生豬集中屠宰環(huán)節(jié)質(zhì)量安全管理規(guī)范

生豬集中屠宰環(huán)節(jié)質(zhì)量安全管理規(guī)范范圍本文件規(guī)定了生豬屠宰環(huán)節(jié)中涉及到的廠區(qū)環(huán)境、設(shè)施設(shè)備、檢驗檢測、生產(chǎn)經(jīng)營、排放處理、質(zhì)量管理制度等的要求。本文件適用于廣西境內(nèi)生豬屠宰企業(yè)屠宰環(huán)節(jié)質(zhì)量安全管理的要求。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。NY/T3227屠宰企業(yè)畜禽及其產(chǎn)品抽樣操作規(guī)范GB4789.2食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗菌落總數(shù)測定GB5009.3食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中水分的測定GB5749生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB12694食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)畜禽屠宰加工衛(wèi)生規(guī)范GB14881食品生產(chǎn)通用衛(wèi)生規(guī)范GB17236畜禽屠宰操作規(guī)程生豬GB17996生豬屠宰產(chǎn)品品質(zhì)檢驗規(guī)程GB18642豬旋毛蟲病診斷技術(shù)GBT20756可食用動物肌肉、肝臟和水產(chǎn)品中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考?xì)埩袅康臏y定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法GB50016建筑設(shè)計防火規(guī)范《病死及病害動物無害化處理操作規(guī)程》術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。自營self-support指擁有獨立的肉類品牌、養(yǎng)殖基地或有簽約的合作養(yǎng)殖單位的（由生豬屠宰企業(yè)自己購進(jìn)生豬）生豬屠宰并銷售生豬產(chǎn)品的經(jīng)營模式。代宰helpingslaughter指屠宰企業(yè)接納生豬販子自行收購生豬或第三方提供的生豬進(jìn)場屠宰，收取相應(yīng)屠宰加工費，再由生豬販子或第三方將生豬產(chǎn)品上市銷售的一種經(jīng)營模式。片豬肉demi-carcasspork將豬胴體沿脊椎中線，縱向鋸（劈）成兩分體的豬肉，包括帶皮片豬肉、去皮片豬肉。廠區(qū)環(huán)境選址與布局選址應(yīng)符合動物防疫條件要求，遠(yuǎn)離“廢水、廢氣、廢渣”污染源。并經(jīng)縣級農(nóng)業(yè)農(nóng)村部門動物防疫選址風(fēng)險評估合格。布局應(yīng)符合動物防疫條件要求。四周有圍墻，設(shè)生產(chǎn)區(qū)和非生產(chǎn)區(qū)、生產(chǎn)區(qū)設(shè)清潔區(qū)和非清潔區(qū)，且有隔離帶，非清潔區(qū)在功能布局的下風(fēng)側(cè)。廠區(qū)入口門前應(yīng)建有生豬運輸車輛停車檢查區(qū)，廠區(qū)內(nèi)應(yīng)設(shè)有生豬運輸車輛、產(chǎn)品運輸車輛清洗和消毒的區(qū)域。生產(chǎn)區(qū)應(yīng)設(shè)有待宰間、隔離間、急宰間、實驗室、官方獸醫(yī)室、屠宰車間、化學(xué)品存放間和無害化處理間等。環(huán)境衛(wèi)生屠宰廠門面整潔，路面、場地道路硬化、平整、無積水。