分離科學(xué)與進展 中科大lecture1

別離科學(xué)與進展

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Go_ustcers課程概要本課程主要面向分析化學(xué)專業(yè)的研究生，介紹與分析技術(shù)相關(guān)的各類別離和分析方法，著重方法的原理介紹。授課時間為18周，考試2周評分(暫定)：考勤10%；課堂測驗30%〔二次〕；Paperpresentation10%；考試50%授課方案〔暫定〕引言及課程介紹〔2〕沉淀、萃取〔3~4周〕色層別離〔4~5周〕離子交換及離子色譜〔5~6周〕膜別離〔7周〕氣相色譜〔8~9周〕液相色譜〔10~12周〕毛細管電泳〔13~14周〕電色譜〔15周〕凝膠電泳〔16~17周〕其它別離方法〔18周〕Paperpresentation(4-18周)沉淀別離無機沉淀劑別離法有機沉淀劑別離法均相沉淀法共沉淀別離法無機沉淀劑別離法沉淀法是最古老、經(jīng)典的化學(xué)別離法，它通過沉淀反響把欲測的組分別離出來或?qū)⒐泊娴慕M份沉淀去除。常用的有氫氧化物和硫化物沉淀別離法常用的氫氧化物沉淀劑有：NaOH溶液，氨水加銨鹽，ZnO懸濁液等生成硫化物沉淀可使用H2S或硫代乙酰胺，后者通過在酸性或堿性溶液中加熱煮沸發(fā)生分解反響而生成沉淀劑H2S或S2-有機沉淀劑別離法無機沉淀劑雖然可以沉淀別離多種離子，但選擇性較差，靈敏度也不夠高，有機沉淀劑的出現(xiàn)很好地克服了這些問題。目前有機沉淀劑的種類已經(jīng)很多，幾乎對各種金屬都開展出了較為特效的試劑。分析功能團：能使有機試劑與金屬離子起選擇性作用的特征結(jié)構(gòu)稱分析功能團，如a-二肟，胂酸基。有機沉淀劑與有機沉淀反響形成螯合物：8-羥基喹啉、丁二酮肟、銅鐵靈和新銅鐵靈、銅試劑、苯胂酸及其衍生物、氨基酸類、苯并三唑形成締合物：苦杏仁酸、二苦胺〔六硝基二苯胺〕、四苯硼酸鈉、聯(lián)苯胺形成三元絡(luò)合物：吡啶、1，10-鄰二氮雜菲形成螯合物的沉淀劑

和沉淀反響8-羥基喹啉：可與許多二價、三價和少數(shù)四價陽離子反響形成羥基或氨基的絡(luò)合物，產(chǎn)生沉淀。不同離子產(chǎn)物沉淀的溶解度不同，因此完全沉淀時的pH也不同。形成螯合物的沉淀劑

和沉淀反響丁二酮肟：能與Ni2+形成2:1的螯合物，四個氮原子以平面正方形的構(gòu)型分布在中心離子的周圍，形成二個五員環(huán)的難溶化合物，于氨性溶液中沉淀，它是別離Ni2+的有效沉淀劑。形成螯合物的沉淀劑

和沉淀反響銅鐵靈和新銅鐵靈：是亞硝基化合物中的重要沉淀劑，兩者作用相似，后者生成的沉淀更難溶解。該兩種試劑能沉淀的離子種類較多，選擇性不高。形成螯合物的沉淀劑

和沉淀反響銅試劑：即二乙基胺二硫代甲酸鈉，簡稱DDTC。能與很多金屬離子生成沉淀，但和Al3+，堿土金屬及稀土離子不產(chǎn)生沉淀，因此常用來沉淀除去重金屬離子。形成螯合物的沉淀劑

和沉淀反響苯胂酸及其衍生物：是Zr4+，Hf4+，Th4+，Sn4+等離子的較好沉淀劑。形成締合物的沉淀劑

和沉淀反響苦杏仁酸〔又名苯羥乙酸〕及其衍生物，常用來沉淀Zr4+，Hf4+。形成締合物的沉淀劑

和沉淀反響二苦胺〔又名六硝基二苯胺〕：用來沉淀K+，Rb+，Cs+。形成締合物的沉淀劑

和沉淀反響四苯硼酸鉀：用來沉淀K+，Rb+，Cs+。四苯硼酸鉀形成的沉淀溶解度小，其分子量大，因而適合重量法測定。聯(lián)苯胺：在微酸性溶液中與H+結(jié)合生成陽離子，可以沉淀SO42-，生成聯(lián)苯胺硫酸鹽。形成三元絡(luò)合物的沉淀劑

