消毒劑的使用及效力驗(yàn)證課件

消毒劑的使用及效力驗(yàn)證課件第一頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期日概述

清潔和消毒工藝的監(jiān)控與評價是良好的微生物控制系統(tǒng)的體現(xiàn)，藥品不僅在生產(chǎn)過程中會遭到微生物的污染，在檢驗(yàn)過程中也會被污染，除非生產(chǎn)和實(shí)驗(yàn)室設(shè)施的微生物污染處于受控制狀態(tài)或者完全被消除（如采用隔離技術(shù)）。破壞細(xì)菌營養(yǎng)體（細(xì)胞）或抑制細(xì)菌生長（細(xì)胞增殖）是控制微生物生長繁殖的兩種最基本方法。而在實(shí)際的控制過程中，可采取物理方法、化學(xué)方法來控制或處理。

習(xí)慣上，我們將能夠殺滅或抑制微生物生長的試劑（通常不能殺死芽孢）統(tǒng)稱為消毒劑，而這種方法與措施稱之為毒。能殺滅所有微生物含殺死芽孢的方法與措施稱之為滅菌。

第二頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期日一、消毒劑與滅菌劑的劃分二、

微生物對消毒因子的敏感性三、消毒劑的效力等級與消毒效力評價四、

影響消毒劑效力的主要因素五、消毒劑的作用方式六、細(xì)菌對消毒劑的耐受性七、消毒劑的選擇和交替使用八、制藥工業(yè)常用的消毒劑九、

消毒劑的效力確認(rèn)十、消毒劑稀釋液的效期確認(rèn)十一、培訓(xùn)和安全教育第三頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期日一、消毒劑與滅菌劑的劃分

衛(wèi)生處理（sanitization）是指用化學(xué)試劑減少活性微生物數(shù)量的過程。用于衛(wèi)生處理的化學(xué)試劑稱為衛(wèi)生洗滌劑（sanitizers）。（一）、衛(wèi)生處理與衛(wèi)生洗滌劑普通微生物細(xì)胞5個對數(shù)單位（99.999%）致病微生物細(xì)胞30s3個對數(shù)單位（99.9%）衛(wèi)生洗滌劑不能殺滅芽胞，并且在土壤存在的條件下不能殺滅活性微生物。第四頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期日(二)、消毒劑及抗菌劑

消毒（disinfection）是指用化學(xué)試劑抑制或殺滅致病微生物的過程。消毒時所有的化學(xué)試劑稱為消毒劑（disinfectant）致病微生物數(shù)量4~10min5個對數(shù)單位（99.999%）30s3個對數(shù)單位（下降99.9%）它不能殺滅芽胞和所有的病毒。消毒劑與衛(wèi)生洗滌劑的主要區(qū)別在于，消毒劑具有更強(qiáng)的殺菌效果并且能殺滅致病微生物，土壤中亦能發(fā)揮殺菌作用。第五頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期日常用消毒劑有70%乙醇或異丙醇溶液、0.04~0.1%新潔爾滅、3%過氧化氫溶液等。

與消毒劑十分類似的另一種化學(xué)試劑叫抗菌劑（antiseptics），當(dāng)用于對粘膜和皮膚消毒時，抗菌劑對粘膜和皮膚安全并且無害，這正是抗菌劑與消毒劑的主要區(qū)別所在。例如，0.05%碘伏溶液是一種常見的抗菌劑。第六頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期日（三）、化學(xué)滅菌劑

滅菌（sterilization）是指用物理或化學(xué)手段完全殺滅或消除活性微生物的過程。從定義上來看，滅菌是一絕對概念，一件物品要么無菌，要么有菌?；瘜W(xué)滅菌劑（sterilants）是指能夠殺滅包括芽胞在內(nèi)的一切污染性微生物的試劑?；瘜W(xué)滅菌劑的腐蝕性很強(qiáng)，處理時務(wù)必要小心，注意安全。此類產(chǎn)品能損壞不銹鋼、塑料和軟金屬。常見滅菌劑有：戊二醛、氧化性試劑（如環(huán)氧乙烷、過氧乙酸、過氧化氫、二氧化氯）和甲醛等。返回第七頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期日二、

微生物對消毒因子的敏感性

(1)親脂病毒(有脂質(zhì)膜的病毒)，例如乙型肝炎病毒、流感病毒等。(2)細(xì)菌繁殖體,例如金黃色葡萄球菌、大腸桿菌等。(3)真菌，例如白色念珠菌、黑曲霉等。高低微生物對消毒因子的敏感性從高到低的順序

(4)親水病毒(沒有脂質(zhì)包膜的病毒)，例如甲型肝炎病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒等。(5)分枝桿菌，例如結(jié)核分枝桿菌、龜分枝桿菌等。(6)細(xì)菌芽孢，例如炭疽桿菌芽孢、枯草桿菌芽孢等。(7)朊毒(感染性蛋白質(zhì))。返回第八頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期日三、消毒劑的效力等級與消毒效力評價

根據(jù)消毒劑對不同類別的微生物的殺滅效果，可將消毒劑分為三個級別：高效消毒劑（HLD），可以殺滅一切細(xì)菌繁殖體(包括結(jié)核分枝桿菌)、病毒、真菌及其孢子等各種微生物，對細(xì)菌芽孢殺滅達(dá)到消毒效果的消毒劑；中效消毒劑（ILD），可以殺滅和去除細(xì)菌芽孢以外的各種病原微生物的消毒劑，包括碘類消毒劑；低效消毒劑（LLD），只能殺滅細(xì)菌繁殖體和親脂病毒的消毒劑，包括單鏈季銨鹽類(苯扎溴銨等)、雙胍類消毒劑如氯己定等。

