人血漿脂蛋白相關(guān)磷脂酶

關(guān)于人血漿脂蛋白相關(guān)磷脂酶第1頁(yè)，講稿共28頁(yè)，2023年5月2日，星期三1.研發(fā)背景1.1中國(guó)主要疾病死亡率男性女性惡性腫瘤心臟病腦血管病呼吸系統(tǒng)疾病來(lái)源：《2010中國(guó)衛(wèi)生統(tǒng)計(jì)年鑒》第2頁(yè)，講稿共28頁(yè)，2023年5月2日，星期三1.2美國(guó)主要疾病死亡率Source:NationalCenterforHealthStatistics2010第3頁(yè)，講稿共28頁(yè)，2023年5月2日，星期三心腦血管疾病是造成人類死亡的主要疾病，預(yù)防﹑檢測(cè)和治療心腦血管疾病一直是全世界醫(yī)學(xué)工作者努力不懈的目標(biāo)。而心腦血管疾病的病理基礎(chǔ)就是動(dòng)脈粥樣硬化，那么，動(dòng)脈粥樣硬化是怎樣形成的呢？第4頁(yè)，講稿共28頁(yè)，2023年5月2日，星期三1.31976年R·Ross提出了損傷反應(yīng)學(xué)說(shuō)近年來(lái)研究的最大成就是認(rèn)識(shí)到動(dòng)脈粥樣硬化是一種炎性反應(yīng)性疾病，炎性細(xì)胞及其釋放的產(chǎn)物已經(jīng)被認(rèn)為是最主要的促動(dòng)脈粥樣硬化的因素。

在粥樣斑塊形成、進(jìn)展和最終破裂的過(guò)程中均有炎性反應(yīng)介質(zhì)的參與。第5頁(yè)，講稿共28頁(yè)，2023年5月2日，星期三因此，尋找一個(gè)能夠反應(yīng)這種動(dòng)態(tài)變化過(guò)程的介質(zhì)就尤為重要了，目前國(guó)際上已經(jīng)把脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2

（Lipoprotein-AssociatedPhospholipaseA2Lp-PLA2)作為一種新的炎性反應(yīng)標(biāo)志物。第6頁(yè)，講稿共28頁(yè)，2023年5月2日，星期三

2.作用機(jī)制及臨床意義

2.1作用機(jī)制

2.2作用示意圖

2.3臨床意義2.4目前檢查的局限性

第7頁(yè)，講稿共28頁(yè)，2023年5月2日，星期三

2.1作用機(jī)制

脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2，英文簡(jiǎn)寫(xiě)Lp-PLA2又稱血小板活化因子乙酰水解酶（PAF-AH）分子量為45KDa

由成熟的巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞合成和分泌，并受炎性介質(zhì)的調(diào)節(jié)

80%與低密度脂蛋白（LDL）結(jié)合能水解低密度脂蛋白上的氧化卵磷脂，生成促炎物質(zhì)，因此具有促炎癥和促動(dòng)脈粥樣硬化的作用第8頁(yè)，講稿共28頁(yè)，2023年5月2日，星期三Lp-PLA2水解動(dòng)脈內(nèi)膜上的LDL中的氧化卵磷脂（ox-PC）溶血卵磷脂（Lyso-PC）和游離的氧化的脂肪酸（ox-FA）刺激粘附因子和細(xì)胞因子的產(chǎn)生，導(dǎo)致單核細(xì)胞向內(nèi)膜聚集單核細(xì)胞衍生成巨噬細(xì)胞并吞噬oxLDL變成凋亡的泡沫細(xì)胞巨噬細(xì)胞和泡沫細(xì)胞聚集形成動(dòng)脈斑塊，產(chǎn)生、釋放更多的Lp-PLA2至循環(huán)第9頁(yè)，講稿共28頁(yè)，2023年5月2日，星期三血管內(nèi)腔氧化的LDL內(nèi)膜介質(zhì)粘附因子單核細(xì)胞細(xì)胞因子斑塊形成泡沫細(xì)胞巨噬細(xì)胞溶血卵磷脂氧化游離脂肪酸2.2作用示意圖第10頁(yè)，講稿共28頁(yè)，2023年5月2日，星期三

穩(wěn)定粥樣斑塊

Lp-PLA2

含量低可能有嚴(yán)重管腔狹窄較少的炎癥細(xì)胞不穩(wěn)定粥樣斑塊

Lp-PLA2

含量高可能輕微的管腔狹窄大量的炎癥細(xì)胞Source：DavidsonMH,JonesPH.AmJCardSuppl2008第11頁(yè)，講稿共28頁(yè)，2023年5月2日，星期三穩(wěn)定粥樣斑塊斑塊破裂形成血栓不穩(wěn)定粥樣斑塊粥樣斑塊早期Source：DavidsonMH,JonesPH.AmJCardSuppl2008第12頁(yè)，講稿共28頁(yè)，2023年5月2日，星期三

