第七營養(yǎng)代謝病檢測(cè)技術(shù)演示文稿

第七營養(yǎng)代謝病檢測(cè)技術(shù)演示文稿本文檔共65頁；當(dāng)前第1頁；編輯于星期六\9點(diǎn)33分優(yōu)選第七營養(yǎng)代謝病檢測(cè)技術(shù)本文檔共65頁；當(dāng)前第2頁；編輯于星期六\9點(diǎn)33分第一節(jié)蛋白質(zhì)檢測(cè)第二節(jié)血糖檢測(cè)第三節(jié)脂肪代謝的檢測(cè)第四節(jié)微量元素檢測(cè)第五節(jié)維生素營養(yǎng)的檢測(cè)主要內(nèi)容本文檔共65頁；當(dāng)前第3頁；編輯于星期六\9點(diǎn)33分一、血清總蛋白測(cè)定二、血清白蛋白測(cè)定三、血清蛋白電泳四、血紅蛋白測(cè)定五、肌紅蛋白測(cè)定第一節(jié)蛋白質(zhì)檢測(cè)（Ketosisindairycows）本文檔共65頁；當(dāng)前第4頁；編輯于星期六\9點(diǎn)33分一、血清總蛋白測(cè)定原理：堿性溶液中蛋白質(zhì)分子的肽鍵與銅離子作用，形成紫紅色的復(fù)合物。這與兩個(gè)尿素分子縮合生成縮二脲，在堿性條件下與銅離子作用形成紫紅色反應(yīng)相似，故稱為雙縮脲反應(yīng)。本文檔共65頁；當(dāng)前第5頁；編輯于星期六\9點(diǎn)33分一、血清總蛋白測(cè)定試劑：6mol/L氫氧化鈉溶液：溶解120g氫氧化鈉于去離子水中，稀釋至500ml，置聚乙烯瓶內(nèi)蓋緊保存。雙縮脲試劑：稱3gCuSO4?5H2O和9g酒石酸鉀鈉（KNaC4H4O4?4H2O），先分別溶于蒸餾水，加入碘化鉀5g，待完全溶解后混合，加入6mol/L氫氧化鈉100ml，最后以蒸餾水加至1L置聚乙烯瓶內(nèi)蓋緊貯存。蛋白標(biāo)準(zhǔn)液：收集混合血清，用凱氏定氮法測(cè)定蛋白質(zhì)含量，亦可用定值參考血清或標(biāo)準(zhǔn)蛋白作標(biāo)準(zhǔn)。本文檔共65頁；當(dāng)前第6頁；編輯于星期六\9點(diǎn)33分一、血清總蛋白測(cè)定操作：取三支試管按下表加入式樣，混勻37攝氏度水浴放置十分鐘，以空白管調(diào)零，540nm波長測(cè)定吸光度。

項(xiàng)目測(cè)定管標(biāo)準(zhǔn)管空白管血清/ml1.00－－蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液/ml－1.00－理生鹽水/ml－－1.00雙縮脲試劑/ml5.005.005.00本文檔共65頁；當(dāng)前第7頁；編輯于星期六\9點(diǎn)33分二、血清白蛋白測(cè)定原理：在pH=4.2環(huán)境中，帶正電荷的白蛋白（pI=4.9）可以與陰離子染料溴甲酚綠（BCG）結(jié)合，溶液由黃變藍(lán)，在波長630nm具有最大光吸收，并與白蛋白濃度成正比，與同樣處理的白蛋白標(biāo)準(zhǔn)比較，可求得血清中白蛋白含量。本文檔共65頁；當(dāng)前第8頁；編輯于星期六\9點(diǎn)33分二、血清白蛋白測(cè)定試劑：溴甲酚綠（BCG）試劑：于1L容量瓶中盛蒸鎦水約400ml，加琥珀酸緩沖貯存液100ml，用吸管準(zhǔn)確吸取BCG貯存液8ml加入，并將內(nèi)壁沾的染料沖洗入液體中，加疊氮鈉存液2.5ml，聚氧化乙烯月桂醚貯存液2.5ml，最后用蒸餾水稀釋至刻度，配好的BCG試劑pH應(yīng)為4.15±0.05。白蛋白標(biāo)準(zhǔn)液：40g/L，也可用定值參考血清。均需置冰箱保存。本文檔共65頁；當(dāng)前第9頁；編輯于星期六\9點(diǎn)33分二、血清白蛋白測(cè)定操作：

