第十四章電泳分離技術演示文稿

第十四章電泳分離技術演示文稿當前第1頁\共有96頁\編于星期三\11點優(yōu)選第十四章電泳分離技術當前第2頁\共有96頁\編于星期三\11點

電泳技術概述70年以來，電泳技術圍繞制膠、電泳、染色三個技術環(huán)節(jié)，不斷改進，以實現(xiàn)下列目標：

1、提高分辨率及靈敏度。

2、簡化操作，縮短電泳時間。

3、擴大應用范圍。目前，電泳技術已成為生物化學與分子生物學以及與其密切相關的醫(yī)學、農、林、牧、漁、制藥及某些工業(yè)分析中必不可少的手段。

當前第3頁\共有96頁\編于星期三\11點電泳是指帶電粒子在電場的作用下，向著與其電性相反的電極移動的現(xiàn)象。電泳技術指利用電泳現(xiàn)象對混合物進行分離分析的技術。二、電泳技術的基本原理當前第4頁\共有96頁\編于星期三\11點蛋白質分子在不同pH下的解離狀態(tài)NH3+NH3+NH2PPPCOOHCOO-COO-

pH＜pIpH＝pIpH＞pIpH>pI

分子帶負電荷，在電場中向正極移動;pH<pI分子帶正電荷，在電場中向負極移動;當前第5頁\共有96頁\編于星期三\11點u:泳動度or泳動率(cm/伏·秒or分)V:泳動速度:cm/秒or分E:電場強度:伏特/cmd:泳動距離:cmt:電泳時間:秒/分U:電壓:常壓(100—500v)

高壓(500—10000v)僅需幾分鐘l:支持場的長度(有效長度)(一)、泳動度u(遷移率):

帶電質點在單位強度電場下的泳動速度不同分子在同一電場中可能具有不同的泳動度當前第6頁\共有96頁\編于星期三\11點泳動度與帶電顆粒所帶凈電荷的數(shù)量、顆粒大小和形狀有關。被分離的球形分子在電場中所受的力(F)為：

F=EQ式中E：電場強度，即每厘米支持物的電位降；Q為被分離物所帶凈電荷。

泳動度當前第7頁\共有96頁\編于星期三\11點（二）、影響電泳速度的因素樣品本身：帶電量，分子大小，形狀電場強度：電壓緩沖液：成分，pH，離子強度支持介質：電滲作用，吸附作用溫度當前第8頁\共有96頁\編于星期三\11點

影響泳動度的因素

1．電場強度

是指每厘米的電位降，也稱電位梯度(電勢梯度)。電場強度越高，則帶電顆粒泳動越快。根據(jù)電場強度的不同，電泳可分為兩種。(1)常壓(100～500V)電泳

其電場強度為2～10V／cm。分離時間較長，從數(shù)小時到數(shù)十小時，適合于分離蛋白質等大分子物質。(2)高壓(2000～10000V)電泳

其電場強度為50～200V／cm，電泳時間很短，有時只需幾分鐘。多用于分離氨基酸、多肽、核苷酸、糖類等小分子物質。當前第9頁\共有96頁\編于星期三\11點

影響泳動度的因素2．溶液pH

溶液的pH值決定帶電顆粒的解離程度，亦即決定其所帶電荷的多少。對蛋白質而言，溶液pH值離等電點(pI)越遠，則顆粒所帶的凈電荷越多，泳動速度也越快；反之，則越慢。當前第10頁\共有96頁\編于星期三\11點

影響泳動度的因素3．溶液的離子強度

緩沖液離子強度越高，則顆粒的電動電勢越小，泳動度也越小。一般最適合的離子強度在O.02～O.2之間。當前第11頁\共有96頁\編于星期三\11點

影響泳動度的因素4．電滲

電泳緩沖液相對于固體支持物的移動稱電滲。如紙電泳時，濾紙吸附OH-帶負電荷，與紙接觸的緩沖液帶正電荷向負極移動。當前第12頁\共有96頁\編于星期三\11點

影響泳動度的因素5．溫度

電泳時會產生焦耳熱，使介質黏度下降，分子運動加快，遷移率增加，同時溫度過高會使樣品中的生物大分子變性失活。因此電泳時，要控制電壓或電流，也可安裝冷卻散熱裝置。6．支持物

