肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色體會

肝穿刺標(biāo)本檢查和處理原則1.肉眼觀察肝穿刺標(biāo)本呈完整園柱狀，長度1－3cm典型的慢性肝炎肝纖維化標(biāo)本呈竹節(jié)狀外觀肝硬化的穿刺標(biāo)本，呈不規(guī)則碎塊本文檔共39頁；當(dāng)前第1頁；編輯于星期二\19點(diǎn)28分2.石蠟切片每張玻片上應(yīng)放置超過6個連續(xù)組織切片，有助于肝纖維化的病理診斷。本文檔共39頁；當(dāng)前第2頁；編輯于星期二\19點(diǎn)28分3.染色除常規(guī)ＨＥ染色供病理診斷用之外，根據(jù)條件和需要作以下特殊染色：

①網(wǎng)狀纖維染色，

②Masson三色染色，

③膠原纖維染色(Siriusred或免疫組化)

本文檔共39頁；當(dāng)前第3頁；編輯于星期二\19點(diǎn)28分④Dm-HSC⑤α-SMA-MFb

Dmα-SMA本文檔共39頁；當(dāng)前第4頁；編輯于星期二\19點(diǎn)28分S1S2S3S4各種病因引起肝纖維的病理學(xué)特點(diǎn)及分期1.慢性肝炎肝纖維化(Dr.Scheuer方案）本文檔共39頁；當(dāng)前第5頁；編輯于星期二\19點(diǎn)28分活動性纖維間隔靜止性纖維間隔本文檔共39頁；當(dāng)前第6頁；編輯于星期二\19點(diǎn)28分脂肪性肝病肝纖維化穿刺肝組織呈淡黃色，標(biāo)本懸浮于固定液

小葉中央?yún)^(qū)纖維化竇周纖維化本文檔共39頁；當(dāng)前第7頁；編輯于星期二\19點(diǎn)28分3.肝糖原累積病肝纖維

本文檔共39頁；當(dāng)前第8頁；編輯于星期二\19點(diǎn)28分4.Wilson病紅氨酸(Rubeanicacid)染色,銅被染成深綠色本文檔共39頁；當(dāng)前第9頁；編輯于星期二\19點(diǎn)28分5.血色病

穿刺肝組織因含有大量含鐵血黃素沉著呈火焰紅色肝細(xì)胞普魯氏藍(lán)染色陽性本文檔共39頁；當(dāng)前第10頁；編輯于星期二\19點(diǎn)28分6.自身免疫性肝炎肝纖維化（AIH）

門管區(qū)肝細(xì)胞呈花環(huán)狀排列HepaticRosette，表現(xiàn)為數(shù)個水樣變性的肝細(xì)胞被炎癥細(xì)胞和塌陷的網(wǎng)狀支架包繞成花環(huán)狀結(jié)構(gòu)。本文檔共39頁；當(dāng)前第11頁；編輯于星期二\19點(diǎn)28分7.原發(fā)性膽汁性肝硬化（PBC）

3期（間隔期）90%出現(xiàn)自身抗體(A-Mit)，F(xiàn)loridductlesion+BiliaryPN，

纖維間隔形成，肝細(xì)胞羽毛狀變性4期（肝硬化）靜止-纖維間隔內(nèi)無炎癥或輕度炎癥活動–FibrousPN.本文檔共39頁；當(dāng)前第12頁；編輯于星期二\19點(diǎn)28分8.血吸蟲性肝纖維化

本文檔共39頁；當(dāng)前第13頁；編輯于星期二\19點(diǎn)28分肝癌(LIVERCANCER)HCCICCCombinedhepatocellularandcholangiocarcinoma本文檔共39頁；當(dāng)前第14頁；編輯于星期二\19點(diǎn)28分肝癌病理診斷常用免疫組化和特染HepPar1線粒體相關(guān)抗原，與AFP無關(guān)對胎兒和成人肝細(xì)胞高度特異(HCC:陽性率82-97%）

