乙肝小三陽血清HBV

乙肝小三陽血清HBVDNA定量檢測及其與前S1關系的研究

［摘要］目的：檢測乙型肝炎小三陽患者HBVDNA含量，并與前S1抗原(PreS1)進行比較分析。方法：收集351例乙型肝炎小三陽患者血清和30例正常體檢者血清，用ELISA方法檢測前S1抗原，用熒光定量PCR方法定量檢測HBVDNA。結果：HBsAg、抗HBe、抗HBc陽性(小三陽)患者HBVDNA檢出率為%(×106copies／ml)，前S1抗原檢出率為%。結論:HBeAg轉陰者也存在病毒復制，HBVDNA與前S1抗原相關性較好，對于乙型肝炎患者在常規(guī)血清學標志物檢測的基礎上對HBVDNA數(shù)量進行動態(tài)檢測有助于臨床診斷、療效觀察及預后判斷。

［關鍵詞］乙型肝炎；HBVDNA；前S1抗原

StudytheRelationshipofHBVDNAQuantitativelyDetectionandPreS1forthePatientsofHepatitisBwithPositiveofHBsAg、AntiHbeandAntiHBc

Abstract：ObjectiveTodeterminehepatitisBvirusDNA(HBVDNA)andpreS1antigeninpatientswithhepatitisBandexpoloretheirdifferentclinical351positiveserumofHBsAg,antiHBe,antiHBcofhepatitisBand30healthymanwrerS1antigenandHBVmarketsweredetectedwithELISAandHBVDNAwithfluorescentquantitativePCR(FQPCR)ThepositiveratesofHBVDNAandPreS1antigenwere%(×106copies／ml)、%respectiveinpatientswithhepatitisBofwhichHBsAg、antiHBe、antiHBcwereTherewerereplicationofvirusinpatientswithHBeAgnegative,TheserumlevelsofHBVDNAofpatientswithhepatitisBcloselycorrelatePreDNAwithfluorescentquantitativePCRforthepatientswithhepatitisBishelpfultoclinicaldiagnosis、clinicalevalutionandprognosis.

Keywords：HepatitisB；HBVDNA；PreS1antigen

乙型肝炎血清標志物的檢測方法有多種，尋求快速、敏感和特異性檢測手段具有十分重要的意義。前S1(PreS1)抗原已成為HBV感染、復制和乙肝患者診斷、治療和預后的一個重要標志，但存在“窗口期”及“免疫逃避株”等問題。乙型肝炎病毒HBVDNA含量是判斷病毒復制活躍和具有傳染性的直接可靠依據(jù)，HBVDNA定量測定可以反映乙型肝炎病毒(HBV)的量的變化，直接檢測患者血清中病毒的拷貝數(shù)量，反映患者病毒血癥的水平。本研究觀察了乙肝小三陽患者血清標志物、前S1和HBVDNA三者之間的相關性，探討了HBVDNA檢測的臨床意義,現(xiàn)報道如下。

1材料與方法

1標本收集我院351例乙型肝炎小三陽患者血清,其中男273例，平均年齡歲，女78例，平均年齡歲，健康對照30例,男25例，平均年齡歲，女5例，平均年齡歲。留取清晨空腹靜脈血，分離血清，-20℃保存待檢。

2儀器RSP150/8全自動加樣器(瑞士TECAN公司生產(chǎn))，BEPⅢ全自動酶免疫分析儀(德國DadeBehring公司生產(chǎn))，美國ABI公司AB770型PCR熒光定量儀。

3方法

血清標志物(HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe、抗HBc)檢測應用ELISA方法，試劑由上海實業(yè)科華生物技術有限公司提供，試劑批號分別為：20060718、20061013、20060913、20060925、20060924。用瑞士TECAN公司生產(chǎn)的加樣器(RSP150/全自動酶免分析儀)進行加樣(包括質(zhì)控血清、陰陽性對照及待檢血清)，然后用BEPⅢ全自動酶免疫分析儀進行檢測，判定方法嚴格按照說明書進行。

前S1抗原檢測采用雙抗體夾心ELISA法，用抗前S1和抗HBs作為固相化抗體和酶標抗體，單抗捕獲待檢標本中的乙肝病毒表面抗原，用辣根過氧化物酶標記的抗PreS1單抗作為檢測抗體。嚴格按照試劑盒說明書的檢測步驟進行操作，根據(jù)酶底物反應后的呈色吸光值，測定血清中乙肝病毒PreS1，試劑由上海阿爾法生物技術有限公司提供，試劑批號：20060601。

HBVDNA定量測定采用PCR方法結合熒光探針體外擴增和檢測技術，試劑由深圳匹基生物工程股份有限公司，該試劑盒的檢測下限為×108copies／ml，試劑批號：20060301。

4統(tǒng)計分析計數(shù)資料采用配對計數(shù)資料卡方檢驗，所有數(shù)據(jù)用SPSS處理。

2結果

HBsAg、抗HBe、抗HBc陽性組(小三陽組)HBVDNA檢出率為%,其HBVDNA平均含量為×106copies／ml；前S1抗原檢出率為％?？梢姴糠諬BeAg轉陰患者仍存在病毒高復制。30例健康對照者血清HBV標志物、HBVDNA及前S1均為陰性，結果見表1。

