查新報(bào)告模版

科技查新報(bào)告項(xiàng)目名稱(chēng)：基于FQ-PCR的高通量貝類(lèi)病原生物檢測(cè)技術(shù)集成學(xué)生姓名：學(xué)號(hào)：所在院系：聯(lián)系方式：電話E-MAIL:中華人民共和國(guó)科學(xué)技術(shù)部二OO年制

查新項(xiàng)目名 稱(chēng)中文：基于FQ-PCR的高通量貝類(lèi)病原生物檢測(cè)技術(shù)集成央文：IntegratedFQ-PCR-basedtechniquesforhighthrough-putpathogenscreeninginmollusks―、查新目的計(jì)算機(jī)檢索課實(shí)習(xí)作業(yè)二、査新項(xiàng)目的科學(xué)技術(shù)要點(diǎn)隨著分子生物學(xué)尤其是DNA測(cè)序技術(shù)的發(fā)展，越來(lái)越多的貝類(lèi)病原生物的核苷酸序列被發(fā)表出來(lái)，利用這些序列信息和PCR技術(shù)，可以準(zhǔn)確、快速、低成本地檢測(cè)進(jìn)出口貝類(lèi)中存在的病毒、細(xì)菌和原生動(dòng)物等病原菌，為我國(guó)的對(duì)外經(jīng)貿(mào)服務(wù)。本項(xiàng)目的研究目的在于通過(guò)廣泛杳詢(xún)國(guó)際上主要的核苷酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)和其他專(zhuān)業(yè)文獻(xiàn)搜集各種以貝類(lèi)為佰主的病毒、細(xì)菌和原生動(dòng)物等病原生物的信息，根據(jù)這些信息選擇或開(kāi)發(fā)針對(duì)各種病原生物的PCR引物，建立基于熒光定量PCR法的快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、低成本的貝類(lèi)病原生物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)。二、查新點(diǎn)與查新要求査新點(diǎn)：1?用熒光定量PCR方法對(duì)病原生物進(jìn)行高通量檢測(cè)技術(shù)集成。2.病原生物主要包括病毒（如甲肝病?HAV、輪狀病毒Rotavirus和諾瓦克病毒Norwalkvirus）,細(xì)菌（如副溶血弧菌VibrioparahaemolyticUs原生動(dòng)物（如單抱子蟲(chóng)Haplosporidiumsp.派琴蟲(chóng)Perkinsussp和馬爾太蟲(chóng)Marteiliarefringer）查新要求：檢索國(guó)內(nèi)外是否有用FQ-PCR同時(shí)檢測(cè)貝類(lèi)中多種病原生物的報(bào)道。

四、文獻(xiàn)檢索范圍及檢索策略國(guó)內(nèi)數(shù)據(jù)庫(kù)重慶維普1.中文科技期刊數(shù)據(jù)庫(kù)1989-2010年萬(wàn)方數(shù)據(jù)資源系統(tǒng)2.中國(guó)學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)1977-2010年3.中國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)1983-2010年4.中國(guó)科技成果數(shù)據(jù)庫(kù)1983-2010年5.數(shù)子化期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù)1983-2010年中國(guó)知網(wǎng)6.中國(guó)期刊網(wǎng)全文數(shù)據(jù)庫(kù)1994-2010年7.中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)1984-2010年8.中國(guó)優(yōu)秀碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)1984-2010年9.中國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議在線（教育部科技發(fā)展中心）2000-2010年10.中國(guó)科技論文在線（教育部科技發(fā)展中心）2003-2010年11.國(guó)家科技圖書(shū)文獻(xiàn)中心（科學(xué)技術(shù)部）1989-2010年12.