本文檔共39頁；當(dāng)前第15頁；編輯于星期二\19點(diǎn)28分AFPHCC陽性率：15-82%本文檔共39頁；當(dāng)前第16頁；編輯于星期二\19點(diǎn)28分CD34:HCC型染色長條分枝，管壁纖細(xì)，管腔狹窄，分布均勻彌漫.而非癌肝組織內(nèi)極少見.本文檔共39頁；當(dāng)前第17頁；編輯于星期二\19點(diǎn)28分CK18:HCC,ICC,Metastaticcarcinoma:100%+上皮性腫瘤標(biāo)志物本文檔共39頁；當(dāng)前第18頁；編輯于星期二\19點(diǎn)28分CK19:膽管型CK:CK19,CK7肝細(xì)胞－膽管上皮，ICC：77-100%ICC最好的標(biāo)志物本文檔共39頁；當(dāng)前第19頁；編輯于星期二\19點(diǎn)28分CEA：monoclonalCEA:毛細(xì)膽管－ICC，轉(zhuǎn)移性肝癌：60-75%+HCC:0-11%+polyclonalCEA:毛細(xì)膽管＋HCC特異標(biāo)志物之一

本文檔共39頁；當(dāng)前第20頁；編輯于星期二\19點(diǎn)28分CK20:胃腸道腺癌的主要標(biāo)志物轉(zhuǎn)移性腺癌：74-100%+ICC:10%+HCC:0%+本文檔共39頁；當(dāng)前第21頁；編輯于星期二\19點(diǎn)28分MOC31:抗人上皮相關(guān)抗原

轉(zhuǎn)移性腺癌：100%+ICC:92.9%+HCC:0%+胃癌肝轉(zhuǎn)移本文檔共39頁；當(dāng)前第22頁；編輯于星期二\19點(diǎn)28分HBsAg:HCC:70-80%+胞質(zhì)型，胞核型陽性胞質(zhì)型，核周型陽性本文檔共39頁；當(dāng)前第23頁；編輯于星期二\19點(diǎn)28分黏液染色：AB/PAS

酸性黏多糖：蘭色（膽管腺瘤,ICC腔內(nèi)黏液）中性黏多糖,糖原：紅色（假腺管型HCC)

本文檔共39頁；當(dāng)前第24頁；編輯于星期二\19點(diǎn)28分免疫組織化學(xué)染色的幾點(diǎn)體會一、組織和細(xì)胞標(biāo)本制備目的：(1)最大限度地保存組織結(jié)構(gòu)。(2)最大限度地保存抗原性。注意事項：在選擇組織處理方法前，先根據(jù)實驗?zāi)康模瑓⒖伎贵w說明，確定組織處理方式(冰凍?石蠟?)。本文檔共39頁；當(dāng)前第25頁；編輯于星期二\19點(diǎn)28分1.取材（1）原則：盡可能新鮮，動物標(biāo)本可選用動脈灌注固定。（2）取材部位：盡量包括病灶和正常組織交界處，避免選擇壞死組織。（3）避免擠壓：受擠壓組織不但影響HE切片的觀察，還造成非特異性免疫組化組織著色。本文檔共39頁；當(dāng)前第26頁；編輯于星期二\19點(diǎn)28分2.固定根據(jù)不同的染色目的，選擇不同的固定液，固定時組織越新鮮越好。組織塊厚薄大小要合適。容器要大,固定液要寬余.固定時間既要考慮充分固定,又不能太長(依組織塊厚薄大小從24hr至3～5天,太長可溶性抗原會滲漏,陽性會減弱甚至轉(zhuǎn)陰.選擇最合適的固定劑,如用福爾馬林,必須用緩沖福爾馬林本文檔共39頁；當(dāng)前第27頁；編輯于星期二\19點(diǎn)28分3.制備蠟塊沖水、脫水、透明、包埋。盡可能采用低溫石蠟包埋,如無低溫石蠟,可將組織塊盡可能修薄,以縮短脫水、透明、包埋時間,盡可能保存組織內(nèi)抗原穩(wěn)定。本文檔共39頁；當(dāng)前第28頁；編輯于星期二\19點(diǎn)28分4.制備冰凍切片冷凍包埋能較好保存抗原,新鮮及已固定材料均適合于冷凍包埋、切片?！锓乐贡Y(jié)晶!!!預(yù)處理:目的是減少組織中的水分以減少冰結(jié)晶的產(chǎn)生,方法是將已固定、沖洗的組織塊放入20～30%蔗糖緩沖液內(nèi),4℃冰箱過夜,再將組織塊埋于OCT包埋劑速凍:目的是使溫度很快下降迅速通過冰點(diǎn),防止冰結(jié)晶產(chǎn)生。本文檔共39頁；當(dāng)前第29頁；編輯于星期二\19點(diǎn)28分速凍方法液氮法:將OCT包埋的組織塊投入液氮數(shù)秒,等組織塊凍結(jié)后,立即移入低溫冰箱(裝入封口塑料袋內(nèi)密封)或放入恒冷切片機(jī)恒冷箱內(nèi)以備切片;干冰-丙酮法:將200ml丙酮注入小型廣口保溫瓶或保溫杯內(nèi),逐漸加入干冰至飽和不再冒泡為止,溫度可達(dá)-70℃;將裝有50ml異戊烷的小燒杯緩慢置入干冰-丙酮飽和液中;然后將OCT包埋的組織塊投入異戊烷內(nèi)速凍半分至一分鐘。本文檔共39頁；當(dāng)前第30頁；編輯于星期二\19點(diǎn)28分免疫組化染色后的襯染常用蘇木精或甲基綠襯染細(xì)胞核。但如果陽性信號在細(xì)胞核,切勿襯染細(xì)胞核!!!細(xì)胞質(zhì)襯染:1%亮綠,但退色較快,可改用堅固綠(FASTBLUE)染,則保存時間較長本文檔共39頁；當(dāng)前第31頁；編輯于星期二\19點(diǎn)28分封固和保存絕大多數(shù)免疫酶染色后都可用樹膠封固，但如用DAB以外的底物應(yīng)注意有色沉淀物如為脂溶性，應(yīng)改用水溶性封固物如明膠、甘油緩沖液等。酶免疫染色切片可保存數(shù)周甚至數(shù)月。免疫熒光染色后應(yīng)盡快觀察、拍照。本文檔共39頁；當(dāng)前第32頁；編輯于星期二\19點(diǎn)28分一.常用免疫組織化學(xué)方法免疫熒光:

