細胞培養(yǎng)設(shè)施和基本條件

細胞培養(yǎng)設(shè)施和基本條件第一頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一準備室：用于進行培養(yǎng)器皿的清洗、包裝、培養(yǎng)物質(zhì)的準備和消毒以及供應(yīng)物品的保藏等。緩沖室：為減少外界污染源帶入培養(yǎng)室，在培養(yǎng)室外間有一緩沖室，3～5m2既可，可作為更衣室,也可放置恒溫培養(yǎng)箱或離心機。培養(yǎng)室：用于進行細胞培養(yǎng)和各種無菌操作的實驗室。其基本條件是：清潔、無菌、干燥、不通風(fēng)，并具有適宜的光線，應(yīng)盡量設(shè)法避免外界的污染。培養(yǎng)室和緩沖室的天花板上均應(yīng)裝消毒用的紫外線燈。第二頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一41緩沖室第三頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一第四頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一第五頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一一、最常用的大型必備裝置和儀器

凈化工作臺、CO2培養(yǎng)箱、倒置顯微鏡、離心機、冰箱、電熱干燥箱、超純水裝置、消毒鍋、超聲波清洗器、恒溫水浴箱、冷凍保存裝置、天平等二、最常用的培養(yǎng)器具

l.過濾除菌裝置：不銹鋼正壓過濾器、一次性濾器

2.手術(shù)器械

3.培養(yǎng)器皿：溶液瓶、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、多孔培養(yǎng)板、移液管和吸管、離心管

第二節(jié)實驗室設(shè)備第六頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一外流式

（基本不用）側(cè)流式

直流式超凈工作臺：工作原理是利用鼓風(fēng)機驅(qū)動空氣遁過高效濾器除去空氣中的塵埃顆粒，使空氣得到凈化。凈化空氣徐徐通過工作臺面，使工作臺內(nèi)構(gòu)成無菌環(huán)境。第七頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一

超凈工作臺結(jié)構(gòu)和模式圖第八頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一CO2培養(yǎng)箱：維持適當(dāng)溫度、濕度與pH培養(yǎng)箱設(shè)定的條件為37℃，5％CO2培養(yǎng)容器需與外界保持通氣狀態(tài)箱內(nèi)空氣應(yīng)保持干凈，定期消毒（紫外燈、酒精）水槽:使用蒸餾水，保持一定濕度。第九頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一電熱干燥箱：烘干和干熱消毒玻璃器皿鼓風(fēng)與升溫同時進行，100度時可停止鼓風(fēng)禁止先升溫后鼓風(fēng)100度以下時再打開箱門金屬器械、塑料制品、橡膠等不能在干燥箱內(nèi)消毒干熱滅菌（160℃，2hr）第十頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一高壓滅菌鍋：用于濕熱滅菌液體、金屬器械、塑料制品、橡膠等不能在干燥箱內(nèi)消毒121℃，20min第十一頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一超純水儀倒置顯微鏡

離心機液氮罐第十二頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一手動移液器電動移液器第十三頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一精密PH計微孔板震蕩器

第十四頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一培養(yǎng)器皿玻璃瓶皿（用于儲存各種液體）玻璃瓶（500毫升、250毫升、100毫升）吸管、離心管多孔培養(yǎng)板4、6、24、96孔；培養(yǎng)皿30、60、100毫米；培養(yǎng)瓶第十五頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一第三節(jié)清洗與消毒在組織細胞培養(yǎng)中清洗和消毒是一項極為重要的環(huán)節(jié)。清洗的主要目的:清除雜質(zhì)和微生物，使在器皿內(nèi)不殘留任何影響細胞生長的成份。細胞培養(yǎng)所用的器皿：玻璃類

塑料類

金屬類

第十六頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一一、清洗在細胞培養(yǎng)中，體外細胞對任何有害物質(zhì)都非常敏感,均能影響培養(yǎng)細胞的生長微生物產(chǎn)品附帶雜物上次細胞殘留物非營養(yǎng)成分的化學(xué)物質(zhì)需要清洗的培養(yǎng)用品玻璃器皿的清洗膠塞的清洗塑料制品的清洗第十七頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一1.玻璃器皿的清洗

浸泡刷洗(+烘干)

浸酸

沖洗清洗后的玻璃器皿：干凈透明無油跡第十八頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一浸泡：初次使用和培養(yǎng)使用后的玻璃器皿均需先用清水浸泡，以使附著物（灰塵或其他有害物）軟化或被溶掉。先用自來水簡單刷洗，然后用5％稀鹽酸液浸泡過夜，以中和其中的堿性物質(zhì)。再次使用的玻璃器皿則常附有大量剛使用過的殘留蛋白質(zhì)，干固后不易洗掉，用后立即浸入水中，要求完全浸入，不能留有氣泡或浮在液面上。刷洗：用毛刷沾洗滌劑刷洗，以除去器皿表面附著較牢的雜質(zhì)，刷洗要適度，過度會損害器皿表面光澤度。自然晾干或烘干后泡酸。第十九頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一浸酸：玻璃器皿浸泡到清潔液（洗液）中清潔液對玻璃器皿無腐蝕作用，而其強氧化作用可除掉刷洗不掉的微量雜質(zhì)浸泡時器皿要充滿清潔液，勿留氣泡或器皿露出清潔液面浸泡時間：一般為過夜，不應(yīng)少于6小時第二十頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一清潔液