國(guó)家科技成果網(wǎng)（科學(xué)技術(shù)部）19782010年國(guó)外數(shù)據(jù)庫(kù)：DIALOG國(guó)際聯(lián)機(jī)1.SCI(ScienceCitationIndex)1990-2010年自有網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫(kù)2.DissertationAbstract1861-2010年3.NTIS-NationalTechnicalInformationService1964-2010年4.ConferencePapersIndex1982-2010年5.AGRISInternational1975-2010年6.AGRICOLA1979-2010年7.CABABSTRACTS1973-2010年8.BIOSISPreviews1969-2010年9.ASFA1:BiologicalSciencesandLivingResources1971-2010年10.ASFAAquacultureAbstracts1984-2010年11?ASFA:AquaticSciencesandFisheriesAbstracts1971-2010年12.Elsevieronline1823-2010年13.Proquest全文數(shù)據(jù)庫(kù)1986-2010年14.歐洲專(zhuān)利局(esp@cenet)(/)15.美國(guó)專(zhuān)利局USPTO(/)16.日本特許廳(http://www.jpo.go.jp/)17.PCT國(guó)際專(zhuān)利(/patentscope/)檢索策略：中文：策略一：熒光定量PCR方法*(病毒+細(xì)菌+原生生物)策略二：熒光定量PCR方法*(甲肝病毒+輪狀病毒+諾瓦克病毒+副溶血弧菌+單抱子蟲(chóng)+派琴蟲(chóng)+馬爾太蟲(chóng))策略三：熒光定量PCR方法*貝類(lèi)英文：策略一：(FQ-PCR+fluorescentquantitativePCR)*(HAV+Rotavirus+Norwalkvirus+virus+pathogenicorganism+Vibrioparahaemolyticus+Haplosporidiumsp.+Perkinsussp+Marteiliarefringens)策略二：(FQ-PCR+fluorescentquantitativePCR)*(mollusk+shellfish)五、檢索結(jié)果根據(jù)用戶(hù)提供的查新點(diǎn)和檢索詞，制定了上述中外檢索策略，查找了上述中外數(shù)據(jù)庫(kù)，篩選出相關(guān)文獻(xiàn)24篇。主要相關(guān)資料如下：1?貝類(lèi)中諾沃克病毒檢測(cè)方法普通RT-PCR方法和實(shí)時(shí)熒光RT-PCR方法作者：行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)商品檢驗(yàn)作者單位：文獻(xiàn)來(lái)源：中華人民共和國(guó)廣西出入境檢驗(yàn)檢疫J；中華人民共和國(guó)上海出入境檢驗(yàn)檢疫局發(fā)表時(shí)間：2005-08-18來(lái)源庫(kù)：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)摘要：本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了貝類(lèi)中諾沃克病毒普速T-PCR和實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于貝類(lèi)中諾沃克病毒的檢測(cè)。2?貝類(lèi)中諾如病毒SYBRGreenI實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)方法研究作者：蘇來(lái)金周德慶；馬麗萍；曹慧慧作者單位：農(nóng)業(yè)部海洋漁業(yè)資源可持續(xù)利用重點(diǎn)開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究中國(guó)海洋大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院文獻(xiàn)來(lái)源：中國(guó)食品學(xué)報(bào)發(fā)表時(shí)間：2009-12-30來(lái)源庫(kù)：期刊摘要:將諾如病毒(Noroviruses,NVs)RT-PCR寺異產(chǎn)物純化后與pGEM-T載體連接并轉(zhuǎn)化至感受態(tài)細(xì)胞DH5a,經(jīng)測(cè)序鑒定，提取陽(yáng)性克隆質(zhì)粒DNA,梯度稀釋后作為實(shí)時(shí)熒光定量PCR的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒。使用SYBRGreenI染料建立檢測(cè)貝類(lèi)中NVs的實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR方法。結(jié)果表明本方法標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍可達(dá)6個(gè)數(shù)量級(jí)(108?103拷貝),R2為0.9983比常規(guī)RT-PCR方法敏感100倍,且特異性良妊與貝類(lèi)中的輪狀病毒、甲肝病毒均不反應(yīng)匕內(nèi)和批間重復(fù)??3.貝類(lèi)產(chǎn)品中諾沃克病毒的實(shí)時(shí)熒^RT-PCR檢測(cè)方法研究作者：潘良文張舒亞；李曉虹；嚴(yán)羅美；李樹(shù)清；王巧全作者單位：上海出入境檢驗(yàn)檢疫局文獻(xiàn)來(lái)源：檢驗(yàn)檢疫科學(xué)發(fā)表時(shí)間：2004-10-25來(lái)源庫(kù)：期刊摘要：諾沃克病毒是一種分布很廣泛的腸道腹瀉病毒主要存在于牡蠣、文蛤等貝類(lèi)中。本研究建立了從貝類(lèi)中提取諾沃克病毒^NA的方法以及進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)的方法。4?貝類(lèi)中諾如病毒ELISA與熒光定量PCR檢測(cè)技術(shù)的研究作者：吳斌裴軼君；王剛；李葉作者單位：遼寧出入境檢驗(yàn)檢疫局大連水產(chǎn)學(xué)院文獻(xiàn)來(lái)源：中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志發(fā)表時(shí)間：2008-12-10來(lái)源庫(kù)：期刊摘要：目的貝類(lèi)中諾如病毒是世界范圍內(nèi)急性非細(xì)菌性流行性胃腸炎的重要病原。目前我國(guó)沿海地區(qū)也暴發(fā)了諾如病毒為了更準(zhǔn)確的檢測(cè)本文尋找和建立了貝類(lèi)產(chǎn)品中諾如病毒的快速檢測(cè)方法。方法用熒光定量PCR和ELISA法對(duì)大連地區(qū)的貝類(lèi)樣品進(jìn)行檢測(cè)。結(jié);:大連地區(qū)的貝類(lèi)樣品未檢測(cè)出諾如病毒。結(jié)論:通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明熒光定量PCR法和ELISA法都可用于快速檢測(cè)諾如病毒旦ELISA法更適于檢測(cè)諾如病毒含量低的樣品。5?貝類(lèi)中甲型肝炎病毒檢測(cè)方法普通.RT-PCR方法和實(shí)時(shí)熒光RT-PCR方法作者：國(guó)家質(zhì)檢總局作者單位：文獻(xiàn)來(lái)源：中華人民共和國(guó)北京出入境檢驗(yàn)檢疫中華人民共和國(guó)江蘇出入境檢驗(yàn)檢疫局發(fā)表時(shí)間：2008-08-12來(lái)源庫(kù)：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)摘要：本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了貝類(lèi)中甲型肝炎病毒的普通T-RCR和熒光RT-PCR檢測(cè)方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于貝類(lèi)中甲型肝炎病毒核酸的檢測(cè)。熒光定量RT-PCR在輪狀病毒檢測(cè)中的應(yīng)用【作者】王志宇；王健偉；何深一；孟紅；韓金祥；洪濤;【作者單位】山東大學(xué)醫(yī)學(xué)院寄生蟲(chóng)學(xué)教研室中國(guó)疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所山東省病毒學(xué)研究所山東省醫(yī)學(xué)病毒學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室暨衛(wèi)生部生物技術(shù)藥物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室山東濟(jì)南；【文獻(xiàn)出處】山東大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），JournalofShandongUniversity（HealthSciences）,編輯部郵箱2006年03期【中文關(guān)鍵詞】實(shí)時(shí)逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)輪狀病毒屬聚合酶鏈反應(yīng)【英文關(guān)鍵詞】Realtimereversetranscriptasepolymerasechainreaction;Rotavirus;Polymerasechainreaction;【摘要】目的:建立輪狀病毒的熒光定量<T-PCR檢測(cè)方法用于檢測(cè)臨床腹瀉樣本方法:使用Taqman探針技術(shù)建立輪狀病毒VP6特異的熒光定量RT-PCR體系。