和沉淀反響吡啶：在SCN-存在下可與Cd2+，Co2+，Mn2+，Cu2+，Ni2+，Zn2+等生成三元絡(luò)合物沉淀。均相沉淀法通常的沉淀別離操作由于沉淀劑在溶液中無法做到分布，因此往往得到的是細小的晶形沉淀〔如BaSO4,CaC2O4〕或訴訟輸送疏松的非晶形沉淀[如Fe(OH)3，Al(OH)3]，容易吸附雜質(zhì)，不利于過濾、洗滌等。均相沉淀法不是將沉淀劑加到溶液中去，而是借助于化學(xué)反響，在溶液中緩慢而又均勻地產(chǎn)生沉淀劑。均相沉淀得到的晶形沉淀顆粒較粗，非晶形沉淀結(jié)構(gòu)致密，因此夾帶的共沉淀雜質(zhì)少，無需陳化，過濾、洗滌也較方便。均相沉淀的途徑改變?nèi)芤旱膒H值：最常采用的是尿素水解法。在溶液中直接產(chǎn)生沉淀劑：如利用丁二酮與鹽酸羥胺的反響來產(chǎn)生丁二酮肟來沉淀Ni2+，不但可以顆粒較粗的沉淀而且可以消除Cu2+，Co2+等發(fā)生共沉淀干擾。逐漸除去溶劑：加熱除去水相中的有機溶劑，使沉淀析出。破壞可溶性絡(luò)合物：加熱，絡(luò)合離子置換均相沉淀的缺點操作時間冗長；生成的沉淀會牢固粘附于器壁。共沉淀別離法共沉淀現(xiàn)象是由于沉淀的外表吸附作用、混晶或固溶體的形成、吸留或包藏等原因引起的。無機共沉淀劑吸附或吸留作用的共沉淀劑；混晶作用的共沉淀劑形成晶核的共沉淀劑沉淀的轉(zhuǎn)化作用吸附或吸留作用的共沉淀劑Cu/Al別離：欲從金屬銅中別離出微量的鋁時，在溶解解試樣后，在試液中參加過量的氨水，銅生成Cu(NH3)42+而留于溶液中，但Al3+很少難以形成Al(OH)3沉淀或沉淀不完全。這時可參加Fe3+，生成的Fe(OH)3外表吸附了一層OH-可以進一步吸附Al3+從而使微量的鋁沉淀出來，得到別離。吸附或吸留作用的共沉淀劑常用于此類的無機共沉淀劑通常生成非晶沉淀，其外表積大，與溶液中微量元素接觸時機多，吸附量也大，有利于痕量元素的共沉淀；而且非晶形沉淀的聚集速率快，可將吸附在外表的微量元素很快地包藏起來，提高了富集的效率。另外，許多硫化物〔如PbS,CdS,SnS2〕等除了具有上述特點外，還易發(fā)生后沉淀，有利于微量元素的富集?；炀ё饔玫墓渤恋韯┤绻麅煞N金屬離子生成沉淀時，具有相似的晶格，就可能生成混晶而共同析出。如BaSO4/Ra2+，SrSO4/Pb2+，SrCO3/Cd2+，二苦胺鉀/Cs+，由于晶格匹配條件的限制該共沉淀方法有較好的選擇性和抗干擾離子的能力。形成晶核的共沉淀劑有些痕量元素含量實在太少，即使轉(zhuǎn)化成難溶物質(zhì)，也無法沉淀出來，但可把它作為晶核，使另一種物質(zhì)聚集在該晶核上而一起沉淀下來。如溶液中極微量的金、鉑、鈀等貴金屬離子，可以入少量Na2TeO3，再參加復(fù)原劑如H2SO3或SnCl2等。在貴金屬離子被復(fù)原為金屬微?！簿Ш恕车耐瑫r，亞碲酸鹽被復(fù)原為游離碲，在貴金屬微粒核心的周圍聚集而沉淀析出沉淀的轉(zhuǎn)化作用用一種難溶化合物，使存在于溶液中的微量元素轉(zhuǎn)化成更為難溶的物質(zhì)而使其得到別離的方法。如：CdS/Cu2+，Hg2Cl2/M，CaCO3/Pb2+無機共沉淀劑無機共沉淀劑除極少數(shù)〔如汞化合物〕可以經(jīng)灼燒揮發(fā)除去外，在大多數(shù)情況下需別離載體元素和痕量待測元素，因此只有當(dāng)載體離子容易被掩蔽或不干擾測定時才方便使用。有機共沉淀劑形成締合物的共沉淀劑：被富集的痕量離子與某種配位體形成絡(luò)離子而與帶相反電荷的有機試劑締合形成難溶鹽，而被具有相似結(jié)構(gòu)的載體共沉淀下來，如甲基紫，孔雀綠，品紅，亞甲基藍等。惰性共沉淀劑：參加結(jié)構(gòu)相似但不溶于水的惰性載體，促使痕量組沉淀析出，又稱固相萃取劑。例如U(VI)-1-亞硝基-2-萘酚是微溶螯合物，量少時難以沉淀。在體系中參加a-萘酚或酚酞的乙醇溶液，a-萘酚或酚酞在水溶液中溶解度小，故析出沉淀，同時將U(VI)-1-亞硝基-2-萘酚螯合物一并共沉淀富集。有機共沉淀劑的優(yōu)點害集效率較高；選擇性較好；有機載體容易通過高溫灼燒除去。萃取別離主要討論金屬離子的液液萃取，即使溶液與另一種不相混溶的溶劑密切接觸，以使溶液中的某種或某幾種溶質(zhì)進入溶劑相中，從而與溶液中的其它干擾組分別離。通常為了實現(xiàn)無機離子的萃取別離，需在水溶液中參加萃取劑，形成不帶電荷、難溶于水而易溶于有機溶劑中的物質(zhì)。以螯合物形式被萃取萃取劑為螯合劑，此類萃取劑有8-羥基喹啉、雙硫腙、銅鐵試劑、乙酰丙酮、二乙基胺二硫代甲酸鈉〔銅試劑〕、丁二酮肟。雙硫腙乙酰丙酮以離子締合物的形式被萃取帶有不同種電荷的離子，由于靜電引力，互相締合成不帶電荷的、易溶于有機溶劑的分子而被萃取。〔1〕被萃取的陰離子或陽離子，與大體積的有機陽離了或陰離子締合成中性分子，可以被有機溶劑萃?。弧?〕有機溶劑分子參加到締合分子中去，形成易溶于有機溶劑的中性分子〔溶劑化分子〕。以離子締合物的形式被萃取ReO4-+(C6H5)4As+(C6H5)4As?ReO4R2OH+(钅羊鹽)+Fe(R2O)2Cl4-