要求是均勻，吸附力和電滲小，機械性能好，便于染色或紫外光下檢測，故最好透明，無紫外吸收。當前第13頁\共有96頁\編于星期三\11點三、電泳的分類按形狀分類：U型管電泳、柱狀電泳、平板電泳；按載體分類：濾紙電泳、瓊脂電泳、聚丙烯酰胺電泳、自由電泳；當前第14頁\共有96頁\編于星期三\11點按分離原理分類移界電泳（movingboundaryEP）不同的離子成分在均一的緩沖液系統(tǒng)中分離成獨立的區(qū)帶，可以用染色等方法顯示出來，如果用光密度計掃描可得出—個個互相分離的峰;區(qū)帶電泳(zoneEP)只能起到部分分離的作用，如將濃度對距離作圖，則得出一個個臺階狀的圖形;等速電泳(isotachophoresis)在電泳達成平衡后，各區(qū)帶相隨，分成清晰的界面，以等速移動。按濃度對距離作圖也是臺階狀，但不同于上述移界電泳，它的區(qū)帶沒有重疊，而是分別保持;等電聚焦

(isoelectricfocusing)由多種具有不同等電點的載體兩性電解質在電場中自動形成pH梯度。被分離物則各自移動到其等電點而聚成很窄的區(qū)帶，分辨率很高。當前第15頁\共有96頁\編于星期三\11點AB+BABAABBAABCCBA移界區(qū)帶ABC等速等電聚焦pH9876混合分立穩(wěn)態(tài)時毗鄰穩(wěn)態(tài)時分立靜止當前第16頁\共有96頁\編于星期三\11點1.連續(xù)系統(tǒng)：緩沖液的離子成分、PH、凝膠濃度、電位梯度都相同，帶電顆粒電泳時僅具有電荷效應、分子篩效應。2.不連續(xù)系統(tǒng)：

緩沖液離子成分、pH、凝膠濃度、電位梯度不連續(xù)，帶電顆粒電泳時具有濃縮效應、電荷效應、分子篩效應。根據(jù)操作方式分類當前第17頁\共有96頁\編于星期三\11點分子篩效應：分子量或分子大小和形狀不同的蛋白質通過一定孔徑分離膠時，受阻滯的程度不同而表現(xiàn)出不同的遷移率，這就是分子篩效應。

分子量小，阻力小，移動快；分子量大，阻力大，移動慢。電荷效應：電荷量不同，遷移率不同。電泳作用效應當前第18頁\共有96頁\編于星期三\11點當前第19頁\共有96頁\編于星期三\11點㈠、凝膠電泳凝膠電泳聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE)瓊脂糖凝膠電泳當前第20頁\共有96頁\編于星期三\11點1、瓊脂糖凝膠電泳

瓊脂糖是從海藻中提取出來的一種線狀高聚物，是由D—半乳糖和3、6—脫水—L—半乳糖結合的鏈狀多糖。

當前第21頁\共有96頁\編于星期三\11點瓊脂瓊脂糖瓊脂膠脫去SO42-丙酮酸酯基應用由于孔徑大，對大多數(shù)蛋白來說，其分子篩作用微不足道。因此廣泛應用于核酸的研究，分離范圍廣（200bp-50kb的DNA）.當前第22頁\共有96頁\編于星期三\11點瓊脂凝膠電泳：常用pH6-9;離子強度0.02-0.05;硼酸鹽緩沖液和巴比妥緩沖液；濃度常用1%-1.5%。瓊脂凝膠電泳的優(yōu)點：近似自由界面;液固相間無明顯界面，電泳速度快;不吸收紫外線，可直接用紫外檢測儀測定;容易染色易洗脫.當前第23頁\共有96頁\編于星期三\11點瓊脂糖凝膠電泳的基本操作１、配制緩沖液貯備液２、水平型瓊脂糖凝膠制備３、樣品的制備與點樣４、電泳５、染色６、樣品回收-紫外-+當前第24頁\共有96頁\編于星期三\11點水平板式電泳槽垂直板式電泳槽當前第25頁\共有96頁\編于星期三\11點﹢﹣﹣﹢當前第26頁\共有96頁\編于星期三\11點在凝膠電泳中，一般加入溴化乙錠（EB）--ethidiumbromide染色，此時，核酸分子在紫外光下發(fā)出熒光，肉眼能看到約50ngDNA所形成的條帶。核酸構型與瓊脂糖凝膠電泳分離的關系:共價閉環(huán)超螺旋結構DNA>直線DNA>雙鏈環(huán)狀DNA當前第27頁\共有96頁\編于星期三\11點2、聚丙烯酰胺凝膠電泳聚丙烯酰胺凝膠電泳(polyacrylamidegelelectrophoresis，PAGE)早在1959年由Raymends和