測(cè)定管（U）標(biāo)準(zhǔn)管（S）空白管（B）待檢血清0.02--白蛋白標(biāo)準(zhǔn)液-0.02-蒸餾水--0.02BCG試劑4.04.04.0

混勻，立即以波長630nm空白管調(diào)零，讀取各管吸光度。血清白蛋白（g/L）=(Odu/Ods)×標(biāo)準(zhǔn)白蛋白濃度（g/L）同時(shí)測(cè)定血清總蛋白濃度，減去血清白蛋白濃度，可得血清球蛋白濃度，并可計(jì)算血清白蛋白/球蛋白比值。本文檔共65頁；當(dāng)前第10頁；編輯于星期六\9點(diǎn)33分三、血清蛋白電泳

電泳：帶電的膠粒或大分子在外加電場(chǎng)中，向帶相反電荷的電極作定向移動(dòng)的現(xiàn)象稱為電泳。

應(yīng)用

1.分離各種有機(jī)物：如蛋白質(zhì)、酶、核酸等

2.分析某種物質(zhì)的純度及分子量本文檔共65頁；當(dāng)前第11頁；編輯于星期六\9點(diǎn)33分電泳的基本原理

電場(chǎng)中推動(dòng)帶電質(zhì)點(diǎn)運(yùn)動(dòng)的力（F）等于質(zhì)點(diǎn)所帶凈電荷量（Q）與電場(chǎng)強(qiáng)度（E）的乘積。F＝QE

質(zhì)點(diǎn)前移受阻力（F）影響，球形質(zhì)點(diǎn)服從Stoke定律，即：F′＝6πrην（r半徑，η介質(zhì)粘度，ν質(zhì)點(diǎn)移速）質(zhì)點(diǎn)在電場(chǎng)中穩(wěn)定運(yùn)動(dòng)時(shí)：F＝F′即：QE＝6πrην

同電泳條件下不同物質(zhì)因其分子大?。╮）和帶電量（Q）差異而有不同泳動(dòng)速度，因此，一定時(shí)間可分離。按其泳動(dòng)速度從正極端起〔即速度最快）依次為白蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白和γ-球蛋白等條帶，有的動(dòng)物α-球蛋白和β-球蛋白可分為兩個(gè)條帶。

本文檔共65頁；當(dāng)前第12頁；編輯于星期六\9點(diǎn)33分+白蛋白(A)α1α2βγ血清蛋白的pI大多在7.5以下，在pH8.6的巴比妥緩沖液中以負(fù)離子形式存在，并且蛋白質(zhì)的分子量、立體構(gòu)象、等電點(diǎn)以及形狀也有差異，在電場(chǎng)中遷移速度不同，可以在醋酸纖維薄膜上分離成A、α1、α2、β和γ五條區(qū)帶。蛋白名稱等電點(diǎn)分子量白蛋白4.8869000α5.06α1：20000α2：30000β5.1290000-150000γ6.85-7.50156000-300000本文檔共65頁；當(dāng)前第13頁；編輯于星期六\9點(diǎn)33分醋酸纖維素（二乙酸纖維素）薄膜具有勻一的泡沫狀結(jié)構(gòu)，滲透性強(qiáng)，對(duì)分子移動(dòng)無阻力，用它作區(qū)帶電泳的支持物，具有用樣量少，分離清晰，無吸附作用。目前可用于血清蛋白、脂蛋白、糖蛋白、酶的分離和免疫電泳等方面。醋酸纖維素薄膜經(jīng)1,4－二氧六環(huán)、透明液或液體石蠟處理即透明，因而可得背景為無色的電泳圖譜。醋酸纖維素薄膜的特性本文檔共65頁；當(dāng)前第14頁；編輯于星期六\9點(diǎn)33分實(shí)驗(yàn)操作及注意事項(xiàng)膜的預(yù)處理：將薄膜切成2.5×8cm，無光澤面向下，漂浮于巴比妥緩沖液面上，膜條自然浸濕下沉。取充分浸透的膜條，濾紙吸取多余的緩沖液，不要弄太干。加樣：光面用鉛筆標(biāo)注，無光澤面距一端1.5cm處用點(diǎn)樣器蘸取新鮮血清點(diǎn)樣（不能看見有液滴形成），待血清進(jìn)入膜內(nèi)，移開點(diǎn)樣器。電泳：放置于電泳槽架時(shí)，無光澤面向下，點(diǎn)樣端置于負(fù)極，膜與電極緊密接觸，不能留有氣泡，平衡5分鐘，通電1h。本文檔共65頁；當(dāng)前第15頁；編輯于星期六\9點(diǎn)33分染色：通電完畢，鑷子取出，浸于氨基黑的染色液中5分鐘，立即放入盛有漂洗液的培養(yǎng)皿中，反復(fù)漂洗數(shù)次，直至背景漂凈，濾紙吸干，不要太干。定量：取6支試管，編號(hào)，分別用吸管吸取0.4NNaOH4ml；剪下膜上各蛋白質(zhì)帶及另一空白部位剪一平均大小的薄膜條（空白帶的寬度以最窄的條帶為準(zhǔn)）。將各條分別浸于上述試管內(nèi)（注意管與蛋白帶的順序），用力搖動(dòng)，使藍(lán)色洗出，約半小時(shí)；用分光光度計(jì)進(jìn)行比色，波長650nm，以空白薄膜條洗出液為空白對(duì)照，讀取A、α1、α2、β、γ球蛋白各管的光密度。本文檔共65頁；當(dāng)前第16頁；編輯于星期六\9點(diǎn)33分結(jié)果計(jì)算：光密度總和T＝A+α1+α2+β+γ