(碘伏、碘酊等)、醇類、醇類和氯己定的復(fù)方、醇類和季銨鹽(包括雙鏈季銨鹽)類化合物的復(fù)方、酚類等；低效消毒劑（LLD），

第九頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期日表4－1：依微生物類型確定消毒劑的效力等級

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效力級別細(xì)菌芽胞細(xì)菌營養(yǎng)細(xì)胞真菌真菌孢子

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低（LLD）－＋±－中（ILD）－1＋＋－高（HLD）＋2＋＋＋2

－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－

－表示幾乎沒有或沒有殺滅效果；+表示有相當(dāng)殺滅效果；±表示殺滅效果較溫和；1某些中級消毒劑，如次氯酸鹽，也能殺滅芽胞胞；像乙醇或酚類等其他消毒劑，則不能殺滅芽胞；2用高級消毒劑殺滅高數(shù)量的細(xì)菌芽胞或真菌孢子時，須延長其接觸時間。返回第十頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期日四、

影響消毒劑效力的主要因素

有許多因素可以影響消毒劑的消毒效果，了解影響消毒劑效力的主要因素，有助于在配制、貯存和使用過程中對消毒劑加以妥善正確處理，以確保其維持最強(qiáng)的殺菌效力。(一)pH值一是對消毒劑的作用，可以改變其溶解度、離解程度和分子結(jié)構(gòu)；

二是對微生物的影響，大多數(shù)微生物能生長的pH值范圍是6～8，pH值過高或過低對微生物的生長均有影響。

第十一頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期日(二)溫度溫度是影響消毒劑效力的另一重大因素，消毒速度一般隨溫度的升高而加快，但溫度變化對各種消毒劑影響的大小不同。一般來說，如果溫度按等差級數(shù)增加，則殺菌速度按幾何級數(shù)增加(三)有機(jī)物有機(jī)物常以血清、血液、膿液、痰液、泥土、食物殘渣、糞便、培養(yǎng)基成分等形式出現(xiàn)，其存在可干擾消毒劑的殺微生物作用，原因主要有兩方面：(1)有機(jī)物在微生物的表面形成一層保護(hù)層，妨礙消毒劑與微生物的接觸，或延遲消毒劑的作用，甚至使微生物逐漸產(chǎn)生對藥物的適應(yīng)性；(2)有機(jī)物可中和一部分消毒劑，消毒劑被有機(jī)物消耗后，則對微生物的作用濃度降低。第十二頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期日(四)表面活性劑和金屬離子

大分子聚合物和非離子表面活性劑可以降低對羥基甲酸脂類和季銨鹽類消毒劑的作用，在有吐溫存在時，需要加大消毒劑的濃度。陰離子表面活性劑可以降低季銨鹽類和洗必太的消毒作用，因此應(yīng)注意不能將新潔爾滅等消毒劑與肥皂及陰離子洗滌劑合用。金屬離子的存在對消毒效果也有一定的影響，可以降低或增加消毒作用。在存在低濃度二價陽離子時，陰離子表面活性劑對葡萄球菌的抗菌作用加強(qiáng)，在存在Mg2+、Ca2+、Ba2+離子時，長鏈脂肪酸的殺菌作用大大降低。由于Mg2+、Ca2+離子對一些消毒劑的消毒效果有影響，所以目前在消毒學(xué)試驗(yàn)中廣泛使用硬水，以便使研究的消毒劑在硬水地區(qū)也能使用。/第十三頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期日(五)水

消毒劑配制用水的質(zhì)量會影響消毒劑的殺菌效力。水的硬度、微生物和化學(xué)物質(zhì)均會對消毒劑的效力產(chǎn)生不良影響，因此，建議用純化水配制消毒劑；由于消毒劑達(dá)的穩(wěn)定性和殺菌效力會隨其濃度和儲藏條件而變化，因此，使用者必須按照生產(chǎn)商的要求配制、儲存和使用消毒劑。返回第十四頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期日五、消毒劑的作用方式

殺菌劑的殺菌效力是多個因素作用的結(jié)果，既包括消毒劑本身的作用，也包括待清潔表面所含有的微生物數(shù)量和總類。通常應(yīng)考慮的主要因素是消毒劑是否易于殺滅營養(yǎng)態(tài)的細(xì)菌細(xì)胞或是否能殺滅對消毒劑具有著很強(qiáng)耐受力的芽胞。另一個必須要考慮并需強(qiáng)調(diào)的因素是在細(xì)菌存在的地方是否還有其他物質(zhì)存在，如血，糞便和有機(jī)物等。這些污染物的存在指示了該表面并不清潔，并且能夠迅速鈍化一些殺菌劑，減弱它們的效力，如次氯酸鹽等。第十五頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期日

然而，從消毒劑本身的作用來看，殺菌劑既可通過襲擊細(xì)菌細(xì)胞的某一特殊部位而發(fā)生作用，也可通過破壞它的某一組分來揮發(fā)作用。根據(jù)它們對細(xì)菌的作用方式，可把消毒劑分為以下四類：（一）、使菌細(xì)胞蛋白變性、凝固如重金屬鹽類、酸、堿等化學(xué)消毒劑，可以破壞蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)，也就是使生物蛋白質(zhì)變性，同時就意味著蛋白質(zhì)的生物學(xué)功能喪失。蛋白凝固變性，喪失了生命力，自然就會死亡。細(xì)菌含大量蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)的變性導(dǎo)致細(xì)菌結(jié)構(gòu)的破壞和功能的喪失，最后導(dǎo)致細(xì)菌的死亡。