R2OH?Fe(R2O)2Cl4乙醚萃取三氯化鐵乙醚萃取三氯化鐵各種溶劑形成钅羊鹽的能力ROR<ROH<RCOOH<RCOOR<RCOR<RCHO以三元絡(luò)合物的形式被萃取三元絡(luò)合萃取體系往往比螯合和締合的二元萃取體系更為優(yōu)越，不但萃取效率高，速率快，而且選擇性好。酸性磷類萃取劑萃取此類萃取劑含有酸性基團，通過結(jié)構(gòu)中的H+而與水溶液中的金屬陽離子交換以進行萃取，因此又被稱為液體陽離子交換劑。酸性磷類萃取劑對大多數(shù)的金屬陽子都能萃取，萃取選擇性較差，但速度快，價格廉價。酸性磷類萃取劑萃取共萃取假設(shè)某一元素〔通常為微量元素〕單獨存在時不被萃取，或很少被萃取，但當(dāng)另一元素〔通常為常量元素〕存在而被萃取時，難萃取元素的萃取效率將大為增加這一現(xiàn)象稱為共萃取。主要包括〔1〕形成復(fù)雜多核絡(luò)合物形式的萃取和〔2〕形成復(fù)雜離子締合物的共萃取。共萃取協(xié)同萃取體系通過兩種萃取劑的同時使用，使得萃取效率〔可用分配比來表示〕比任何一種萃取劑單獨使用時大大提高的象稱為協(xié)同效應(yīng)，這種萃取體系稱為協(xié)同萃取體系，簡稱協(xié)萃體系。其本質(zhì)可能是形成了三元或四元絡(luò)合物。(SynergicEffectsinSolventExtraction:://doi.wiley/10.1002/anie.196500951)協(xié)萃系數(shù)R：R=D協(xié)同/D加和M(w)+R1(w)+R2(w)=MR1R2(o)協(xié)同萃取體系協(xié)同萃取體系實質(zhì)上也是一種三絡(luò)合物體系，它是由被萃物質(zhì)與螯合劑及中性有機磷萃取劑組成的三元絡(luò)合物萃取體系。在這種體系中螯合劑與被萃取的金屬離子螯合，中和了金屬離子上的電荷，生成螯合物。有機磷萃取劑進一步置換了螯合物中金屬離子上殘留的水合分子，于是形成疏水性的三元絡(luò)合物，而為有機溶劑萃取。協(xié)同萃取體系協(xié)同萃取體系協(xié)同萃取作用:混合萃取劑同時萃取某一物質(zhì)時，其分配比顯著大于相同濃度下各單一萃取劑分配比之和。即：有協(xié)同效應(yīng)：D協(xié)同D加和＝D1＋D2＋…無協(xié)同效應(yīng)：D協(xié)同D加和反協(xié)同效應(yīng)：D協(xié)同D加和協(xié)萃系數(shù)R：R=D協(xié)同/D加和協(xié)萃系數(shù)二(2-乙基己基〕磷酸〔P204〕與中性含磷萃取劑協(xié)萃體系萃取UO22+的協(xié)萃系數(shù)含磷萃取劑〔B〕TBPBDBPTOPO單獨含磷萃取劑DB0.00020.0020.06單獨P204萃取劑DP204135135135混合萃取劑D協(xié)同47035003500協(xié)萃系數(shù)R3.525.925.9TBP=磷酸三丁酯；BDBP=二丁基膦酸丁酯；TOPO=三辛基氧膦協(xié)同萃取機理生成了更為穩(wěn)定的含有兩種以上配位體的可萃物；生成的配合物疏水性更強，更易進入有機相中。如單獨陽離子交換萃取反響：Mn+＋nHA(org)MAn(org)參加中性配合萃取劑S后的協(xié)同萃取反響：Mn+＋nHA(org)＋xS(org)MAnSx(org)＋nH＋協(xié)同萃取機理—取代機理如果形成的萃合物中含有自由萃取劑HA，那么參加中性萃取劑S后，S取代HA生成更穩(wěn)定或更疏水的萃合物。UO22+＋3HA(org)UO2(A)2HA(org)＋2H＋UO2(A)2HA(org)＋TOPO(org)UO2(A)2TOPO(org)＋HA(org)有時，參加強配位體后，也可以局部取代配位數(shù)已飽和的單一配體萃合物。〔TTA:噻吩甲酰三氟丙酮〕Pu(TTA)4(org)＋HNO3＋TOPO(org)Pu(TTA)3NO3TOPO(org)＋HTTA協(xié)同萃取機理—溶劑化機理如果金屬的配位數(shù)沒有飽和，只有一局部被萃取劑A配位，剩下的配位局部被水分子占據(jù)，當(dāng)參加中性萃取劑S后，S取代水分子，形成A和S的協(xié)同萃取體系。Y(TTA)32H2O(org)＋2TBP(org)Y(TTA)32TBP(org)＋2H2O主要協(xié)同萃取體系體系類型實例陽離子交換與中性配合P204和TBP萃取UO22+不同的二元陽離子交換與胺類協(xié)同TTA和TOA萃取Th4+協(xié)萃體系中性配合與胺類協(xié)同TOPO和TOA萃取Am3+陽離子交換與陽離子交換TTA和HAA萃取RE3+相同的二元中性配合與中性配合TBP和Ar2SO萃取UO22+協(xié)萃體系三元協(xié)萃體系陽離子交換/中性配合/胺類P204/TBP/R3N萃取UO22+形成高分子胺鹽的三元絡(luò)合物萃取體系溶于有機相中的高分子胺鹽，與水相中的金屬絡(luò)陰離子接觸時，發(fā)交換過程，使水相中的金屬絡(luò)陰離子與有機相中的胺鹽陽離子締合生成三元絡(luò)合物而進入有機相。R3N(o)+HA=R3N+HA-(o)R3N+HA-(o)+B-=R3N+HB-(o)+A-形成高分子胺鹽的三元絡(luò)合物萃取體系有機相中的高分子胺與水相中的酸作用生成胺鹽；有機相中胺鹽的陰離子與水溶液中的金屬絡(luò)陰離子交換，形成締合三元絡(luò)合物，而使陰離子進入有機相。這類反響具有溶劑萃取和離子交換兩種作用，因此這類胺鹽也稱為陰離子交換劑。冠狀化合物作為萃取劑的萃取體系冠狀化合物通常指大環(huán)多醚，包括冠醚和穴醚。冠醚形似皇冠，而穴醚為具有三維結(jié)構(gòu)的雙環(huán)穴狀化合物。冠狀化合物結(jié)構(gòu)中疏水性的乙撐基處于外側(cè)，而親水性的雜原子朝向內(nèi)側(cè)，形成一個外面疏水、內(nèi)腔親水的結(jié)構(gòu)。當(dāng)金屬離子的直徑與空腔的大水相匹配時，可形成穩(wěn)定的1:1絡(luò)合物而被萃取。冠狀化合物作為萃取劑的萃取體系萃取過程中的根本參數(shù)分配系數(shù)：溶質(zhì)在互不相溶的兩相中分配到達平衡后，其在兩種溶劑中的濃度比值為一常數(shù)，不因濃度而改變，該常數(shù)值稱為分配系數(shù)。KD=[Ao]/[Aw]，這關(guān)系稱為分配定律，是溶劑萃取的根本定律。分配定律使用時應(yīng)考慮溫度和濃度的影響。萃取過程中的根本參數(shù)分配比：當(dāng)溶質(zhì)在一相或兩相中發(fā)生電離、聚合等化學(xué)反響時，需引入分配比的概念，D=(A總)o/(A總)w，分配比通常不一定等于分配系數(shù)。電離平衡:聚合平衡:分配平衡:分配比:D隨[HAc]o和[H+]w而變！配合平衡:分配平衡:分配比:D隨[I-]W而變萃取百分數(shù)別離系數(shù)在分析化學(xué)中，為了到達別離的目的，不僅要求被萃取物質(zhì)的分配比大，萃取百分數(shù)高，而且要求溶液中共存組分間的別離效果好。別離效果的好壞可用別離系數(shù)b來表示：b=DA/DB萃取條件的選擇：

形成螯合物的萃取體系HRH++R-HRMn++nR-MRnHRMRn水相油相KDRKDXKiKfD=(KDXKfKin/KDRn)?([HR]o/[H+])n萃取條件的選擇：