Weintraub．L建立。1964年，此法進一步從理論和實驗技術上得到改進并推廣應用。由于具有較高的分辨率和靈活性，目前已被廣泛應用于蛋白質等生物大分子的分離和分析。

當前第28頁\共有96頁\編于星期三\11點聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）原理PAGE是根據(jù)被分離物質所帶電荷的多少及其分子大小、形狀不同，在電場作用下產生不同的移動速度而分離。它具有電泳和分子篩雙重作用.當前第29頁\共有96頁\編于星期三\11點

聚丙烯酰胺凝膠構成聚丙烯酰胺凝膠是由單體丙烯酰胺(Acr)和交聯(lián)劑N,N-甲叉雙丙烯酰胺(Bis)在加速劑

N,N,N,N-四甲基乙二胺(TEMED)和催化劑過硫酸銨(AP)或核黃素(C17H2O6N4)的作用下聚合交聯(lián)成三維網(wǎng)狀結構的凝膠，以此凝膠為支持物的電泳稱為聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)。當前第30頁\共有96頁\編于星期三\11點■凝膠的聚合反應：Ammoniumpersulfate(freeradicalinitiator)過硫酸銨

Acrylamide(monomer)Bis(acrylamide)(bridge)TEMED(catalyst):四乙基乙二胺自由基的生成者凝膠的基本單位:丙烯酰胺交聯(lián)使聚合產生分枝:甲叉丙烯酰胺幫助傳遞自由基的催化劑Acrylamide有毒性！-(OS-SO)442-2SO4CH2=CH-CO-NH212112核黃素-TEMED系統(tǒng)與過硫酸銨-TEMED系統(tǒng)當前第31頁\共有96頁\編于星期三\11點■

聯(lián)丙烯酰胺單體聚合過程：聚合反應交聯(lián)劑造成分枝端點自由基可再延續(xù)freeradicalBisBis聚合反應交錯連結當前第32頁\共有96頁\編于星期三\11點丙烯酰胺甲叉雙丙烯酰胺

聚丙烯酰胺凝膠具有一定的網(wǎng)狀結構。如果形成的孔徑大小接近于所分離樣品分子的平均半徑，樣品分子在通過凝膠孔洞時，所受到的阻力就會和樣品分子的大小及形狀有關。當前第33頁\共有96頁\編于星期三\11點聚丙烯酰胺凝膠的優(yōu)點①在一定濃度時，凝膠透明，有彈性，機械性能好；②化學性能穩(wěn)定，與被分離物不發(fā)生化學反應；③對pH和溫度變化較穩(wěn)定；④幾乎無電滲作用；⑤樣品不易擴散，其靈敏度可達10-6g；⑥凝膠孔徑可通過選擇單體及交聯(lián)劑的濃度調節(jié)；⑦分辨率高；PAGE應用范圍廣，可用于蛋白質、酶、核酸等生物分子的分離、定性、定量及少量的制備，還可測定相對分子質量、等電點等。當前第34頁\共有96頁\編于星期三\11點一些概念凝膠濃度和交聯(lián)度不連續(xù)膠與連續(xù)膠變性膠及非變性膠SDS(Sodiumdodecylsulfate)十二烷基磺酸鈉當前第35頁\共有96頁\編于星期三\11點凝膠的濃度和交聯(lián)度凝膠濃度：

T（Acr和Bis總濃度）=(a+b)/m.100%交聯(lián)百分比：

C（交聯(lián)劑的百分比）=b/(a+b).100%a:Acr濃度；b:Bis濃度；m:緩沖液體積當前第36頁\共有96頁\編于星期三\11點凝膠的濃度和交聯(lián)度濃度和交聯(lián)劑濃度決定膠的物理狀態(tài)及分子篩的孔徑的大小一般濃縮膠：2-5%，a:b=20分離膠：7-10%，a:b=40標準膠濃度：7%當前第37頁\共有96頁\編于星期三\11點在濃度為7.5%