:重鉻酸鉀（g）濃硫酸（ml）蒸餾水（ml）常用三種：

強清潔液63∶1000∶200次強清洗液120∶200∶1000

弱清潔液100∶100∶1000配制時應(yīng)注意安全，須穿戴耐酸手套和圍裙，并要保護好面部及身體裸露部分。配制過程中可使重鉻酸鉀溶于水中，然后慢慢加濃硫酸。并不停的用玻璃棒攪拌，使產(chǎn)生的熱量揮發(fā)，配制溶液應(yīng)選擇玻璃制品、耐酸塑料制品。配成后清潔液一般為棕紅色。第二十一頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一以配置10000ml常用清潔液為例介紹如下：先在搪瓷盆或塑料盆中加入蒸餾水8000ml，稱取1000g重鉻酸鉀，用玻璃棒攪拌直至溶解（可加熱以輔助溶解），待重鉻酸鉀液冷卻后，緩慢加入1000ml濃硫酸，邊加邊用玻璃棒攪動，以混合液溫度不過快上升和不出現(xiàn)重鉻酸鉀結(jié)晶為度。配好后倒入洗液缸中備用。新配制的清潔液呈棕紅色。當(dāng)使用時間過久，清潔液的顏色變暗、發(fā)綠或混濁時，應(yīng)棄去（深埋地下），配制新的。第二十二頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一

酸缸配制、盛裝清潔液的容器應(yīng)防酸、耐熱、有較大的開口，一般用瓷缸、玻璃制品或耐酸塑料制品。第二十三頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一沖洗：在使用后，刷洗及浸泡后都必須用水充分沖洗,使之盡量不留污染或清潔液的殘跡。需流水沖洗十次以上，每次水須灌滿及倒干凈，然后用蒸餾水清洗3-5次，晾干（或烘干）備用第二十四頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一2.膠塞的清洗新購置的瓶塞帶有大量滑石粉及雜質(zhì)，應(yīng)先用自來水沖洗，再做常規(guī)處理新膠塞置入水中浸泡后，用2%NaOH或洗衣粉煮沸10-20分鐘，自來水沖洗后，蒸餾水沖洗2-3次，晾干備用。第二十五頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一3.塑料制品的清洗塑料制品現(xiàn)多是采用無毒并已經(jīng)特殊處理的包裝，打開包裝即可用，多為一次性物品。必要時用2%NaOH浸泡過夜，用自來水充分沖洗，再用5%鹽酸溶液浸泡30分鐘，最后用自來水和蒸餾水沖洗干凈，晾干備用。第二十六頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一新購置物品玻璃器皿清洗步驟清水浸泡半小時以上→簡單刷洗→5%的稀鹽酸浸泡過夜→自來水沖洗→在洗滌劑中反復(fù)刷洗→自來水中充分沖洗→涼干（或50℃烤干）→浸酸過夜→流水振蕩沖洗20遍→漓水→去離子水沖洗3～4次→三蒸水沖洗兩次（或浸泡一次）→50℃烤干，待包裝。第二十七頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一用過的玻璃器皿清洗步驟帶毒玻璃器材用后應(yīng)立即浸入消毒水中，非帶毒的玻璃器材需浸入清水中浸泡→刷洗→自來水沖洗→涼干（50℃烤干）→浸酸過夜→流水振蕩沖洗20遍→漓水→去離子水沖洗3～4次→三蒸水沖洗兩次（或浸泡一次）→50℃烤干，待包裝。第二十八頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一橡皮帽和橡皮塞的清洗新購置的橡膠制品（大小膠塞、橡皮膠頭）的洗滌方法:2%NaOH煮沸15分鐘→流水沖洗→2～5%稀HCl煮沸15分鐘→流水沖洗→去離子水煮沸20分鐘（或去離子水浸泡過夜）→去離子水沖洗一次→三蒸水煮沸20分鐘→三蒸水沖洗一次→50℃烤干備用．第二十九頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一不銹鋼除菌濾器的清洗先用洗滌劑刷洗濾器→流水沖洗15分鐘→去離子水沖洗2～3次（去離子水浸泡24小時）→三蒸水沖洗2～3次或浸泡24小時→干燥備用。鑷子、剪刀紗布擦去臟污→自來水洗凈→酒精棉球擦試。金屬濾網(wǎng)自來水沖洗→蒸餾水沖洗→三蒸水沖洗。第三十頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一二、消毒細胞培養(yǎng)的最大危險是發(fā)生培養(yǎng)物的細菌、真菌和病毒等微生物的污染常見原因：操作間或周圍空間的不潔培養(yǎng)器皿和培養(yǎng)液消毒不徹底由于有關(guān)培養(yǎng)的每個環(huán)節(jié)的失誤均能導(dǎo)致培養(yǎng)失敗，故細胞培養(yǎng)的每個環(huán)節(jié)都應(yīng)嚴格遵守操作常規(guī)，防止發(fā)生污染第三十一頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一物理消毒滅菌法紫外線：用于空氣，操作臺表面和不能使用其它法進行消毒的培養(yǎng)器皿。消毒時間：30min（至少）紫外殺菌功能除了紫外本身以外，還可以由產(chǎn)生的臭氧來完成。紫外滅菌以后，最好過一個小時再進去。

第三十二頁，共三十四頁，編輯于2023年，星期一濕熱（高壓蒸氣滅菌法）