形成螯合物的萃取體系萃取劑的選擇：對于形成螯合物的萃取體系，應(yīng)選擇酸性較強的，較易電離和較易溶于水的萃取劑；萃取劑與被萃取離子螯合后所形成的螯合物越穩(wěn)定越好，越易溶于有機溶劑越好；這些因素通常要綜合考慮。D=(KDXKfKin/KDRn)?([HR]o/[H+])n萃取條件的選擇：

形成螯合物的萃取體系萃取溶劑的選擇：被萃取的螯合物在萃取溶劑中的溶解度越大，那么萃取效率越高；萃取溶劑與水的比重差異要大，粘度要小，這樣便于分層，有利于操作的進行；揮發(fā)性、毒性要小，而且不易燃燒。酸度的選擇：萃取曲線〔E~pH繪圖〕D=E/(100-E)=K*/[H+]nK*=(KDXKfKin/KDRn)([HR]o)n 適當(dāng)控制溶液酸度可以實現(xiàn)不同離子間的別離各種雙硫腙螯合物的萃取曲線萃取操作間歇萃取法：為分析化學(xué)中最常用的萃取方法，設(shè)備簡單〔分液漏斗即可〕；連續(xù)萃取法：對于分配比小的體系，用間歇法需反復(fù)萃取許屢次才能到達定量別離，此時需連續(xù)萃取技術(shù)。逆流萃取法連續(xù)萃取法從燒瓶中不斷地蒸發(fā)出萃取用的溶劑，讓它冷凝下來，連續(xù)通過被萃取的溶液進行萃取，萃取液別離后仍流回原來的燒瓶中。在燒瓶中再將溶劑蒸發(fā)出來，再次經(jīng)冷凝，萃取，并重復(fù)進行直到萃取完成。需采取一定的措施保證兩相的充分接觸：常在溶劑入口增加多孔玻璃或使用攪拌。連續(xù)萃取器Friedrich萃取器〔溶劑比水輕〕Schmall萃取器〔溶劑比水輕但不易揮性〕連續(xù)萃取器〔溶劑比水重〕索氏萃取〔提取、抽提〕器〔固體樣品〕逆流萃取Craig提出的萃取模式一般來說，二項分布的圖形形狀取決于n和p，如果p=q=1/2，不管n有多大，二項分布呈對稱形狀；當(dāng)p≠q時，圖的形狀呈偏斜狀，而且假設(shè)在n一定情況下，〔p+q)n中的p值與q值相差越大，那么偏度越大；當(dāng)p與q為一定值，盡管二者相差較大，但隨著n的增大而偏斜度相應(yīng)減小，且逐漸接近于左右對稱；當(dāng)n適當(dāng)大〔n>30〕,且np和nq都不小于5時，〔p+q)n的二項分布趨近于正態(tài)分布；當(dāng)n→∞時，二項分布的極限即為正態(tài)分布。=P(0)+P(1)+P(2)+…P(x)…P(n)f(x)=5.1.5溶劑萃取新技術(shù)液相微萃取微波輔助溶劑萃取加速溶劑萃取1.液相微萃取(LiquidPhaseMicro-Extraction，

LPME)也稱溶劑微萃取〔solventmicroextraction,SME〕。1996年在液-液萃取根底上開展起來的，結(jié)合了液-液萃取和固相微萃取的優(yōu)點。只需極少量的有機溶劑、裝置簡單、操作方便、本錢低。在樣品前處理方面具有重要價值。適合萃取在水溶液中溶解度小、含有酸性或堿性官能團的痕量目標(biāo)物。LPME技術(shù)還可以方便地與后續(xù)分析儀器連接，實現(xiàn)在線樣品前處理。最初的液相微萃取將一滴有機溶劑直接懸掛于色譜進樣針尖，將其浸入樣品水溶液中，分析物從被萃取到有機溶劑液滴中，直接注入色譜儀分析〔別離＋進樣〕。缺陷：懸掛于針尖的有機溶劑液滴在攪拌樣品時容易脫落。改進方法：將多孔中空纖維管固定在針頭上保護和容納有機萃取劑。同時，纖維的多孔性增加了溶劑與樣品接觸的外表積，從而提高萃取效率。中空纖維管剖面圖平面圖液相微萃取的萃取模式兩相微萃取和三相微萃取。在兩相LPME中，中空纖維管壁微孔內(nèi)浸入的作為萃取劑的有機溶劑與纖維腔內(nèi)吸入的作為吸收液的有機溶劑相同。目標(biāo)物被萃取到纖維腔內(nèi)，在接收液和樣品水相之間到達分配平衡。〔萃取劑與萃取溶劑相同〕三相LPME中空纖維管壁的微孔內(nèi)浸入的是有機萃取劑，而纖維腔內(nèi)吸入的是水溶液接收相。有機萃取劑成了樣品水溶液和接收相水溶液的隔斷。目標(biāo)物先被有機萃取劑從樣品水溶液中萃出，然后進入接收相。

可離子化的分析物從水相萃取到中空纖維孔中的有機相中，再進入水相接受液中，萃取了樣品的接受液可直接注入色譜儀分析。三相LPME的萃取裝置

接受液在中空纖維管中循環(huán)流動，以加快纖維壁中萃取劑與接受液之間的傳質(zhì)速度。

纖維管中的接受液在萃取結(jié)束后可以吸入注射器中，換上色譜進樣針頭，直接注入色譜儀。

動態(tài)三相微萃取裝置示意圖有機溶劑浸漬的中空纖維套在注射器上，注射器內(nèi)存有少量受液，推動注射器反復(fù)更新中空纖維內(nèi)的有機相，可提高富集倍數(shù)，已用于萃取水樣中的芳胺。液滴微萃取液滴萃取/進樣方法是一種微量樣品富集進樣技術(shù)，樣品富集機理為液液萃取。如水樣中的十二烷基硫酸鈉，與亞甲基蘭形成離子對，用氯仿液滴(~1.3μl)收集，用光學(xué)檢測法檢測。假設(shè)樣品為多個成分，可利用該富集技術(shù)，將富集后的樣品液滴引入色譜系統(tǒng)進行別離檢測。構(gòu)思新穎，設(shè)計巧妙。液滴收集

