傳染病的檢測技術(shù)進展及質(zhì)量控制

關(guān)于傳染病的檢測技術(shù)進展及質(zhì)量控制第1頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三伴隨醫(yī)療衛(wèi)生事業(yè)的發(fā)展，人們對傳染病的防治也越來越重視。在醫(yī)院中大量傳染病標(biāo)本的檢測工作也變得十分重要。第2頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三

傳統(tǒng)的檢測方法多種多樣，對于很多疾病的診斷有相當(dāng)大的輔助作用，傳染病病原體的準確檢測是傳染病有效防控的前提，也是合理用藥的基礎(chǔ)。然而，傳統(tǒng)的病原體分離、培養(yǎng)等診斷方法不能完全滿足臨床治療和疾病控制的需要。新發(fā)展的傳染病診斷技術(shù)可有效彌補傳統(tǒng)方法的不足。第3頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三傳統(tǒng)檢測方法第4頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三新生檢測技術(shù)高通量酶聯(lián)免疫吸附PCR蛋白質(zhì)芯片技術(shù)生物傳感技術(shù)第5頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三乙型病毒性肝炎的病原學(xué)檢查及其意義

第6頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三電鏡下，HBV感染者血清中存在三種形式的顆粒：

1.小球形顆粒：直徑15-25nm，數(shù)量最多

2.管形顆粒：直徑22nm，長50-230nm

3.大球形顆粒：直徑42nm，量少，完整顆粒，有傳染性僅由HBsAg構(gòu)成的空心顆粒，無核酸、無傳染性生物學(xué)特征第7頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三大球形顆粒是完整的乙型肝炎病毒（HBV）顆粒，又稱Dane顆粒，分為包膜和核心兩部分包膜：含HBsAg、糖蛋白與細胞脂質(zhì)核心：含環(huán)狀雙股DNA、DNAP、HBcAg和HBeAg，是病毒復(fù)制的主體HBsAgHBeAgDNADNA-PHBcAgDane顆粒生物學(xué)特征第8頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三HBV基因組又稱HBVDNA環(huán)狀部分雙股DNA全長2182bp

長的負鏈（L）分S、C、P、X區(qū)重疊，高利用率短的正鏈（S）長度可變（50-80%）生物學(xué)特征第9頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三HBV基因組結(jié)構(gòu)

編碼

pre-S1pre-S1蛋白

pre-S2pre-S2蛋白SHBsAgpre-C

HBeAgCHBcAgPDNAPXHBxAg生物學(xué)特征第10頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三生物學(xué)特征第11頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三生物學(xué)特征第12頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三生物學(xué)特征第13頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三開放讀碼框架（ORF）及編碼蛋白S區(qū)前S1區(qū)：前S1蛋白（pre-S1）陽性提示HBV存在和復(fù)制，慢性化前S2區(qū)：前S2蛋白（pre-S2）陽性提示HBV復(fù)制

S區(qū)：HBsAg：感染標(biāo)志屬決定簇“a”亞型決定簇“d/y”和“w/r”C區(qū)

前C基因：HBeAg：陽性提示患者高感染低應(yīng)答率

C基因：HBcAg：免疫原性強生物學(xué)特征第14頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三開放讀碼框架（ORF）及編碼蛋白P區(qū)最長，編碼多種功能蛋白，參與HBV復(fù)制

DNA多聚酶：復(fù)制的主要酶體，有逆轉(zhuǎn)錄功能

RNA酶HX區(qū)

HBxAg：具反式激活作用，在HCC發(fā)生中起重要作用生物學(xué)特征第15頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三乙肝五項檢查是用來判斷是否感染乙肝，粗略估計病毒復(fù)制水平的初步檢查，雖然項目少，檢查簡單，但是意義非常重要。乙肝五項檢查分別是：1.表面抗原(HBsAg)2.表面抗體(抗HBs)3.е抗原(HBeAg)4.е抗體(抗HBe)5.核心抗體(抗HBc）乙肝五項又叫乙肝兩對半。病原學(xué)檢查第16頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三乙型肝炎病毒血清學(xué)檢測臨床意義第17頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三乙肝五項的檢測包括定性檢測和定量檢測；

