檢驗(yàn)核醫(yī)學(xué)：放射性核素示蹤技術(shù)1

放射性核素示蹤技術(shù)

RadioactiveNuclideTracerMethod應(yīng)用思考1食物中有兩種含甲基的化合物膽堿和蛋氨酸，其甲基部分可相互轉(zhuǎn)移，彼此代替，并供給肌酸與腎上腺素合成的需要。

其轉(zhuǎn)移過(guò)程是以甲基作為完整基團(tuán)直接轉(zhuǎn)移，還是分解后重新形成？應(yīng)用思考23-羥-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶主要存在細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，能催化HMG-CoAMVA

該酶是膽固醇生物合成關(guān)鍵限速酶有多種因素(藥物、激素、代謝物）主要通過(guò)調(diào)節(jié)此酶活性影響膽固醇合成

如何測(cè)定其活性?應(yīng)用思考3從某中藥中提取得某單體，可能對(duì)瘤細(xì)胞DNA合成有抑制作用

如何設(shè)計(jì)一體外實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證？應(yīng)用思考4如何比較口服止血藥A及劑型改進(jìn)型B對(duì)消化道出血的治療效果？如何比較某些藥物增加或降低冠狀動(dòng)脈血流量？應(yīng)用思考5某生物制劑對(duì)神經(jīng)損傷有修復(fù)作用，現(xiàn)將其制成海綿敷貼劑，以延長(zhǎng)作用時(shí)間（緩釋作用）

如何設(shè)計(jì)一實(shí)驗(yàn)，證明此敷貼劑對(duì)神經(jīng)損傷創(chuàng)面的緩釋作用？應(yīng)用思考6某新型腫瘤單克隆抗體在腫瘤組織有較好的特異性濃聚。

如何設(shè)計(jì)一實(shí)驗(yàn)證明其濃聚程度？應(yīng)用思考7如何監(jiān)測(cè)干細(xì)胞的移植?一、概念

放射性核素示蹤技術(shù)是利用放射性核素及其標(biāo)記化合物作示蹤劑來(lái)研究生物體內(nèi)各種代謝物質(zhì)的吸收、分布、排泄、轉(zhuǎn)移規(guī)律及疾病診斷的一門(mén)科學(xué)。

Label:放射性核素Substance：觀察對(duì)象System:整體、離體Labeled-Substance吸收、分布、排泄…

放射性核素示蹤技術(shù)**放射性核素稀釋法**物質(zhì)吸收、分布、轉(zhuǎn)化、排泄的示蹤研究*放射性核素示蹤動(dòng)力學(xué)細(xì)胞動(dòng)力學(xué)的示蹤研究藥物代謝反應(yīng)機(jī)制的示蹤研究分子生物學(xué)的示蹤研究特定探針（單克隆抗體、配基）的示蹤研究

…….

二、原理

●放射性核素及標(biāo)記化合物與

相應(yīng)普通原子及分子具相同

的生物學(xué)性質(zhì).

如I與125I、雌二醇與3H-雌二醇

●放射性核素發(fā)出的射線(xiàn)可記錄分析三、放射性核素示蹤的特點(diǎn)

●

靈敏度高

●檢測(cè)方法簡(jiǎn)單

●合乎生理?xiàng)l件

●定位準(zhǔn)確

●非創(chuàng)傷性

待分析物析量g比色分光光度色質(zhì)譜層析放射性核素示蹤技術(shù)10-210-810-810-1010-15~10-18四、常用示蹤方法及其應(yīng)用

放射性核素稀釋法

物質(zhì)吸收示蹤法

物質(zhì)轉(zhuǎn)化示蹤法

物質(zhì)分布示蹤法

物質(zhì)示蹤動(dòng)力學(xué)

放射性核素稀釋法

radionuclidedilutiontechnique利用化學(xué)物質(zhì)在稀釋前后質(zhì)量不變的原理與示蹤技術(shù)相結(jié)合而建立的微量物質(zhì)定量分析方法基本公式A：放射性示蹤劑的總活度

