微柱凝膠技術(shù)在臨床血型鑒定和交叉配血中的應(yīng)用

微柱凝膠技術(shù)在臨床血型鑒定和交叉配血中的應(yīng)用【摘要】目的探討微柱凝膠技術(shù)在血型鑒定和交叉配血中的應(yīng)用。方法應(yīng)用微柱凝膠卡進(jìn)行血型鑒定及抗篩實(shí)驗(yàn)2160例,交叉配血548例。結(jié)果正反定型不一致206例，血型鑒定中Rh5例，不規(guī)則抗體篩查陽(yáng)性7例，血交叉主側(cè)不合1例,次側(cè)不合2例。結(jié)論微柱凝膠試驗(yàn)可作為血型和交叉配血的常規(guī)檢測(cè)方法。

【關(guān)鍵詞】微柱凝膠技術(shù)血型交叉配血抗體篩查

準(zhǔn)確的血型鑒定及交叉配血是臨床安全、有效輸血的重要保證。為了減少輸血反應(yīng)的發(fā)生，選擇一種安全有效、靈敏度高的配血方法就顯得至關(guān)重要。微柱凝膠檢測(cè)技術(shù)(MGI)是近幾年剛傳入我國(guó)的一種用于輸血前檢查的方法，是目前國(guó)際衛(wèi)生組織推薦的最先進(jìn)的微柱凝膠免疫檢測(cè)技術(shù)。本院血庫(kù)自2007年6至12月對(duì)住院擇期手術(shù)患兒采用微柱凝膠法進(jìn)行血型鑒定、交叉配血及抗體篩查試驗(yàn),現(xiàn)報(bào)告如下。

1臨床資料

一般資料本組2160例中男1230例，女930例；年齡0～6個(gè)月152例、6個(gè)月～1歲32例、1～13歲22例；均為本院2007年6～12月?lián)衿谧≡菏中g(shù)患兒。

試劑微柱凝膠卡、微柱凝膠多克隆抗人球卡、譜細(xì)胞、低離子液、離心機(jī)、孵育箱均由瑞士達(dá)亞美公司提供。A、B反定型細(xì)胞由本試驗(yàn)室自制。

檢測(cè)方法(1)血型鑒定：50μl、%A、B反定型細(xì)胞加入A1、B管中,50μl血漿加入A1、B管中；10μl、5%紅細(xì)胞懸液加入A、B、D、clt管中；離心10min,判讀結(jié)果。(2)不規(guī)則抗體篩查：微柱中分別加入譜細(xì)胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ各50μl；加入25μl血漿；37℃孵育15min，離心10min,判讀結(jié)果。(3)交叉配血：主側(cè)微柱加入50μl、%獻(xiàn)血者紅細(xì)胞及25μl受血者血漿；次側(cè)微柱加入50μl、%受血者紅細(xì)胞及25μl獻(xiàn)血者血漿；37℃孵育15min,離心10min,判讀結(jié)果。

2結(jié)果

血型鑒定共2160例，正反定型不一致206例；其中Rh5例。

不規(guī)則抗體篩查共2160例,其中陽(yáng)性7例。

交叉配血卡式交叉配血548例，其中主側(cè)不合而次側(cè)良好1例,主側(cè)良好而次側(cè)不合2例，此3例血樣鹽水法及凝聚胺法交叉配血主次側(cè)均不凝集。

3討論

微柱凝膠技術(shù)作為一項(xiàng)免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)，已在歐美等發(fā)達(dá)國(guó)家作為常規(guī)性檢測(cè)技術(shù)應(yīng)用于臨床［１，２］。其基本原理是利用微柱凝膠的微孔過(guò)濾作用和抗原抗體特異性反應(yīng)的作用通過(guò)離心技術(shù)，利用凝膠微柱層析分子排阻原則［３］將發(fā)生凝集反應(yīng)的紅細(xì)胞阻滯于凝膠之內(nèi)，而未凝集的單個(gè)紅細(xì)胞則穿過(guò)微孔運(yùn)動(dòng)至柱底，從而區(qū)分有無(wú)凝集。