定量檢測方法包括：化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CLIA）、電化學(xué)發(fā)光免疫分析法、時間分辨熒光分析法（TRFIA）、放射免疫分析法（RIA）、微粒子酶免分析（MEIA）等定性檢測包括酶聯(lián)免疫分析法（ELISA）、乳膠分析法、金標(biāo)快速法等。病原學(xué)檢查第18頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三1.乙肝五項定量檢查可以動態(tài)觀察療效和對乙肝病情進行監(jiān)測。乙肝五項定量檢查分析HBSAg和HBsAb濃度的變化，可以預(yù)見急性乙肝是不是處在恢復(fù)期。乙肝五項定量檢查分析HBeAg和HBeAb濃度的變化，可以反映病情變化和治療作用。HBcAb濃度的高低能夠反映病毒感染的狀況，高濃度的HBcAb提示乙肝急性感染;低濃度通常為恢復(fù)期或既往感染，有利于對慢性肝炎活動性和非活動性的判斷，可以用于慢性乙肝的分類。病原學(xué)檢查第19頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三2.乙肝五項定量檢查分析能夠?qū)贵w是不是真正具有中和HBV的免疫力作出正確評價，對乙肝的預(yù)防起到監(jiān)督作用。HBsAb的含量在10mIU/ml以上的患者在用酶聯(lián)免疫吸附劑（ELISA）檢測查就可呈HBsAb陽性結(jié)果，但并不提示機體都一定具有免疫力，而HBsAb的含量在10mIU/ml-100mIU/ml之間的樣本，定性雖為陽性，但此時機體對乙肝病毒的免疫能力較弱，甚至不能預(yù)防HBV感染，仍然有感染HBV的危險。作為定量檢查，依據(jù)HBsAb的含量能夠判斷機體對HBV的免疫狀態(tài)及乙肝疫苗的免疫效果。病原學(xué)檢查第20頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三放射免疫技術(shù)優(yōu)點：1.是一項較為成熟的診斷技術(shù)，其夾心法、競爭法的標(biāo)記原理為以后的檢測技術(shù)的發(fā)展奠定了基礎(chǔ)。2.其精度可達10-12mol/L。缺點：1.使用的放射性物質(zhì)（125I）對環(huán)境造成了污染2.對操作者的身體健康造成了危害；3.試劑有效期短，試劑盒的批間、批內(nèi)變異較大，標(biāo)準曲線有效期短，必須每次定標(biāo)，造成浪費；4.該法操作繁瑣，出報告時間長。病原學(xué)檢查第21頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三優(yōu)點：1.在于該法避免對環(huán)境和人體的危害；2.操作簡便并且有效期較長。缺點：1.由于該法酶的純度和反應(yīng)過程容易受環(huán)境因素影像，導(dǎo)致其穩(wěn)定性不好；2.該法靈敏度、重復(fù)性不及放射免疫技術(shù)，精度為10-9mol/L，易造成漏檢和假陽性。酶聯(lián)免疫分析法（ELISA）病原學(xué)檢查第22頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三化學(xué)發(fā)光法優(yōu)點：1.單個樣本檢測速度快，適合做急診；2.靈敏度較高，精度可達10-15mol/L3.自動化程度高。缺點：1.該法發(fā)光過程短，樣品不能重復(fù)檢測2.本底較高，在超微量分析及早期診斷方面能力不足3.試劑價格較高病原學(xué)檢查第23頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三時間分辨熒光免疫法技術(shù)特異性高，線性范圍更寬；可以反復(fù)檢測，并且其重復(fù)性、穩(wěn)定性好，試劑保質(zhì)期至少1a，標(biāo)準曲線保留時間長，同一批次試劑只需做一條標(biāo)準曲線即可，其精度可達10-18mol/L，其定量結(jié)果更是肝移植、乙肝疫苗接種療效觀察等臨床必須的檢查。病原學(xué)檢查第24頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三臨床上采用定量測定乙肝五項指標(biāo)更能準確的反應(yīng)乙型肝炎臨床變化，以及乙肝患者的治療，預(yù)后情況。現(xiàn)在臨床醫(yī)生對乙肝五項定量測定已經(jīng)有了普遍的認識，也越來越被患者接受。病原學(xué)檢查第25頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三HBVDNA是病毒復(fù)制和傳染性的直接標(biāo)志。目前常用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）。聚合酶鏈式反應(yīng)（PCR）是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)，它可看作是生物體外的特殊DNA復(fù)制，PCR的最大特點，是能將微量的DNA大幅增加。病原學(xué)檢查第26頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三HBV-DNA定量檢查就是檢驗乙肝病毒在血液中的含量。通過乙肝病毒含量的檢測，可以了解患者體內(nèi)的病毒含量，病情發(fā)展?fàn)顩r，對患者的治療有很好的指導(dǎo)作用。