示意圖

2.微波輔助溶劑萃取

微波輔助溶劑萃取〔microwaveassistedsolventextraction,MASE〕也稱微波輔助萃取或微波萃取。微波指波長在1mm至1m范圍〔300－300000MHz〕的電磁波。915MHz和2450MHz兩個頻率廣泛用于微波加熱。微波輔助萃取就是利用微波加熱來加速溶劑對固體樣品中目標(biāo)物的萃取。早期使用家用微波爐，幾分鐘就解決了傳統(tǒng)加熱萃取需要幾個小時甚至十幾個小時的問題。微波加熱原理傳統(tǒng)加熱：熱傳導(dǎo)、熱輻射方式，由外向里，加熱慢，受熱不均。微波加熱：被輻射物質(zhì)偶極矩旋轉(zhuǎn)〔數(shù)億次/分鐘〕和離子傳導(dǎo)方式，由里向外，加熱快，受熱均勻。微波加熱的選擇性：不同物質(zhì)的極性不同，吸收微波能的程度就不同，因而產(chǎn)生和傳遞給周圍環(huán)境的熱量不同。非熱生物效應(yīng)：生物樣品中的極性水分子在微波場中的強烈極性振蕩，導(dǎo)致細胞分子間氫鍵松弛，細胞膜結(jié)構(gòu)破裂，使萃取更快、更完全。密閉型微波萃取裝置萃取罐可控溫控壓。萃取罐密閉，目標(biāo)成分不易損失。壓力增大時，溶劑沸點也相應(yīng)提高，有利萃取。萃取溶劑既可以是無機酸、也可以是各種有機溶劑〔包括正己烷、苯等非極性溶劑〕。開罐型微波萃取裝置

通過一根波導(dǎo)管將微波聚焦于萃取體系上；萃取罐是開放式的，與大氣連通，只能控溫、不能控壓。繼承了索氏萃取的優(yōu)點；缺乏之處是同時處理的樣品數(shù)較少。加速溶劑萃取

加速溶劑萃取〔acceleratedsolventextraction,ASE〕是一種連續(xù)自動萃取技術(shù)。在較高溫度〔50200OC〕和較高壓力〔1020MPa〕下用溶劑萃取固體或半固體樣品；與索氏萃取、微波輔助萃取、超臨界流體萃取等固體樣品萃取技術(shù)相比，ASE使用的有機溶劑少，萃取10g樣品僅需15mL溶劑；萃取速度快，完成一個萃取操作全過程只需15分鐘?；w影響小，相同萃取條件可以用于不同基體的樣品；萃取效率高；萃取選擇性好；自動化程度高。加速溶劑萃取儀傳送裝置將萃取池送入加熱爐腔，泵將溶劑輸送到萃取池，萃取池在加熱爐中被加熱和加壓〔58分鐘〕，靜態(tài)萃取數(shù)分鐘，萃取液經(jīng)濾膜進入收集瓶。少量屢次向萃取池中參加清洗溶劑，然后用氮氣吹洗萃取池和管道。將樣品裝入萃取池，放到圓盤式傳送裝置上，以下操作將完全自動進行。5萃取別離法5.1溶劑萃取5.2膠團萃取5.3雙水相萃取5.4超臨界流體萃取5.5固相萃取5.6溶劑微膠囊萃取5.2膠團萃取1.根本概念膠團〔膠體〕萃取—被萃取物以膠體或膠團形式被萃取。膠體萃取也能用于無機物的別離，但應(yīng)用較少。如：氯仿〔或CCl4〕萃取膠體金；乙醚或氯仿萃取膠體銀或硫酸鋇。正向微膠團：在水溶液中參加外表活性劑到達一定濃度時，會形成外表活性劑聚集體〔膠團〕，在這種膠團中，外表活性劑的極性頭朝外〔向水〕，而非極性尾朝內(nèi)。反向微膠團：與正相微膠團相反，當(dāng)向非極性溶劑中加入外表活性劑到達一定濃度時，會形成憎水非極性尾朝外〔向溶劑〕，而極性頭〔親水基〕朝內(nèi)的膠團。膠團大小在毫微米級。正向微膠團反向微膠團生物物質(zhì)對別離體系的要求嚴格由于在別離過程中生物物質(zhì)容易被破壞，很多通常的別離方法〔如蒸餾〕難以采用。由于生物樣品一般粘度較大，過濾和超濾等也困難。由于生物物質(zhì)〔蛋白質(zhì)〕的親水憎油性，使其難溶于一般有機溶劑；不適合通常的水相/有機溶劑相體系。由于生物物質(zhì)直接與有機溶劑接觸會引起變性。應(yīng)盡可能防止直接接觸。對生物物質(zhì)萃取所用溶劑的要求能溶解蛋白質(zhì)并能與水分相，不破壞蛋白質(zhì)生物功能。反向微膠團對生物物質(zhì)的溶解反向微膠團中有一個極性核心，它包括了外表活性劑的極性頭組成的內(nèi)外表，平衡離子和水。此極性核心又稱“水池〔waterpool〕〞，水池可以溶解極性分子，于是，極性的生物分子就可以溶于有機溶劑而不直接接觸有機溶劑。2.蛋白質(zhì)的溶解模型水殼模型蛋白質(zhì)居于“水池〞中心，水殼層那么保護了蛋白質(zhì)，使其生物活性不會改變。陸九芳p125a蛋白質(zhì)親水基插入反向微膠團中僅蛋白質(zhì)的親水基插入膠團內(nèi)部的“水池〞中，而其親脂基團露在膠團外面，與外表活性劑的疏水劑或有機溶劑的碳氫局部接觸。陸九芳p125b吸附模型蛋白質(zhì)分子吸附在膠團內(nèi)部由外表活性劑親水頭組成的親水壁上。陸九芳p125c溶解模型蛋白質(zhì)被幾個膠團包圍而溶解于外表活性劑膠團，膠團的非極性尾與蛋白質(zhì)的親脂局部直接作用。陸九芳p125c水殼模型是比較公認的蛋白質(zhì)溶解機理膠團中水含量〔0〕“水池〞中的水與正常水有所不同，特別是當(dāng)0相當(dāng)?shù)汀踩?<10〕時，其冰點通常低于00C。蛋白質(zhì)外表的電荷與微膠團內(nèi)外表的電荷之間的靜電作用對蛋白質(zhì)的溶解起重要作用。3.影響膠團萃取的主要因素外表活性劑和溶劑種類對膠團萃取的影響外表活性劑多采用AOT〔琥珀酸二(2-乙基己基)酯磺酸鈉〕陰離子外表活性劑AOT作為反向微膠團的外表活性劑的優(yōu)點：所形成的膠團的含水率高〔0為50－60〕，比季銨鹽高一個數(shù)量級以上；AOT形成反向微膠團時，不需要助外表活性劑。有機溶劑通常采用異辛烷。外表活性劑AOT能迅速溶于有機溶劑，也能溶于水而形成液晶態(tài)〔非球狀〕膠團。水相pH值對膠團萃取的影響蛋白質(zhì)為兩性分子，各種蛋白質(zhì)有確定的等電點(pI)，當(dāng)pH<pI時，蛋白質(zhì)荷正電，AOT為陰離子外表活性劑，所形成的反向膠團內(nèi)外表荷負電，蛋白質(zhì)分子與膠團內(nèi)外表作用強，形成穩(wěn)定的含蛋白質(zhì)的微膠團。當(dāng)pH>pI時，蛋白質(zhì)分子和外表活性劑內(nèi)外表都荷負電，相互排斥，蛋白質(zhì)難溶于膠團中。pH過低時，蛋白質(zhì)會變質(zhì)，溶解度也降低。pH值對蛋白質(zhì)溶解度的影響離子強度增加，減小了蛋白質(zhì)的外表電荷與微膠團內(nèi)外表電荷的相互作用，從而降低蛋白質(zhì)在膠團中的溶解度。陸九芳p127－320離子強度對膠團萃取的影響4.膠團萃取別離過程制備含蛋白質(zhì)的反向微膠團的三種方法相轉(zhuǎn)移法：將含蛋白質(zhì)的水相和含外表活性劑的有機溶劑相接觸，在緩慢攪拌下，局部蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)入有機相。此過程較慢，最終得到的含蛋白質(zhì)有機相是穩(wěn)定的。注入法：向含外表活性劑的有機相中注入含蛋白質(zhì)的水溶液。此過程較快，操作也很簡單。溶解法：適用于水不溶蛋白質(zhì)。將含水的反向微膠團的有機溶液與蛋白質(zhì)固體粉末一起攪拌。制備含蛋白質(zhì)的反向微膠團的三種方法膠團萃取實例：膠團萃取別離3種蛋白質(zhì)〔核糖核酸酶、細胞色素C、溶菌酶〕外表活性劑：AOT；有機相：異辛烷利用離子強度和pH值調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)的溶解度差異。pH=9,[KCl]=0.1M時，核糖核酸酶不溶于膠團，留在水相。進入有機相膠團中的細胞色素C和溶菌酶用pH=9,[KCl]=0.5M的水溶液反萃取，只有細胞色素C進入水相。仍留在有機相中的溶菌酶再用pH=11.5,[KCl]=2.0M的水相反萃取。陸九芳p128－323核糖核酸酶不溶于膠團，留在水相。反萃取，只有細胞色素C進入水相。反萃取5.3雙水相萃取1896年Beijerinck發(fā)現(xiàn)：〔明膠＋瓊脂〕或〔明膠＋可溶性淀粉〕混濁不透明溶液兩個有界面的液相兩相的主成分都是水上相富含明膠下相富含瓊脂〔或淀粉〕葡聚糖-甲基纖維素雙水相體系等體積的2.2%葡聚糖與0.72%的甲基纖維素的水溶液形成的雙水相體系