白蛋白％＝A/T×100%α1球蛋白％＝α1/T×100%α2球蛋白％＝α2/T×100%β球蛋白％＝β/T×100%γ球蛋白％＝γ/T×100%本文檔共65頁；當(dāng)前第17頁；編輯于星期六\9點(diǎn)33分【附注】電泳緩沖液要使兩側(cè)槽的液面保持水平，以免虹吸現(xiàn)象影響泳動(dòng)速度。每次電泳時(shí)應(yīng)更換電泳槽的正負(fù)極，以保持兩側(cè)緩沖液離子、pH一致。使用一段時(shí)間后電泳緩沖液應(yīng)廢棄換新。關(guān)閉電泳儀電源后才能從電泳槽上取醋纖膜，以免電擊。本文檔共65頁；當(dāng)前第18頁；編輯于星期六\9點(diǎn)33分

表動(dòng)物血清蛋白質(zhì)參考值（g/L）動(dòng)物總蛋白白蛋白球蛋白白蛋白/球蛋白牛67?7525?3530?350.8?0.9馬50?7925?3526?400.6?1.5豬79?8918?3353?640.4?0.5綿羊60?7924?3335?570.4?0.8山羊64?7027?3927?410.6?1.3犬53?7823?4327?440.6?1.1貓58?7819?3826?510.5?1.2本文檔共65頁；當(dāng)前第19頁；編輯于星期六\9點(diǎn)33分血清蛋白濃度增髙（髙蛋白血癥）TP增加：脫水引起，非絕對(duì)量升髙。紅細(xì)胞壓積容量（PCV)增髙，白蛋白蛋白比值（A/G）正常。白蛋白增髙：單純白蛋白升髙很少。球蛋白增加：α-球蛋白（肝球蛋白、α2-巨球蛋白、α1-抗胰蛋白酶等）：組織損傷或炎癥。β-球蛋白（轉(zhuǎn)鐵蛋白、β-脂蛋白、補(bǔ)體-3及免疫球蛋白）：活動(dòng)性肝臟疾病及圓線蟲病。γ-球蛋白：慢性炎性、免疫性疾病，淋巴瘤、骨髓瘤、多克隆和肝硬化等，免疫接種。本文檔共65頁；當(dāng)前第20頁；編輯于星期六\9點(diǎn)33分血清蛋白濃度降低（低蛋白血癥）血漿水份增加，如靜注過多低滲溶液。白蛋白降低：白蛋白/蛋白比值變小。營養(yǎng)不良和消耗增加，飼料蛋白質(zhì)長期不足或慢性腸道疾病所引起吸收不良，或因長期患消耗性疾病。合成障礙：慢性肝臟疾病、肝臟功能嚴(yán)重?fù)p害。蛋白質(zhì)丟失：大出血，燒傷，腎病綜合征。妊娠期對(duì)蛋白質(zhì)需要增加。球蛋白降低：喂初乳不足或未喂初乳；腎上腺皮質(zhì)激素和其他免疫抑制劑；免疫缺陷性疾病。本文檔共65頁；當(dāng)前第21頁；編輯于星期六\9點(diǎn)33分四、血紅蛋白測(cè)定（沙利氏比色法）原理表面活性劑紅細(xì)胞膜血紅蛋白溶解高鐵血紅蛋白高鐵氰化鉀氧化氰離子棕紅色氰化高鐵血紅蛋白540nm比色血紅蛋白濃度本文檔共65頁；當(dāng)前第22頁；編輯于星期六\9點(diǎn)33分四、血紅蛋白測(cè)定（沙利氏比色法）試劑轉(zhuǎn)化液：氰化鉀50mg，高鐵氰化鉀200mg，無水磷酸二氫鈉114mg，TritonX-1001.0ml，蒸鎦水1000ml。溶解混勾后用濾紙過濾，置棕色瓶中，保存于冷暗處，但勿使結(jié)冰，可保存數(shù)月。