病原學(xué)檢查第27頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三

HBV-DNA定量檢查的正常值是1000cps/ml。當(dāng)HBV-DNA定量檢查值小于1000cps/ml時，表明體內(nèi)HBV-DNA為陰性，傳染力弱。當(dāng)HBV-DNA定量檢查值大于1000cps/ml時，表明體內(nèi)HBV-DNA為陽性，病毒仍然較多，傳染力強。病毒的數(shù)量與某些藥物的療效相關(guān)。例如，干擾素治療對肝炎病毒高拷貝者不敏感，低拷貝者敏感；而有些藥物則具有顯著降低病毒高拷貝的作用。病原學(xué)檢查第28頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三乙型肝炎病毒前Ｓ1抗原乙型肝炎病毒前Ｓ1抗原（PreS1-Ag）是存在于均有傳染性的完整Dane顆粒和管型顆粒上最外端的外膜蛋白，前S1蛋白（抗原）在病毒侵入肝細胞過程中起重要作用。國內(nèi)報道部分HBeAg陰性患者仍有病毒復(fù)制，而前S1抗原可作為HBeAg陰性慢性乙型肝炎患者肝細胞損害的一項指標(biāo)。作為HBV感染、復(fù)制和乙肝患者診斷、治療和預(yù)后的一個重要標(biāo)志，在多數(shù)醫(yī)院廣泛開展，但其臨床價值仍沒有被充分認識。病原學(xué)檢查第29頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三國內(nèi)外對前Ｓ蛋白/抗前Ｓ蛋白臨床意義的基本共識一·前Ｓ蛋白１．前Ｓ1病毒蛋白出現(xiàn)在急性HBV感染的最早期，是病毒清除的最早跡象。２．前Ｓ1病毒蛋白持續(xù)存在者將發(fā)展至慢性肝炎。３．前Ｓ1病毒蛋白與HBV-DNA,HBeAg高度相關(guān)。與肝內(nèi)

HBV-DNA,HBcAg檢出高度相關(guān)。４．在抗HBe(+)

的HBV感染者中，檢出前Ｓ1蛋白可表明病毒的復(fù)制。病原學(xué)檢查第30頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三５．病毒附著于肝細胞膜上，最重要的介導(dǎo)部位是前Ｓ1蛋白的氨基酸(AA)21-47片段。變異的病毒只要這一區(qū)段完好就有傳染性。僅僅是對(AA)21-47肽的