生豬入場、廢棄物運送與成品出廠不得共用一個大門，場內(nèi)不共用一個通道，且凈道和污道不交叉。非清潔區(qū)應(yīng)設(shè)置有糞污、廢棄物等暫時貯存場所，其地面、四壁應(yīng)便于清潔和消毒。廠區(qū)內(nèi)各消毒通道、消毒池內(nèi)應(yīng)常年有消毒藥水且定期更換。廠區(qū)內(nèi)禁止飼養(yǎng)與屠宰無關(guān)的動物。廠區(qū)內(nèi)定期除蟲滅害。建設(shè)要求。屠宰車間布局合理，設(shè)清潔區(qū)和非清潔區(qū)，且有效間隔。滿足生產(chǎn)工藝流程和衛(wèi)生要求，避免迂回運輸。人流、物流互不干擾。設(shè)施設(shè)備生產(chǎn)區(qū)設(shè)置要求待宰間面積應(yīng)與設(shè)計屠宰規(guī)模相適應(yīng)，應(yīng)能容納設(shè)計日屠宰量1.5倍的生豬數(shù)量。屠宰車間應(yīng)有放血、燙毛、拋光、清洗掛鉤、開膛、取內(nèi)臟、內(nèi)臟清洗、副產(chǎn)品加工等區(qū)域。建筑要求應(yīng)采用耐用材料建造，易于維護(hù)、清潔和消毒，且符合GB50016中規(guī)定的防火要求。建筑內(nèi)部結(jié)構(gòu)與材料，如頂棚、墻壁、門窗、地面應(yīng)易于維護(hù)、清潔和消毒，具體應(yīng)符合GB14881中描述的建筑內(nèi)部結(jié)構(gòu)與材料的要求。應(yīng)有防塵設(shè)計。生產(chǎn)車間內(nèi)地面、頂棚、墻、柱、窗口等處的陰陽角，應(yīng)呈弧形設(shè)計?；A(chǔ)設(shè)施給排水設(shè)施設(shè)備應(yīng)符合屠宰加工規(guī)模，應(yīng)符合GB12694描述的供水要求和排水要求。屠宰與分割加工用水的水質(zhì)應(yīng)符合GB5749的規(guī)定。加工用水的管道不與非飲用水管道相連，并有標(biāo)識。通風(fēng)設(shè)施設(shè)備應(yīng)有良好的通風(fēng)、排氣裝置，及時排除污染的空氣和水蒸氣。空氣流動的方向應(yīng)從清潔區(qū)流向非清潔區(qū)。通風(fēng)口應(yīng)裝有紗網(wǎng)或其他保護(hù)性的耐腐蝕材料制作的網(wǎng)罩，防止蟲害侵入。紗網(wǎng)或網(wǎng)罩應(yīng)便于裝卸、清洗、維修或更換。照明設(shè)施設(shè)備應(yīng)與屠宰加工規(guī)模相適應(yīng)，屠宰和分割車間內(nèi)應(yīng)有適宜的自然光線或人工照明。亮度應(yīng)能滿足檢疫檢驗人員和生產(chǎn)操作人員的工作需要，動物裝卸臺配備照度不小于300Lx的照明設(shè)備，屠宰間配備檢疫操作臺的照度不小于500Lx的照明設(shè)備。照明燈具的XX不應(yīng)改變屠宰或分割產(chǎn)品的本色。食品和原料正上方的照明設(shè)施應(yīng)使用安全性照明設(shè)施或采取防護(hù)措施。倉儲設(shè)施設(shè)備應(yīng)防水、防霉、防鼠、防蟲，且滿足被儲存產(chǎn)品對于溫濕度等的特定要求?？刂萍訜?、冷卻、冷凍的溫控設(shè)施設(shè)備應(yīng)根據(jù)生產(chǎn)需要滿足相應(yīng)的要求，并進(jìn)行溫濕度監(jiān)控。屠宰設(shè)施設(shè)備應(yīng)滿足設(shè)計屠宰能力，且定期維護(hù)和保養(yǎng)，配備活豬輸送機、豬體清洗裝置、致昏設(shè)備、同步檢驗裝置、懸掛輸送機、浸燙池、脫毛機（剝皮機）、劈半機等；應(yīng)有專門收集豬血的容器，采集食用豬血時，應(yīng)配置中空放血設(shè)備。有與屠宰數(shù)量相適應(yīng)的頭、蹄、內(nèi)臟等存放設(shè)備；有病害豬或不合格肉品專用軌道及專用容器、運輸工具。不能使用國家規(guī)定的淘汰設(shè)備。