與WHO推薦的輪狀病毒檢測(cè)方法ELISA平行檢測(cè)!對(duì)該體系的檢測(cè)范圍、靈敏度、特異性等參數(shù)進(jìn)行評(píng)價(jià)。并將該體系用于臨床腹瀉樣本。果:該熒光定量RT-PCR體系具有高度靈敏度和特異性線性范圍寬最低可檢出1TCID50/m。對(duì)113份臨床腹瀉樣本的平行檢測(cè)結(jié)果顯示亥熒光定量RT-PCR體系與ELISA的檢出率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義x2=0.41,P>0.5）可同樣用于臨床樣本檢測(cè)。結(jié)論成功建立了輪狀病毒熒光定量RT-PCR體系，該體系靈敏、特異、重復(fù)性好可用于臨床檢測(cè)。水體中輪狀病毒實(shí)時(shí)熒光RT-PCR法檢測(cè)【作者】陳小岳；談立峰；吉俊敏；邵俊斌田海林；許曉國(guó)；【作者單位】江蘇省常州市疾病預(yù)防控制中心杭州博康生物科技有限公司蘇州大學(xué)放射與公共衛(wèi)生學(xué)院；【文獻(xiàn)出處】中國(guó)公共衛(wèi)生，ChineseJournalofPublicHealth編輯部郵箱2009年02期【中文關(guān)鍵詞】熒光值；實(shí)時(shí)熒光定量實(shí)時(shí)檢測(cè)；水體；輪狀病毒加標(biāo)回收；【基金】江蘇省常州市衛(wèi)生局科技項(xiàng)目2004019）【正文快照】輪狀病毒（Rotavitus,RV是引起嬰幼兒腸胃炎腹瀉）的最主要病原體全球每年約60萬(wàn)5歲以下兒童因輪狀病毒感染引起急性腹瀉而死!其中80%以上發(fā)生在發(fā)展中國(guó)家1］。輪狀病毒隨糞便排出體外后，容易進(jìn)入水體并穩(wěn)定存在2］較低數(shù)量的病毒即可引發(fā)感染所以輪狀病毒污染的水體對(duì)公TaqMan探針熒光定量PCR檢測(cè)櫛孔扇貝急性病毒性壞死病毒方法的建立和應(yīng)用【會(huì)議錄名稱(chēng)】2008年中國(guó)水產(chǎn)學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集2008年【作者】任偉成王崇明；【作者單位】中國(guó)海洋大學(xué)養(yǎng)殖系海水養(yǎng)殖生物疾病控制和病原分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)彳究院黃海水產(chǎn)研究所【會(huì)議名稱(chēng)】2008年中國(guó)水產(chǎn)學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)【會(huì)議地點(diǎn)】中國(guó)云南昆明【主辦單位】中國(guó)水產(chǎn)學(xué)會(huì)【學(xué)會(huì)名稱(chēng)】中國(guó)水產(chǎn)學(xué)會(huì)【關(guān)鍵詞】櫛孔扇貝;AVNVAVND;熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)FQ-PCR）;TaqMan探針；【論文摘要】根據(jù)櫛孔扇貝急性病毒性壞死病毒AcuteViralNecrobioticVirus,AVNV）保守序列應(yīng)用BeaconDesigner7.0設(shè)計(jì)了一對(duì)能特異性擴(kuò)增90bp片段的引物和TaqMan探針,建立并完善了AVNV的熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)FluorescentQuantitativePolymeraseChainReaction,FQ-PC診斷方法。該方法在AVNV核酸拷貝數(shù)為108?102范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系Ct值和AVNV核酸拷貝數(shù)X）的相關(guān)關(guān)系為:Ct=-3.401gX+45.18相關(guān)系數(shù)R2=0.998）檢測(cè)AVNV的靈敏度為102核酸拷貝數(shù)特異性實(shí)驗(yàn)表明只對(duì)AVNV基因組呈陽(yáng)性反應(yīng)。