前Ｓ1抗體才能中和病毒。６．前S1蛋白顆粒表面具有高度的免疫原性，常作為乙肝疫苗的主要成分。⒎前S1抗原主要存在于血清中完整HBV表面。病原學(xué)檢查第31頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三PreS1抗原試劑盒的臨床應(yīng)用1.對擬查“二對半”的患者，同時加查PreS1，可起到確診與補充的作用，如感染與復(fù)制、急性與慢性、預(yù)后與療效等；2.非肝炎住院病人常規(guī)檢測，PreS1比“二對半”更有意義；3.獻血員篩查，檢測前S1可減少乙肝病毒感染者漏檢；4.創(chuàng)傷性檢查病員應(yīng)檢測PreS1，如內(nèi)窺鏡檢查、牙科手術(shù)等。病原學(xué)檢查第32頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三乙型肝炎病毒血清學(xué)檢測的臨床意義第33頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三乙肝大蛋白HBV表面抗原通過啟動子表達后，會產(chǎn)生大蛋白（HBV-LP）、中蛋白（HBV-MP）以及小蛋白（HBV-SP）三類產(chǎn)物;HBV-LP氨基酸序列中包括Pre-S1、Pre-S2和S部分；產(chǎn)物中蛋白和產(chǎn)物小蛋白形式主要為小球型病毒顆粒，其余兩種病毒顆粒（管形顆粒、Dane顆粒）則是由三類產(chǎn)物共同組成，且Dane顆粒的組成取決于HBV-LP。因此HBV-LP被認為是一種能反映HBV復(fù)制和Dane顆粒存在的標(biāo)記物。病原學(xué)檢查第34頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三病原學(xué)檢查第35頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三HBV-LP有直接的肝細胞毒性，致使肝細胞凋亡而快速死亡。HBV-LP對HBV復(fù)制過程有反式激活作用，并與病毒顆粒從細胞內(nèi)釋放調(diào)節(jié)有關(guān)。所以，檢測HBV-LP用于臨床判斷體內(nèi)HBV復(fù)制和治療預(yù)后有一定意義。病原學(xué)檢查第36頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三病毒性肝炎—丙肝

丙型肝炎（HC）是一種對人類危害重大的疾病，HCV感染的慢性化發(fā)生率明顯高于乙型肝炎，較乙型肝炎易早期出現(xiàn)肝硬化、HCC，因此，HCV的檢測對丙型肝炎病毒感染的早期診斷和指導(dǎo)臨床治療有重大的意義。到目前為止,丙型肝炎檢測技術(shù)主要有抗-HCV檢測、HCV-RNA核酸擴增檢測、HCV基因分型、HCV核心抗原的檢測以及同時檢測抗-HCV和HCV核心抗原等。第37頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三第38頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三抗-HCV的檢測

抗-HCV的檢測（化學(xué)發(fā)光免疫分析法CIA，或者酶免疫法EIA）是最早出現(xiàn)的HCV檢測技術(shù),可用于HCV感染者的篩查?？焖僭\斷測試(RDTs)可以被用來初步篩查抗–HCV，對于抗體陽性者，應(yīng)進一步進行HCVRNA檢測。

然而，對于免疫功能不正常的HCV感染者,則不能檢出抗-HCV。另外,由于“窗口期”的存在,仍有一定的漏檢率。對于抗-HCV的檢測,目前仍有改進的潛力。HCV抗原的檢測

在缺乏HCVRNA檢測條件時，可考慮進行HCV核心抗原的檢測，用于慢性HCV感染者的實驗室診斷。第39頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三HCV-RNA核酸擴增檢測技術(shù)(NAT)

HCV-RNA是HCV感染、傳染性和病毒復(fù)制的標(biāo)志HCV-RNA水平直接代表患者病毒血癥水平HCV-RNA檢測可將窗口期由6-8周縮短至12天HCV-RNA檢測是丙肝早期篩查、診斷和治療管理最關(guān)鍵的指標(biāo)準確的HCV-RNA檢測是應(yīng)答指導(dǎo)治療策略的保障，可以幫助醫(yī)生確定停藥終點，進而提高治愈率第40頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三

HCV基因分型HCV基因分型的方法有分子生物學(xué)和血清學(xué)兩大類，前者包括DNA測序法、特異型引物擴增法、基因芯片、探針雜交等，后者是合成HCV特異性多肽來檢測其特異性的抗體從而區(qū)分基因型，HCV基因分型應(yīng)當(dāng)在抗病毒治療前進行。HCV基因型與肝病嚴重程度有著密切關(guān)系，并且對抗病毒治療產(chǎn)生很大影響。因此，HCV基因分型檢測可為HCV感染者的診斷和治療提供重要的科學(xué)依據(jù)。HCV1b和2a在中國各地較為常見。第41頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三肝纖維化非侵襲性診斷目前常用的無創(chuàng)診斷方法包括血清學(xué)和影像學(xué)兩大類。血清學(xué)方法通常是指包括多種臨床指標(biāo)的模型。其中APRI和FIB-4簡單易行，但敏感性和特異性不強。