應(yīng)設(shè)有獨立的官方獸醫(yī)室。應(yīng)設(shè)有獨立的檢驗室。配備有與屠宰加工規(guī)模相適應(yīng)的非洲豬瘟、旋毛蟲、“瘦肉精”、抗生素、水分、細(xì)菌、揮發(fā)性鹽基氮等理化、生化及殘留檢測能力檢驗室，各實驗室功能區(qū)分開且相對獨立。配備的設(shè)施設(shè)備包括但不限于：顯微鏡、恒溫培養(yǎng)箱、烤箱、水浴鍋、干燥器、萬分之一天平、溫濕度計、冰箱、冰柜、加樣器、酶標(biāo)儀、純水儀、超凈工作臺、高溫滅菌器、凱氏定氮蒸餾玻璃裝置、滴定管、熒光PCR儀等。設(shè)備定期維護(hù)、校準(zhǔn)、檢定。應(yīng)配備與屠宰加工規(guī)模相適應(yīng)的污水污物處理系統(tǒng)和病害豬及其產(chǎn)品無害化處理設(shè)施設(shè)備。若委托專業(yè)無害化處理廠進(jìn)行病害豬及其產(chǎn)品無害化處理的，應(yīng)配備廢棄物、病害豬及其產(chǎn)品暫存設(shè)施設(shè)備，且有明顯標(biāo)識。應(yīng)配備緊急供電、消防設(shè)施等能確保屠宰廠安全生產(chǎn)的設(shè)施設(shè)備。應(yīng)設(shè)有監(jiān)控設(shè)備。包括：視頻監(jiān)控系統(tǒng)，在生豬進(jìn)場、產(chǎn)品出廠、待宰間、屠宰車間、檢驗崗位、檢驗室、分割車間等處安裝在線視頻監(jiān)控設(shè)備，實行中央控制，應(yīng)與縣級以上監(jiān)管部門聯(lián)網(wǎng)運行并接受縣級以上農(nóng)業(yè)農(nóng)村主管部門監(jiān)控；用于監(jiān)測、控制、記錄的設(shè)備，如壓力表、溫濕度計等，應(yīng)定期校準(zhǔn)、維護(hù)。運輸工具應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特點配備制冷設(shè)施，并有溫度自動調(diào)控和記錄監(jiān)控裝置。屠宰廠運輸片豬肉應(yīng)使用封閉和設(shè)有吊掛設(shè)施的專用車輛。衛(wèi)生消毒設(shè)施設(shè)備生豬運輸車輛出入口應(yīng)設(shè)置與門同寬、長4m、深0.3m以上的消毒池；各車間出入口應(yīng)設(shè)置換鞋（穿鞋套）設(shè)施或工作鞋、車輪消毒設(shè)施，其規(guī)格應(yīng)滿足消毒需求。應(yīng)配備有車輛的清洗消毒設(shè)施，并實行雨污分離。應(yīng)設(shè)有與屠宰加工規(guī)模相適應(yīng)并與車間相接的更衣室、衛(wèi)生間、淋浴間，上述場所不應(yīng)對產(chǎn)品造成潛在的污染風(fēng)險。不同清潔程度要求的區(qū)域應(yīng)設(shè)有單獨的更衣室。更衣室應(yīng)保證工作服與個人服裝及其他物品分開放置。衛(wèi)生間不得與屠宰加工、包裝或貯存等區(qū)域直接連通。屠宰車間、隔離間、急宰間、無害化處理間、衛(wèi)生間內(nèi)等應(yīng)設(shè)置與屠宰加工能力相適應(yīng)的非手動式洗手、消毒設(shè)施、干手設(shè)施，必要時設(shè)置冷熱水混合器。生產(chǎn)經(jīng)營工藝流程屠宰工藝流程合理，應(yīng)包括噴淋、致昏、刺殺放血、脫毛或剝皮、預(yù)干燥、開膛、凈腔、去頭、去蹄尾、劈（鋸）半、修整等。人員配備及從業(yè)資格應(yīng)配備與屠宰廠規(guī)模相適應(yīng)的屠宰工人、與屠宰加工規(guī)模相適應(yīng)的肉品品質(zhì)檢驗人員（包括實驗室檢測檢驗人員），不同崗位的人員應(yīng)以著裝顏色進(jìn)行區(qū)別。從事肉品品質(zhì)檢驗的人員（包括實驗室檢測檢驗人員），須具備中專以上或同等學(xué)歷水平，并經(jīng)考核合格。