4種細胞學檢測方法對良惡性胸腹腔積液的鑒別價值

4種細胞學檢測方法對良惡性胸腹腔積液的鑒別價值【摘要】目的:比較4種細胞學檢測方法在鑒別良、惡性胸腹腔積液(胸腹水，malignantpleuraleffusion,MPE)中的差異。方法:對40例胸腔積液患者的胸腹水標本分別同時采用石蠟包埋法、液基薄層制片法、細胞離心涂片法、直接涂片(CS)法檢測，結合組織病理檢查或治療、隨訪觀察比較4種方法的診斷符合率。結果:40例胸腹水中CB法、TCT法、細胞離心涂片法、CS法找到惡性腫瘤細胞分別為25例、21例、2例、0例,余為良性病變，陽性檢出率分別為%、%、5%、0%。經(jīng)與組織病理或臨床治療、隨訪結果對比，診斷符合率分別為：%、%、%、%。結論:CB法診斷符合率最高，TCT次之。這兩種方法在鑒別良、惡性胸腹水方面有較大的診斷價值。

【關鍵詞】胸腹腔積液；細胞學檢測；方法；隨訪觀察

胸腹腔積液(胸腹水)是臨床上較為常見的癥狀、體征之一，細胞學檢查是鑒別診斷良、惡性胸腹水的關鍵。尋找或改進細胞學檢測方法，提高臨床檢出率，是目前的熱點之一。目前臨床上多采用直接涂片(CS)法和細胞離心涂片法，少數(shù)采用液基薄層制片法及石蠟包埋法。然而有關4種細胞學方法的系統(tǒng)比較及其與臨床治療、隨訪的比較研究尚不多見。為此我們收集了40例胸腹水標本,同時結合組織病理檢查或臨床隨訪觀察，系統(tǒng)比較了4種細胞學方法在診斷符合率上的差異，并對細胞塊CB法作一些小的改良，獲得了比較滿意的療效，現(xiàn)報道如下。

1材料與方法

臨床病例收集我院呼吸科、腫瘤科胸腹腔積液患者的胸、腹水標本共40例，其中男性27例，女性13例；年齡20歲～87歲，平均年齡54歲；對胸腔積液量采取前肋計算法［1］，大量胸腔積液(第2前肋水平以上)13例，中等量胸腔積液(第2至第4前肋水平)13例，少量胸腔積液(第4前肋水平以下)12例，腹水2例。留取胸腹水同時以CS法、細胞離心涂片法、TCT法和CB法檢測。部分有胸部腫塊的患者作纖維支氣管鏡檢查。全部患者隨訪觀察。

儀器與試劑

儀器液基薄層自動細胞制片機MZ-1、MZ-2型(寧波美生醫(yī)療器械有限公司)，生物組織自動脫水機ZT-12P2型，石蠟切片機LEICARM2135，生物組織包埋機YB-6型，光學電子顯微鏡OLYMPUSBX51TF型。

材料及試劑細胞采集器、細胞收集瓶、標本轉移注射器、試管、吸嘴、膠環(huán)、載玻片及蘇木精和EA／OG、碳酸鋰染液、橙黃G染液、EA液、95％酒精、二甲苯、氨水、伊紅。

方法

CS法將送檢胸腹水標本靜置10min~20min,棄上清，取容器底部液體5ml~10ml,涂于干凈載玻片上,冷風吹干后,立即置酒精乙醚混合固定液中固定10min。

細胞離心涂片法常規(guī)胸腔穿刺，留取胸液100ml,肝素抗凝，以1000r/min的速度離心4min~10min，棄上清，取沉渣涂片，干燥后行常規(guī)蘇木素伊紅(HE)染色和瑞氏染色。

TCT法常規(guī)胸腔穿刺,留取胸液100ml~200ml，靜置沉淀，棄去上清液，剩余液體以1000r/min的速度離心4min,棄上清,剩余約cm左右沉渣,吹打混勻，而后利用離心沉淀技術自動完成制片過程,最后在載玻片上形成一個直徑約1cm大小的細胞薄層,再行手工巴氏染色備檢。

