不同中藥對豚鼠膽色素結(jié)石模型的生化學(xué)影響

不同中藥對豚鼠膽色素結(jié)石模型的生化學(xué)影響【摘要】目的：觀察中藥清膽膠囊和養(yǎng)肝利膽顆粒對豚鼠膽囊膽色素結(jié)石模型的生化學(xué)影響。方法：雄性豚鼠皮下注射林可霉素建立膽色素結(jié)石模型，并設(shè)立空白組、模型組、清膽膠囊干預(yù)組和養(yǎng)肝利膽顆粒干預(yù)組，觀察各組動(dòng)物的成石率、膽汁中總膽紅素、游離膽紅素和鈣離子濃度等指標(biāo)的變化。結(jié)果：與模型組比較，清膽膠囊組和養(yǎng)肝利膽顆粒組成石率均顯著降低，膽汁中總膽紅素、游離膽紅素和鈣離子濃度也明顯降低。結(jié)論：清膽膠囊和養(yǎng)肝利膽顆粒可通過降低膽汁中總膽紅素、游離膽紅素和鈣離子含量而逆轉(zhuǎn)成石膽汁，起到預(yù)防膽色素結(jié)石形成的作用。

【關(guān)鍵詞】利膽劑膽色素類膽結(jié)石豚鼠

Methods:Ananimalmodelofpigmentgallstoneswasestablishedinmaleguineapigsbyhypodermicinjectionoflincomycin.Theguineapigswererandomlydividedintoblankcontrolgroup,untreatedgroup,QDCgroupandYGLDGgroup.Therewere8guineapigsineachgroup.Aftertendaytreatment,animalsweresacrificedandsampledtocalculatetherateofstoneformation,totalbilirubin(TB),unconjugatedbilirubin(UCB)andCa2+densityinbileofthefourgroups.

Results:Incomparisonwiththeuntreatedgroup,theratesofstoneformationintheQDCandYGLDGgroupsweresignificantlydecreased().TBIL,UCBandCa2+contentofbileinbothQDCandYGLDgroupswasalsosignificantlydecreased(,).

Conclusion:QDCandYGLDhavegoodeffectsonbiochemicalchangesofanimalmodelofpigmentgallstoneinreversingthelithogenesityofbilebyreducingthecontentofTB,UCBandCa2+,henceresultinginclinicaltreatmentandpreventionofpigmentgallstonedisease.

Keywords:choleretics;bilepigments;cholelithiasis;guineapigs

肝膽管結(jié)石的主要類型為膽色素結(jié)石，這類膽石病在我國的發(fā)病率很高［1］。膽色素結(jié)石主要存在于肝內(nèi)膽管，但膽囊內(nèi)亦可發(fā)生。近年來關(guān)于膽囊色素性結(jié)石的研究已經(jīng)引起人們的重視，其病理成因比較復(fù)雜，至今仍未完全闡明。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)觀點(diǎn)認(rèn)為膽色素結(jié)石的發(fā)病主要與膽道細(xì)菌感染、膽汁淤滯和膽道寄生蟲病等多種因素密切相關(guān)，其中膽道動(dòng)力學(xué)異常和膽汁淤積是生石的重要條件［2］。目前，臨床治療肝膽管結(jié)石多采用手術(shù)和各種途徑相結(jié)合的綜合治療措施，但效果尚未達(dá)到理想程度，因此，非手術(shù)療法的研究一直備受重視。目前中醫(yī)藥在肝膽管結(jié)石治療中的優(yōu)勢日顯突出。本學(xué)科的前期研究工作表明，清膽膠囊和養(yǎng)肝利膽顆粒對膽石病具有肯定的臨床療效［3］。為進(jìn)一步論證此兩種藥物的作用機(jī)制，尤其是對膽色素結(jié)石的作用，我們進(jìn)行了以下的研究。

1材料和方法

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物普通級豚鼠，雄性，300～350g，共32只，由上海市奉賢縣泰日鎮(zhèn)銀根養(yǎng)兔室提供，合格證編號為SCXK20030002。

實(shí)驗(yàn)藥物和致石方法清膽膠囊和養(yǎng)肝利膽顆粒為上海中醫(yī)藥大學(xué)龍華醫(yī)院的院內(nèi)制劑，均由龍華醫(yī)院制劑室生產(chǎn)提供。清膽膠囊由生大黃、陳皮、虎杖三味中藥組成；養(yǎng)肝利膽顆粒由白芍、何首烏、枸杞子、陳皮、甘草組成，8g/包，每克干粉相當(dāng)于g生藥。