肉品品質(zhì)檢驗人員（實驗室檢驗人員）應(yīng)具備非洲豬瘟、“瘦肉精”類物質(zhì)、水分含量、旋毛蟲等檢測能力。應(yīng)對所有從業(yè)人員定期開展身體健康檢查，持健康證明上崗。健康檢查項目應(yīng)包含可能危害到食品安全的疾病。屠宰操作規(guī)范生豬入廠時，屠宰廠應(yīng)查驗生豬隨附（佩戴）的畜禽標(biāo)識、動物檢疫合格證明。屠宰廠肉品品質(zhì)檢驗人員在待宰期間應(yīng)對生豬進(jìn)行全面檢查，確認(rèn)健康，確認(rèn)生豬宰前噴淋干凈，生豬體表不應(yīng)有灰塵、污泥、糞便。屠宰廠對健康生豬實行按批次分圈待宰靜養(yǎng)。宰前靜養(yǎng)不少于12h，宰前停止喂水不少于3h，宰前6h申報檢疫。可疑病豬趕入隔離間，病豬和傷殘豬送入急宰間處理?？梢刹∝i經(jīng)過飲水和休息后恢復(fù)正常、且經(jīng)診斷不影響肉食安全的趕入待宰間；非染疫但宰前2h癥狀仍沒有緩解、且不影響肉食安全的送入急宰間處理。屠宰廠應(yīng)在屠宰車間顯著位置標(biāo)識生豬屠宰操作工作流程圖和肉品品質(zhì)檢驗工序位置圖。屠宰全過程屠體、胴體、肉品和副產(chǎn)品不著地。屠宰過程中紅臟與白臟應(yīng)分別收集處理。屠宰操作應(yīng)符合GB17236的有關(guān)規(guī)定。動物產(chǎn)品品質(zhì)檢驗人員嚴(yán)格按照GB17996對每頭豬進(jìn)行頭部檢驗、體表檢驗、內(nèi)臟檢驗、胴體檢驗、復(fù)驗與蓋章。。污染控制應(yīng)制定大腸桿菌等主要致病菌和指示菌等微生物污染的監(jiān)控計劃和操作程序，應(yīng)采取修割、剔除、清洗、消毒等適當(dāng)措施，避免環(huán)境和可疑病害豬胴體、組織、體液、腸胃內(nèi)容物等污染其他肉品、設(shè)施設(shè)備和場地。應(yīng)制定防止化學(xué)污染的控制計劃和操作程序，除清潔消毒必需和工藝需要，不應(yīng)在生產(chǎn)場所使用和存放能污染生豬或生豬產(chǎn)品的化學(xué)制劑。屠宰廠應(yīng)使用食用油脂或能保證安全要求的其他油脂作為生產(chǎn)設(shè)備上可能直接或間接接觸生豬或生豬產(chǎn)品的活動部件的潤滑劑。應(yīng)制定防止異物污染的控制計劃和操作程序，應(yīng)通過設(shè)置金屬檢查器等設(shè)備，或采取有效措施降低金屬或其他異物污染生豬或生豬產(chǎn)品的風(fēng)險。應(yīng)做好預(yù)防措施，避免各類殺蟲劑或其他藥劑對人身、生豬或生豬產(chǎn)品、設(shè)備工具等的污染；不慎污染時，及時采取措施，消除污染。消毒應(yīng)每天對廠區(qū)、車間、設(shè)施、設(shè)備清洗消毒，定期更換消毒藥。生產(chǎn)過程中，應(yīng)定期對器具、操作臺和接觸生豬產(chǎn)品的加工表面進(jìn)行清洗消毒。生豬屠宰、檢驗過程使用的器具和設(shè)備、宰殺設(shè)備、檢驗刀具、開膛和開片刀具、檢疫檢驗盛放內(nèi)臟的托盤等，每次使用后，應(yīng)使用82℃以上的熱水進(jìn)行清洗消毒。加工應(yīng)具有與屠宰能力相適應(yīng)的胴體分割、包裝等生豬產(chǎn)品深加工能力。貯存和運輸應(yīng)符合GB14881中描述的食品的貯存和運輸?shù)囊?。產(chǎn)品召回管理對于不合格產(chǎn)品的召回，應(yīng)符合GB14881中描述的產(chǎn)品召回管理的要求。檢驗檢疫嚴(yán)格產(chǎn)品出廠查驗，出廠的生豬產(chǎn)品應(yīng)當(dāng)按照規(guī)定加施檢疫、檢驗合格印章，附具檢疫證明和肉品品質(zhì)檢驗合格證明。檢測檢驗用藥劑、試劑應(yīng)當(dāng)由專人負(fù)責(zé)管理，使用合格試劑，安全存儲，定期更新。易燃、易爆、劇毒、強腐蝕品不得混放，應(yīng)設(shè)專柜存放，并由兩人及以上共同負(fù)責(zé)管理。