上相：0.39%葡聚糖0.65%甲基纖維素98.96%水下相：1.58%葡聚糖0.15%甲基纖維素98.27%水幾類雙水相體系聚合物－聚合物－水：聚丙稀乙二醇－甲氧基聚乙二醇聚乙二醇－聚乙烯醇高分子電解質(zhì)－聚合物－水：硫酸葡聚糖鈉鹽－聚丙稀乙二醇羧甲基葡聚糖鈉鹽－甲基纖維素高分子電解質(zhì)－高分子電解質(zhì)－水：硫酸葡聚糖鈉鹽－羧甲基纖維素鈉鹽硫酸葡聚糖鈉鹽－羧甲基葡聚糖鈉鹽聚合物－低分子量組分－水：聚丙稀乙二醇－磷酸鉀甲氧基聚乙二醇－磷酸鉀聚丙稀乙二醇－葡萄糖外表活性劑－外表活性劑－水：生物物質(zhì)在雙水相體系中的分配生物樣品的復(fù)雜性分配機理的復(fù)雜性包括可溶物〔蛋白質(zhì)、核酸〕、懸浮顆?！布毎蚣毎鳌?；各種物質(zhì)的大小、形狀和性質(zhì)不同；存在形式不同〔離解狀態(tài)、聚集狀態(tài)〕分配機理的解釋界面張力作用電位差作用〔Donnan效應(yīng)〕界面張力作用微小粒子在液體中由于熱運動而隨機分布，界面張力的影響使它呈不均勻分布，并聚集在雙水相體系中具有較低能量的一相中。電位差作用帶電大分子〔粒子〕在兩相中分配時，會在兩相產(chǎn)生電位—Donnan效應(yīng)。Donnan效應(yīng)使得某些物質(zhì)選擇性地通過Donnan膜，即某種〔類〕物質(zhì)在某相富集。影響分配的因素聚合物的組成和濃度pH值：影響兩相的電位差。鹽的種類和濃度陸九芳p137－330雙水相萃取體系的應(yīng)用酶、核酸、生長激素、病毒等生物物質(zhì)的別離純化萃取流程〔右圖〕聚乙二醇〔PEG〕-磷酸鹽體系萃取酶1.目標(biāo)酶進入富PEG上相;2.富PEG上相中加鹽后形成新雙水相，目標(biāo)酶進入上相。3.富PEG上相中加鹽后形成新雙水相，目標(biāo)酶進入下相。破碎的細胞PEG/磷酸鹽下相：上相產(chǎn)物：目標(biāo)蛋白質(zhì)細胞碎片、雜蛋＋鹽白、核酸、多糖形成PEG/磷酸鹽體系

下相：核酸、上相產(chǎn)物：目標(biāo)酶雜蛋白、多糖＋鹽形成PEG/磷酸鹽體系下相：目標(biāo)酶上相：PEG，蛋白質(zhì)雙水相體系的特點：體系中水含量達70－90％，組成雙水相的高聚物及某些無機鹽不會導(dǎo)致生物物質(zhì)失活，有時還有保護作用?？芍苯訌暮芯w的發(fā)酵液和培養(yǎng)液中提取所需蛋白質(zhì)，還能不經(jīng)破碎直接提取細胞內(nèi)酶。易于進行工業(yè)放大，處理量可以較大。萃取后，含有聚合物的目標(biāo)產(chǎn)物可以采用常用的別離手段〔超濾、電泳、色層別離等〕將聚合物除掉。5.4超臨界流體萃取