鹽酸林可霉素注射液，規(guī)格：g/ml。致石飼料配方［4］：正常飼料g和致石性藥物g。

動(dòng)物分組、造模及藥物處理實(shí)驗(yàn)豚鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、清膽膠囊組和養(yǎng)肝利膽顆粒組，每組各8只。皮下注射林可霉素60mg/，同時(shí)給予致石飼料，連續(xù)7d，建立豚鼠膽囊膽色素結(jié)石動(dòng)物模型［4，5］。造模期間不限飲食、攝水?？瞻捉M喂正常飼料的同時(shí)皮下注射等體積生理鹽水，連續(xù)7d。清膽膠囊組和養(yǎng)肝利膽顆粒組均于造模前3d開始給予相應(yīng)的藥物灌胃，藥物劑量以成人用藥劑量按實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體型系數(shù)換算法計(jì)算［6］，清膽膠囊按g/計(jì)算，養(yǎng)肝利膽顆粒按g/計(jì)算，連續(xù)給藥10d。空白組和模型組均予等體積生理鹽水灌胃。各組灌胃時(shí)間均為2次/d，灌胃10d后取材。

標(biāo)本采集和制備各組動(dòng)物均于第10天灌胃結(jié)束后禁食不禁水，次日取材。以15%烏拉坦腹腔麻醉，抽血處死。肉眼觀察膽汁中成石情況，抽取膽汁，迅速完整切除膽囊后放于冰盤上，再次仔細(xì)觀察膽囊內(nèi)成石情況，隨后置于4℃預(yù)冷的生理鹽水中，洗去余血，和膽汁分別于－80℃冰箱保存?zhèn)錅y。

膽石紅外光譜定性采用美國Nicolet公司MgnaFTIR750型紅外光譜儀測定膽石成分。

指標(biāo)測定膽汁中總膽紅素和游離膽紅素含量用重氮試劑法測定，膽汁中鈣離子用甲基麝香草酚藍(lán)比色法測定，試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供。

統(tǒng)計(jì)學(xué)方法計(jì)數(shù)資料采用率表示，采用確切概率法檢驗(yàn)。計(jì)量資料用x±s表示，組間均數(shù)比較采用單因素方差分析。所有運(yùn)算程序均在計(jì)算機(jī)上運(yùn)用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行。

2結(jié)果

豚鼠膽結(jié)石生成情況空白組有1只動(dòng)物發(fā)生膽結(jié)石，模型組8只全部有結(jié)石形成，其成石率顯著高于空白組。清膽膠囊組有3只動(dòng)物成石，養(yǎng)肝利膽顆粒組有5只動(dòng)物成石，均明顯低于模型組膽石生成率。

膽石定性肉眼見膽囊及膽管內(nèi)有棕黑色泥沙樣或棕色絮狀沉淀物。經(jīng)紅外光譜檢測可見在1cm1處有一膽紅素吸收峰，在1cm1處有一焦磷酸鹽吸收峰，為膽紅素焦磷酸鹽類色素型結(jié)石。

各組豚鼠膽汁總膽紅素含量模型組豚鼠TBIL含量明顯高于空白組，養(yǎng)肝利膽顆粒組TBIL含量較模型組明顯降低。清膽膠囊組TBIL含量較模型組也降低，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表1。

各組豚鼠膽汁游離膽紅素含量模型組豚鼠UCB含量明顯高于空白組，清膽膠囊組和養(yǎng)肝利膽顆粒組含量較模型組均明顯降低。養(yǎng)肝利膽顆粒組UCB含量低于清膽膠囊組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表1。

各組豚鼠膽汁鈣離子含量模型組豚鼠膽汁的Ca2＋含量明顯高于空白組，清膽膠囊組和養(yǎng)肝利膽顆粒組膽汁中Ca2＋含量較模型均組顯著降低。清膽膠囊組和養(yǎng)肝利膽顆粒組Ca2＋含量比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表1。

表1各組動(dòng)物膽汁總膽紅素、游離膽紅素和鈣離子含量

Table1Levelsoftotalbilirubin,unconjugatedbilirubinandCa2infourgroups

*P<,**P<,vsuntreatedgroup.

3討論

膽色素結(jié)石是一成因復(fù)雜的疾病，普遍認(rèn)為是多種因素共同作用的結(jié)果，可涉及膽道梗阻與感染，鈣離子、黏蛋白、膽汁酸、氧自由基以及脂蛋白代謝障礙等［2］。本實(shí)驗(yàn)采用林可霉素聯(lián)合致石飼料的方法建立膽色素結(jié)石動(dòng)物模型［4，5］，分別觀察清膽膠囊和養(yǎng)肝利膽顆粒對膽色素結(jié)石模型動(dòng)物生化指標(biāo)的影響，探討二者對膽色素結(jié)石的防治作用和部分作用機(jī)制。

膽色素結(jié)石形成的一個(gè)必要條件之一是膽汁中UCB和Ca2＋含量的增加。在生理情況下，膽汁中UCB較少，即使有Ca2＋存在，也不易形成結(jié)石，原因在于膽汁中的膽鹽能使UCB離子化，避免其與Ca2＋接觸。當(dāng)膽汁中UCB含量增加時(shí)，便會(huì)產(chǎn)生膽紅素鈣沉淀，成為膽色素結(jié)石形成的基礎(chǔ)。本研究發(fā)現(xiàn)模型組膽汁中UCB、Ca2＋含量明顯增加，與上述理論相吻合。由此可見，模型組成石機(jī)制可能就是因?yàn)槟懼蠺BIL、UCB及Ca2＋含量的增加，膽紅素鈣沉淀溶解平衡失調(diào)，從而形成致石膽汁，導(dǎo)致成石［7，8］。本研究發(fā)現(xiàn)，清膽膠囊和養(yǎng)肝利膽顆粒均有明顯干預(yù)動(dòng)物膽汁生化學(xué)變化的作用，該兩種藥物可能主要通過降低膽汁中UCB及Ca2＋含量，從而逆轉(zhuǎn)成石性膽汁，較好地預(yù)防結(jié)石形成。

