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文檔簡(jiǎn)介
11.220
41DB22
22/T
3111—2020
RT-PCR
Detection
quantitative
calicivirus
2020
2020
吉林省市場(chǎng)監(jiān)督管理廳
DB22/T
2020前 言
20001.4-2015
DB22/T
2020貓杯狀病毒檢測(cè)
實(shí)時(shí)熒光
RT-PCR
法
范圍
規(guī)范性引文件
GB
19489 實(shí)驗(yàn)室
GB/T
27401
縮略語(yǔ)Ct
Cdna （Complementary
acid）DMEM
Eagle's
Reading
Frame）
RT-PCR （Reverse
chain
原理進(jìn)入延伸階段時(shí)，Taq酶發(fā)揮5’→3’的外切核酸酶功能，將探針降解。探針上的熒光基團(tuán)游離出來(lái)，
試劑和材料
試劑
DB22/T
2020除有特殊說(shuō)明外，所有實(shí)驗(yàn)試劑均為分析純。實(shí)驗(yàn)水應(yīng)符合
GB/T
6682
DMEM
陽(yáng)性對(duì)照，為貓杯狀病毒的細(xì)胞培養(yǎng)物或非感染性體外轉(zhuǎn)錄
RNA。
RNA
water）。
材料
離心管，1.5
mL、15
mL
50
mL。
吸頭，200
L～1
L、20
L～200
L、2
L～20
0.5
L～10
L。
RNA
L～1
L、20
L～200
L、2
L～20
0.5
L～10
L。
RNA
1.5
5.3
引物和探針引物及探針時(shí)配制成表
℃保存，6
個(gè)月。表1
引物序列和濃度
儀器設(shè)備
℃。
高速冷凍離心機(jī)，12
000
r/min
可調(diào)移液器，200
L～1
L、20
L～200
L、2
L～20
0.5
L～10
L。
天平，感量
0.01
g。
熒光定量
PCR
擴(kuò)增儀。
樣品7.1
樣品的采集
DB22/T
2020
7.2
樣品的處理7.2.1
口鼻拭子的處理
r/min
500
RNA
7.2.2
組織處理采取少于
500
1.5
mL
RNA
試驗(yàn)步驟8.1
模板的制備
RNA
cDNA
8.2
反應(yīng)體系
表2
反應(yīng)體系8.3
反應(yīng)程序
將熒光定量
PCR
PCR
DB22/T
2020表3
反應(yīng)程序
結(jié)果判定9.1
結(jié)果分析條件設(shè)定9.2
質(zhì)控
9.3
結(jié)果描述及判定9.3.1
陰性判定
Ct
9.3.2
陽(yáng)性判定
Ct
值≤35，出現(xiàn)特定的擴(kuò)增曲線(xiàn)，表示樣品中存在
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