影像學(xué)主要是瞬時彈性成像（TE），TE是近年開始廣泛使用的一種新的影像學(xué)無創(chuàng)診斷方法，對HCV肝纖維化分期的診斷較為可靠，對肝硬化的診斷更準確。

血清學(xué)和TE等影像學(xué)無創(chuàng)指標(biāo)聯(lián)合應(yīng)用，可顯著提高纖維化的診斷準確率。當(dāng)兩者結(jié)果不一致時，建議進行肝活檢明確真確。第42頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三艾滋病

人類免疫缺陷病毒（HIV），即艾滋?。ˋIDS）病毒，是造成人類免疫系統(tǒng)缺陷的一種病毒。人類免疫缺陷病毒是一種感染人類免疫系統(tǒng)細胞的慢病毒（Lentivirus），屬逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種。HIV通過破壞人體的CD4﹢T淋巴細胞，進而阻斷細胞免疫和體液免疫過程，導(dǎo)致免疫系統(tǒng)癱瘓，從而致使各種疾病在人體內(nèi)蔓延，最終導(dǎo)致艾滋病。第43頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三病毒復(fù)制過程第44頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三HIV感染過程中HIV抗原和相關(guān)抗體及CD4+細胞的變化第45頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三實驗室免疫學(xué)檢查

1.主要是中度以上細胞免疫缺陷包括：CD4+T淋巴細胞耗竭：T淋巴細胞功能下降，外周血淋巴細胞顯著減少，CD4<200/μl，CD4/CD8<1.0，（正常人為1.25～2.1），遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)皮試陰性，有絲分裂原刺激反應(yīng)低下。2.B淋巴細胞功能失調(diào)：多克隆性高球蛋白血癥，循環(huán)免疫復(fù)合物形成和自身抗體形成。3.NK細胞活性下降第46頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三

檢測HIV感染者體液中病毒抗原和抗體的方法，操作方便，易于普及應(yīng)用，其中抗體檢測尤普通。但HIvP24抗原和病毒基因的測定，在HIV感染檢測中的地位和重要性也日益受到重視?？贵w檢測血清中HIV抗體是判斷HIV感染的間接指標(biāo)。根據(jù)其主要的適用范圍，可將現(xiàn)有HIV抗體檢測方法分為篩檢試驗和確證試驗。HIV-1抗體的檢測，ELISA測定法結(jié)果連續(xù)兩次為陽性者，再行WB法進行確診（確證試驗）。第47頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三第48頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三HIVP24抗原HIV-1P24抗原檢測可用于HIV-1抗體不確定或窗口期的輔助診斷；HIV-1抗體陽性母親所生嬰兒早期的輔助鑒別診斷。病毒基因

通過檢測HIV基因型和表型的變異了解藥物變異情況。目前主要采用基因型檢測。在抗病毒治療前進行基因檢測，有助于選擇合適的抗病毒藥物。第49頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三第50頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三第51頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三第52頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三第53頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三第54頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三第55頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三蛋白質(zhì)芯片

蛋白芯片在人的傳染病檢測方面主要研究對象是較為嚴重的傳染病病原，能同時檢測HIV、HBV、HCV聯(lián)合感染患者血中HIV、HBV、HCV核酸和相應(yīng)的抗體，有較好的應(yīng)用前景。第56頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三流行性出血熱

出血熱即流行性出血熱又稱腎綜合征出血熱，是由流行性出血熱病毒（漢坦病毒）引起的，以鼠類為主要傳染源的自然疫源性疾病。以發(fā)熱、出血、充血、低血壓休克及腎臟損害為主要臨床表現(xiàn)。，其病理變化為全身小血管和毛細血管損傷。流行性出血熱的病毒具有多嗜性的特點，可以導(dǎo)致患者體內(nèi)多個臟器官的損傷，臨床表現(xiàn)較為復(fù)雜，時常出現(xiàn)并發(fā)癥和不典型病例。第57頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三出血熱潛伏期一般為2～3周。典型臨床經(jīng)過分為五期：發(fā)熱期、低血壓休克期、少尿期、多尿期及恢復(fù)期。1.發(fā)熱期