的凝膠中，大多數(shù)生物體內的蛋白質能得到滿意的分離效果。因此，把濃度為7.5%

凝膠稱為標準膠。對于一個未知樣品，常用7.5%的標準膠或4%-10%

的凝膠梯度來測試，而后選出適宜的凝膠濃度。當前第38頁\共有96頁\編于星期三\11點連續(xù)膠與不連續(xù)膠:連續(xù)膠：膠條(膠板)的濃度、pH值、組成成份不變不連續(xù)膠:膠條(膠板)的濃度、pH值、組成成份變化當前第39頁\共有96頁\編于星期三\11點連續(xù)膠的制膠過程與點樣過程玻璃板

(前,后)樣本梳間隔條間隔條當前第40頁\共有96頁\編于星期三\11點濃縮膠分離膠不連續(xù)膠的制膠過程與點樣過程玻璃板

(前,后)樣本梳間隔條間隔條當前第41頁\共有96頁\編于星期三\11點■

電泳凝膠系統(tǒng)的組成：1電泳系統(tǒng)pH膠體濃度緩沖液上層

(負極)緩沖液

2樣品溶液3濃縮膠

6.9

4分離膠

膠體

5下層

(正極)緩沖液

Tris-HClTris-HClTris-glycine

Tris-glycine

Tris-glycine

8.3

8.3

8.3

8.3

5%

7.5~20%

-

-

-

●

不連續(xù)膠有聚焦樣品的作用當前第42頁\共有96頁\編于星期三\11點聚丙烯酰胺凝膠電泳原理三種物理效應

⑴樣品濃縮效應

⑵分子篩效應⑶電荷效應三種物理效率使樣品分離效果好，分辨率高當前第43頁\共有96頁\編于星期三\11點（1）樣品濃縮效應：由凝膠系統(tǒng)的不連續(xù)性產生。

①凝膠孔徑不連續(xù)性②緩沖液離子成份的不連續(xù)性

③pH的不連續(xù)性當前第44頁\共有96頁\編于星期三\11點

⑴．樣品濃縮效應

凝膠孔徑的不連續(xù)性

樣品膠及濃縮膠為大孔膠；分離膠為小孔膠。在電場作用下，樣品顆粒在大孔膠中泳動的阻力小，移動速度快；當進入小孔膠時，受到的阻力大，移動速度減慢。因而在兩層凝膠交界處，樣品遷移受阻而壓縮成很窄的區(qū)帶。當前第45頁\共有96頁\編于星期三\11點■濃縮膠對蛋白質分子的集焦作用：分離膠濃縮膠樣本8.96.9離子缺乏空間ABC++8.3當前第46頁\共有96頁\編于星期三\11點

⑵．分子篩效應

大小和形狀不同的蛋白質通過一定孔徑分離膠時，受阻滯的程度不同而表現(xiàn)出不同的遷移率，這就是分子篩效應。蛋白質進入pH8.9的同一孔徑的分離膠后，分子小且為球狀的蛋白質分子所受阻力小，移動快，走在前面；反之，則阻力大，移動慢，走在后面，從而通過凝膠的分子篩作用將各種蛋白質分成各自的區(qū)帶。這種分子篩效應不同于柱層析中的分子篩效應，后者是大分子先從凝膠顆粒間的縫隙流出，小分子后流出。當前第47頁\共有96頁\編于星期三\11點圖中圓球分別代表大、中、小3種不同分子量的蛋白質。大、中、小分子分別滯留在與分子大小相當?shù)哪z孔徑中，不再前進，因而分離成3個區(qū)帶。當前第48頁\共有96頁\編于星期三\11點

⑶．電荷效應

在pH8.9的分離膠中，各種帶凈電荷不同的蛋白質有不同的遷移率。凈電荷多，則遷移快；反之，則慢。因此，各種蛋白質按電荷多少、相對分子質量及形狀，以一定順序排成一個個區(qū)帶，因而稱為區(qū)帶電泳。當前第49頁\共有96頁\編于星期三\11點變性膠與非變性膠：變性膠：膠電泳在蛋白質變性的狀態(tài)下進行，主要指SDS變性條件下進行；非變性膠：電泳在蛋白質保持天然狀態(tài)下進行，不加變性劑。當前第50頁\共有96頁\編于星期三\11點

3、SDS電泳SDS即十二烷基硫酸鈉(SodiumDodecylSulfate，簡稱SDS)是陰離子表面活性劑，它能以一定的比例和蛋白質結合，形成一種SDS--蛋白質復合物。此復合物可用具有SDS的聚丙烯酰胺凝膠(包括連續(xù)的和不連續(xù)的系統(tǒng))電泳進行分離，通常把這種電泳稱為SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(簡稱SDS)。它的主要用途是分離蛋白質和測定其分子量。當前第51頁\共有96頁\編于星期三\11點⑴.SDS原理