該液應(yīng)透明、淡黃色，pH7.0?7.4，以蒸餾水作空白，在540nm處比色，吸光度應(yīng)小于0.001。若渾濁、變綠則應(yīng)廢棄。本文檔共65頁；當(dāng)前第23頁；編輯于星期六\9點(diǎn)33分四、血紅蛋白測(cè)定（沙利氏比色法）操作取血20μl加5ml血紅蛋白轉(zhuǎn)化液，充分混勻，靜置5min。用波長540nm，光徑1cm，轉(zhuǎn)化液或水作空白，測(cè)吸光度計(jì)算血紅蛋白（g/L)=測(cè)定管吸光度×(64458÷44000)×251式中：64458血紅蛋白平均分子量，44000血紅蛋白摩爾吸光度，251為稀釋倍數(shù)。因品種、年齢和環(huán)境血紅蛋白有差異，參考值90~120g/L本文檔共65頁；當(dāng)前第24頁；編輯于星期六\9點(diǎn)33分四、血紅蛋白測(cè)定（沙利氏比色法）附注血液用EDTA二鈉抗凝，不可用肝素鈉抗凝。氰化鉀為劇毒化學(xué)品，在配置和保存過程中應(yīng)注意安全。測(cè)定廢液應(yīng)加次氯酸鈉〔35ml/L)混勻敞開過夜，使氰離子氧化成CO2和N2揮發(fā)后，再排入下水道中。本文檔共65頁；當(dāng)前第25頁；編輯于星期六\9點(diǎn)33分四、血紅蛋白測(cè)定（沙利氏比色法）臨床意義血紅蛋白占紅細(xì)胞32%~36%，或干重96%。在某些類型貧血時(shí)（如低色素貧血）紅細(xì)胞與血紅蛋白降低程度不一致，血紅蛋白降低比紅細(xì)胞明顯。同時(shí)測(cè)定紅細(xì)胞數(shù)與血紅蛋白，對(duì)診斷有實(shí)際意義。血紅蛋白增多：如血漿中水分丟失；紅細(xì)胞增生活躍。血紅蛋白減少：貧血性疾??；其中營養(yǎng)性貧血見于蛋白質(zhì)缺乏，銅、鐵、鈷等微量元素缺乏，維生素B1、維生素B2、維生素B6、維生素B12、葉酸、煙酸缺乏等。本文檔共65頁；當(dāng)前第26頁；編輯于星期六\9點(diǎn)33分五、肌紅蛋白測(cè)定

肌紅蛋白（Mb）：橫紋肌色素成分，分子量170kD。肌細(xì)胞內(nèi)貯存和運(yùn)輸氧。肌肉組織損傷時(shí)Mb從肌細(xì)胞中釋放入血，血清Mb升高，大部分以游離狀態(tài)存在，小部分與血清蛋白結(jié)合；肌紅蛋白血癥和肌紅蛋白尿。測(cè)定方法：溶解度試驗(yàn)、比色法、放射免疫法、酶聯(lián)免疫法、膠乳凝集試驗(yàn)、熒光免疫法、滴金免疫法等。本文檔共65頁；當(dāng)前第27頁；編輯于星期六\9點(diǎn)33分五、肌紅蛋白測(cè)定1、Mb溶解度試驗(yàn)原理Mb分子含血紅素基團(tuán)，有氧化酶活性，用聯(lián)苯胺或鄰甲苯胺同過氧化氫反應(yīng)呈色鑒定，Mb可溶解于80%飽和度的硫酸胺溶液，而Hb則不能。試劑1%鄰甲苯胺甲醇溶液：難溶解但較穩(wěn)定。過氧化氫醋酸溶液：冰醋酸1+3%過氧化氫2。硫酸胺（化學(xué)純）本文檔共65頁；當(dāng)前第28頁；編輯于星期六\9點(diǎn)33分五、肌紅蛋白測(cè)定