CB法參照鄭暉方法［1］加以改良。將送檢胸腹水標本靜置5min后,取容器底部液體100ml～200ml,離心10min，1000r/min,棄上清,管底剩余細胞液視情況不同而改變處理步驟:若送檢胸腹水中含黏液和纖維蛋白質(zhì)樣物質(zhì),離心震蕩后凝結成團的細胞團塊不完全溶解,則將細胞團直接用雙層紗布包好入包埋小框,自動脫水機常規(guī)脫水,浸蠟,石蠟包埋；若送檢胸腹水標本離心震蕩后,細胞團完全溶解,則再次棄上清,其后將剩余底層的液體加入蛋清約1ml，用吸管吹打試管底部液體，使細胞沉渣與蛋清充分混合，盡量使細胞成團懸浮于蛋清中；離心4min，1000r/min；去除上層多余蛋清,再次吹打混勻剩余的蛋清和細胞沉渣,用吸管將其全部移入鋪有雙層紗布塊的包埋框內(nèi),紗布包裹,自動脫水機常規(guī)脫水,浸蠟,包埋，切取3μm石蠟切片,60℃烤片，手工HE染色備檢。

2結果

細胞離心涂片法、TCT法與CB法比較本文中以CS法無一例腫瘤細胞陽性，無法圖示。余如圖所示，細胞離心涂片法所涂片細胞量少，細胞分散不均勻,核漿對比欠清晰(圖1)；TCT法所制玻片背景干凈，染色鮮艷均勻，胞核胞質(zhì)清晰，被檢細胞集中，有助于對異常細胞的篩查(圖2)；CB法中用雞蛋清預包埋脫落細胞收獲的細胞多,能像組織塊一樣進行脫水、包埋。HE切片顯示細胞數(shù)目多,厚薄均勻,結構完整,染色鮮艷,核漿對比清晰(圖3)。TCT法及CB法中可見轉移性腫瘤引發(fā)的胸腹水細胞數(shù)較涂片鏡檢明顯增多，可見異型細胞團分布。CB法制片中還可見較多組織。

圖1細胞離心涂片法

圖2液基薄層制片法

圖3石蠟包埋制片法

4種細胞學檢測方法與組織病理學檢查或隨訪資料比較見表1。

表14種細胞學檢測方法與組織病理學檢查或隨訪資料比較

注：*在未找到癌細胞的病例中1例纖維支氣管鏡檢為腺癌。

從表中可見，40例胸腹水中，22例CB片中發(fā)現(xiàn)有惡性腫瘤細胞，其中10例經(jīng)纖維支氣管鏡檢為惡性腫瘤，2例手術病檢為惡性腫瘤。隨訪治療觀察，11例1年內(nèi)死亡，11例疾病進行性加重。這22例均與石蠟片結果相符。在18例石蠟片中未找到癌細胞的病例中，14例臨床診斷為肝硬化、結核性胸膜炎，經(jīng)治療有效，隨訪無疾病進展，與石蠟片檢查結果相符。另4例中有1例被組織病理學結果證實為腺癌，1例在1a內(nèi)死亡，2例疾病進行性加重，這4例石蠟片結果均與組織病理學或臨床隨訪不符。故綜合檢查結果和治療隨訪，惡性胸腹腔積液應為26例，良性為14例，石蠟片診斷符合率為%。40例胸腹水中，18例以TCT法檢測到有惡性腫瘤細胞，22例未找到癌細胞，與組織病理或治療隨訪比較，8例不符；診斷符合率達%；在以CB法檢出的25例中，細胞離心涂片法及CS法檢測到惡性腫瘤細胞分別為2例、0例。