用于培養(yǎng)細(xì)胞效果較好,石蠟切片因常有自發(fā)熒光,背景熒光較強(qiáng),用時要注意

FITC(異硫氰酸熒光素)用450～490nm光激發(fā),515nm濾片觀察,呈翠綠色

RB200(四乙基羅達(dá)明B200)用570nm光激發(fā),596～600nm濾片觀察,呈橘紅色

TRITC(四甲基異硫氰酸羅達(dá)明)用530～560nm光激發(fā),580nm濾片觀察,呈紅色

Texasred用595nm光激發(fā),615nm濾片觀察,呈紅色直接免疫熒光法:間接免疫熒光法雙重?zé)晒馊旧疚臋n共39頁；當(dāng)前第33頁；編輯于星期二\19點(diǎn)28分2.免疫組織化學(xué)常用方法:PAPABC或LSABELPS(二步法)本文檔共39頁；當(dāng)前第34頁；編輯于星期二\19點(diǎn)28分20世紀(jì)70年（1970）SternbergPeroxidase-anti-Peroxidase(PAP)本文檔共39頁；當(dāng)前第35頁；編輯于星期二\19點(diǎn)28分20世紀(jì)80年代（1981）許世民ABC（親和免疫組化）Avidin-Biotin-PeroxidaseComplex本文檔共39頁；當(dāng)前第36頁；編輯于星期二\19點(diǎn)28分90年代中期：EnhancedPolymerOneStep(EPOS)EnVision(EnhancedLabelledPolymerSystem,ELPS)簡稱二步法1mol含70molHRP+10molAB本文檔共39頁；當(dāng)前第37頁；編輯于星期二\19點(diǎn)28分如何做好免疫組化染色?什么才是高質(zhì)量的免疫組化染色?陽性信號突出無背景染色切片平整無破裂/碎,無污穢本文檔共39頁；當(dāng)前第38頁；編輯于星期二\19點(diǎn)28分做好免疫組化染色幾點(diǎn)體會1.組織細(xì)胞處理:

固定劑固定時間速凍防冰結(jié)晶白片質(zhì)量好:平整,無破裂/碎,無污穢防脫片:玻片絕對干凈涂粘合劑:

白膠多聚賴氨酸