聚丙烯酰胺凝膠電泳能有效地把不同類型的蛋白質分開的主要依據(jù)，是樣品中各種物質的電荷和分子量的差異性。而SDS—PAGE的主要依據(jù)，則是各種物質分子量的差異性。因為當SDS與蛋白質結合后，蛋白質分子即帶有大量的負電荷，并遠遠超過了其原來的電荷，從而使天然蛋白質分子問的電荷差別就降低乃至消除了。與此同時蛋白質在SDS作用下結構變得松散，形狀趨向一致，所以各種SDS一蛋白質復合物在電泳時產生的泳動率差異，就反映了分子量的差異。當前第52頁\共有96頁\編于星期三\11點SDS與PAGE有什么區(qū)別？SDS（十二烷基磺酸鈉）+蛋白線性復合物使復合物所帶負電荷遠超過天然蛋白本身電荷，消除了電荷效應，而分子量占主導。當前第53頁\共有96頁\編于星期三\11點H-C-C-C-C-C-C-C-C-C-C-C-C-O-S-O-Na+HHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHOONon-polarHydrophobictailHydrophilicheadSDS（C12H25NaO4S）

SodiumDodecylSulfate十二烷基磺酸鈉

SDS是一種陰離子去污劑，它在水溶液中以單體和分子團的混合形式存在。這種陰離子去污劑能破壞蛋白質分子之間以及與其他物質分子之間的非共價鍵，使蛋白質分子內的二硫鍵被還原劑打開并不易再氧化，這就保證了蛋白質分子與SDS充分結合從而形成帶負電荷的蛋白質-SDS復合物。當前第54頁\共有96頁\編于星期三\11點SDSProteinSDSandProteins當前第55頁\共有96頁\編于星期三\11點

蛋白質分子與SDS充分結合后，所帶上的SDS負電荷大大超過了蛋白質分子原有的電荷量，因而也就掩蓋或消除了不同種類蛋白質分子之間原有的電荷差異。

這樣的蛋白質-SDS復合物在SDS聚丙烯酰胺凝膠系統(tǒng)中的電泳遷移率便不再受蛋白質原有電荷和形狀等因素的影響，而主要取決于蛋白質分子量大小。當前第56頁\共有96頁\編于星期三\11點SDS當前第57頁\共有96頁\編于星期三\11點XYZ+SDSNativeSDS分子量及凈電荷密度均影響泳動率只有分子量

影響泳動率XYZ-+-當前第58頁\共有96頁\編于星期三\11點SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS）當前第59頁\共有96頁\編于星期三\11點緩沖液樣品緩沖液凝膠緩沖液電泳緩沖液1xSDS:50mmol/LTris-Hcl(PH6.8)100mmol/LDTT2%SDS0.1%溴酚藍10%甘油Tris堿用鹽酸一次調PH成功0.1%SDS1xTris–

甘氨酸:25mmol/LTris250mmol/L甘氨酸(PH8.3)0.1%SDS當前第60頁\共有96頁\編于星期三\11點主要試劑及相關問題：1、Acr和Bis

比例29：1，此時分辨率最佳，凝膠成透明；避光室溫保存，隔幾個月重配。2、SDS

電泳級10%母液，室溫儲備。3、分離膠、濃縮膠的Tris緩沖液

PH6.8PH8.8神經(jīng)毒?。?！刺激呼吸系統(tǒng)?。‘斍暗?1頁\共有96頁\編于星期三\11點主要試劑及相關問題：4、TEMED(四甲基乙二胺)

