飲用水微生物檢測文稿

飲用水微生物檢測文稿第一頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期二生活飲用水中微生物指標項目單位限值說明總大腸菌群MPN/100mL或CFU/100mL不得檢出一般性污染耐熱大腸菌群MPN/100mL或CFU/100mL不得檢出指示糞便污染大腸埃希氏菌MPN/100mL或CFU/100mL不得檢出指示糞便污染菌落總數(shù)CFU/mL100一般性污染賈第鞭毛蟲個/10L<1腸道原蟲隱孢子蟲個/10L<1腸道原蟲第二頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期二微生物指標常規(guī)檢驗流程水樣總大腸菌群菌落總數(shù)報告報告陰性耐熱大腸菌群或大腸埃希氏菌陽性報告第三頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期二實驗前準備1、滅菌吸管

10mL、1mL刻度吸管分別包好，160℃干烤2h滅菌2、9mL滅菌生理鹽水3、相應的滅菌培養(yǎng)基4、檢驗前，無菌室用紫外線燈照射30min第四頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期二菌落總數(shù)定義：是指水樣在營養(yǎng)瓊脂上有氧條件下37℃培養(yǎng)48h后，所得1mL水樣所含菌落的總數(shù)。培養(yǎng)基：營養(yǎng)瓊脂設備：放大鏡/菌落計數(shù)器第五頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期二菌落總數(shù)平板計數(shù)法第六頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期二總大腸菌群檢測方法多管發(fā)酵法濾膜法酶底物法第七頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期二多管發(fā)酵法定義：總大腸菌群指一群在37℃培養(yǎng)24h能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。培養(yǎng)基：乳糖蛋白胨培養(yǎng)液二倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)液伊紅美藍培養(yǎng)基設備：顯微鏡第八頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期二15管法檢測步驟在36℃下培養(yǎng)24h10ml水樣1ml水樣0.1ml水樣10ml雙料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液10ml單料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液10ml單料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液都不產(chǎn)酸產(chǎn)氣判陰性產(chǎn)酸產(chǎn)氣管EMB染色鏡檢乳糖蛋白胨培養(yǎng)液革蘭氏陰性無芽孢桿菌產(chǎn)酸產(chǎn)氣判總大腸菌群存在典型特征菌落在36℃下培養(yǎng)24h10ml雙料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液10ml單料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液10ml單料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液都不產(chǎn)酸產(chǎn)氣產(chǎn)酸產(chǎn)氣管EMB染色鏡檢革蘭氏陰性無芽孢桿菌產(chǎn)酸產(chǎn)氣典型特征菌落第九頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期二多管發(fā)酵法結果大腸菌群在伊紅美藍培養(yǎng)基上的典型菌落特征大腸菌群革蘭氏染色顯微鏡下的形態(tài)第十頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期二第十一頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期二濾膜法定義：是指用孔徑為0.45μｍ的微孔濾膜過濾水樣，將濾膜貼在選擇性品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基上37℃培養(yǎng)24h，能形成紫紅或紅色有金屬光澤的需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。培養(yǎng)基品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基乳糖蛋白胨培養(yǎng)液設備：顯微鏡，過濾設備第十二頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期二檢測步驟過濾水樣：過濾設備顯色培養(yǎng)，染色鏡檢：24h復發(fā)酵：陽性接種，24h第十三頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期二第十四頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期二酶底物法

EnzymeSubstrateTest第十五頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期二常用的色原和熒光底物色原（熒光）糖苷結合物糖苷酶色原（熒光）氨基酸結合物氨基肽酶常用呈色的色原有：α、β萘酚，鄰位或對位硝基酚，對硝基苯胺，酚酞，2-氨4-硝基苯等，如ONPG(鄰硝基酚-B-D半乳糖苷)

常用的熒光物有：4-甲基傘形酮（4MU），7氨基4甲基傘形酮香豆素如MUG(四甲基傘形酮-B-D-葡萄糖苷)第十六頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期二總大腸菌群酶底物法定義：

在選擇性培養(yǎng)基上能產(chǎn)生β-半乳糖苷酶（β-D-galactosidase）分解ONPG（Ortho-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside）使培養(yǎng)基呈黃色的細菌群組。培養(yǎng)基：

MMO-MUG培養(yǎng)基

設備：壓膜機第十七頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期二檢測步驟加樣：干粉培養(yǎng)基加入到100mL水樣中壓膜：專用壓膜機分裝培養(yǎng)：36±1℃的培養(yǎng)24h結果判讀：24h培養(yǎng)后顏色變成黃色判斷為陽性反應；培養(yǎng)24h后判讀，為可疑陽性，可延長培養(yǎng)到28h判讀，超過28h之后出現(xiàn)的顏色反應不作為陽性結果。第十八頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期二第十九頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期二總大腸菌群酶底物法檢測示意圖第二十頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期二耐熱大腸菌群檢測方法多管發(fā)酵法濾膜法第二十一頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期二多管發(fā)酵法定義：用提高培養(yǎng)溫度的方法將自然環(huán)境中的大腸菌群與糞便中的大腸菌群區(qū)分開，在44.5℃仍能生長的大腸菌群，稱為耐熱大腸菌群。培養(yǎng)基：

EC培養(yǎng)基伊紅美藍瓊脂設備：無特殊設備第二十二頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期二檢測步驟初發(fā)酵（同總大腸菌群），24h耐熱培養(yǎng)：陽性管接種，24h顯色培養(yǎng)：陽性管接種，24h第二十三頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期二第二十四頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期二濾膜法定義：

用孔徑為0.45μｍ的濾膜過濾水樣，細菌被阻留在膜上，將濾膜貼在MFC培養(yǎng)基上，44.5℃培養(yǎng)24h能形成藍色菌落的細菌為耐熱大腸菌群。培養(yǎng)基：MFC培養(yǎng)基EC培養(yǎng)基設備：過濾設備第二十五頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期二第二十六頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期二第二十七頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期二大腸埃希氏菌檢測方法多管發(fā)酵法濾膜法酶底物法第二十八頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期二多管發(fā)酵法定義：指多管發(fā)酵法總大腸菌群陽性，在EC-MUG培養(yǎng)基上44.5℃培養(yǎng)24±2h產(chǎn)生β-葡萄糖醛酸酶（β-glucuronidase），分解MUG（4-methyl-umbelliferyl-β-D-glucuronide）并產(chǎn)生熒光產(chǎn)物，使培養(yǎng)基在波長366nm紫外光下產(chǎn)生藍色熒光的細菌。

培養(yǎng)基：EC-MUG培養(yǎng)基設備：紫外燈：波長366nm第二十九頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期二檢測步驟初發(fā)酵（同總大腸菌群），24h耐熱顯色培養(yǎng)：陽性管接種，24h熒光觀測，報告第三十頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期二第三十一頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期二大腸埃希氏菌酶底物法檢測示意圖第三十二頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期二生活飲用水非常規(guī)檢測項目賈第蟲和隱孢子蟲檢測方法:水樣過濾---洗滌離心---免疫磁珠分離---熒光標記和DAPI染色---顯微鏡檢查記述---結果報告在2012年成為常規(guī)檢驗項目第三十三頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期二微生物指標檢驗方法的總結第三十四頁，共三十六頁，編輯于2023年，星期二總大腸菌群三種方法比較多管發(fā)酵法濾膜法酶底物法時間24h-72h24h-48h24h-28h驗證試驗需要需要不需要步驟較繁鎖較簡便簡便可操作性強特殊設備顯微鏡顯微鏡過濾設