表1351例乙肝小三陽患者血清HBVDNA及前S1抗原檢測結果(略)

乙型肝炎小三陽患者PreS1與HBVDNA的關系351例乙型肝炎小三陽患者血清中，HBVDNA陽性為220例，PreS1陽性為256例，其陽性檢出率分別為%(220／351)、%(256／351)。HBVDNA陽性組中PreS1檢出率為%(170/220)，HBVDNA陰性組中PreS1檢出率為%(86/131)，PreS1與HBVDNA檢出率不一致，HBVDNA與PreS1檢出率差異有統(tǒng)計學意義(χ2=，)，見表2。

表2乙型肝炎小三陽患者血清PreS1與HBVDNA的關系(略)

3討論

HBV血清標志物檢測是目前診斷乙肝最常用的指標，它主要反映人體對乙肝病毒的免疫反應狀態(tài)，不能直接反映HBV在患者體內(nèi)的復制情況。由于HBV血清標志物復雜多樣，臨床上難以根據(jù)這些結果對HBV感染復制情況進行準確判斷。HBV的外衣殼蛋白包括S蛋白、前S1蛋白和前S2蛋白，研究顯示，前S1蛋白含有肝細胞膜受體，與病毒侵入肝細胞以及HBV復制關系密切［1］。PreS1作為病毒復制的標志物之一被廣泛應用于臨床。ELISA抗原檢測方法一般需要1015～1017個病原體才可檢測出陽性，而病毒感染后“窗口期”則會出現(xiàn)假陰性結果。熒光定量PCR技術的出現(xiàn)，解決了病原體感染后的發(fā)病時間、病情輕重與病原體數(shù)量的關系［2］。探討HBV血清標志物、前S1、HBVDNA檢測及其相互間的關系對于乙型肝炎臨床診斷、療效觀察和預后判斷具有重要意義。本研究采用ELISA及FQPCR方法檢測351例乙型肝炎小三陽患者血清標本的前S1、HBVDNA，結果顯示小三陽患者血清中HBVDNA檢出率達%。HBVDNA平均含量為×105copies／ml；PreS1檢出率為%。通常認為HBeAg陽性是HBV復制活躍的指標之一，本研究結果表明HBeAg陰性并不表明HBV復制的完全終止或病毒血癥的消失，該結果和Pichoud等［3］的報道基本一致，病毒拷貝數(shù)與HBeAg陽性相比明顯下降，表明在HBV感染者體內(nèi)HBeAg向抗HBe血清轉換的動態(tài)過程中，病毒的復制逐漸減少。前S1與HBVDNA檢出率并不一致，可能是前S1和HBVDNA檢測所表達的意義并不完全一致，慢性乙型肝炎病程早期(HBsAg陽性)，HBVDNA陽性而PreS1陰性；病程后期，部分病例PreS1陽性而HBVDNA為陰性。因此，不能僅依照PreS1來判斷病毒是否復制，PreS1不能完全代替HBVDNA的檢測，只能作為其補充的指標。傳統(tǒng)觀念認為慢性乙肝患者出現(xiàn)HBeAg轉陰或轉為HBeAb陽性后傳染性小，病情好轉，常作為抗病毒治療有效的指標。本研究表明，HBeAg陰性乙肝小三陽患者血清采用敏感的DNA信號擴增法約40%可檢出病毒活動性復制，其中約70%為HBV前C/C區(qū)變異的突變株［4，5］，而對于HBeAg陰性慢性乙肝患者，是否存在HBVDNA復制是判斷病情與預后、衡量抗病毒療效的關鍵指標。有研究認為前S1抗原與HBV復制有更密切關系，PreS1作為病毒復制的重要指標，較HBeAg敏感。在本研究中，PreS1與HBVDNA高度相關，表明PreS1與HBV的復制具有一致性，但HBVDNA陽性組中PreS1檢出率為%，和HBVDNA的檢出率差異有顯著性，因此認為臨床上判斷病毒的復制及其活躍程度不能單靠HBeAg或PreS1是否陽性，準確的方法是熒光定量PCR方法對HBVDNA進行定量檢測。血清中HBVDNA的量是反映病毒復制的最直接標志，是評價傳染性的最可靠的方法，熒光定量PCR技術能從DNA水平鑒別其潛伏性和活動性，可以作為HBV感染的分子診斷標準因此對于乙型肝炎病毒感染者，在常規(guī)血清學標志物檢測的基礎上，采用FQPCR方法對HBVDNA數(shù)量進行動態(tài)觀測，對乙型肝炎的診斷、抗病毒治療的藥物療效評價、指導乙型肝炎合理治療方案的制訂以及預后判斷有非常重要的意義。

參考文獻：

［1］盧建華，宋晨朝，郎振為，等．前S1蛋白檢測在慢性乙型肝炎患者病理診斷中的價值［J］．中華傳染病雜志，2006，24(1)：6062.

［2］姚磊，潘海龍，張征，等．59434例就診者血清乙肝病毒標志物的檢出與分析［J］．重慶醫(yī)學，2003，32(4)：469.

［3］PichoudC,BerbyF,StuyverL,etofviralreplicationafterantiHbseroconversionduringantiviraltherapyforchronichepatitis［J］.BJHepatol,2003,32:307.

［4］IkedaK,AraseY,SaitohS,ettermoutcomeof