操作先檢尿液有無血紅素存在，新鮮尿液4滴+

鄰甲苯胺液2滴，混合，+過氧化氫醋酸溶液3滴，有藍(lán)色或藍(lán)綠色。取過濾后透明尿液5ml+

硫酸胺2.8g，溶解混勾，靜置5min，濾紙過濾。取濾液重復(fù)測(cè)試有無血紅素色素存在，陽性表示含Mb。陰性表示色素是Hb。本文檔共65頁；當(dāng)前第29頁；編輯于星期六\9點(diǎn)33分五、肌紅蛋白測(cè)定2、反向膠乳凝集法原理Mb與用Mb單克隆抗體致敏的羧化聚苯乙烯膠乳作用出現(xiàn)凝集者為陽性。試劑羧化聚苯乙烯粒子；pH8.4，0.1mol/L硼酸-甘氨酸緩沖液；Mb單克隆抗體；牛血清白蛋白。本文檔共65頁；當(dāng)前第30頁；編輯于星期六\9點(diǎn)33分五、肌紅蛋白測(cè)定

操作用Mb單克隆抗體致敏羧化聚苯乙烯膠乳。取250μl硼酸-甘氨酸緩沖液混合，逐滴加1%羧化聚苯乙烯粒子500μl，邊加邊搖動(dòng)試管混勻，加入1mg牛血清白蛋白置37℃水洗30min，用硼酸-甘氨酸緩沖液洗兩次后，放4℃冰箱保存。取待檢血清10μl，用pH8.4硼酸-甘氨酸緩沖液做1：20倍稀釋，取25μl與等量致敏膠乳在玻片上混合搖動(dòng)，觀察3min，同時(shí)做陽性和陰性對(duì)照。本文檔共65頁；當(dāng)前第31頁；編輯于星期六\9點(diǎn)33分五、肌紅蛋白測(cè)定

結(jié)果判斷4+：全部呈粗粒狀凝集，邊緣有厚凝集圈，中間液體清亮3+：大部凝集，周圍有凝集，中間液體微渾濁。2+：中度凝集，顆粒較細(xì)，凝集圈不顯，液體渾濁。

+：少量凝集，液體明顯渾濁。

-：保持均勻的乳狀，與陰性對(duì)照相同。本文檔共65頁；當(dāng)前第32頁；編輯于星期六\9點(diǎn)33分五、肌紅蛋白測(cè)定

附注理想的膠乳顆粒直徑0.81μm，<0.59μm時(shí)可延緩凝集反應(yīng)速度，膠乳最適濃度1%。緩沖液pH<8.0時(shí)易發(fā)生自凝，pH>10.0使反應(yīng)完全抑制。加牛血清白蛋白可使膠乳表面的結(jié)合部位充分飽和，減少非特異性凝集。

臨床意義主要見于肌肉損傷性疾病，如馬麻痹性肌紅蛋白尿癥、應(yīng)激綜合征、馬地方性肌紅蛋白尿癥等。本文檔共65頁；當(dāng)前第33頁；編輯于星期六\9點(diǎn)33分第二節(jié)血糖檢測(cè)（鄰甲苯胺法）

原理葡萄糖與鄰甲苯胺在強(qiáng)酸溶液中加熱，葡萄糖的醛基與鄰甲苯胺縮合生成葡萄糖基胺，其脫水生成藍(lán)色的席夫氏（Schiff）堿，生成的藍(lán)色化合物在630nm有吸收峰，用比色法可測(cè)定得葡萄糖含量。本文檔共65頁；當(dāng)前第34頁；編輯于星期六\9點(diǎn)33分第二節(jié)血糖檢測(cè)

試劑鄰甲苯胺：取940ml冰醋酸，加1.5g硫脲和60ml鄰甲苯胺混合，硫脲完全溶解后置棕色瓶內(nèi)室溫保存，24h后可用。該試劑腐蝕性強(qiáng)，避免接觸皮膚。12mmol/L苯甲酸：將1.46g苯甲酸加入900ml蒸餾水，加熱助溶。冷卻后置于1L容量瓶中，以蒸餾水定容至刻度。葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)貯存液（100mmol/L）：取無水葡萄糖（預(yù)先置80℃干燥至恒重干燥器保存）1.802g溶于80ml上述苯甲酸溶液中，移置100ml容量瓶中，以苯甲酸溶液定容至刻度。本文檔共65頁；當(dāng)前第35頁；編輯于星期六\9點(diǎn)33分第二節(jié)血糖檢測(cè)