主要表現(xiàn)為感染性病毒血癥和全身毛細血管損害引起的癥狀。起病急,有發(fā)熱（38℃～40℃）、三痛（頭痛、腰痛、眼眶痛）以及惡心、嘔吐、胸悶、腹痛、腹瀉、全身關(guān)節(jié)痛等癥狀，皮膚黏膜三紅（臉、頸和上胸部發(fā)紅），眼結(jié)膜充血，重者似酒醉貌?？谇火つぁ⑿乇场⒁赶鲁霈F(xiàn)大小不等的出血點或淤斑，或呈條索狀、抓痕樣的出血點。2.低血壓休克期

多在發(fā)熱4～6日，體溫開始下降時或退熱后不久，主要為失血漿性低血容量休克的表現(xiàn)?；颊叱霈F(xiàn)低血壓，重者發(fā)生休克。第58頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三3.少尿期

24小時尿量少于400ml，少尿期與低血壓期常無明顯界限。4.多尿期

腎臟組織損害逐漸修復(fù)，但由于腎小管回吸收功能尚未完全恢復(fù)，以致尿量顯著增多。第8～12日多見，持續(xù)7～14天，尿量每天4000～6000ml左右，極易造成脫水及電解質(zhì)紊亂。5.恢復(fù)期隨著腎功能的逐漸恢復(fù)，尿量減至3000ml以下時，即進入恢復(fù)期。尿量、癥狀逐漸恢復(fù)正常，復(fù)原需數(shù)月。第59頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三診斷:出血熱病死率與臨床類型、治療遲早及措施是否正確相關(guān)。早期的診斷和治療措施的改進可有效降低病死率。通常診斷依據(jù)主要依靠臨床特征癥狀和體征，結(jié)合實驗室檢查，參考流行病學(xué)資料進行診斷。

第60頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三第61頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三1.常規(guī)檢查

（1）血常規(guī)早期白細胞總數(shù)正?；蚱?，3～4日后即明顯增高，多在（15～30）×109/L，異型淋巴細胞在1～2病日即可出現(xiàn)，且逐日增多，一般為10～20%，部分達30%以上；血小板明顯減少，低血壓及少尿期最低，并有異型、巨核血小板出現(xiàn)，多尿后期始恢復(fù)。紅細胞和血紅蛋白在發(fā)熱期開始上升，低血壓期逐漸增高，休克期患者明顯上升，至少尿期下降，其動態(tài)變化可作為判斷血液濃縮與血液稀釋的重要指標(biāo)。（2）尿常規(guī)顯著的尿蛋白是本病的重要特點，也是腎損害的最早表現(xiàn)。尿中還可有紅細胞、管型或膜狀物（是凝血塊、蛋白質(zhì)與壞死脫落上皮細胞的混合凝聚物）。第62頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三2.血液生化檢查（1）尿素氮及肌酐低血壓休克期輕、中度增高。少尿期至多尿期達高峰，以后逐漸下降，升高程度及幅度與病情成正比。（2）電解質(zhì)血鉀在發(fā)熱期可有降低，休克期仍低，少尿期上升為高血鉀，多尿期又降低。但少尿期亦有呈低血鉀者。血鈉及氯在全病程均降低，以休克及少尿期最顯著。血鈣在全病程中亦多降低。（3）二氧化碳結(jié)合力發(fā)熱后期即下降，低血壓休克期明顯，少尿期亦有下降，多尿期逐漸恢復(fù)至正常。第63頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三3.凝血功能檢查凝血因子大量消耗，血小板下降，凝血酶原和部分凝血活酶時間延長，纖維蛋白原降低。繼發(fā)性纖溶亢進表現(xiàn)為凝血酶凝固時間延長，纖維蛋白降解物增加及優(yōu)球蛋白溶解時間縮短。血漿魚精蛋白副凝試驗（3P試驗）陽性。第64頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三4.特異性抗原、抗體和病原學(xué)檢查早期用免疫熒光試驗、酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA、膠體金法在血清、尿沉渣細胞可查特異性抗原。檢測血清特異性抗體IgM1：20以上和IgG抗體1：40為陽性，恢復(fù)期血清特異性IgG抗體比急性期有4倍以上增高者也可診斷。RT-PCR法檢測血清中病毒RNA，可用于早期的診斷和非典型患者的診斷。第65頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三布魯菌病