應(yīng)對每批屠宰加工產(chǎn)品進(jìn)行非洲豬瘟、“瘦肉精”等檢測，檢測頻次和比例符合農(nóng)業(yè)農(nóng)村主管部門規(guī)定。抽樣要求，抽樣方法，樣品的包裝、標(biāo)記、保存和運輸，按照NY/T3227的要求進(jìn)行。制定主要致病菌和指示菌等衛(wèi)生指標(biāo)檢測方案，明確檢測頻次和數(shù)量，至少每季度開展一次菌落總數(shù)、沙門氏菌等主要致病菌和指示菌的檢測。詳細(xì)檢測項目和方法見附錄A。應(yīng)根據(jù)屠宰環(huán)節(jié)肉品質(zhì)量安全風(fēng)險狀況制定獸藥、重金屬等殘留檢測方案，按批次和數(shù)量明確檢測頻次和次數(shù)，定期開展抗生素和重金屬殘留檢測。詳細(xì)檢測項目和方法見附錄B。應(yīng)根據(jù)屠宰環(huán)節(jié)肉品品質(zhì)及質(zhì)量安全制定水分、寄生蟲病等檢測方案，按批次和數(shù)量明確檢測頻次和次數(shù)，定期開展水分、寄生蟲病檢測。詳細(xì)檢測項目和方法見附錄C。不具有7.5、7.6、7.7等衛(wèi)生指標(biāo)、制定獸藥、重金屬等檢測能力的屠宰廠，應(yīng)委托具有資質(zhì)的第三方檢測機構(gòu)進(jìn)行檢測。排放及無害化處理屠宰廠副產(chǎn)品及廢棄物流向不對合格產(chǎn)品和周圍環(huán)境造成污染。屠宰廠應(yīng)建立惡臭污染物收集處理系統(tǒng)，屠宰、加工和無害化處理產(chǎn)生的煙氣、污水等排放指標(biāo)應(yīng)符合環(huán)保要求。對屠宰加工過程中產(chǎn)生的污物、廢棄物，屠宰前確認(rèn)的病害生豬、屠宰過程中經(jīng)檢疫或肉品品質(zhì)檢驗確認(rèn)為不可食用的生豬產(chǎn)品、召回生豬產(chǎn)品，以及其他應(yīng)當(dāng)進(jìn)行無害化處理的生豬及其產(chǎn)品，應(yīng)及時進(jìn)行無害化處理。無害化處理方法應(yīng)符合《病死及病害動物無害化處理操作規(guī)程》的要求。不具有病害豬及其產(chǎn)品無害化處理能力的屠宰廠，應(yīng)就近委托具有資質(zhì)的專業(yè)無害化處理廠進(jìn)行無害化處理。質(zhì)量管理屠宰廠屠宰經(jīng)營方式可采取自營、代宰。自營可采取自主品牌經(jīng)營或自有養(yǎng)殖場和（或）簽約養(yǎng)殖場，代宰生豬應(yīng)與生豬經(jīng)紀(jì)人簽訂協(xié)議，明確收購生豬的質(zhì)量要求及雙方的質(zhì)量安全責(zé)任，代宰量不能超過屠宰總量的20％。屠宰廠應(yīng)建立生豬屠宰檢疫申報、經(jīng)紀(jì)人備案管理、生豬入廠查驗登記、待宰靜養(yǎng)、“瘦肉精”等風(fēng)險物質(zhì)檢測、肉品品質(zhì)檢驗、非洲豬瘟檢測、動物疫情報告、生豬產(chǎn)品追溯、清洗消毒、無害化處理、食品加工助劑和化學(xué)品使用管理、應(yīng)急管理等生豬屠宰質(zhì)量管理制度。屠宰廠應(yīng)建立屠宰安全生產(chǎn)、屠宰信息報送、生豬屠宰證章標(biāo)志使用管理、設(shè)施設(shè)備日常使用、設(shè)施設(shè)備檢測保養(yǎng)、屠宰從業(yè)人員管理、缺陷產(chǎn)品召回等生豬屠宰生產(chǎn)管理制度。屠宰廠應(yīng)采取巡查、抽檢等方式每月對生豬屠宰全過程管理情況效果評價，并能對發(fā)現(xiàn)的問題采取相應(yīng)措施進(jìn)行糾偏。屠宰廠應(yīng)每月檢查各項質(zhì)量管理制度落實情況，做到有跡可循。對生產(chǎn)過程中發(fā)現(xiàn)的問題應(yīng)當(dāng)及時糾正。屠宰廠應(yīng)每月開展安全生產(chǎn)情況檢查。