通過催化過硫酸銨形成自由基，加速Acr-Bis聚合。低PH聚合反應受到抑制。5、過硫酸銨提供引發(fā)聚合反應的自由基。10%4℃保存.6、Tris-GlyBuffer吸入致命、揮發(fā)性強極其易燃，周圍不得有明火?。。∶恐苄屡洌?！安全！當前第62頁\共有96頁\編于星期三\11點凝膠濃度及其分離范圍丙烯酰胺濃度線性分離范圍/kDa1512107.55.010-4312-6020-8036-9457-212當前第63頁\共有96頁\編于星期三\11點SDS電泳裝置當前第64頁\共有96頁\編于星期三\11點實驗步驟安裝玻璃板當前第65頁\共有96頁\編于星期三\11點灌注分離膠加水膜約30min后，膠凝聚后用水清洗幾遍！并吸干殘存的液體當前第66頁\共有96頁\編于星期三\11點灌注濃縮膠灌滿！當前第67頁\共有96頁\編于星期三\11點根據(jù)需要插入不同的梳子30min左右加電泳緩沖液，再拔梳子！當前第68頁\共有96頁\編于星期三\11點拔梳子后形成點樣孔孔周圍有膜，用針撥開當前第69頁\共有96頁\編于星期三\11點點樣，電泳當前第70頁\共有96頁\編于星期三\11點-+當前第71頁\共有96頁\編于星期三\11點蛋白質電泳中SDS凝膠檢測常采用的染色方法有:考馬斯亮藍、硝酸銀染色、熒光染色法。當前第72頁\共有96頁\編于星期三\11點染色液配制：

0.1%考馬斯亮藍R250(先用甲醇充分溶解)50%甲醇

10%冰乙酸

40%蒸餾水濾紙過濾脫色液配制：

10%甲醇

10%冰乙酸

80%蒸餾水5倍體積染色4小時以上，脫色搖床，中間更換幾次脫色液當前第73頁\共有96頁\編于星期三\11點硝酸銀染色銀染的機制:來源于攝影銀染技術,是將蛋白分子結合的銀離子還原作成金屬銀。優(yōu)點:檢測靈敏度高,較普通考馬斯亮藍染色靈敏度要高50-100倍,可在蛋白質中找到含量較低的蛋白,而且所需的上樣量較少(每點僅需0.1ｎｇ)。缺點:可重復性差耗費人力質譜測定有一定的干擾當前第74頁\共有96頁\編于星期三\11點當前第75頁\共有96頁\編于星期三\11點

在某一PH下，蛋白質分子在電場中不再移動，即靜電荷為零，則此PH值即為該蛋白質的等電點。4、等電聚焦當前第76頁\共有96頁\編于星期三\11點

聚丙烯酰胺等電聚焦電泳(IsoelectricFocusing，簡稱IEF)：利用各種蛋白質pI不同，以聚丙烯酰胺凝膠為電泳支持物，并在其中加入兩性電解質載體(carrierampholytes)，兩性電解質載體在電場作用下，按各自pI形成從陽極到陰極逐漸增加的平滑和連續(xù)的pH梯度。在電場作用下，蛋白質在此pH梯度凝膠中泳動，當遷移至pH值等于pI處時，就不再泳動，而被濃縮成狹窄的區(qū)帶。當前第77頁\共有96頁\編于星期三\11點PI2

PI3

PI1

++-+++--+---PH增加+_蛋白質123蛋白質在電場中，等點聚焦示意圖當前第78頁\共有96頁\編于星期三\11點當前第79頁\共有96頁\編于星期三\11點電泳系統(tǒng)中加進兩性電解質載體，當通已直流電時，兩性電解質載體即形成一個由陽極到陰極連續(xù)增高的pH梯度。Pr進入時，不同的Pr移動到與其等電點相當?shù)膒H位置上，從而使不同等電點的Pr得以分離。優(yōu)點：分辨率高，區(qū)帶清晰、窄，加樣部位自由，重現(xiàn)性好，可測定Pr或多肽的等電點。缺點：需無鹽溶液，不適用于在等電點不溶解或發(fā)生變性的Pr。當前第80頁\共有96頁\編于星期三\11點第二向根據(jù)蛋白質的分子量大小不同在垂直方向或水平方向進行十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS)5、雙向電泳第一向根據(jù)蛋白質的等電點不同在PH梯度膠中等點聚焦（isoelectricfocusing,IEF)當前第81頁\共有96頁\編于星期三\11點當前第82頁\共有96頁\編于星期三\11點當前第83頁\共有96頁\編于星期三\11點蛋白質雙向電泳中SDS凝膠檢測常采用的染色方法有考馬斯亮藍、硝酸銀染色、熒光染色法、免疫染色法以及蛋白質印跡法。

染色當前第84頁\共有96頁\編于星期三\11點6、變性梯度凝膠電泳變性梯度凝膠電泳（denaturinggelgradientelectrophoresis，DGGE）溫度梯度凝膠電泳（Temperaturegradientgelelectrophoresis，TGGE）恒定變性膠電泳（Constantderatararedgelelectrophoresis，CDGE）當前第85頁\共有96頁\編于星期三\1