核桃葉提取液對衰老模型小鼠記憶力的影響

核桃葉提取液對衰老模型小鼠記憶力的影響【摘要】［目的］觀察核桃葉提取液對小鼠記憶功能的影響.［方法］將84只小鼠隨機分為空白對照組、模型組、維生素E組和核桃葉提取液大、中、小劑量組，每組各為14只.給予小鼠皮下注射D-半乳糖建立衰老模型，核桃葉提取物各劑量組灌胃給予相應(yīng)劑量的核桃葉提取液，30d后利用Morris水迷宮儀觀察小鼠記憶能力.［結(jié)果］與模型組比較，核桃葉提取液各劑量組小鼠搜索站臺的潛伏期均明顯縮短，而穿越站臺的次數(shù)則明顯增加.［結(jié)論］核桃葉對D-半乳糖所致衰老模型小鼠的記憶功能具有一定的改善作用.

【關(guān)鍵詞】抗衰老藥；植物，藥用；小鼠

ABSTRACT:OBJECTIVEToobservetheeffectsoftheWalnutleafformemoryinmouse.METHODSThesenescencemodelofmicewasestablishedbysubcutaneousinjectionwiththeD-galactose.Total84micewererandomlydividedintocontrolgroup,modelgroup,VitaminEgroupandlarge,mediumandsmalldoseoftheWalnutleafextractgroups.ThemiceweregivenbyintragastricadministrationwithdifferentdoseoftheWalnutleafextractforthirtydays,andthentheabilityofmemorywasexaminedbytheMorriswatermaze.RESULTSThelatentperiodofsearchingplatformwasshortenedandexploratorybehaviorwasenhancedineverymedicationgroupascomparedwiththemodelgroup.CONCLUSIONTheWalnutleafextracthassomeeffectsofimprovingthememoryinsenescencemodelofmiceinducedbyD-glactose.

Keywords:antiagingdrugs(TCD);plants,medicinal;mice

核桃葉別名為胡桃葉，為胡桃科植物胡桃的葉.研究表明,核桃葉具有較好的體外抗菌作用，還具有抑制腫瘤細(xì)胞生長的作用［1，2］.本實驗采用D-半乳糖制作小鼠衰老模型，利用Morris水迷宮儀觀察了核桃葉提取液對小鼠記憶功能的影響，旨在為核桃葉的臨床應(yīng)用提供依據(jù).

1材料與方法

材料實驗動物取健康昆明種小鼠，雌雄各半，體重為(20±2)g，由延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)部實驗動物科提供.核桃葉水提取液：采集長白山地區(qū)核桃葉，曬干，粉碎，加水浸泡24h，水煎提取4次，合并提取液，濃縮得質(zhì)量濃度為10g/L的核桃葉生藥；D-半乳糖為國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司產(chǎn)品；維生素E為浙江醫(yī)藥股份有限公司產(chǎn)品.Morris水迷宮視頻分析系統(tǒng)及DigBehv動物行為分析系統(tǒng)為上海吉量軟件科技有限公司產(chǎn)品.

方法

動物分組及處理取84只健康昆明種小鼠，雌雄各半,適應(yīng)環(huán)境1周后按體重隨機分為6個組，即空白對照組、模型組、維生素E組和核桃葉提取液大、中、小劑量組，每組各為14只.每日給予除空白對照組外的其他各組小鼠皮下注射D-半乳糖g/kg，給予空白對照組小鼠皮下注射50mL/kg生理鹽水.同時,每日分別灌胃給予核桃葉水提取液大、中、小劑量組小鼠核桃葉水提取液12,6,3g/kg，灌胃給予維生素E組小鼠維生素E100mg/kg，模型組和空白對照組每日灌胃給予100mL/kg蒸餾水，連續(xù)30d.于第31日起利用Morris水迷宮視頻分析系統(tǒng)和DigBehv動物行為分析系統(tǒng)軟件測試記憶能力.

動物的訓(xùn)練與測試本實驗所用的通用Morris水迷宮是直徑為120cm，高為50cm的圓形水池,其內(nèi)壁為黑色，池內(nèi)水深為22cm，水溫保持在(22±2)℃，房間內(nèi)光照恒定，無光線反射在水面.池壁上以4個等距離點，即東、南、西、北將水池分為4個象限，分別稱為SW,NW,SE,NE象限.在NE象限正中，距池壁30cm處放置1個直徑為6cm,高為cm的圓形黑色站臺，站臺低于水面cm，迷宮上方安裝著連接顯示系統(tǒng)的攝像機.訓(xùn)練時間為4d，每日分上、下午時間段，其中上午為8:00～10:00,下午為13:00～15:00,每個時間段內(nèi)每組小鼠均連續(xù)訓(xùn)練2次，其間隔不短于10min.訓(xùn)練時將小鼠在南點面向池壁放入水中，開始計時,若小鼠在60s內(nèi)搜索到站臺并停留10s，則以其后的時間為潛伏期;若小鼠在60s內(nèi)未搜索到站臺，則將其引至站臺并停留10s，潛伏期記錄為60s［3］.于實驗第6日檢測各組小鼠長時程記憶功能,內(nèi)容包括定位游泳和空間搜索.游泳實驗時選擇SW象限的中心作為入水點，將小鼠面向池壁放入水中，檢測小鼠尋找站臺的潛伏期.間隔10min后撤除站臺，進(jìn)行空間搜索實驗.將站臺撤除后，同樣選擇SW象限的中心作為入水點，將小鼠面向池壁輕輕放入水中，觀察并記錄60s內(nèi)小鼠穿越原站臺位置的次數(shù).