試劑葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液（5mmol/L）：取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)貯存液5.0ml，置于100ml容量瓶中，用苯甲酸溶液定容至刻度。本文檔共65頁；當(dāng)前第36頁；編輯于星期六\9點(diǎn)33分第二節(jié)血糖檢測(cè)

操作。單位：ml

測(cè)定管（U）標(biāo)準(zhǔn)管（S）空白管（B）血清0.1--葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液-0.1-蒸餾水--0.1鄰甲苯胺試劑3.03.03.0混勻后，沸水浴12min，取出置冷水中冷卻5min，空白管調(diào)零，630nm比色，讀取標(biāo)準(zhǔn)管與測(cè)定管的光密度。本文檔共65頁；當(dāng)前第37頁；編輯于星期六\9點(diǎn)33分第二節(jié)血糖檢測(cè)

計(jì)算血清葡萄糖（mmol/L）=（ODu/ODs）×5

參考值表11-5動(dòng)物血糖參考值動(dòng)物mmol/L動(dòng)物mmol/L牛2.22?4.44馬3.33?5.56豬4.72?8.33綿羊2.77?4.44山羊2.77?4.17犬3.94?6.39貓2.94?6.67本文檔共65頁；當(dāng)前第38頁；編輯于星期六\9點(diǎn)33分第二節(jié)血糖檢測(cè)

臨床意義低血糖：見于胰島素分泌增多，腎上腺皮質(zhì)功能減退、糖原貯存性疾病，牛酮病，綿羊妊娠毒血癥，饑餓，消化吸收不良，肝臟機(jī)能不全，馬黃曲霉毒素中毒等。髙血糖：反芻動(dòng)物氨中毒、劇痛、運(yùn)輸、胰腺炎等可引起暫時(shí)性髙糖血癥。糖尿病、肢端肥大癥、腎上腺功能亢進(jìn)、腦垂體功能亢進(jìn)等可引起持續(xù)性髙糖血癥。本文檔共65頁；當(dāng)前第39頁；編輯于星期六\9點(diǎn)33分一、血清膽固醇測(cè)定二、血清甘油三酯測(cè)定三、酮體測(cè)定第三節(jié)脂肪代謝的檢測(cè)本文檔共65頁；當(dāng)前第40頁；編輯于星期六\9點(diǎn)33分一、血清膽固醇測(cè)定

原理異丙醇抽提、高鐵冰醋酸-硫酸顯色法。血清經(jīng)異丙醇沉淀蛋白質(zhì)并經(jīng)氧化鋁吸附，膽固醇被抽提，與濃硫酸及三價(jià)鐵作用，生成較穩(wěn)定的紫紅色化合物，與同樣處理的標(biāo)準(zhǔn)液比色，求得樣品中膽固醇濃度。

試劑異丙醇（AR)

氧化鋁：層析用中性氧化鋁，用水洗去不易下沉的細(xì)顆粒，吸濾干后，在110℃烘箱中活化至少3h，密閉容器保存本文檔共65頁；當(dāng)前第41頁；編輯于星期六\9點(diǎn)33分一、血清膽固醇測(cè)定

試劑三氯化鐵貯存液：取三氯化鐵0.1g溶于冰醋酸100ml。顯色劑：三氯化鐵貯存液與濃硫酸按1：1體積混合。5.17mmol/L膽固醇標(biāo)準(zhǔn)液：取重結(jié)晶膽固醇200mg，用異丙醇溶解至100ml，置4℃冰箱保存。膽固醇重結(jié)晶：取10g于燒杯中加無水乙醇50ml，70℃水浴中加熱溶解放冷置冰箱過夜重結(jié)晶，過濾，收集沉淀再溶于50ml熱乙醇中，放冷置冰箱過夜，過濾，收集沉淀再溶于30ml熱乙醇中，重復(fù)3?4次，最后收集沉淀于100℃烘箱中干燥4h，貯于干燥器中備用。本文檔共65頁；當(dāng)前第42頁；編輯于星期六\9點(diǎn)33分一、血清膽固醇測(cè)定