(SupercrticalFluidExtraction,SFE)以超臨界流體作流動相，直接從固體〔粉末〕或液體樣品中萃取目標(biāo)物質(zhì)〔有機物〕。100年前人們就知道超臨界流體可以溶解很多物質(zhì)。20世紀50年代，美國將SFE用于工業(yè)別離。1963年，德國首次申請SFE別離技術(shù)的專利。20世紀80－90年代成為熱門學(xué)科。超臨界流體與氣體、液體傳遞性能的比較

氣體超臨界流體液體(常溫常壓)〔Tc，Pc〕(常溫常壓)密度g/cm30.006－0.0020.2-0.50.6-1.6粘度10-5kg/(m.s)1-31-320-300自擴散系數(shù)10-4m2/s0.1-0.40.710-3(0.2-2)10-5SFE的優(yōu)點：萃取劑在常溫常壓下為氣體，萃取后可以方便地與萃取組分別離。在較低的溫度和不太高的壓力下操作，特別適合天然產(chǎn)物的別離。超臨界流體的溶解能力可以通過調(diào)節(jié)溫度、壓力、夾帶劑〔如：醇類〕在很大范圍內(nèi)變化；而且還可以采用壓力梯度和溫度梯度。SFE的缺點：萃取率較低，選擇性不夠高。超臨界流體的選擇原那么：化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，對設(shè)備無腐蝕。臨界溫度應(yīng)接近室溫或操作溫度，不能太高，也不能太低。操作溫度應(yīng)低于被萃取組分的分解、變質(zhì)溫度。臨界壓力應(yīng)較低〔降低壓縮動力〕。對被萃取組分的溶解能力高，以降低萃取劑的消耗。選擇性較好，易于得到純品。原料目標(biāo)產(chǎn)物超臨界流體萃取容器收集別離發(fā)生裝置裝置SFE的根本過程：超臨界流體萃取典型流程實例1：從咖啡豆中除去咖啡因大量飲食咖啡因?qū)θ梭w有害。以往工業(yè)上除咖啡豆中咖啡因采用二氯乙烷萃取。缺點是殘留二氯乙烷影響咖啡品質(zhì)；而且二氯乙烷同時將局部有用香味物質(zhì)〔芳香化合物〕帶走。SFE除咖啡因：浸泡過的咖啡豆直接置于萃取容器中，連續(xù)〔循環(huán)〕用超臨界CO2萃取〔T＝70－900C；p＝16－20MPa〕10h，咖啡因用水吸收，蒸餾可回收咖啡因。經(jīng)SFE處理后的咖啡豆中咖啡因含量從0.7-3%降到0.02%。實例2：從生物體中提取有機錫有機錫的用途：船體涂料、漁網(wǎng)防污劑、殺蟲劑、塑料添加劑、殺菌劑。有機錫的污染：海洋生物〔魚〕、環(huán)境等。溶劑萃取的問題：繁瑣費時。SFE法：從大量脂肪基體中別離出有機錫用于分析。CO2，500C，100kg/cm2，萃取30min，萃取率94％。5.5固相萃取固相萃?。阂怨腆w吸附劑作固定相，被測物或干擾物吸附到固定相中，使被測物與樣品基體或干擾組分得以別離。主要用于樣品前處理。操作與柱層析〔色譜〕類似。往往同時使被測物得到富集。固相萃取的特點〔與溶劑萃取比〕是目前生物、醫(yī)藥、環(huán)境、食品等領(lǐng)域備受歡送的樣品前處理〔別離和富集〕技術(shù)。操作簡單、快速；減少乳化現(xiàn)象；可處理大量樣品；不需要使用大量有機溶劑；應(yīng)用樣品對象十分廣泛。固相萃取原理

是發(fā)生在固定相和流動相之間的物理過程，其實質(zhì)就是液相色譜色譜別離過程，只不過用于樣品前處理的別離要求不是很高，只需將大量基體物質(zhì)或其他干擾組分與被測物別離，即對柱效的要求不高。同液相色譜中別離柱的原理一樣，固相萃取也是基于待測組分與樣品基體在固定相上吸附和分配性質(zhì)的不同來進行別離的。固相萃取的目的與要求待測組分在固定相上沒有保存—從樣品中除去大量基體；待測組分牢固地吸附在固定相上—從復(fù)雜基體中將待測組分別離富集出來；與液相色譜不同的是，固相萃取并不需要特別好的峰形和相當(dāng)短的分析時間。固相萃取的主要萃取模式與LC別離模式相同，有正相固相萃取、反相固相萃取、吸附固相萃取和離子交換固相萃取;不同的萃取模式所使用的固定相不同;固定相選擇原那么也與LC相同，主要依據(jù)被測物和基體物質(zhì)的性質(zhì)，被測物極性與固定相極性越相似，那么被測物在固定相中的保存就越強;固相萃取所用的固定相也與LC常用的固定相相同，只是粒度稍大一些〔約30-50m〕。正相固相萃取采用極性固定相，可從非極性溶劑樣品中萃取有機酸、碳水化合物和弱陰離子等極性物質(zhì)。被萃取的極性化合物在固定相上保存的強弱取決于其極性基團與固定相外表極性基團之間的相互作用〔氫鍵、-鍵、偶極間相互作用等〕。固定相主要是以硅膠為載體的二醇基、丙氨基小柱。反相固相萃取采用非極性或弱極性固定相，適用于萃取從非極性至中等極性的化合物；應(yīng)用對象最廣泛，是樣品前處理中使用最多的一種固相萃取模式；被萃取物與固定相間主要是基于范德華力和色散力的疏水相互作用；使用的固定相主要是在硅膠載體外表鍵合了疏水性烷烴，如18烷、辛烷、二甲基丁烷。離子交換固相萃取采用離子交換劑固定相，用來萃取有機和無機離子性化合物，如有機堿、氨基酸、核酸堿、離子性外表活性劑等。被萃取離子因與固定相外表的離子交換基團之間的靜電相互作用而保存，所用離子交換劑通常是在硅膠載體外表接上季銨基、磺酸基、碳酸基等。吸附固相萃取以吸附劑〔氧化鋁、硅膠、石墨碳材料、大孔吸附樹脂等〕作固定相；除石墨碳材料和大孔吸附樹脂也可以萃取非極性物質(zhì)外，吸附固相萃取主要用于極性化合物的萃取。吸附固相萃取在樣品前處理中的應(yīng)用也相當(dāng)廣泛。固相萃取裝置簡易固相萃取儀：