統(tǒng)計學(xué)處理小鼠運動軌跡及測試結(jié)果的顯示處理均采用上海吉量軟件科技有限公司研制的動物行為分析軟件.所有數(shù)據(jù)從Morris水迷宮分析系統(tǒng)數(shù)據(jù)庫中調(diào)出，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)偏差（±SD)表示，組間比較采用t檢驗，統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS軟件進(jìn)行.

2結(jié)果

各組小鼠定向游泳時潛伏期的比較各組小鼠不同訓(xùn)練時段的潛伏期見表1.模型組與對照組相比較，第1～4日的潛伏期及平均潛伏期間無顯著性差異;核桃葉提取液大、中、小劑量組小鼠第1日的潛伏期較模型組明顯縮短,相比較均有顯著性差異，第2,3,4日的潛伏期及平均潛伏期間無顯著性差異.

各組小鼠記憶力的比較于實驗第6日檢測小鼠形成的空間記憶，結(jié)果見表2.由表2可見，與空白對照組相比，模型組小鼠搜索站臺的潛伏期和穿越站臺的次數(shù)不同程度地延長和增多，其中搜索站臺潛伏期的變化間有顯著性差異，提示模型制作成功.與模型組比較，維生素E組小鼠穿越站臺的次數(shù)明顯增多,組間比較有顯著性差異，但搜索站臺的潛伏期間無顯著性差異；各劑量核桃葉提取液組小鼠穿越站臺的次數(shù)均明顯增加，搜索站臺的潛伏期均明顯縮短,與模型組比較均有顯著性差異.表1各組小鼠定向游泳實驗中潛伏期的比較表2各組小鼠空間搜索能力的比較

3討論

學(xué)習(xí)記憶是腦的重要功能，藥物可直接作用于各種記憶過程，同時機體的各種精神活動如情緒、動機、內(nèi)分泌、活動水平及應(yīng)激狀態(tài)等也可間接影響記憶過程.D-半乳糖對學(xué)習(xí)記憶能力的影響在于代謝產(chǎn)物半乳糖醇在體內(nèi)不能被進(jìn)一步代謝而堆積在細(xì)胞內(nèi)，影響滲透壓導(dǎo)致細(xì)胞腫脹、代謝紊亂及體內(nèi)活性氧水平升高，導(dǎo)致細(xì)胞膜脂質(zhì)受損，出現(xiàn)腦神經(jīng)元退行性變化，包括神經(jīng)元數(shù)目減少、腦組織中SOD活性下降、MDA及脂褐素濃度升高、B型單胺氧化酶活性增高等變化，表現(xiàn)為學(xué)習(xí)記憶能力下降，這種變化與自然老齡小鼠相似［4］.學(xué)習(xí)記憶過程較復(fù)雜，而它的神經(jīng)基礎(chǔ)是神經(jīng)元之間的連接，并依靠突觸結(jié)構(gòu)、形態(tài)和功能的可塑性及合成學(xué)習(xí)記憶信息傳遞的載體，如乙酰膽堿、兒茶酚胺、γ-氨基丁酸、神經(jīng)肽等神經(jīng)遞質(zhì)有關(guān)［5］.這些學(xué)習(xí)記憶過程中必需的神經(jīng)遞質(zhì)又與各種營養(yǎng)素緊密相關(guān)，所以攝食調(diào)結(jié)在一定程度上可改善或促進(jìn)記憶力.核桃葉內(nèi)含有沒食子酸、縮沒食子酸、油酸、檸檬烯、胡桃葉醌、胡桃甙、5-羥色胺及黃酮等多種化學(xué)成分［6，7］，具有抗氧化作用［8］.目前，國內(nèi)外多采用建立條件反射的方法檢測動物的行為和腦的高級功能，其中水迷宮法的應(yīng)用較為廣泛.本研究結(jié)果表明，各劑量核桃葉提取液組小鼠在早期搜索站臺潛伏期均明顯縮短，增加小鼠穿越站臺的次數(shù)，提示核桃葉水提取液可明顯改善衰老模型小鼠空間位置覺和方向覺，改善記憶功能.

【參考文獻(xiàn)】

［1］姚振生,葉荷平,陳杰,等.野核桃葉提取物的體外抗菌作用［J］.江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2001,13(3):122.

［2］宋華,包永明,張紅梅,等.核桃楸葉提取液對腫瘤細(xì)胞的抑制作用［J］.大連輕工學(xué)院學(xué)報,2001,20(2):109.

［3］張莉,于瑋,韓太真,等.不同訓(xùn)練方式建立大鼠空間記憶后海馬結(jié)構(gòu)NMDA受體表達(dá)的變化［J］.生理學(xué)報,2006,58(5):442.

［4］駱靜,鄭陶冶,莫扎拜,等.火麻仁提取液對D-半乳糖致衰老模型小鼠學(xué)習(xí)記憶及代謝產(chǎn)物的影響［J］.北京師范大學(xué)學(xué)報,2003，39：386.

［5］徐項桂,?；?/p>