膽石病根據(jù)其臨床癥狀及病理特點(diǎn)歸屬于中醫(yī)學(xué)脅痛、腹痛或膽脹等范疇，其病因多見于情志失調(diào)或飲食不節(jié)，致濕熱中阻，郁而化熱，熏蒸肝膽，煎熬成石。臨床上多采用辨病與辨證論治相結(jié)合的方法診治膽石病。本次研究中的實(shí)驗(yàn)藥物清膽膠囊和養(yǎng)肝利膽顆粒均是本學(xué)科依據(jù)多年臨床經(jīng)驗(yàn)總結(jié)研制而成的藥物。清膽膠囊由大黃、虎杖、陳皮等組成，具清除濕熱、行氣活血、緩下通便和健脾和中之功效。方中大黃清泄?jié)駸?、利膽消黃；虎杖清熱解毒、利濕、活血，兼緩下通便；陳皮行氣，與大黃、虎杖活血作用相配，可奏行氣活血之效，以達(dá)“通則不痛”的目的。養(yǎng)肝利膽顆粒由白芍、首烏、枸杞子、陳皮、甘草等組成。方中首烏、枸杞子、白芍滋養(yǎng)肝陰；枸杞子生精益氣；白芍養(yǎng)血斂陰、柔肝止痛；甘草緩肝急；陳皮理氣健脾，且能防滋陰藥過于滋膩之弊。現(xiàn)代藥理研究認(rèn)為上述藥物在肝膽水平均有顯著的藥理作用［9］。兩方中諸藥合用均能達(dá)到阻遏成石性膽汁生成的作用。其現(xiàn)代藥理學(xué)機(jī)制則是通過降低膽汁中UCB和Ca2＋的含量，保護(hù)肝細(xì)胞的正常代謝，達(dá)到逆轉(zhuǎn)膽汁成石的作用。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)此兩種藥物在改善TBIL、UCB及Ca2＋上的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明二者盡管中醫(yī)治則不同，但在干預(yù)膽色素結(jié)石形成的生化學(xué)環(huán)節(jié)方面，效果及作用機(jī)制基本一致。

【參考文獻(xiàn)】

1BiliaryGroupsofSurgery,SurgeryAcademyofChina.ThetrendofthegallstonediseaseinChinaoverthepastdecade.ZhonghuaWaiKeZaZhi.1995;33(11):652658.ChinesewithabstractinEnglish.

中華外科學(xué)會(huì)膽道外科學(xué)組.我國膽石病十年來的變遷.中華外科雜志.1995;33(11):652658.

2GuanZZ,TangQL.Researchprogressofformationfactorsofbilepigmentcalculus.HezeYiXueZhuanKeXueXiaoXueBao.2007;19(1):6873.Chinese.

關(guān)中正,唐乾利.膽色素結(jié)石形成的因素研究進(jìn)展.菏澤醫(yī)學(xué)專科學(xué)校學(xué)報(bào).2007;19(1):6873.

3ZhuPT,ZhangJZ,CaoZP,etal.Summaryof274casesofinfectionofbiliarytractandcholelithiasis.ShanghaiZhongYiYaoZaZhi.1986;20(9):1517.Chinese.

朱培庭,張靜喆,曹中平,等.治療慢性膽道感染、膽石病274例的總結(jié).上海中醫(yī)藥雜志.1986;20(9):1517.

4XuCS,ZhuPT,CaoZP,etal.Experimentalstudyofanimalmodelanddrugpreventionandcureofbilepigmentstones.ZhonghuaXiaoHuaZaZhi.1982;2(1):3436.Chinese.

徐長生,朱培庭,曹中平,等.膽色素結(jié)石動(dòng)物模型及藥物防治的實(shí)驗(yàn)研究.中華消化雜志.1982;2(1):3436.

5WangJT,ChenYQ,NiuSK.Effectoffreeradicleintheformationofbilepigmentstones.ShanxiYiYaoZaZhi.1999;28(2):116118.ChinesewithabstractinEnglish.

王俊田,陳允清,牛樹凱.自由基對豚鼠膽色素結(jié)石形成的影響.山西醫(yī)藥雜志.1999;28(2):116118.

6ChenQ.TheexperimentalmethodsoftraditionalChinesemedicinalpharmacology.Beijing:People‘sMedicalPublishingHouse.1994:206231.Chinese.

陳奇.中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué).北京:人民衛(wèi)生出版社.1994: