膿汁和糞便標本中病原菌的檢測

膿汁和糞便標本中病原菌的檢測第一頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期二微生物學實驗室規(guī)則

LabSafetyRegulation

進入實驗室必須穿白大衣，戴帽子。書本、文具放在抽屜里。實驗室內(nèi)不準吃東西、喝飲料，不準把任何東西放入嘴中，也不要用手撫摸頭臉等部位。凡是廢棄的細菌培養(yǎng)物、帶菌材料，應放在指定地點等待滅菌處理，不得隨便亂放或用水沖洗。一旦發(fā)生意外，造成污染，應立即報告老師進行處理。離開實驗室前,必須洗手。懷疑污染應及時用1‰新潔而滅泡手。每次實驗后，實驗臺用消毒液擦拭，地板先用濕的拖布拖地以后再掃地，實驗室用紫外線燈照射1小時。第二頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期二實驗分組（45人）倆倆相對4人為一個小組,組號編在電源插座上。每組按從前到后,從左到右的順序，分別編號為甲乙丙丁。甲乙

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講臺左右11甲乙丙丁戊第三頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期二實驗分組（40人）倆倆相對4人為一個小組,組號編在電源插座上。每組按從前到后,從左到右的順序，分別編號為甲、乙、丙、丁。甲乙

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講臺左右第四頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期二實驗分組（36人）倆倆相對4人為一個小組,組號編在電源插座上。每組按從前到后,從左到右的順序，分別編號為甲、乙、丙、丁。甲乙

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講臺左右第五頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期二實驗分組（32人）倆倆相對4人為一個小組,組號編在電源插座上。每組按從前到后,從左到右的順序，分別編號為甲、乙、丙、丁。甲乙

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講臺左右第六頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期二實驗室器材介紹第七頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期二常用器材擺放順序：電源插座→試管架→酒精燈→污物盤。試管架上器材：靠近插座一側(cè)第1列放置接種針,第2列放置接種環(huán)，另一側(cè)中間兩行放置油性筆和打火機?！鞑氖褂煤?，必須放回原處，依次擺整齊。第八頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期二普通冰箱(3顆星***)冷藏室(上柜）：溫度4～8℃，保存細菌培養(yǎng)物，培養(yǎng)基，常用菌種和抗菌素紙片等。冷凍室（下柜）：溫度－18℃，保存診斷血清、血漿，長期保藏的抗菌素紙片。

衛(wèi)生工具：掃帚,拖布,撮箕,垃圾筐,放在冰箱和水池之間。第九頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期二隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱：35～37℃，一般細菌培養(yǎng)時間為18～24小時。第十頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期二奧林巴斯CX21型生物顯微鏡（實驗柜內(nèi)，每人一臺）注意：只能橫放，不得豎放。第十一頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期二革蘭染色瓶染色架石蠟油拭鏡紙吸水紙乙醇乙醚微生物學器材柜-1（西側(cè)邊臺中段）電爐→右側(cè)柜內(nèi)第十二頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期二微生物學器材柜-2（東側(cè)邊臺中段）酒精棉球碘酒棉球鑷子電爐、石棉網(wǎng)手套第十三頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期二1500W電爐▲安全警告1.電源插塞與電爐插孔接觸良好→插頭插入插座。2.如果培養(yǎng)基暴沸溢出，流入電爐；必須立即切斷電源、拔除插頭；以免觸電，危及生命！東西兩側(cè)邊臺各一個電爐，每個電爐可同時放置4個300ml錐形瓶進行加熱。第十四頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期二蒸餾水：配制培養(yǎng)基。1‰新潔而滅：懷疑病原菌污染，泡手3～5分鐘。消毒液：擦拭實驗臺臺面。玻片缸：浸泡用過的載玻片。第十五頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期二醫(yī)學微生物學實驗

綜合性實驗一

ComprehensiveExperiment1

膿汁和糞便標本中病原菌的檢測（P2）

Isolationanddetectionofpathogenicbacteriainpusandstoolspecimens

培養(yǎng)基的制備P2消毒與滅菌P5細菌的人工培養(yǎng)無菌技術(shù)（錄像）擺斜面，傾注平板。第十六頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期二膿汁、痰、咽部分泌物觀察菌落特征、溶血性、色素肉湯增菌培養(yǎng)挑取可疑菌落涂片染色鏡檢血平板培養(yǎng)直接涂片、革蘭染色、鏡檢血液、穿刺液純培養(yǎng)培養(yǎng)液涂片染色境檢染色鏡檢生化反應血清學鑒定雙糖鐵培養(yǎng)基增菌培養(yǎng)血、骨髓挑取可疑菌落SS瓊脂、伊紅美藍平板分離培養(yǎng)糞便常見腸道致病菌的檢查程序P48：常見病原性球菌的檢查程序P47：生化反應動物實驗藥敏實驗第十七頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期二膿汁和糞便標本中病原菌的檢測

實驗流程(6次課12學時）①培養(yǎng)基的制備②細菌的分離培養(yǎng)③細菌的純培養(yǎng)④細菌的形態(tài)學檢查⑤細菌的生化試驗等⑥細菌的血清學試驗、結(jié)果分析→實驗論文撰寫第十八頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期二培養(yǎng)基的制備

Preparationof

CultureMedia組號培養(yǎng)基稱量水量煮沸分裝備注（45人份）1，11營養(yǎng)瓊脂11.4g300ml--4瓶，500ml瓶，平板2～4營養(yǎng)瓊脂3.0g80ml3次5ml16支×3，中試管，斜面5～7營養(yǎng)肉湯1.1g50ml1次3ml16支×3，小試管，肉湯8～10半固體瓊脂1.9g65ml3次4ml16支×3，小試管，高層※公共培基，勿作標記！第十九頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期二培養(yǎng)基的制備

Preparationof

CultureMedia組號培養(yǎng)基稱量水量煮沸分裝備注（40人份）1營養(yǎng)瓊脂11.4g300ml--4瓶，500ml瓶，平板2～4營養(yǎng)瓊脂2.9g75ml3次5ml15支×3，中試管，斜面5～7營養(yǎng)肉湯1.1g50ml1次3ml15支×3，小試管，肉湯8～10半固體瓊脂1.7g60ml3次4ml15支×3，小試管，高層※公共培基，勿作標記！第二十頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期二培養(yǎng)基的制備

Preparationof

CultureMedia組號培養(yǎng)基稱量水量煮沸分裝備注（36人份）1營養(yǎng)瓊脂11.4g300ml--3瓶，500ml瓶，平板2～4營養(yǎng)瓊脂2.7g70ml3次5ml14支×3，中試管，斜面6～7營養(yǎng)肉湯1.3g60ml1次3ml20支×2，小試管，肉湯8～10半固體瓊脂1.7g60ml3次4ml14支×3，小試管，高層※公共培基，勿作標記！第二十一頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期二培養(yǎng)基的制備

Preparationof

CultureMedia組號培養(yǎng)基稱量水量煮沸分裝備注（32人份）1營養(yǎng)瓊脂11.4g300ml--3瓶，500ml瓶，平板2～4營養(yǎng)瓊脂2.3g60ml35ml12支×3，中試管，斜面6、7營養(yǎng)肉湯1.2g55ml13ml18支×2，小試管，肉湯8、9半固體瓊脂2.2g75ml34ml18支×2，小試管，高層※公共培基，勿作標記！第二十二頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期二

培養(yǎng)基隔石棉網(wǎng)煮沸，使完全溶解。營養(yǎng)肉湯煮沸1次，含瓊脂的培養(yǎng)基煮沸3次(煮至剛剛冒泡,立即放置臺面，半分鐘后再煮)。加熱時,常搖動。沸騰時，不能搖動！第二十三頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期二用洗耳球和刻度吸管分裝培養(yǎng)基。棉塞1/2塞入試管口內(nèi)，松緊合適。培養(yǎng)基趁熱分裝培養(yǎng)基裝筐待滅菌放置試管筐內(nèi)，罩上硫酸紙牛皮紙，用橡皮筋扎好。第二十四頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期二各組邊臺柜子內(nèi)器材量筒錐形瓶砝碼干粉培養(yǎng)基試管筐天平第二十五頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期二各組邊臺抽屜內(nèi)器材試管刻度吸管洗耳球稱量皿2個藥勺厘米尺硫酸紙、牛皮紙、橡皮筋第二十六頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期二

稱量皿置于左、右盤，游碼移至標尺左端“0”點位置上，指針應對準中線，取得平衡。否則將杠桿兩端的調(diào)整螺母旋動調(diào)節(jié)平衡。

秤物時“左物右碼”，砝碼置右盤，物品置左盤，盡可能放在秤盤中心。天平保持干燥、清潔。用過的藥勺、稱量皿清洗干凈。第二十七頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期二