微柱凝膠技術(shù)血型正定型具有檢測(cè)敏感性高、特異性強(qiáng)、結(jié)果準(zhǔn)確、易于觀察、影響因素少等特點(diǎn)，特別是對(duì)抗原性較弱的嬰兒紅細(xì)胞抗原檢測(cè)更表現(xiàn)出其優(yōu)越性［４］。由于嬰幼兒的ABO血型抗原較成人弱，僅有成人的1/4,用傳統(tǒng)的試管法鑒定血型時(shí),需要借助顯微鏡觀察才能判定結(jié)果,辨別困難且較繁瑣。而微柱凝膠法卻能用肉眼直接觀察到極弱的陽(yáng)性反應(yīng)(±),使肉眼不易察覺(jué)的凝集明顯化。說(shuō)明微柱凝膠血型鑒定法的高度敏感性，反定型時(shí)，微柱凝膠技術(shù)能使紅細(xì)胞抗原與極微弱的相應(yīng)的血型抗體發(fā)生陽(yáng)性反應(yīng),說(shuō)明微柱凝膠抗人球蛋白反應(yīng)介質(zhì)能加速和增強(qiáng)凝集反應(yīng),且凝集在微柱凝膠孔內(nèi)的紅色凝集顆粒清晰、明確,極易被觀察到,可作為反定型檢測(cè)低滴度血型抗體的有效方法［５］。由于新生兒出生時(shí)帶有來(lái)自母體的免疫球蛋白，免疫反應(yīng)相對(duì)較弱,故血型血清學(xué)檢測(cè)的難度較大,故作者對(duì)新生兒血型以檢測(cè)紅細(xì)胞抗原正定型為主。本試驗(yàn)中正反定型不一致及其年齡分布也反映了這一現(xiàn)象。

不規(guī)則抗體指ABO系統(tǒng)以外的其他血型抗體，是引起免疫性溶血性輸血反應(yīng)及造成配血困難的主要原因，在輸血前對(duì)受血者進(jìn)行抗體篩查有助于血液的選擇?？煞乐挂蜉斪⒑信c抗體相應(yīng)抗原的血液而引起溶血性輸血反應(yīng)；應(yīng)避免因找不到相吻合的血液而延誤治療，確保輸血者的輸血安全。但以往常用的酶法、抗人球蛋白法及凝聚胺法，均因洗滌費(fèi)時(shí)、操作繁瑣及影響因素較多，而不能在臨床推廣應(yīng)用。微柱凝膠法則克服了這些缺點(diǎn)，為臨床提供了一種有效、準(zhǔn)確、快速的不規(guī)則抗體鑒定方法。本實(shí)驗(yàn)室共檢出抗篩陽(yáng)性7例。其中1例交叉配血卡主側(cè)凝集、次側(cè)良好，而鹽水法和凝聚胺法主次側(cè)均良好。對(duì)該樣本進(jìn)行不規(guī)則抗體篩查，結(jié)果陽(yáng)性。2例交叉配血卡主側(cè)良好、次側(cè)凝集者，鹽水法和凝聚胺法主次側(cè)均良好，對(duì)該標(biāo)本，作者在微柱中僅加入受血者紅細(xì)胞懸液50μl，孵育后離心，結(jié)果顯示陽(yáng)性，說(shuō)明次側(cè)凝集是由于受血者自身抗人球蛋白陽(yáng)性造成，不影響輸血。4例送南京市中心血站作進(jìn)一步鑒定并進(jìn)行選擇性配血。因此作者建議對(duì)于抗篩陽(yáng)性患兒的血交叉必須用卡式法，以提高檢測(cè)靈敏度，避免鹽水法或凝聚胺法對(duì)不合者漏檢而引起輸血反應(yīng)。

為確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可靠，微柱凝膠技術(shù)對(duì)標(biāo)本的質(zhì)量也有嚴(yán)格的要求,如采集患兒標(biāo)本時(shí)未充分抗凝,使血漿中含有小凝塊?；虮患?xì)菌污染等,就有可能導(dǎo)致假陽(yáng)性。故最好要求臨床科室留取血樣必須新鮮,無(wú)溶血,并且要充分抗凝等。特別是不能隨意縮短離心時(shí)間,標(biāo)本必須離心,以免血清中的纖維蛋白絲影響試驗(yàn)結(jié)果及離心不徹底時(shí)血清中含纖維蛋白出現(xiàn)細(xì)胞“凝塊”，出現(xiàn)假陽(yáng)性。

綜上所述,微柱凝膠技術(shù)是一種安全、靈敏的免疫鑒定技術(shù)，它能很好地把免疫血清學(xué)技術(shù)與凝膠分子篩選技術(shù)有機(jī)結(jié)合起來(lái),簡(jiǎn)化了操作過(guò)程,并且結(jié)果清晰明了,易于判斷。最大限度消除了人為因素對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果便于保存和查詢，對(duì)提高用血質(zhì)量與安全發(fā)揮了明顯的促進(jìn)作用。是值得推廣應(yīng)用的方法［６，７］。

【參考文獻(xiàn)】

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6LangstonMM,ProcterJL,CipoloneKM,etofthegelsystemforABOgroupingandDransfusion,1999,39(