應(yīng)用該技術(shù)對(duì)樣品進(jìn)行檢灘果顯示在蝦夷扇貝、紫貽貝和長(zhǎng)牡蠣體內(nèi)均檢測(cè)到AVNV的存在。研究結(jié)果表明該方法快速、靈敏、特異、重復(fù)性良好且能實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確W量檢測(cè)，可用于AVNV感染疑似病例檢測(cè)、監(jiān)測(cè)AVNV的動(dòng)態(tài)分布及分子流行病學(xué)調(diào)查等。貝類(lèi)GI型扎幌樣病毒熒光定量3CR檢測(cè)作者：曾愛(ài)華梅寒芳；楊小蓉；金小寶；朱家勇作者單位：廣東藥學(xué)院藥科學(xué)院廣東藥學(xué)院基礎(chǔ)學(xué)院文獻(xiàn)來(lái)源：中國(guó)公共衛(wèi)生發(fā)表時(shí)間：2009-10-15來(lái)源庫(kù)：期刊摘要：目的建立貝類(lèi)中GI型扎幌樣病毒的熒光定量PCR檢測(cè)方法。方法通過(guò)用聚乙二醇6000(PEG6000對(duì)貝類(lèi)中扎幌樣病毒進(jìn)行濃縮用序列比對(duì)軟件設(shè)計(jì)出針對(duì)GI型扎幌樣病毒保守序列的通用引物與探針建立GI型扎幌樣病毒熒光定量PCR檢測(cè)方法。結(jié)果濃度為106?104,103,102?101拷貝/|jL的GI扎幌樣病毒檢出率分別為/3,1/3,0/3因此常規(guī)逆轉(zhuǎn)聚合酶鏈反應(yīng)RT-PCR最低檢出限為103拷貝/pL。此熒光定量PCR方法對(duì)貝類(lèi)中GI型扎幌樣病毒檢測(cè)高度特異.10?實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)貝類(lèi)中的札幌病毒作者：鄧恬寧潘良文；呂蓉；高琴；張舒亞盧鐘山作者單位：華東理工大學(xué)生物工程學(xué)院上海出入境檢驗(yàn)檢疫局文獻(xiàn)來(lái)源：食品科學(xué)發(fā)表時(shí)間：2009-10-15來(lái)源庫(kù)：期刊摘要:建立檢測(cè)貝類(lèi)中GI、GII、GW和GV型札幌病毒的實(shí)時(shí)熒^T-PCR新方法。首先使用PEG8000對(duì)貝類(lèi)中的札幌病毒進(jìn)行富集然后采用Tri-reagent提取材料中的總RNA,針對(duì)札幌病毒RNA3端含PolyA尾的特點(diǎn)使用帶有Poly(dT)25的磁珠對(duì)病毒RNA進(jìn)行純化用所獲的高純度RNA進(jìn)行四種型別札幌病毒的實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)。該方法高效、靈敏，檢測(cè)下限為101數(shù)量級(jí)拷貝能夠用于日常檢驗(yàn)。11.副溶血性弧菌LUX?(TM)熒光PCR快速檢測(cè)方法的建立【作者】許如蘇；陳茹；林彩華；楊梓堅(jiān)陳冠武【作者單位】汕頭出入境檢驗(yàn)檢疫局廣東局出入境檢驗(yàn)檢疫局【文獻(xiàn)出處】中國(guó)獸醫(yī)科學(xué)，ChineseVeterinaryScience編輯部郵箱2008年12期【中文關(guān)鍵詞】副溶血性弧菌LUXTM熒光PCR；TaqMan熒光PCR；【摘要】根據(jù)LUXTM熒光PCR技術(shù)原理針對(duì)副溶血性弧菌toxR基因的保守序列設(shè)計(jì)了特異的LUXTM熒光標(biāo)記引物通過(guò)優(yōu)化反應(yīng)條件與參數(shù)建立了可快速檢測(cè)副溶血性弧菌白LUXTM熒光PCR方法。結(jié)果顯示該方法高度敏感對(duì)純菌的檢測(cè)低限達(dá)到每個(gè)反應(yīng)體系個(gè)菌(CFU)經(jīng)6h增菌培養(yǎng)后檢測(cè)，對(duì)樣品的檢測(cè)低限CFU)達(dá)到100/25g特異性強(qiáng)對(duì)副溶血性弧菌2株標(biāo)準(zhǔn)菌株和10株參考菌株的檢驗(yàn)均呈陽(yáng)性而對(duì)霍亂弧菌等28株非目標(biāo)菌的檢測(cè)均呈陰性重復(fù)性妊定量檢測(cè)的批內(nèi)和批間變異系數(shù)均小于1%。應(yīng)用此方法檢測(cè)水產(chǎn)樣品103份,檢出陽(yáng)性樣品6份，與TaqMan熒光PCR和SN標(biāo)準(zhǔn)的檢測(cè)結(jié)果完全一致。