動(dòng)物的克隆 省賽獲獎(jiǎng)

第3節(jié)動(dòng)物的克?。ㄒ唬﹦?dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)將動(dòng)物體內(nèi)的一部分組織取出分散成單個(gè)細(xì)胞人工控制的條件下細(xì)胞得以生存并保持生命活動(dòng)現(xiàn)象生長(zhǎng)、分裂乃至接觸抑制和有規(guī)律的衰老、死亡性能等機(jī)械消化或胰酶消化（1）定義一、動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)和克隆形成（二）動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)過程

取動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物器官和組織剪碎組織胰蛋白酶處理細(xì)胞培養(yǎng)單個(gè)細(xì)胞?動(dòng)物組織細(xì)胞間隙中含有一定量的彈性纖維等蛋白質(zhì)?（三）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程取動(dòng)物組織塊剪碎組織用胰蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液中進(jìn)行原代培養(yǎng)貼滿瓶壁的細(xì)胞用胰蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液中進(jìn)行傳代培養(yǎng)放入二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)細(xì)胞

懸浮液第一次轉(zhuǎn)移．．無限傳代原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細(xì)胞株（泛指有特殊功能的細(xì)胞系或原代培養(yǎng)中獲?。┘?xì)胞系（泛指可傳代的細(xì)胞）1.如何界定原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)；細(xì)胞株和細(xì)胞系？(遺傳物質(zhì)改變)基本概念理解2、細(xì)胞系、細(xì)胞株：

細(xì)胞系是泛指可傳代的細(xì)胞，細(xì)胞株是具有特殊性質(zhì)的細(xì)胞系。

通過一定的選擇或純化后，細(xì)胞株一般具有恒定的染色體組型、同功酶類型、病毒敏感性和生化特性等。連續(xù)細(xì)胞系有限細(xì)胞系惡性細(xì)胞系，致瘤性不死性，保留接觸性抑制連續(xù)細(xì)胞株有限細(xì)胞株海拉(HeLa)細(xì)胞系電鏡照片二倍體細(xì)胞（四）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件1.無菌無毒的環(huán)境2.營(yíng)養(yǎng)（動(dòng)物血清，葡萄糖等）3.溫度和pH（CO2培養(yǎng)箱：調(diào)節(jié)PH）4.氣體環(huán)境思考：2、為什么選用動(dòng)物胚胎或幼齡個(gè)體的器官或組織做動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)材料？1、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液較植物組培培養(yǎng)基有何獨(dú)特之處？3、為什么培養(yǎng)前要將組織細(xì)胞分散成單個(gè)細(xì)胞？1、液體培養(yǎng)基2、成分中有動(dòng)物血清等因?yàn)檫@些組織或器官上的細(xì)胞生命力旺盛，分裂能力強(qiáng)成塊組織不利培養(yǎng)，分散了做成細(xì)胞懸浮液利于培養(yǎng)4、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)能否像綠色植物組織培養(yǎng)那樣最終培養(yǎng)成新個(gè)體？不能，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)只能使細(xì)胞數(shù)目增多，不能發(fā)育成新的動(dòng)物個(gè)體5、若一直在卡氏瓶中持續(xù)培養(yǎng)會(huì)出現(xiàn)什么情況？貼壁生長(zhǎng)以及接觸抑制生長(zhǎng)的細(xì)胞就會(huì)因細(xì)胞密度過大和代謝消耗引起營(yíng)養(yǎng)枯竭，不能正常生長(zhǎng)。（五）克隆培養(yǎng)法

把一個(gè)單細(xì)胞從群體中分離出來單獨(dú)培養(yǎng)，使之繁衍成一個(gè)新的細(xì)胞群體(純系)的技術(shù)。細(xì)胞克隆法的最基本要求：必須保證分離出來的細(xì)胞是一個(gè)而不是多個(gè)．不同系統(tǒng)的細(xì)胞克隆的難度是不一樣的提高細(xì)胞克隆形成率的措施：適宜的培養(yǎng)基動(dòng)物血清（胎牛血清）滋養(yǎng)細(xì)胞（射線照射后的成纖維細(xì)胞）激素刺激（胰島素刺激）調(diào)節(jié)pH等。應(yīng)用：研究遺傳規(guī)律和生理特性的重要材料。單抗細(xì)胞侏的制備（六）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用（1）生產(chǎn)蛋白生物制品：病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體等。（3）用于檢測(cè)有毒物質(zhì)。（2）獲得大量自身的皮膚細(xì)胞，用于植皮。（4）用于生理、病理、藥理等方面的研究，為治療和預(yù)防疾病提供理論依據(jù)。植物組織培養(yǎng)和動(dòng)物組織培養(yǎng)的比較比較項(xiàng)目植物組織培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)理論基礎(chǔ)培養(yǎng)基性質(zhì)培養(yǎng)基特有成分培養(yǎng)結(jié)果培養(yǎng)目的獲得細(xì)胞或