動(dòng)脈粥樣硬化的炎癥發(fā)展到嚴(yán)重程度，將要或者已經(jīng)出現(xiàn)向血管內(nèi)腔破裂時(shí)，Lp-PLA2將會(huì)被大量釋放入血液，致使其血液內(nèi)的水平會(huì)大幅增高，因此Lp-PLA2在血液中的濃度就能夠反映動(dòng)脈粥樣斑塊的炎癥程度。第13頁(yè)，講稿共28頁(yè)，2023年5月2日，星期三2.3臨床意義通過(guò)檢測(cè)血液中的Lp-PLA2,可以有效地了解動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的炎癥程度及其穩(wěn)定性。這樣就可預(yù)警心肌梗死和腦血栓的發(fā)生，對(duì)預(yù)防心腦血管突發(fā)事件具有相當(dāng)重要的意義。臨床意義：1、預(yù)測(cè)心腦血管栓塞性疾病的發(fā)生。2、判斷心腦血管栓塞性疾病的轉(zhuǎn)歸。第14頁(yè)，講稿共28頁(yè)，2023年5月2日，星期三2.4目前臨床檢測(cè)都存在著一定的局限（1）血管造影，可以顯示血管的狹窄程度，但這是一種有創(chuàng)性檢查，不適用于普檢、預(yù)防和監(jiān)測(cè)。（2）許多的血液生化檢測(cè)，比如膽固醇與低密度脂蛋白升高，體內(nèi)脂質(zhì)代謝異常，還是無(wú)法預(yù)警動(dòng)脈粥樣斑塊的炎癥程度，對(duì)判斷爆發(fā)心腦血管意外危險(xiǎn)性的特異性不好。第15頁(yè)，講稿共28頁(yè)，2023年5月2日，星期三（3）各種心肌酶的檢測(cè)，這些酶是發(fā)生了心肌梗死以后才出現(xiàn)的指標(biāo)異常，因而也失去了預(yù)防和監(jiān)測(cè)意義。（4）CRP在各種急性炎癥時(shí)出現(xiàn)，其升高幅度與感染的程度呈正相關(guān)，對(duì)于動(dòng)脈粥樣硬化炎癥缺乏特異性。只有Lp-PLA2的檢測(cè)能直接準(zhǔn)確的反映血管內(nèi)膜的炎癥程度，也就是動(dòng)脈粥樣硬化的嚴(yán)重程度，并且它是動(dòng)態(tài)的變化。第16頁(yè)，講稿共28頁(yè)，2023年5月2日，星期三3.醫(yī)學(xué)評(píng)價(jià)3.1醫(yī)學(xué)正常值根據(jù)臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)與統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，對(duì)照組Lp-PLA2(ng/ml)檢測(cè)數(shù)據(jù)為正態(tài)分布，在a=0.05檢驗(yàn)水準(zhǔn)下，制定單側(cè)95%醫(yī)學(xué)正常值為175ng/ml。依據(jù)這個(gè)正常值，檢測(cè)靈敏度為93.40%，特異度為92.8%，準(zhǔn)確度為97.0%。第17頁(yè)，講稿共28頁(yè)，2023年5月2日，星期三3.2產(chǎn)品評(píng)價(jià)產(chǎn)品是中國(guó)首家，國(guó)內(nèi)第一個(gè)上市產(chǎn)品，也是國(guó)家863高科技成果。第18頁(yè)，講稿共28頁(yè)，2023年5月2日，星期三

檢測(cè)方法簡(jiǎn)易、快捷（3h）、準(zhǔn)確、靈敏度高，重復(fù)性好。

價(jià)格優(yōu)勢(shì)：同類產(chǎn)品在美國(guó)普遍應(yīng)用，臨床的檢測(cè)收費(fèi)在250美元（人民幣1500），天津市物價(jià)局批復(fù)每人份380元。第19頁(yè)，講稿共28頁(yè)，2023年5月2日，星期三4.適應(yīng)科室及人群

4.1醫(yī)院科室門診部：內(nèi)科、外科。住院部：心內(nèi)科、神經(jīng)內(nèi)科、內(nèi)分泌科、神經(jīng)外科、老干科。急診部：內(nèi)科、外科。健康管理中心。第20頁(yè)，講稿共28頁(yè)，2023年5月2日，星期三4.2適用人群高危人群：冠心病、腦血栓、高血壓、高血脂癥、高粘血癥等患者及肥胖、煙酒過(guò)度、缺乏運(yùn)動(dòng)等人群的門診常規(guī)血液檢測(cè)。住院病人的常規(guī)血液檢測(cè)。

40歲以上人群體檢的常規(guī)血液檢測(cè)項(xiàng)目。第21頁(yè)，講稿共28頁(yè)，2023年5月2日，星期三5.樣本的采集用肝素或EDTA抗凝管或者不抗凝取血管抽取適應(yīng)癥患者靜脈血2-5ml送檢即可。第22頁(yè)，講稿共28頁(yè)，2023年5月2日，星期三6.ELISA原理6.1原理：ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的高效催化作用相結(jié)合起來(lái)的一種敏感性很高的新型免疫檢測(cè)技術(shù)。洗滌待測(cè)抗原第23頁(yè)，講稿共28頁(yè)，2023年5月2日，星期三第24頁(yè)，講稿共28頁(yè)，2023年5月2日，星期三6.2操作流程a.將試劑盒從冰箱中取出，在室溫中平衡片刻；b.加入20微升待測(cè)樣品（血清或血漿）或標(biāo)準(zhǔn)品于反應(yīng)孔內(nèi)，然后加入30微升稀釋液混和后覆膜，37℃溫育20分鐘(建議血清樣本可按比例先在離心管中充分混勻后再取50微升加入到反應(yīng)孔內(nèi)）；c.加入150微升酶標(biāo)記物，混和后覆膜37℃溫育120分鐘；d.除去孔內(nèi)液體，每孔加入300微升洗滌液，振蕩20-30秒后除去洗滌液，重復(fù)4次；第25頁(yè)，講稿共28頁(yè)，2023年5月2日，星期三

e.每孔加入顯色液100微升，混勻，37℃避光溫育20分鐘；

f.加入50微升終止液；

g.立即用酶標(biāo)儀在450納米波長(zhǎng)條件下測(cè)定各孔的OD值；

h.以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），Lp-PLA2標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的Lp-PLA2含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。第26頁(yè)，講稿共28頁(yè)，2023年5月2日，星期三研究展望人血漿脂蛋白相關(guān)磷