用此方法可在h內(nèi)完成對(duì)樣品中副溶血性弧菌的檢漱檢測(cè)的快速性、敏感性和特異性與TaqMan熒光PCR技術(shù)相當(dāng)，但檢測(cè)成本更低。12?實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)水產(chǎn)品中副溶血性弧菌【作者】史煜曼；陳少青；翁奕敏；倪肖琴【作者單位】揭陽(yáng)市疾病預(yù)防控制中心中山大學(xué)附屬第二醫(yī)院【文獻(xiàn)出處】中國(guó)微生態(tài)學(xué)雜志，ChineseJournalofMicroecology編輯部郵箱2009年07期【中文關(guān)鍵詞】水產(chǎn)品；副溶血性弧菌實(shí)時(shí)熒光PCR；【英文關(guān)鍵詞】Aquaticproducts；Vibrioparahemolyticus；Real-timefluorescencePCR；【摘要】目的探索副溶血性弧菌快速檢測(cè)法應(yīng)用于日常監(jiān)測(cè)及食物中毒的快速查源。方法用副溶血性弧菌實(shí)時(shí)熒光試劑盒對(duì)水產(chǎn)品樣本進(jìn)行檢馭副溶血性弧菌toxR基因?yàn)榘行蛄性O(shè)計(jì)1對(duì)引物和探針，采用熱裂解法提取DNA。結(jié)果實(shí)時(shí)熒光PCR從42份水產(chǎn)品樣品的增菌液中檢出13份樣品副溶血性弧菌陽(yáng)性與傳統(tǒng)培養(yǎng)法相比一致性極好K=0.943,K>0.75)結(jié)論實(shí)時(shí)熒光PCR方法在副溶血性弧菌的檢驗(yàn)方面較傳統(tǒng)方法具有快速、靈敏、特異性強(qiáng)等優(yōu)，具有廣闊的應(yīng)用前景。13.實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)副溶血弧菌致病基因【作者】張紅河；范建中；張衛(wèi)英；董曉勤；王賢軍；陳瑜；【作者單位】溫州醫(yī)學(xué)院檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)院杭州市第一人民醫(yī)院浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院浙江溫州;浙江杭卅【文獻(xiàn)出處】中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，ChineseJournalofNosocomiology編輯部郵箱2006年11期【中文關(guān)鍵詞】聚合酶鏈反應(yīng)副溶血弧菌致病基因；【摘要】目的建立一種快速、準(zhǔn)確、特異、定量檢測(cè)副溶血弧菌及其致病因子的方法。方法選擇胃血弧菌TLH、TDH和TRH基因作為靶序列設(shè)計(jì)并合成引物和探針收集疑似食物中毒導(dǎo)致腹瀉患者糞便標(biāo)本487份，并對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)分析結(jié)果采用熒光聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)TLH和TDH基因的靈敏度為1.0X102拷貝,而檢測(cè)TRH的靈敏度為1.0X103拷貝;487份糞便標(biāo)本中檢出副溶血弧菌TLH基因112例(23.0%)檢出攜帶TDH基因菌株101例(90.2%)未檢出TRH基因。結(jié)論應(yīng)用Taqman探針實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)能夠快速、準(zhǔn)確檢測(cè)副溶血弧菌及其致病基I適合于大樣本篩查臨床分離的副溶血弧菌以攜帶TDH基因?yàn)橹鳌?4.食品中副溶血弧菌實(shí)時(shí)熒池CR快速檢測(cè)方法的建立【作者】徐德順；吳曉芳查云峰【作者單位】湖州市疾病預(yù)防控制中心【文獻(xiàn)出處】浙江預(yù)防醫(yī)學(xué)，ZhejiangJournalofPreventiveMedicin^S輯部郵箱2009年01期【中文關(guān)鍵詞】熒光強(qiáng)度；副溶血弧菌金黃色葡萄球菌重復(fù)檢測(cè)；熒光定量引物；實(shí)時(shí)；特異性;【基金】湖州市科技計(jì)劃項(xiàng)目2007YS15)【正文快照】實(shí)時(shí)熒光PCR(Real-timePCR)是近幾年興起的分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)。其檢測(cè)靈敏性高特異性好且操作簡(jiǎn)便出結(jié)果快。