稱量皿置于左盤，游碼移至標尺左端“0”點位置上，指針應對準中線，取得平衡。否則將杠桿兩端的調(diào)整螺母旋動調(diào)節(jié)平衡。

秤物時“左物右碼”，砝碼置右盤，物品置左盤，盡可能放在秤盤中心。天平保持干燥、清潔。用過的藥勺、稱量皿清洗干凈。第二十八頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期二培養(yǎng)基配制器材內(nèi)蓋蓋好外蓋扭緊第二十九頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期二培養(yǎng)基制備程序

干粉培養(yǎng)基→蒸餾水→加熱溶化→分裝→集中放在試管筐里→罩上硫酸紙、牛皮紙→用橡皮筋扎好→放入講臺邊的滅菌桶或滅菌筐內(nèi)→送到高壓蒸汽滅菌室（洗刷室）→滅菌。

※請在30分鐘內(nèi)完成。第三十頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期二培養(yǎng)基的制備

Preparationof

CultureMedia組號培養(yǎng)基稱量水量煮沸分裝備注（40人份）1營養(yǎng)瓊脂11.4g300ml--4瓶，500ml瓶，平板2～4營養(yǎng)瓊脂2.9g75ml3次5ml15支×3，中試管，斜面5～7營養(yǎng)肉湯1.1g50ml1次3ml15支×3，小試管，肉湯8～10半固體瓊脂1.7g60ml3次4ml15支×3，小試管，高層※公共培基，勿作標記！第三十一頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期二第三十二頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期二PreparationofCulturemedia

Groupformation:FourstudentseachformonegroupTotalof10groups(10×4=40)Eachgroupwillpreparethemediaaccordingto theinstructiongiveninnextslide.第三十三頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期二PreparationofCultureMediaGroupnumberNameofMediumtoprepareQuantityweightingDistilledwaterBoilDispensingquantityincontainerContainertodispense1Nutrientagar11.4g300ml－－4bottles，Petridishes2～4Nutrientagar2.9g75ml3×5ml15×3tubes，agarslants5～7Nutrientbroth1.1g50ml1×3ml15×3tubes，brothtubes8～10Semi-solidagar1.7g60ml3×4ml15×3tubes，agardeepsMeltagarintosolutioninthemicrowaveorelectricstove第三十四頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期二玻璃器材的洗刷無污染器皿:洗滌劑洗刷→流水沖洗10次→晾干。病原菌污染的器材→高壓蒸汽滅菌→趁熱倒出污物→洗滌劑浸泡→瓶子、試管、吸管用毛刷，平皿用紗布，洗刷干凈→流水沖洗10次→晾干。瓶刷試管刷吸管刷去污粉紗布第三十五頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期二收拾器材，放回邊臺柜內(nèi)，依次擺整齊!量筒錐形瓶砝碼干粉培養(yǎng)基試管筐天平量筒→罩紙?zhí)?，扎皮筋。錐形瓶→洗干凈，塞棉塞，罩紙?zhí)?，扎皮筋。干粉培養(yǎng)基→內(nèi)外蓋子，必須蓋好扭緊！第三十六頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期二收拾器材，放回抽屜內(nèi)，依次擺整齊!試管刻度吸管洗耳球稱量皿藥勺厘米尺硫酸紙、牛皮紙、橡皮筋藥勺、稱量皿、刻度吸管洗刷干凈，甩去水滴，放回邊臺抽屜內(nèi)。第三十七頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期二第三十八頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期二細菌培養(yǎng)基CultureMedia

用人工的方法，將多種營養(yǎng)物質(zhì)，根據(jù)各種微生物生長繁殖的需要而合成的一種營養(yǎng)制品。它的主要成分是蛋白胨、牛肉膏、氯化鈉和水，pH7.4～7.6。培養(yǎng)基制備的一般程序：