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FFU風(fēng)機(jī)過濾單元/第十六頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期日（三）、阻斷食物攝取和廢物排泄

某些殺菌劑，如季銨鹽類化合物，它們在水溶液中帶正電荷，能把自己附著在細(xì)胞膜上的某個特殊位置，攻擊細(xì)胞上帶負(fù)電荷的部分，最終的結(jié)果是季銨鹽基團(tuán)阻斷了營養(yǎng)物質(zhì)運(yùn)輸?shù)郊?xì)胞內(nèi)，并阻止了堆積在細(xì)胞內(nèi)的廢物向外排泄。實(shí)際效果是，細(xì)胞饑餓死亡和被細(xì)胞內(nèi)堆積的廢物毒死。（二）、破壞與損傷細(xì)胞膜類

殺菌劑，如次氯酸鈉和過氧乙酸，它們都是強(qiáng)氧化劑，能夠引起細(xì)胞膜的全面破壞，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)的關(guān)鍵功能結(jié)構(gòu)流失，這個過程導(dǎo)致了細(xì)胞的真正死亡。第十七頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期日

（四）、鈍化關(guān)鍵酶類

酶是一切生物的活性催化劑，細(xì)胞的生長和為細(xì)胞生長和裂殖提供能量的代謝活動都和細(xì)胞內(nèi)的一些酶活性有關(guān)，這些酶能夠支持細(xì)胞的生長和代謝活動（代謝能夠提供給細(xì)胞生長和裂殖提供能量）。一些消毒劑，如苯芬酚，酚醛類等，它們能夠進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)并和某些關(guān)鍵酶發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，從而使酶活性喪失，導(dǎo)致細(xì)菌的生長和代謝受阻，然而假如鈍化作用不夠完全，酶活性有可能會被修復(fù)，這樣受傷的細(xì)菌在幾個小時以后能夠恢復(fù)生長能力并重新污染表面。返回第十八頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期日

六細(xì)菌對消毒劑的耐受性

當(dāng)細(xì)菌細(xì)胞暴露于消毒劑中時,細(xì)胞中的多種結(jié)構(gòu)就會受到不可逆轉(zhuǎn)的損害。細(xì)菌細(xì)胞增殖能力的永遠(yuǎn)喪失通常就被稱為是微生物死亡。但是在消毒過程中，一些細(xì)菌細(xì)胞往往能夠乃受消毒劑的作用，盡管它們的增殖能力能夠暫時喪失，但是過一段時間之后，它們的增殖能力又會恢復(fù)，從而使消毒過程無效。細(xì)菌產(chǎn)生對消毒劑的耐受性與多種因素有關(guān)，細(xì)菌對消毒劑產(chǎn)生耐受性的方式是：第十九頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期日（一）具耐受性的細(xì)菌和不能完全致死的消毒劑劑量

在一特定的群體中，細(xì)菌對于某一特定的消毒劑劑量敏感范圍很寬。在正常的接觸條件下，消毒劑能夠殺滅99.999%的細(xì)菌。從本質(zhì)上講，清潔前含1000000/cm2

的個細(xì)菌的表面有望在消毒后僅含10個細(xì)菌。在這個假想的條件下，細(xì)菌數(shù)量減至了安全水平，達(dá)到了消毒過程目的。問題在于10個耐受住了消毒程序的殘存菌，會成為再次污染的潛在因素。對表面進(jìn)行充分的潤洗，那么這10個殘存菌會耐受住第二個消毒過程而殘存下來，其他種類的細(xì)菌也會發(fā)生這個過程。過了一段時間并經(jīng)歷了幾次消毒和清潔過程之后，具有了耐受力的殘存者們有能力進(jìn)行增殖。當(dāng)這個過程發(fā)生以后，工廠就得重新尋找辦法處理那些對這種殺菌劑已經(jīng)不再有反應(yīng)的細(xì)菌。第二十頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期日(二)分泌多聚糖樣物質(zhì)粘附細(xì)菌，共同形成生物膜

生物膜的形成是細(xì)菌耐受消毒劑的另一種機(jī)制，正如前面所指出那樣，有效清毒之前必須要進(jìn)行正確清潔。某些細(xì)菌能分泌一種多聚糖樣的物質(zhì)，這種多聚糖組成了一層薄膜。這些分泌物有著很強(qiáng)的粘性，能把細(xì)菌本身牢固地粘附在金屬上面。這樣就形成了一層含有細(xì)菌的膜，也就是我們所指的生物膜。形成生物膜的細(xì)菌本身也許是無害的或者不是病原菌，然而，由它們的分泌物形成的凝膠矩陣卻能夠把它們自己粘附牢并且能夠把病原菌包埋其中，如李斯特菌。資料整理金田瑞麟

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盡管這些病原菌對于生物膜的形成沒有任何作用，然而它們卻能污染和該表面接觸的產(chǎn)品。凝膠矩陣對于化學(xué)去除劑有著非常好的耐受性，因此生物膜一旦形成就難于去除生物膜，通常需要高于正常濃度的堿試劑或是具有強(qiáng)氧化性的次氯酸鈉才能奏效，而完全失去除生物膜通常需要幾種方法并用。第二十二頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期日（三）、清潔劑之間的交互作用