為人畜共患病，以畜傳染人為主，人傳人的實例少見。1.傳播途徑

主要為接觸性傳播，包括飲食、接觸患病動物皮毛

2.癥狀

急性的病人會發(fā)高熱、關(guān)節(jié)炎、出汗、另有一些病人會出現(xiàn)肌肉痛等癥狀

3.危害

可侵犯中樞神經(jīng)系統(tǒng)，以及引起腦膜炎等并發(fā)癥，侵蝕骨骼，引起骨骼損傷，甚至讓患者喪失勞動能力。第66頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三成年人發(fā)病男性多于女性，且多集中在３０～４９歲。另外，分布于中國北部的病患以農(nóng)牧民居多，而在中國南方則主要集中于餐飲服務(wù)者，工人及退休人員，城市地區(qū)發(fā)病率有所上升。面臨如此嚴峻的形勢，加強臨床實驗室的檢測力度并形成統(tǒng)一的篩選及確診檢驗?zāi)Ｊ绞鞘种匾摹５?7頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三細菌學(xué)培養(yǎng)技術(shù)

細菌學(xué)培養(yǎng)技術(shù)是臨床實驗室最常用的分離方法，是布魯菌病疫情判定，臨床診斷中最直接的證據(jù)。目前血液中布魯氏菌的分離率呈上升趨勢。臨床醫(yī)生如遇診斷不明的腦膜炎患者，應(yīng)考慮腦脊液的細菌培養(yǎng)，以排除布魯菌性腦膜炎。目前細菌學(xué)培養(yǎng)是分離布魯氏菌的“金標(biāo)準”，但由于其培養(yǎng)周期長，分離鑒定困難，因此易造成漏診誤診。第68頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三免疫學(xué)檢測技術(shù)1.特異性血清凝集性試驗?zāi)壳皣鴥?nèi)外用于檢測診斷布魯菌病的特異性血清凝集性試驗方法主要有平板凝集試驗（PAT）、虎紅平板凝集試驗（RBPT）試管凝集試驗（SAT）。PAT和RBPT在臨床上主要用于早期大面積快速篩查。2.酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）酶的催化效率很高，可使測定達到很高的靈敏度，同時優(yōu)化檢測靶點，大大提高了檢測的特異。3.其他血清學(xué)檢測方法補體結(jié)合實驗（CFT）和抗人球蛋白試驗（Coomb′s）此外，熒光偏振技術(shù)（FPA）被認為是檢測牛布魯菌病抗體最穩(wěn)定的血清學(xué)方法，F(xiàn)PA技術(shù)可以進行人類感染布魯菌病的快速檢測，且可以對治療過程及預(yù)后復(fù)發(fā)進行實時監(jiān)控。第69頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三分子生物學(xué)技術(shù)（PCR技術(shù))

實時熒光定量PCR（Real‐timePCR）Real‐timePCR技術(shù)實現(xiàn)了PCR技術(shù)中定性到定量的飛躍，具有更強的特異度，更高的自動化程度，并且有效地解決了PCR的污染問題，Real‐timePCR技術(shù)具有較好的穩(wěn)定性，特異度和靈敏度，檢測時間小于２h，重現(xiàn)性好，易于標(biāo)準化，且能對臨床治療的效果進行監(jiān)測和評估，可作為人類布魯菌病快速診斷的實用方法。第70頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三真菌—新型隱球菌病

第71頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三第72頁，講稿共83頁，2023年5月2日，星期三第73