萃取小柱真空萃取箱蠕動泵SPE真空裝置

能同時處理多個樣品,利用其獨特的轉(zhuǎn)動上蓋,可方便地在SPE各步驟間任意切換,以收取所需要的組分。自動固相萃取系統(tǒng)儀器操作原理在進行柱預(yù)處理、樣品添加、柱的洗滌、枯燥時,ＳＰＥ支架如下圖位于托盤的前方位置。接著,安裝在機械臂上的移液針將ＳＰＥ支架移動到托盤后面的位置,使ＳＰＥ柱位于相應(yīng)的洗脫液收集管上方并將洗脫下來的化合物收集在收集管中.固相萃取與色層別離、萃取色層的區(qū)別固相萃取色層別離萃取色層兩相固/液固/液液/液(水)固定相制備鍵合、化學(xué)修飾鍵合、化學(xué)修飾液體附于固體載體固定相種類較多很多較少別離機理吸附、分配、交換等吸附、分配、交換等分配柱尺寸小，(3－5)cmX1cm大，(20－100)cmX5cm中等主要用途樣品前處理別離、純化、工業(yè)制備無機別離剩余硅醇基非極性固定相通常采用封尾技術(shù)將硅膠外表的剩余硅醇基屏閉，但極性或離子交換固定相通常不封尾。封尾程度非常重要，因為殘留硅醇基對化合物的保存和洗脫起著不可無視的作用。即使采用最嚴格的封尾方法，也只能將鍵合相形成后剩余的70%的硅醇基團封住。因此，那些殘留硅醇基還會在待測組分的別離中發(fā)揮作用。剩余硅醇基的作用在pH小于2時，硅醇基不帶電荷；pH大于2時，硅醇基逐漸離解而帶負電荷，從而影響萃取。靜電相互作用比疏水相互作用更強，因此，如果存在混合保存機理，必須采取措施減小或擴大殘留硅醇基的影響。例如，固相萃取法萃取胺時，帶正電荷的胺與帶負電荷的硅醇基形成非共價鍵，很難離解。為了降低硅醇基的影響，最好選擇封尾的固定相。殘留硅醇基可用三乙胺或醋酸銨等競爭堿來屏蔽。剩余硅醇基的利用使用沒有封尾的固定相和pH≥4的緩沖溶液以保證剩余硅醇基離子化。推薦采用緩沖溶液作為二級調(diào)節(jié)溶劑是因為水的pH值是波動的，而且沒有緩沖能力。實例〔血漿中舒喘寧的測定〕：未封尾的硅膠萃取小柱先用甲醇和水活化，血漿流經(jīng)萃取柱，帶正電荷的舒喘寧通過與硅醇基的相互作用被萃取在柱上。先用水然后用乙腈沖洗固定相以消除有可能產(chǎn)生干擾的成分。最后用含有0.5%醋酸銨的甲醇溶液將舒喘寧從萃取柱上洗脫下來，作為后續(xù)分析的樣品。相互作用能待測組分可以通過氫鍵、偶極-偶極相互作用、疏水作用力、靜電相互作用等機理保存到固定相上。在萃取中，這些作用機理可能單獨存在，也可能多種別離機理同時存在。了解是哪些力在起作用，有利于制訂特效的別離方法。各種鍵合力的能量相差較大。疏水鍵合能〔偶極-偶極，偶極-誘導(dǎo)偶極，色散相互作用〕：1～10kcal/mol；極性基團間的氫鍵：5～10kcal/mol，這種類型的相互作用在硅膠外表發(fā)生的時機較多。相反電荷間的離子或靜電相互作用：50～200kcal/mol。有機高分子聚合物固定相也是利用范德華力、氫鍵、離子相互作用、偶極-偶極相互吸引等機理進行別離。與硅膠載體的固定相相反，有機聚合物固定相沒有由硅烷醇或痕量金屬引起的附加效應(yīng)干擾待測組分在固定相外表的吸附。非極性物質(zhì)，如脂肪、蠟、碳氫化合物、類脂類和芳香類化合物，可以強烈地吸附在這類固定相上，如果采用溫和的洗脫條件，上述非極性物質(zhì)可以與極性或離子性污染物別離。如果抑制離子型化合物的離解，使它們成為“電中性〞的，它們也能在有機聚合物固定相柱上保存，然后通過改變淋洗液的pH將它們從柱上洗脫下來。固相萃取操作根本步驟：用甲醇等溶劑活化固定相；用水或緩沖溶液〔有時也用不含被測物質(zhì)的空白溶液〕平衡萃取柱；將樣品負載在萃取柱上；用水或緩沖溶液沖洗萃取柱，以消除樣品基體；用流動相或溶劑將待測組分從萃取柱上洗脫下來；最后將流出液直接或經(jīng)蒸發(fā)濃縮后進行后續(xù)分析。用有機溶劑〔如甲醇〕潤濕柱子的目的消除萃取柱中可能會干擾待測組分的有機雜質(zhì)；翻開碳鏈，增加萃取柱與待測組分相互作用的外表積，也就是通常所說的活化。如果不進行這一步，就會減少待測組分的保存，影響回收率，而且有可能出現(xiàn)干擾峰。用純水或適宜的緩沖溶液沖洗吸附床將消除過量的甲醇，調(diào)節(jié)柱子的外表，為樣品的負載作準備。實例1.HPLC測定人血清中膽汁酸的樣品前處理。實驗過程:SPE柱〔ODS柱〕先后用5ml甲醇和5ml水預(yù)處理；100μL血清樣品中參加4ml0.4mol/LNaHCO3上樣；樣品通過柱子后,用20mL水沖洗；再用2mL甲醇將膽汁酸洗脫；在45℃下用N2將洗脫液吹干,以丙酮定容至1mL,衍生化；取20μL樣品做HPLC分析〔ODS柱〕。右圖為經(jīng)SPE處理并衍生后膽汁酸的HPLC譜圖。SPE預(yù)處理已根本去除了人血清中其它物質(zhì)對膽汁酸的干擾。實例2.固相萃取別離提純紫杉醇紫杉醇是一種具有獨特抗癌機理的天然抗癌藥物,它對乳腺癌和卵巢癌等有特殊的療效。簡化紫杉醇的提純工藝,降低本錢,是紫杉醇走入市場的一個技術(shù)關(guān)鍵。固相萃取方法(使用Sep-PakC18硅膠載體柱)①活化:往柱中依次參加10ｍｌ乙酸乙酯、甲醇和0.01mol/LpH5.0的乙酸銨水溶液并抽干。②樣品上柱:將100mg紅豆杉浸膏溶解于40%～60%的甲醇/乙酸銨水溶液后加到柱中,抽干。③雜質(zhì)淋洗:先用10ml的含20%甲醇的乙酸銨緩沖液淋洗并