大部分清潔劑既含有非離子型的表面活性劑（乳化劑和清潔劑），也含有陰離子型的表面活性劑或者是兩者組合成的混合物。在溶液中，非離子型的表面活性劑電性為中，但是陰離子型的表面活性劑卻帶有負(fù)電荷。當(dāng)該清潔劑被直接用于含有土壤的表面上時，大部分效力在15~20min之內(nèi)耗盡。然而，極少量消毒劑，也就是那些在水溶液中呈現(xiàn)陰離子狀態(tài)并最先作用于表面的消毒劑成分卻留在了表面上。第二十三頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期日在施用季銨鹽類消毒劑之前，假如該表面沒有被充分潤洗，那么帶正電荷的季銨基團(tuán)就會帶負(fù)電荷的殘留消毒劑發(fā)生中和反應(yīng)，這些消毒劑就會被完全鈍化，形成了陰離子-季銨基團(tuán)復(fù)合物或無殺菌作用的膜，消毒劑完全喪失了效力，更有甚者，在形成的季銨鹽復(fù)合膜中也會含有一些利于細(xì)菌生長的營養(yǎng)物質(zhì)。假如沒有仔細(xì)檢查，這樣的符合物實(shí)際上就能支持細(xì)菌的裂殖.返回第二十四頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期日七、消毒劑的選擇和交替使用

理想消毒劑的7條標(biāo)準(zhǔn)是：殺菌譜廣，作用快速；性能穩(wěn)定，便于儲存和運(yùn)輸；無毒無味，無刺激，無致畸、致癌、致突變作用；易溶于水，不著色，易去除，不污染環(huán)境；不易燃易爆，使用安全；受有機(jī)物、酸堿和環(huán)境因素影響小；作用濃度低，使用方便，價格低廉。

選擇消毒劑時務(wù)必考慮以下因素：需消毒表面與消毒劑本身的適應(yīng)性、產(chǎn)品的完整性、人員的安全性、環(huán)境中微生物的菌群、消毒劑的使用方法頻率等。

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FFU風(fēng)機(jī)過濾單元/第二十五頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期日另一個重要因素是消毒劑要交替使用。定期交替使用不同消毒劑是為了防止環(huán)境中的微生物因?qū)ν环N消毒劑產(chǎn)生抗性而影響實(shí)際的消毒效果。不得將非同種類的消毒劑聯(lián)合或混合使用，否則，很可能會引發(fā)危險的或致命的化學(xué)反應(yīng)并產(chǎn)生有毒化合物。

很多消毒劑在使用后都有殘留，經(jīng)過不斷積累并給消毒效果造成不良影響。此外，殘留于設(shè)備或設(shè)施的消毒劑會影響外觀，使設(shè)備看上去很臟。因此，在消毒劑的使用過程中，應(yīng)定期用純水或乙醇為溶媒的試劑對有消毒劑殘留物的設(shè)備/設(shè)施表面加以清洗。尤其是當(dāng)交替使用的消毒劑的化學(xué)性質(zhì)不兼容時，清洗就顯得更加重要。有一些消毒劑的效力能被另一種消毒劑的殘留物鈍化（減弱殺菌效果），季銨鹽類化合物和苯酚類化合物尤為如此。清洗用水或試劑在使用前要經(jīng)過滅菌或除菌處理，以避免已被消毒過的表面因清洗而發(fā)生二次污染。返回資料整理金田瑞麟

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FFU風(fēng)機(jī)過濾單元/第二十六頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期日八、制藥工業(yè)常用的消毒劑(一)醇類醇類消毒劑具有悠久的歷史，也有其重要的地位。短鏈脂肪醇具有快速殺滅微生物的作用，其殺菌效果屬于中等水平，主要用于皮膚消毒，由于其價格低廉，無色，使用方便，所以得到了廣泛的應(yīng)用，并以乙醇為最好，其次是異丙醇。

機(jī)理主要是使微生物的蛋白質(zhì)變性，而且乙醇具有很強(qiáng)的滲透作用，比較容易滲透到菌體內(nèi)，使得細(xì)菌細(xì)胞破壞溶解，乙醇還可通過抑制細(xì)菌物酶系統(tǒng)，特別是脫氫酶和氧化酶等，阻礙細(xì)菌的正常代謝，從而抑制其生長繁殖。

第二十七頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期日

在沒有水的情況下，蛋白質(zhì)不易被變性，因此，加入一些水會使殺菌效力更佳，70%(w/w)乙醇比其他濃度的乙醇更為有效，實(shí)際上70%(W/W)的濃度相當(dāng)于77%(V/V)的濃度，為配制方便起見，可改為80%(V/V)或75%(V/V)的濃度，大部分藥廠都用75%(V/V)的乙醇或異丙醇來消毒工作臺面、物料和操作者手套。以乙醇為基質(zhì)的化合物被制藥企業(yè)普遍使用是因?yàn)樗鼈冋舭l(fā)后沒有任何殘留。乙醇能夠迅速殺滅細(xì)菌繁殖體，在較高體積分?jǐn)?shù)(80%)時，具有很好的殺病毒作用，乙醇對真菌也有抑制和殺滅作用。然而，乙醇的殺菌效力是有限的，特別是它對從人體表面散發(fā)到環(huán)境中的一些微生物的消毒效果并不理想，乙醇只能夠抑制細(xì)菌芽孢發(fā)芽，但并不能殺滅芽孢，并且乳膠手套上的微孔會削弱乙醇類消毒劑的殺菌效力。要想使?jié)崈魠^(qū)內(nèi)微生物得到有效控制，務(wù)必要使用比乙醇消毒效力更強(qiáng)的消毒劑與乙醇消毒劑交替輪換使用。第二十八頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期日