屠宰廠應(yīng)建立企業(yè)管理信息系統(tǒng)，實現(xiàn)生豬采購與進(jìn)廠、產(chǎn)品出廠銷售等環(huán)節(jié)各項記錄的信息化管理。屠宰廠應(yīng)充分運用現(xiàn)代信息技術(shù)，建立生豬屠宰溯源查詢系統(tǒng)，信息采集點覆蓋屠宰全流程，實現(xiàn)生豬進(jìn)廠到產(chǎn)品出廠各環(huán)節(jié)有效追溯。屠宰廠應(yīng)建立肉品品質(zhì)檢驗合格證電子出證系統(tǒng)，實現(xiàn)肉品品質(zhì)檢驗合格的電子信息化管理，并具有產(chǎn)品溯源查詢能力。屠宰企業(yè)根據(jù)實際逐步建立并實施危害分析與關(guān)鍵控制點（HACCP）體系。屠宰場應(yīng)對所有從業(yè)人員定期開展專業(yè)培訓(xùn)，提高人員專業(yè)能力。屠宰企業(yè)的所有環(huán)節(jié)和活動要有記錄，且記錄信息翔實，確保對產(chǎn)品從生豬進(jìn)場到產(chǎn)品出廠的所有環(huán)節(jié)都可以進(jìn)行有效追溯。記錄保存期不得少于肉類保質(zhì)期滿后的6個月，沒有明確保質(zhì)期的，保存期限不少于2年。

（資料性）

主要致病菌和指示菌衛(wèi)生指標(biāo)檢測方法菌落總數(shù)樣品豬肉實驗方法采用《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗菌落總數(shù)測定》（GB4789.2-2016）檢測。大腸桿菌樣品豬肉實驗方法采用《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗大腸菌群計數(shù)》（GB4789.3-2016）檢測。沙門氏菌樣品豬肉表面、屠宰環(huán)境、豬肉實驗方法豬肉中沙門氏菌采用《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗沙門氏菌檢驗》（GB4789.4-2016）檢測。金黃色葡萄球菌樣品豬肉表面、屠宰環(huán)境實驗方法試劑：7.5％NaCl肉湯，胰蛋白胨肉湯，Taq酶（5U/μL）、MgCl2（25mmol/L）、dNTPs（10mmol/L）、DNA抽提試劑盒。引物：上游引物：５‘－AAGCACATAACAAGCGAGATAAC－３’下游引物：５‘－TGATAAAGAAGAAACCAGCAGAG－３’探針為：FAM5‘-CGTCTACAAGAAGAACATGGTAATG－3’TAMRA。儀器：可調(diào)微量移液槍及槍頭、恒溫培養(yǎng)箱、高壓鍋、二級生物安全柜、電子秤、熒光PCR儀、恒溫水浴鍋、冷凍高速離心機、旋渦混勻器。增菌培養(yǎng)：樣品充分混勻后取0.5ml，加入到4.5ml的7.5％NaCl肉湯或胰蛋白胨肉湯中，37℃培養(yǎng)24小時。DNA模板制備：按DNA抽提試劑盒說明書進(jìn)行。反應(yīng)體系配制：在25μL反應(yīng)體系中，10×PCRbuffer2.5μL、MgCl22.5μL、dNTPs1.0μL、上游和下游引物各0.5μL，Taq酶0.3μL，探針0.3μL，模板溶液2.0μL，滅菌雙蒸水補足體積至25μL。實時PCR反應(yīng)條件：94℃變性45s，58℃退火60s，72℃延伸60s，經(jīng)40個循環(huán)；循環(huán)結(jié)束后，72℃，10min。結(jié)果判定質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合以下要求：陰性對照無Ct值并且無擴增曲線；陽性對照的Ct值≤30，并且出現(xiàn)特定的擴增曲線；如陰性對照和陽性對照不滿足上述條件，則視為實驗不成立。結(jié)果分析檢測樣本出現(xiàn)特定的擴增曲線，且計數(shù)的Ct值≤32，判定為陽性。Ct值?32或無Ct值的判定為陰性。