操作取血清(測(cè)定管)或膽固醇標(biāo)準(zhǔn)液(標(biāo)準(zhǔn)管)0.1ml于帶塞試管中，向管底吹入異丙醇2.4ml，沖散血清，使蛋白質(zhì)沉淀，加塞混勻后放60℃水浴1-2min，加氧化鋁0.4g，加塞于漩渦混合器上混合15s或手搖2min，離心。取上清液。取上清液1ml于另二支試管中，空白管中加異丙醇1ml。各管置60℃預(yù)熱1min(試管不離開水?。謩e加入顯色劑3ml，充分混合后留在水浴中15min。冷卻，以空白管調(diào)零，530-550nm波長比色。本文檔共65頁；當(dāng)前第43頁；編輯于星期六\9點(diǎn)33分一、血清膽固醇測(cè)定

附注加顯色劑時(shí)會(huì)產(chǎn)熱，程度與顯色深淺有關(guān)，應(yīng)注意：①所用試管口徑和厚度一致，試管口徑大便于快速搖勻。②加顯色劑時(shí)要沿管壁加入，使上下分成兩層，然后突然混合。③加顯色劑必須加一管搖一管，不可成批加完后一起混合，搖的手法也要一致。所用試管和比色杯均須干燥。所用濃硫酸要求較高，應(yīng)密閉保存防止吸水。本文檔共65頁；當(dāng)前第44頁；編輯于星期六\9點(diǎn)33分一、血清膽固醇測(cè)定

計(jì)算血清膽固醇（mmol/L）=(Odu/Ods)×5.17

參考值動(dòng)物mmol/L動(dòng)物mmol/L牛2.0?3.1馬1.9?3.9豬0.9?1.4綿羊1.3?2.0山羊2.0?3.4犬3.4?7.0貓2.4?3.4本文檔共65頁；當(dāng)前第45頁；編輯于星期六\9點(diǎn)33分一、血清膽固醇測(cè)定

臨床意義

血清膽固醇升髙：肝內(nèi)或肝外膽汁郁積、膽結(jié)石（尤其膽固醇結(jié)石）、脂肪肝、糖尿病及腎病綜合征等。

血清膽固醇降低：嚴(yán)重貧血、營養(yǎng)不良、感染及甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)等。本文檔共65頁；當(dāng)前第46頁；編輯于星期六\9點(diǎn)33分二、血清甘油三酯測(cè)定

原理用高效微生物脂蛋白脂肪酶（LPL）使血清中的甘油三酯水解成甘油和脂肪酸，將生成的甘油用甘油激酶(GK)及三磷酸腺苷(ATP)磷酸化，以磷酸甘油氧化酶(GPO)氧化3-瞵酸甘油(G-3-P)，然后以過氧化氫酶(POD)、4-氨基比林（4-AAP）與4-氯酚（三者合成PAP）顯色，測(cè)定所生成的H2O2，本法簡稱GPO-PAP法。該方法有一步終點(diǎn)法和兩步終點(diǎn)法測(cè)定，目前常用兩步法。本文檔共65頁；當(dāng)前第47頁；編輯于星期六\9點(diǎn)33分二、血清甘油三酯測(cè)定

試劑Tris-HCl緩沖液，150mmol/L，pH7.6，每升中含MgSO410mmol，膽酸鈉3.5mmol，ATP1.0mmol，4-氯酚2.5mmol，TritonX-1000.1g

酶液I：Tris緩沖液50ml中溶GK500U，GPO3000U，POD1000U。酶液II：Tris緩沖液50ml中溶LPL3000U，4-AAP1mmol。手工法應(yīng)用試劑I：酶液Ⅰ5ml與Tris緩沖液45ml混合。手工法應(yīng)用試劑II：酶液II5ml與Tris緩沖液45ml混合。本文檔共65頁；當(dāng)前第48頁；編輯于星期六\9點(diǎn)33分二、血清甘油三酯測(cè)定

試劑用于自動(dòng)分析時(shí)，試劑I、II的用量隨儀器調(diào)整，但緩沖液與酶液I和酶液II的最終比例9:0.5:0.5不變。參考物（校準(zhǔn)液)：2mmol/L三油酸酯水溶液。精確稱取三油酸酯〔純品）177mg(可直接稱入100ml容量瓶中），加TritonX-1005ml，搖動(dòng)使成乳濁狀，置56℃水浴約10min，澄清后加蒸餾水90ml，冷卻至室溫，再加蒸餾水至刻度，混勻。以2ml分裝，4℃保存至少穩(wěn)定2年，勿冰凍。本文檔共65頁；當(dāng)前第49頁；編輯于星期六\9點(diǎn)33分二、血清甘油三酯測(cè)定