由于乙醇易揮發(fā)且易燃，在實(shí)驗(yàn)室要按照易燃易爆物品的保管要求予以保存。

(二)酚類化合物酚類消毒劑是消毒劑中種類較多的一類，而且其使用已有一百多年的歷史了。此類化合物的抑菌譜很廣，包括對G＋細(xì)菌和G－細(xì)菌以及真菌均有殺傷作用。酚類消毒劑適宜用水溶液或含乙醇的水溶液配制，多數(shù)產(chǎn)品的使用有效濃度為400百萬分之一到1300百萬分之一之間。酚類化合物對芽孢的殺傷力不強(qiáng)，不宜用作殺芽孢劑。酚類化合物對有機(jī)物具有較好的耐受性，但水中鈣鎂離子會降低其殺菌效果。酚類消毒劑會產(chǎn)生殘留物，但能被生物降解，該特性對環(huán)境保護(hù)、廢物處理和生態(tài)環(huán)境的影響非常重要，研究表明，所有的酚類化合物都能被生活在土壤、堆肥和廢水池中的某些微生物降解。資料整理金田瑞麟

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FFU風(fēng)機(jī)過濾單元/第二十九頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期日

目前，在制藥業(yè)使用最多的酚類消毒劑主要有兩種，即酸性酚類消毒劑和堿性酚類消毒劑。國內(nèi)較常用的酚類消毒劑是煤酚皂溶液(liquidofcresolwithsoap)又稱為來蘇爾(Lysol)，其主要成分是甲酚，約占50%，其他成分是植物油、氫氧化鈉等，經(jīng)皂化作用制成。酚類消毒劑適用于消毒地面、墻壁以及那些不與藥品接觸的表面，它們對人體的毒性較低并且對多數(shù)材料的腐蝕性也相對較小。資料整理金田瑞麟

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FFU風(fēng)機(jī)過濾單元/第三十頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期日(三)季銨鹽類化合物

季銨鹽類化合物是一類陽離子表面活性劑，季銨鹽消毒劑在低濃度下即有抑菌作用，較高濃度時可殺滅大多數(shù)種類的細(xì)菌繁殖體和部分病毒，但不能殺滅細(xì)菌芽孢，屬低效消毒劑。季銨鹽類消毒劑因其性質(zhì)穩(wěn)定、易于貯存、毒性腐蝕性較小、刺激性小，被廣泛應(yīng)用，目前，大約有30%的制藥公司使用季銨鹽類消毒劑，新潔爾滅（苯扎溴銨）是一種常見的季銨鹽類消毒劑。這類消毒劑的殺菌效力會被肥皂、陰離子型去污劑和有機(jī)物鈍化，會因產(chǎn)生泡沫而引發(fā)一些問題。如果季銨鹽類消毒劑的配制水中含菌量過高，那么其消毒效力就會被削弱。由于季銨鹽類消毒劑對G－細(xì)菌（包括綠膿桿菌）的殺傷力較差，G－細(xì)菌不僅可在此類消毒劑中存活，而且可能增殖，資料整理金田瑞麟

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FFU風(fēng)機(jī)過濾單元/第三十一頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期日

因此，通常需要在這類產(chǎn)品中加入表面活性劑EDTA以增強(qiáng)其殺傷效力，季銨鹽類消毒劑也不能殺細(xì)菌芽孢和真菌孢子，盡管它在液態(tài)下很穩(wěn)定，但是，使用液在配制后的3～4個星期即變得不穩(wěn)定。

(四)液體滅菌劑和殺芽孢劑有些化學(xué)試劑在高濃度下延長消毒時間就能將芽孢或真菌孢子殺滅?？捎米鳉⒀挎呋蜴咦拥南緞┯卸趸?、戊二醛、甲醛、過氧化氫、過氧乙酸、次氯酸鈉等。資料整理金田瑞麟

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FFU風(fēng)機(jī)過濾單元/第三十二頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期日表4－2：液體消毒劑的殺菌效力等級表

類型常用濃度消毒效力酚類0.4%～0.3%中效季銨鹽類0.1%～0.2%低效醇類（乙醇、異丙醇）75%中效戊二醛2%高效甲醛1%~8%高效次氯酸鈉1000～2000百萬分之一高效過氧化氫3%～6%高效過氧乙酸0.2%～0.5%高效二氧化氯10～250百萬分之一高效返回資料整理金田瑞麟

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FFU風(fēng)機(jī)過濾單元/第三十三頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期日九、

消毒劑的效力確認(rèn)

作為使用者，每個公司都應(yīng)當(dāng)為消毒劑在各種不同的使用條件下的消毒效果進(jìn)行評價，因?yàn)橄緞┑臍⒕Ч麜艿奖幌颈砻娴念愋?、與被消毒的接觸時間以及相關(guān)設(shè)施中的微生物種群的影響。消毒劑的生產(chǎn)供應(yīng)商常用從環(huán)境中分離的常見微生物做效力評價測試，而這些實(shí)驗(yàn)菌株可能與用戶實(shí)際環(huán)境中的微生物有較大差別。因此，制藥企業(yè)還應(yīng)當(dāng)用從自己環(huán)境中分離的微生物來測定消毒劑對這些微生物的殺滅效果。資料整理金田瑞麟