單核增生李斯特氏菌樣品豬肉表面、屠宰環(huán)境實驗方法試劑：7.5％NaCl肉湯，胰蛋白胨肉湯，Taq酶（5U/μL）、MgCl2（25mmol/L）、dNTPs（10mmol/L）、DNA抽提試劑盒。引物：上游引物5‘-CGCAAAAGATGAAGTTCAAATCA-3’下游引物5‘-CTCCTGGTGTTTCTCGATTAAAAGT-3’探針FAM5‘-CGACGGCAACCTCGGAGACTTACG-3’TAMRA儀器：可調(diào)微量移液槍及槍頭、恒溫培養(yǎng)箱、高壓鍋、二級生物安全柜、電子秤、熒光PCR儀、恒溫水浴鍋、冷凍高速離心機、旋渦混勻器。增菌培養(yǎng)：樣品充分混勻后取0.5ml，加入到4.5ml的7.5％NaCl肉湯或胰蛋白胨肉湯中，37°C培養(yǎng)24小時。DNA模板制備：按DNA抽提試劑盒說明書進(jìn)行。反應(yīng)體系配制：在25μL反應(yīng)體系中，10×PCRbuffer2.5μL、MgCl22.5μL、dNTPs1.0μL、上游和下游引物各0.5μL，Taq酶0.3μL，探針0.3μL，模板溶液2.0μL，滅菌雙蒸水補足體積至25μL。實時PCR反應(yīng)條件：94℃變性45s，58℃退火60s，72℃延伸60s，經(jīng)40個循環(huán)；循環(huán)結(jié)束后，72℃，10min。結(jié)果判定質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合以下要求：陰性對照無Ct值并且無擴增曲線；陽性對照的Ct值≤30，并且出現(xiàn)特定的擴增曲線；如陰性對照和陽性對照不滿足上述條件，則視為實驗不成立。結(jié)果分析檢測樣本出現(xiàn)特定的擴增曲線，且計數(shù)的Ct值≤32，判定為陽性。Ct值?32或無Ct值的判定為陰性。

（資料性）

藥物殘留指標(biāo)檢測方法違法添加1.1β-受體激動劑項目包括：克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林、西馬特羅、非諾特羅、氯丙那林、妥布特羅和噴布特羅。樣品肝臟檢測方法具體參照《動物源性食品中β-受體激動劑殘留檢測液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》（農(nóng)業(yè)部1025號公告-18-2008）檢測。項目快速檢測“瘦肉精”：克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇。樣品豬尿檢測方法采用相應(yīng)試紙條篩選，檢測靈敏度分別不低于3ppb、3ppb和5ppb。篩選出的陽性尿液，采用《豬尿中β-受體激動劑多殘留檢測液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》（農(nóng)業(yè)部1025號公告-11-2008）確證，或采同一動物的肝臟進(jìn)行確證。糖皮質(zhì)激素類藥物項目地塞米松和倍他米松。樣品肝臟檢測方法具體參照《動物源性食品中糖皮質(zhì)激素類藥物多殘留檢測液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》（農(nóng)業(yè)部1031號公告-2-2008）檢測。藥物殘留項目氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考。樣品肝臟3.3實驗方法按照GB/T20756-2006可食用動物肌肉、肝臟和水產(chǎn)品中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考?xì)埩袅康臏y定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行。

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