細(xì)胞分泌蛋白細(xì)胞的全能性細(xì)胞株、細(xì)胞系植物體快速繁殖、培育無病毒植株等葡萄糖、

動(dòng)物血清蔗糖、

植物激素液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基細(xì)胞增殖雜交瘤技術(shù)和單克隆抗體制備：(1).傳統(tǒng)抗體生產(chǎn)方法：抗原動(dòng)物體內(nèi)抗體刺激效應(yīng)B(抗體不純)篩選單一效應(yīng)B細(xì)胞不能增值，產(chǎn)生大量抗體特異性差、純度低；產(chǎn)量低、反應(yīng)不夠靈敏。二、動(dòng)物的細(xì)胞融合技術(shù)及應(yīng)用(2).單克隆抗體制備過程：設(shè)計(jì)方案：一個(gè)B淋巴細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞+化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體。特性：主要用于制備單克隆抗體獲得雜種植株用途物理、化學(xué)方法（同左）滅活的病毒物理（離心、振蕩、電刺激）化學(xué)（聚乙二醇）誘導(dǎo)方法使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合細(xì)胞融合的方法細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞融合的原理動(dòng)物細(xì)胞融合植物體細(xì)胞雜交比較項(xiàng)目比較項(xiàng)目植物、動(dòng)物細(xì)胞融合的比較

下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌的實(shí)驗(yàn)方案2、該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？為什么？4、圖中B為________過程，常用_________作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼承___________的遺傳特性，既能__________,又能___________。1、該實(shí)驗(yàn)方案的目的是__________3、A是從小鼠的脾臟中取得_______,該細(xì)胞能夠產(chǎn)生______5、C過程指細(xì)胞培養(yǎng)，該過程包括_____培養(yǎng)和_____培養(yǎng)兩個(gè)階段，其中_____代以內(nèi)的的細(xì)胞屬于細(xì)胞株。制備單克隆抗體效應(yīng)B細(xì)胞抗體細(xì)胞融合滅活病毒雙親細(xì)胞分泌抗體無限增殖原代傳代B體外培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞足夠數(shù)量的細(xì)胞群注射到小鼠腹腔AC三、動(dòng)物的克隆繁殖1、動(dòng)物細(xì)胞全能性的表現(xiàn)程度：

低等動(dòng)物細(xì)胞的全能性一般比較容易體現(xiàn)。

無論是分化還是癌變，變化的都是表現(xiàn)型，基因組成的完整性并沒有改變。癌細(xì)胞仍能逆轉(zhuǎn)為正常細(xì)胞。干細(xì)胞的分類：按分化潛能分：(1)全能干細(xì)胞：具有形成完整個(gè)體的分化潛能。如胚胎干細(xì)胞。(2)多能干細(xì)胞：具有分化出多種細(xì)胞組織的潛能，失去發(fā)育成完整個(gè)體的能力。(3)專能干細(xì)胞：只能向一種類型或密切相關(guān)的兩種類型分化的細(xì)胞。如骨髓干細(xì)胞、皮膚生發(fā)層細(xì)胞等。按來源分：

(1)胚胎干細(xì)胞：當(dāng)受精卵分裂發(fā)育成囊胚時(shí)，內(nèi)層細(xì)胞團(tuán)的細(xì)胞即為胚胎干細(xì)胞。(2)成體干細(xì)胞：指已分化特定組織中的未分化細(xì)胞，可來源于胚胎、胎兒和成人的組織中，如造血干細(xì)胞、神經(jīng)干細(xì)胞、成肌細(xì)胞等。2、動(dòng)物難以克隆的根本原因：

基因表達(dá)的調(diào)控使得細(xì)胞中合成了專一的蛋白質(zhì)。一類基因是維持生存的；一類基因隨著組織器官和發(fā)育階段不同而選擇性表達(dá)。導(dǎo)致基因組中的基因活動(dòng)不完全．如：哺乳動(dòng)物的紅細(xì)胞只

有少量的線粒體。3、細(xì)胞核移植實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物的克隆繁殖：胚胎細(xì)胞核的移植成功率遠(yuǎn)高于成體細(xì)胞。綿羊“多莉”克隆過程：涉及的技術(shù)：核移植胚胎移植克隆羊成功的分子細(xì)胞生物學(xué)機(jī)理：體細(xì)胞克隆成功的意義：1、證明了高度分化的細(xì)胞也可以回復(fù)到類似受

精卵時(shí)期的功能。2、證明了細(xì)胞質(zhì)具有調(diào)控細(xì)胞核發(fā)育