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FFU風(fēng)機(jī)過濾單元/第三十四頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期日（一）、確認(rèn)時需要考慮的因素在消毒確認(rèn)試驗(yàn)的準(zhǔn)備過程中，企業(yè)應(yīng)考慮以下幾個方面的問題：(1)基于消毒劑本身的消毒能力進(jìn)行評價。(2)選擇合適的試驗(yàn)方案。(3)審計生產(chǎn)/供應(yīng)商。

對于消毒效力已被得到公認(rèn)的消毒劑而言。選取適當(dāng)?shù)脑囼?yàn)方法和挑戰(zhàn)菌株是非常重要的。例如，某種消毒劑已被認(rèn)為是低效力的并且不能殺滅芽胞，那么，就不能將枯草芽胞桿菌作為該消毒劑效力測試的試驗(yàn)菌株。由于沒有特定的測試方法要求的測定方法，不同企業(yè)可采用不同的實(shí)驗(yàn)方案。試驗(yàn)方案要與自身的消毒表面類型以及環(huán)境中的微生物種群相結(jié)合。理想的做法是將試驗(yàn)方案分為實(shí)驗(yàn)室考察現(xiàn)場考察兩部分。資料整理金田瑞麟

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FFU風(fēng)機(jī)過濾單元/第三十五頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期日二、現(xiàn)場考察

現(xiàn)場考察試驗(yàn)用以評估消毒劑對相應(yīng)設(shè)施的實(shí)際消毒效力。此類試驗(yàn)是通過監(jiān)測清潔/消毒前、后的環(huán)境微生物學(xué)質(zhì)量進(jìn)行的。經(jīng)歷一段時間后才能積累用以評估消毒和清潔程序的數(shù)據(jù)（建議至少3次試驗(yàn)）。為了獲得更好的評價結(jié)果，可以在最差條件下（如預(yù)防性維修之后）檢測環(huán)境的污染狀況，因?yàn)榇藭r環(huán)境中的微生物種類和數(shù)量有上升的潛在可能性。一般說來，試驗(yàn)方法要求，在清潔后環(huán)境中微生物數(shù)量應(yīng)控制在警戒限度以內(nèi)。盡管消毒劑效力確認(rèn)試驗(yàn)的完整性。第三十六頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期日三、實(shí)驗(yàn)室考察

實(shí)驗(yàn)室對消毒劑的殺菌效力測定方法通常是參照美國政府農(nóng)業(yè)化學(xué)師學(xué)會（AOAC）制定的消毒劑效力測定法。用于消毒劑效力測試的標(biāo)準(zhǔn)方法見AOACOfficialMethod960.09”GermicidalandDetergentSanitizingActionofDisinfectants”；用于滅菌劑或殺芽孢劑效力測試的標(biāo)準(zhǔn)方法見Method966.04”SporicidalActivityofDisinfectants”。當(dāng)然，有時限于實(shí)驗(yàn)室的實(shí)際實(shí)驗(yàn)條件，可以對標(biāo)準(zhǔn)方法做適當(dāng)?shù)恼{(diào)整和修改。資料整理金田瑞麟

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FFU風(fēng)機(jī)過濾單元/第三十七頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期日

美國政府農(nóng)業(yè)化學(xué)師學(xué)會(AOAC)方法建議使用銅綠假單胞菌（ATTCC15442）金黃色葡萄球菌（ATCC6538）和沙門菌（ATCC10708）作為挑戰(zhàn)菌，為了對消毒劑進(jìn)行更充分的評估，還可增加一些試驗(yàn)菌，如大腸桿菌（ATCC8739）白色念珠菌（ATCC1031）黑曲菌（ATCC16404）枯草牙胞桿菌（ATCC6633）以及控制性環(huán)境中的主要分離菌等。當(dāng)然，亦可用CMCC系列菌種測試消毒劑的殺菌效力。資料整理金田瑞麟

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FFU風(fēng)機(jī)過濾單元/第三十八頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期日

在我國，消毒劑的效力驗(yàn)證還可以參照中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB15981-1995《消毒與滅菌效果的評價方法與標(biāo)準(zhǔn)》以及中華人民共和國衛(wèi)生部的《消毒技術(shù)規(guī)范》。通常建議使用金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）ATCC6538作為細(xì)菌繁殖體中化膿性球菌的代表；大腸桿菌（Escherichiacoli）8099作為細(xì)菌繁殖體中腸道菌的代表；白色葡萄球菌（Staphylococcusalbus）8032作為空氣中細(xì)菌的代表；龜分枝桿菌膿腫亞種（Mycobacteriumchelonaesubsp.abscessus）ATCC93326作為人結(jié)核分枝桿菌的代表；枯草桿菌黑色變種芽孢(Bacillussubtilisvar.niger)ATCC9372作為細(xì)菌芽孢的代表；白色念珠菌（Candidaalbicans）ATCC10231和黑曲霉菌（Aspergillusniger）ATCC16404作為致病性真菌的代表；脊髓灰質(zhì)炎病毒-I型疫苗株(Poliovirus-I)作為病毒的代表。在此基礎(chǔ)上，根據(jù)消毒劑特定的用途或試驗(yàn)特殊需要，還可增選其他菌、毒株。資料整理金田瑞麟

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FFU風(fēng)機(jī)過濾單元/第三十九頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期日(四)定量懸浮試驗(yàn)定量懸浮試驗(yàn)是評價消毒劑殺菌效果常用的一種定量試驗(yàn)方法。