操作采血前兩天不進(jìn)食含脂肪食物，樣品4℃存放不超過3d。測(cè)定管、校準(zhǔn)管和空白管中分別加入血清、校準(zhǔn)液及蒸餾水各10μl，各加應(yīng)用試劑Ⅰ0.5ml，混勻，37℃水浴5min，然后再各加應(yīng)用試劑II0.5ml，混勻后37℃水浴10min，空白管校零，在波長500nm測(cè)吸光度（A)。本文檔共65頁；當(dāng)前第50頁；編輯于星期六\9點(diǎn)33分二、血清甘油三酯測(cè)定

計(jì)算血清甘油三酯（TG)(mmol/L)=(測(cè)定管A/校準(zhǔn)管A）×校準(zhǔn)液TG濃度（mmol/L）參考值：犬0.43mmol/L，貓0.40mmol/L。

臨床意義增高：原發(fā)性高脂血癥、肥胖癥、糖尿病、脂肪肝、腎病綜合征、犬肝臟疾病、長期饑餓或高脂飲食等。降低：甲狀腺功能減退、腎上腺功能降低及嚴(yán)重肝功能不良等。本文檔共65頁；當(dāng)前第51頁；編輯于星期六\9點(diǎn)33分三、酮體測(cè)定

酮體：乙酰乙酸、β-羥丁酸（脂質(zhì)代謝中間產(chǎn)物）和丙酮（剩余物）。碳水化合物缺乏時(shí)酮體產(chǎn)生增多，糖異生作用增強(qiáng)；三羧酸循環(huán)中草酰乙酸缺乏抑制脂肪生成，乙酰輔酶A增多。酮體腎閾較低，在酮血癥之前，通常已出現(xiàn)酮尿。本文檔共65頁；當(dāng)前第52頁；編輯于星期六\9點(diǎn)33分三、酮體測(cè)定定性試驗(yàn)：常用亞硝基鐵氰化鈉反應(yīng)。特異性對(duì)乙酰乙酸，但對(duì)β-羥丁酸不起反應(yīng)，而β-羥丁酸在酮血癥中占主要成分。該法簡便易行，可用酮粉法或配置的液體試劑測(cè)定奶、尿或血清樣品。酮粉試劑配制：取硫酸銨100g，無水碳酸鈉50g，亞硝基鐵氰化鈉3g，研碎混勻備用。操作方法：在短試管內(nèi)加酮粉試劑1g，滴加被檢樣品，數(shù)分鐘后呈髙錳酸鉀樣紅色為陽性反應(yīng)。本文檔共65頁；當(dāng)前第53頁；編輯于星期六\9點(diǎn)33分三、酮體測(cè)定定量試驗(yàn)（微量凱氏蒸餾、水楊醛比色法）：以氫氧化鋇和硫酸鋅除蛋白，丙酮首先被蒸餾分離，乙酰乙酸和β-羥丁酸經(jīng)先后加入硫酸和重鉻酸鉀氧化使變成丙酮而蒸餾，蒸餾液與芳族醛在堿性條件下發(fā)生紅色反應(yīng)。酶試驗(yàn)法比較簡便的酮體定量試驗(yàn)，但進(jìn)口試劑。

臨床意義酮血或酮尿表明機(jī)體脂肪和能量代謝紊亂。如奶牛酮病、綿羊妊娠毒血癥、母牛肥胖綜合征、長期饑餓等。本文檔共65頁；當(dāng)前第54頁；編輯于星期六\9點(diǎn)33分一、樣品采集二、樣品制備三、定量檢測(cè)第四節(jié)微量元素檢測(cè)本文檔共65頁；當(dāng)前第55頁；編輯于星期六\9點(diǎn)33分一、樣品采集樣品：土壤、水、飼草料和體液、被毛及組織器官等；保證樣品的均勻性和代表性；據(jù)研究目的、要求，選擇不同預(yù)處理和分析方法；牧草：多點(diǎn)采樣，離開地表2~3cm，避免土壤污染；土壤：多點(diǎn)采集植物根部延伸到的部位（0~30cm）；組織：新鮮，無離子水沖洗，烘干，研細(xì)備用；被毛：固定部位、不銹鋼剪刀采樣，洗凈；血樣：采集干凈容器內(nèi)，避用橡膠蓋