3討論

目前國內(nèi)臨床上檢測胸腹水的方法一般有4種，即CS法、細胞離心涂片法、TCT法和CB法［2］。許多學者在檢測中體會到CS法檢出率低，涂片法又存在涂片厚、細胞重疊、結構不清、細胞量少而陽性檢出率低［3，4］的特點。近年來有少數(shù)學者報道了CB法可提高陽性檢出率［5］,但有關研究注重的多為腫瘤細胞的陽性檢出率，而對幾種方法與臨床的診斷符合率的關注不多。本文中我們對同一患者、同一送檢液分別采用4種不同方法進行細胞學檢查。結果經(jīng)3名有細胞學經(jīng)驗的檢測小組同時比較觀察，結果顯示，40例胸腹水中，22例CB片中發(fā)現(xiàn)有惡性腫瘤細胞，18例石蠟片中未找到癌細胞。我們在對40例患者的分析中發(fā)現(xiàn),22例惡性腫瘤患者中22例全部經(jīng)手術、纖支鏡組織病理學結果或臨床隨訪證實；在18例CB片中未找到癌細胞的病例中，14例與臨床隨訪相符。4例與組織病理學或臨床隨訪不符，為漏診。CB片診斷符合率為%,而TCT法診斷符合率也達到了%；但細胞離心涂片法及CS法診斷符合率則較低。既往的胸腹水細胞學多采用直接涂片法，涂片以瑞氏或HE染色后進行細胞分類及形態(tài)學檢查，雖然方法簡單易行，但檢出率低。雖然采用細胞離心涂片法提高了檢出陽性率，但仍然有限。我們的檢測結果比文獻報道［6］的低。由此我們認為，直接涂片法檢出率太低，幾乎對惡性胸腹水沒有診斷價值，應予以淘汰，而細胞離心涂片法雖部分提高了檢出率，但十分有限。這可能是因為該方法干擾因素太多，如標本放置時間的長短、涂片的厚簿、染色的質(zhì)量等。加之該方法存在著涂片厚、細胞重疊、結構不清、細胞量少的缺點，影響了對結果的正確判斷，故參考價值亦不大。我國學者楊玉林曾報道，胸腹水中脫落的細胞種類較多，如組織細胞、白細胞和紅細胞、惡性腫瘤細胞、壞死物和黏液以及正常的或反應性的間皮細胞等可以互相重疊，退化變性，在常規(guī)檢查中很難進行鑒別做出正確的診斷［7］，我們的結果與此相符。液基薄層細胞學技術是近年來推廣的一項新技術，它以在婦科宮頸癌早期診斷方面的優(yōu)越性而受到國內(nèi)外學者的青睞［8］。但在非婦科領域，尤其是在胸腔積液細胞學檢測方面的應用研究尚不多見。在我們檢測的40例中，18例通過該方法檢測到惡性腫瘤細胞，22例未找到癌細胞，與手術或纖維支氣管鏡組織病理學結果、治療及隨訪觀察結果比較，其診斷符合率達%，且無一例假陽性結果。比該方法在宮頸癌及痰細胞學檢出率高［9］，提示該方法在惡性胸腹水的診斷方面有較大的診斷價值。同時該方法涂片厚薄均勻一致，細胞單層分布，容易辨認，對病理診斷醫(yī)師的要求相對沒有涂片嚴格。如果多次檢測可更大地提高陽性檢出率。但該方法也有其不足，一方面是如果細胞數(shù)太少時陽性檢出率不高，另一方面是在細胞分類上只能靠經(jīng)驗，在免疫細胞化學檢測中其細胞核著色的免疫標記物的陽性率和表達強度均較石蠟切片低［10］。近年來石蠟包埋切片技術因其陽性診斷率高而受到廣大學者關注［1］，本文中我們采用多次反復離心沉淀法，搜集到較多的細胞，并觀察到該方法對凝固的標本檢測也不受影響。我們在凝固物中找到了大量的細胞及組織，由此可以觀察到細胞的形態(tài)及組織結構，提高了石蠟切片的陽性檢出率。這與文獻報道一致［7］。此外我們參照鄭暉［1］的方法，用雞蛋清作為介質(zhì),預包埋細胞使其凝聚成團塊,再按組織塊標本一樣進行常規(guī)脫水、包埋、石蠟切片、染色,同時對該方法作了部分改良，取消了甲醛固定，這一方面使收集到的細胞

［1］鄭暉,顏亞暉.介紹一種簡單適用的胸腹水脫落細胞石蠟包埋法［J］.中國組織化學與細胞化學雜志,2003,12(4):445446.

［2］張智慧，孫耘田.免疫細胞化學在細胞病理學中的應用［J］.中華病理學雜志,2005,34(10):672673.

［3］郭智俊，彭掛香,潘乃梁.胸腹水沉淀物瓊脂石蠟雙包埋切片法與常規(guī)涂片法的對比［J］.臨床與實驗病理學雜志，2002,18(4):437.

［4］李琳，胡海，黃曉楠.胸腹水沉淀物制片方法介紹［J］.診斷病理學雜志，2003，10(1)：50．

［5］邱前程，盧善明，黃杰雄.胸腹水細胞塊石蠟包埋及免疫細胞化學染色在胸腹水細胞病理學診斷中的價值［J］.汕頭大學醫(yī)學院學報,2005,18(1):4344.

［6］楊文君,任曉冰,沈?qū)氈?等.免疫組織化學方法在良惡性胸腹水鑒別診斷中的意義［J］.實用醫(yī)學雜志,2004,20(4):374375.

［7］楊玉林，陳麗，王玉萍.胸腹水細胞石蠟切片技術的臨床應用［J］.臨床檢驗雜志,2004,22(2):102.

［8］潘秦鏡，李凌，喬友林，等．液基細胞學篩查宮頸癌的研究［J］．中華腫瘤雜志，2001，23