1.試驗(yàn)原理

將定量的指示菌懸液加入消毒劑溶液中，作用一定時間。經(jīng)中和劑去除殘留的消毒劑影響后，定量接種于平皿上，傾注培養(yǎng)基，經(jīng)培養(yǎng)后計算其菌落數(shù)。與未經(jīng)消毒劑作用的對照菌液平皿計數(shù)相比較，計算出殺菌率。2.試驗(yàn)器材試驗(yàn)菌種、培養(yǎng)基、中和劑、稀釋液、電動混合器、秒表、刻度吸管、恒溫水浴箱。

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FFU風(fēng)機(jī)過濾單元/第四十頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期日

3.試驗(yàn)步驟

(1)用無菌蒸餾水或磷酸鹽緩沖液配制試驗(yàn)用菌懸液，濃度為1×108～5×108CFU/ml。(2)將消毒劑用蒸餾水稀釋至待測濃度，置20℃±1℃水浴備用。(3)吸取試驗(yàn)菌液0.5ml，加入含消毒劑溶液4.5ml的試管中，迅速混勻并立即計時。(4)待試驗(yàn)菌液與消毒劑相互作用至預(yù)定時間，吸取0.5ml菌藥混合液，加入4.5ml經(jīng)滅菌的中和劑中，迅速混勻。(5)中和10min后，進(jìn)行系列10倍稀釋，分別吸取1.0ml樣液（原液、稀釋液），按活菌培養(yǎng)計數(shù)方法測定存活菌數(shù)，每管樣液接種2個平皿。(6)同時用稀釋液代替消毒液，進(jìn)行平行試驗(yàn)，作為陽性對照。(7)細(xì)菌營養(yǎng)體試驗(yàn)樣本在37℃溫箱培養(yǎng)48h，觀察最終結(jié)果；細(xì)菌芽孢試驗(yàn)樣本在37℃溫箱培養(yǎng)72h，觀察最終結(jié)果；真菌試驗(yàn)樣本在30℃溫箱培養(yǎng)48～72h，觀察最終結(jié)果。(8)試驗(yàn)重復(fù)3次，計算各組的活菌數(shù)，計算殺菌率。資料整理金田瑞麟

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FFU風(fēng)機(jī)過濾單元/第四十一頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期日

細(xì)菌懸液（107cfu/ml）對照管

0.5ml

0.5ml

消毒液

稀釋液

4.5ml

4.5ml（預(yù)定時間）

0.5ml

0.5ml

4.5ml

中和劑4.5ml

（中和10min）

1ml

1ml

1ml1ml1ml

1ml1ml

1ml

9ml9ml9ml

稀釋液

9ml9ml9ml

1ml1ml1ml

1ml1ml1ml

10010－310－210－1

10－110－210－3100

定量懸浮試驗(yàn)示意圖定量懸浮試驗(yàn)示意圖

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FFU風(fēng)機(jī)過濾單元/第四十二頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期日

定量懸浮試驗(yàn)不僅用于常規(guī)消毒效果測定，也可用于消毒劑的殺菌作用及其影響因素的試驗(yàn)。消毒劑濃度、作用時間、試驗(yàn)菌株以及是否加入有機(jī)物等可根據(jù)試驗(yàn)?zāi)康脑O(shè)計。

4.消毒效力評價一般采用殺菌率表示消毒劑殺菌能力。殺菌率＝[（對照組平均活菌數(shù)-試驗(yàn)組活菌數(shù)）÷對照組平均活菌數(shù)]×100％同時亦有用平均殺菌率及95％可信限表示。資料整理金田瑞麟

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FFU風(fēng)機(jī)過濾單元/第四十三頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期日例1：如某消毒劑進(jìn)行的定量懸浮試驗(yàn)得出以下（表4－3）試驗(yàn)結(jié)果，求其殺菌率是多少？表：4－3定量懸浮試驗(yàn)結(jié)果對照管試驗(yàn)管生長菌落數(shù)生長菌落數(shù)原液無法計數(shù)無法計數(shù)10－1無法計數(shù)8810－2無法計數(shù)619－31100

殺菌率＝[（對照組平均活菌數(shù)-試驗(yàn)組活菌數(shù)）÷對照組平均活菌數(shù)]×100％＝[(110000－880)÷110000]×100％＝99．2％資料整理金田瑞麟

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FFU風(fēng)機(jī)過濾單元/第四十四頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期日

例2：某消毒劑消毒前菌數(shù)為400000／ml，消毒后兩次試驗(yàn)10－1稀釋液生長菌落數(shù)分別為38／和34／ml，求其平均殺菌率及95％可信限。

m＝[(38+34)/2]×10＝360poisson分布的均數(shù)等于方差，當(dāng)均數(shù)（m）增加到k倍時，方差（σ2）增加k2倍，Sm＝√m/n×k2

代入公式Sm＝√m/n.k2

＝√36/2×102

＝42．4

式中Sm為標(biāo)準(zhǔn)誤，m為均數(shù)，n為樣品數(shù)。資料整理金田瑞麟

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FFU風(fēng)機(jī)過濾單元/第四十五頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期日

消毒后菌數(shù)（m）95％可信區(qū)間＝m±t×Sm

＝360±1．96×42.4/ml＝277－443/ml

殺菌率的95％可信限＝消毒前菌數(shù)±消毒后菌數(shù)／消毒前菌數(shù)＝[(400000－443)/400000]－[(400000－277)/400000]