①調(diào)配→溶化→矯正pH→分裝→滅菌→檢定→保存。②干粉培養(yǎng)基→蒸餾水→加熱溶化→分裝→滅菌→檢定→保存。培養(yǎng)基的制備原則：

(1)適當?shù)臓I養(yǎng)成分,(2)合適的酸堿度,(3)配制后必須滅菌。第三十九頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期二培養(yǎng)基的種類（按物理性狀分類）液體培養(yǎng)基:不含凝固劑(瓊脂),用于增菌，純培養(yǎng),保種。固體培養(yǎng)基:含1％～2％瓊脂，用于分離培養(yǎng),純培養(yǎng),保種。半固體培基（瓊脂高層）:含0.3％～0.5％瓊脂，用于動力檢測,保種。營養(yǎng)肉湯brothtube瓊脂斜面agarslant瓊脂高層agardeepDifferentformsofculturemedia.第四十頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期二培養(yǎng)基的種類（按用途分類）P3基礎(chǔ)培養(yǎng)基:含一般細菌生長繁殖所需的基本營養(yǎng)成分，可作為一些特殊培養(yǎng)基的基礎(chǔ)成分，如普通平板。營養(yǎng)培養(yǎng)基：在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入血液、生長因子等特殊成分，供營養(yǎng)要求較高的細菌和須要特殊生長因子的細菌生長，如血平板。增菌培養(yǎng)基：促進目的菌的生長，適用于含菌量較少的標本，如葡萄糖肉湯。選擇培養(yǎng)基：在培養(yǎng)基中加入抑制劑抑制雜菌生長，有助于目的菌的生長，如EMB、SS平板。鑒別培養(yǎng)基：利用細菌分解能力及代謝產(chǎn)物的不同，在培養(yǎng)基中加入特定的作用底物和指示劑，用來試驗細菌的生化反應、代謝產(chǎn)物，如糖發(fā)酵管。厭氧培養(yǎng)基：氧化還原電勢低，表面用凡士林和石蠟封住，與空氣隔絕，成為無氧環(huán)境，如庖肉培養(yǎng)基。第四十一頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期二培養(yǎng)基的滅菌

在冷空氣完全排盡的情況下，蒸汽壓103.43kPa,溫度可達到121.3℃,維持15～30分鐘，可以殺滅包括細菌芽胞在內(nèi)的所有微生物?；A(chǔ)培養(yǎng)基：121℃高壓蒸汽滅菌15～30分鐘。含糖培養(yǎng)基：115℃滅菌15分鐘。雞蛋、牛奶培養(yǎng)基:75～100℃30分鐘，3次(1天1次)。不耐高溫的液體成分：濾菌器濾過除菌EK型蔡氏濾器、G5或G6玻璃濾器、0.45um或0.22um微孔濾膜。第四十二頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期二瓊脂平板agarplate

含瓊脂的培養(yǎng)基滅菌以后，冷卻50～60℃（溫度越高，冷凝水越多，越易污染），以無菌操作，傾注平皿10ml（直徑7厘米平皿），瓊脂凝固后形成瓊脂平板。平板主要用于細菌的分離培養(yǎng)和藥敏試驗。平板儲存待用或做細菌培養(yǎng)時，為什么要倒置？①防止平板水分蒸發(fā)丟失。②防止冷凝水滴于平板表面，影響單菌落形成。③……第四十三頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期二瓊脂斜面agarslant

含瓊脂的培養(yǎng)基滅菌以后，趁熱斜放，培基不超過試管長度的2/3，瓊脂凝固以后形成一個傾斜的表面。斜面主要用于純菌移種和菌種保存。

斜面底部的冷凝水有利于純菌移種、菌苔形成和菌種保藏。第四十四頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期二怎樣檢查培養(yǎng)基是否合格?★無菌試驗：將待檢培養(yǎng)基置于35～37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時，無任何細菌生長為合格?！镄Ч囼灒簩⒁阎臉藴蕝⒖季辏臃N于待檢培養(yǎng)基中，檢查細菌的生長繁殖狀況和生化反應是否與預期的結(jié)果相符合。第四十五頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期二細菌生長繁殖的方式和速度細菌繁殖方式：以二分裂方式進行無性繁殖。繁殖速度：多數(shù)20～30分鐘繁殖1代，結(jié)核桿菌18～20小時繁殖一代。細菌生長繁殖曲線第四十六頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期二細菌的生長曲線細菌數(shù)量的對數(shù)培養(yǎng)時間（小時）510152025306.06.57.07.58.08.59.0活菌數(shù)總菌數(shù)遲緩期對數(shù)生長期穩(wěn)定期衰退期第四十七頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期二細菌生長曲線意義遲緩期：一般1～4h，細菌代謝活躍，但不繁殖。對數(shù)期：維持4～8h，細菌快速繁殖，數(shù)目呈幾何級數(shù)增加，細菌形態(tài)、染色性、生理活性最