S1、m1：混合前示蹤劑比活度與質(zhì)量

S2、m2：混合后的比活度及非標(biāo)記物質(zhì)量例1：某樣品中含有殘留甲胺磷，加入比活度為450000dpm/mg的32P標(biāo)記的甲胺磷0.02mg混勻后分離得0.1mg甲胺磷的放射性為2000dpm,求樣品中的甲胺磷含量。例2．以14CO2通過(guò)植物的光合作用生成放射性蛋白。取其中少量蛋白水解分離出部分谷氨酸比活度為508dpm/mg，欲求谷氨酸的含量，取126mg放射性蛋白樣品，水解后加入非標(biāo)記谷氨酸10.7mg，混勻后，分離出少部分谷氨酸測(cè)得其比活度為328dpm/mg，求標(biāo)記谷氨酸的量及蛋白中標(biāo)記谷氨酸的重量百分比？標(biāo)記谷氨酸的重量百分比為：32.44÷126=25.7%物質(zhì)轉(zhuǎn)化示蹤研究

揭示機(jī)體內(nèi)重要生命物質(zhì)的前身物、中間物和產(chǎn)物的關(guān)系以及完成某種轉(zhuǎn)化的必要條件,參入實(shí)驗(yàn)(incorporationexperiment）是放射性核素示蹤技術(shù)應(yīng)用到研究生物體內(nèi)物質(zhì)轉(zhuǎn)化的重要方法.

參入實(shí)驗(yàn)(incorporationexperiment)

研究生物體系中化合物A與B是否為產(chǎn)物和前身物的關(guān)系或轉(zhuǎn)化的必要條件基本原理

AB?*A*B

主要參數(shù)參入實(shí)驗(yàn)的類(lèi)型

整體參入實(shí)驗(yàn)

離體參入實(shí)驗(yàn)

參入實(shí)驗(yàn)應(yīng)用

1.淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)

細(xì)胞免疫功能

腫瘤細(xì)胞增殖

鉛中毒病人淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率

淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率（104CPM/106淋巴細(xì)胞）病人n=6021.27±10.32

正常n=10048.96±21.462.代謝物轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)

細(xì)菌放射呼吸實(shí)驗(yàn)：原理：細(xì)菌→CO2

14C-葡萄糖、14C-氨基酸→14CO2

設(shè)備：細(xì)胞代謝快速閃爍計(jì)數(shù)器

濾膜

培養(yǎng)液細(xì)菌放射呼吸實(shí)驗(yàn)的應(yīng)用：

生長(zhǎng)指數(shù)（GI）測(cè)定：GI=Ci/C0

GI＞3為陽(yáng)性

細(xì)菌倍增時(shí)間（t2x）測(cè)定：

logR2-logR1=K(t1-t2)t2x=0.301/KR2為t2的計(jì)數(shù)，R1為t1的計(jì)數(shù)，K為對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的速度常數(shù)。常見(jiàn)需氧菌倍增時(shí)間（min）菌種t2x菌種t2x大腸桿菌27.5±0.7炭疽桿菌38.0±5.2產(chǎn)氣桿菌28.7±0.5枯草桿菌48.8±2.3腸炎沙門(mén)氏菌43.7±5.5福氏痢疾桿菌51.5±4.1粘質(zhì)沙雷氏菌44.3±1.6宋內(nèi)氏痢疾桿菌29.7±0.1臘樣桿菌33.6±0.8金黃色葡萄球菌40.9±3.6巨大芽孢桿菌40.1±2.0白色葡萄球菌74.5±8.73.參入競(jìng)爭(zhēng)抑制實(shí)驗(yàn)：

體外抗腫瘤藥物篩選

DrugIR（%）

ADM57.73Carbo29.38BLM38.26VCR56.80Taxol63.35Holoxan32.97MMC19.34DTIC38.31ADM+Carbo70.90VCR+Carbo+BLM81.45卵巢癌常用化療藥物體外敏感實(shí)驗(yàn)五、放射性示蹤實(shí)驗(yàn)的基本方法

及注意事項(xiàng)1.放射性示蹤實(shí)驗(yàn)的類(lèi)型

●整體示蹤實(shí)驗(yàn)

●離體示蹤實(shí)驗(yàn)

2.注意事項(xiàng)

實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備階段:

選擇合適示蹤物

射線(xiàn)類(lèi)型

半衰期

放化純度

比活度

核素標(biāo)記位置

選擇合適的測(cè)量方法實(shí)驗(yàn)階段:

示蹤劑