＝0．9989－0．9993

答：該消毒劑的殺菌率為42.4；殺菌率的95％可信限為0.9989－0.9993。資料整理金田瑞麟

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FFU風(fēng)機(jī)過濾單元/第四十六頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期日(五)載體浸泡定量試驗(yàn)1.試驗(yàn)原理原理與定量懸浮試驗(yàn)相類似，本試驗(yàn)先將指示菌懸液定量接種到載體上，再將載體加入到消毒劑中作用至約定時間后，把載體取出加入中和劑內(nèi)中和，定量接種于平皿上，傾注培養(yǎng)基，經(jīng)培養(yǎng)后計算其菌落數(shù)。與未經(jīng)消毒劑作用的對照菌液平皿計數(shù)相比較，計算出殺菌率。2.試驗(yàn)器材試驗(yàn)菌種、載體、培養(yǎng)基、中和劑、稀釋液、電動混合器、秒表、刻度吸管、恒溫水浴箱。資料整理金田瑞麟

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FFU風(fēng)機(jī)過濾單元/第四十七頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期日3.試驗(yàn)步驟

(1)用無菌蒸餾水或磷酸鹽緩沖液配制試驗(yàn)用菌懸液，濃度為1×108～5×108CFU/ml。(2)用相應(yīng)方法將載體染菌（滴染法、浸染法、噴染法等），每片載體回收菌數(shù)應(yīng)為5×105～5×106CFU/片（按活菌培養(yǎng)計數(shù)所得結(jié)果），染菌載體可置37℃溫箱內(nèi)干燥備用。(3)將消毒劑用蒸餾水稀釋至待測濃度，置20℃±1℃水浴備用。(4)按每片5.0ml的量吸取消毒劑注入無菌小平皿中，用無菌鑷子取3片預(yù)先制備的菌片放入平皿中，并使之浸透于消毒液中。(5)待菌藥相互作用至約定時間，用無菌鑷子將菌片取出分別移入含5.0ml中和劑試管中。用電動混合器混合20s，使菌片上的菌體被洗脫進(jìn)入中和液中，再放置5min以上，使中和作用充分。最終進(jìn)一步混勻后，進(jìn)行系列10倍稀釋，分別吸取1.0ml樣液（原液、稀釋液）接種平皿，每管接種2個平皿，測定存活菌數(shù)。資料整理金田瑞麟

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FFU風(fēng)機(jī)過濾單元/第四十八頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期日6)另取一平皿，注入10.0ml稀釋液代替消毒液，加入2片菌片，作為陽性對照組。其隨后的試驗(yàn)步驟和活菌培養(yǎng)計數(shù)與上述試驗(yàn)組相同。(7)細(xì)菌營養(yǎng)體試驗(yàn)樣本在37℃溫箱培養(yǎng)48h，觀察最終結(jié)果；細(xì)菌芽孢試驗(yàn)樣本在37℃溫箱培養(yǎng)72h，觀察最終結(jié)果；真菌試驗(yàn)樣本在30℃溫箱培養(yǎng)48～72h，觀察最終結(jié)果。(8)試驗(yàn)重復(fù)3次，計算各組的活菌數(shù)，計算殺菌率,計算公式同定量懸浮試驗(yàn)。返回資料整理金田瑞麟

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FFU風(fēng)機(jī)過濾單元/第四十九頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期日

十、消毒劑稀釋液的效期確認(rèn)

假如企業(yè)配制了消毒劑以備將來使用，那就必須證明該稀釋過的消毒液在儲藏期間是穩(wěn)定的并且殺菌效力不變。此類確認(rèn)實(shí)驗(yàn)務(wù)必要考慮供應(yīng)相關(guān)消毒劑的使用、配制和儲藏方面的建議。一般說來，在確認(rèn)消毒劑的有效期時，總是將配制目的消毒效力測定結(jié)果與預(yù)定效期日的效力檢測結(jié)果作對比性評價。資料整理金田瑞麟

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FFU風(fēng)機(jī)過濾單元/第五十頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期日

多采用工作液直接接種法或載體試驗(yàn)法確認(rèn)消毒劑的效期。為了確定消毒液在有效期依然有效，試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)證明，在有效期末的消毒劑工作液能使細(xì)菌的活細(xì)胞的下降數(shù)量不低于3-5個對數(shù)單位；對殺孢子劑而言，消毒劑的工作液應(yīng)能使芽孢的下降數(shù)量不低于3-4個對數(shù)單位。用于消毒液效期確認(rèn)的試驗(yàn)方法須經(jīng)過驗(yàn)證。返回資料整理金田瑞麟

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FFU風(fēng)機(jī)過濾單元/第五十一頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期日

很多化學(xué)消毒劑的有效成分是易于分解或揮發(fā)的，因此，制藥工業(yè)對消毒劑的使用和確認(rèn)已經(jīng)并越來越引起法規(guī)部門的重視，制藥企業(yè)也越來越意識到驗(yàn)證清潔/消毒程序的必要性。然而，在驗(yàn)證方法的選擇上依然有很多靈活性，并且在多數(shù)情況下都是依照自己的實(shí)際條件來制定測試方法。最好是將實(shí)驗(yàn)室考察與現(xiàn)場考察相結(jié)合。資料整理金田瑞麟

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研究表明，Letheen肉湯(含%大豆卵磷脂和0.7%聚山梨酯)適用于中和酚類和季銨鹽類消毒劑,硫代硫酸鈉(常用濃度0.5%)適用于中和次氯酸鹽類消毒劑,其