在眾多現(xiàn)代檢測(cè)技術(shù)中脫穎而出成為檢測(cè)領(lǐng)域中越來(lái)越重要的一種快速檢測(cè)手段。我們針對(duì)副溶血弧菌的屬特異性基因/rB基因設(shè)計(jì)引物和探針。15?實(shí)時(shí)熒光定量PCR法與常規(guī)PCR法及細(xì)菌培養(yǎng)法檢測(cè)副溶血弧菌的比較【作者】高學(xué)祥；韋幫海；徐海虹；【作者單位】合肥市第三人民醫(yī)院檢驗(yàn)科【文獻(xiàn)出處】中華實(shí)用診斷與治療雜志,2009年09期【中文關(guān)鍵詞】副溶血弧菌聚合酶鏈反應(yīng)熒光定量PCR;【摘要】目的:比較實(shí)時(shí)熒光定量PCR法、常規(guī)PCR法及細(xì)菌培養(yǎng)法檢測(cè)副溶血弧菌的靈敏度與特異性。方法采用建立的實(shí)時(shí)熒光定量3CR、常規(guī)PCR及傳統(tǒng)細(xì)菌培養(yǎng)法3種方法同時(shí)對(duì)副溶血弧菌等細(xì)菌進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果:實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)的靈敏度可達(dá)19cfu/mL且有很高的特異性對(duì)金黃色葡萄球菌等10種相關(guān)細(xì)菌均無(wú)交叉反應(yīng)從細(xì)菌核酸提取至完成檢測(cè)僅需h左右。結(jié)論:實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)由于在密封環(huán)境中進(jìn)行避免了產(chǎn)物與環(huán)境間的交叉污染是3種方法中最為快速敏感的方法適用于公共衛(wèi)生應(yīng)急疫情的實(shí)驗(yàn)室快速診斷。快速熒光定量PCR檢測(cè)副溶血性弧菌及其毒力基因方法建立與應(yīng)用效果評(píng)價(jià)的研究【作者】王忠發(fā)；顧松葉；王虹玲【作者單位】浙江省舟山市疾病預(yù)防控制中心【文獻(xiàn)出處】中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2009年08期【中文關(guān)鍵詞】快速熒光定量PCR;副溶血性弧菌tlh.tdh、trh基因檢測(cè)；應(yīng)用效果評(píng)價(jià)【摘要】目的:建立一種快速、特異、靈敏、定量檢測(cè)副溶血性弧菌及其毒力基因的方法于副溶血弧菌性食物中毒的應(yīng)急檢測(cè)。方法艮據(jù)GenBank中副溶菌(AY-289609全基因序列上不耐熱溶血素基因(仕h)、耐熱直接溶血素基因tdh)、耐熱相關(guān)溶血素基因trh)為靶序列設(shè)計(jì)引物與Tagman探針并對(duì)模板DNA制備方法和PCR反應(yīng)時(shí)間進(jìn)行改進(jìn)與優(yōu)化以提高檢測(cè)速|(zhì)采集食物中毒樣本與國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)平行比對(duì)。結(jié)果:本方法檢測(cè)時(shí)間僅需30min。檢出限2X101cfu/m1定量線性范圍2X103cfu/ml~2X108cfu/ml對(duì)77份患者糞便增菌前后平行檢測(cè)結(jié)果顯示該方法檢出率明顯高于國(guó)家標(biāo)方法并具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義X2=58.80,Pv0.01x2=42.98,Pv0.01)與7種常見(jiàn)腸道細(xì)菌均無(wú)反應(yīng)。對(duì)6個(gè)濃度的副溶血弧菌測(cè)定的批內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差在.10?0.56之間。結(jié)論該方法可在30min內(nèi)完成糞便中副溶血性弧菌的tlh、tdh、trh的檢測(cè)，具有靈敏度高、特異性好、結(jié)果穩(wěn)定、抗雜菌與藥物干擾能力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)。非常適合食物中毒的應(yīng)急檢測(cè)。貝類(lèi)單抱子蟲(chóng)熒光定量3CR檢測(cè)方法的建立作者：謝麗基謝芝勛；龐耀珊；劉加波;鄧顯文；謝志勤作者單位：廣西獸醫(yī)研究所文獻(xiàn)來(lái)源：西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)發(fā)表時(shí)間：2010-02-28來(lái)源庫(kù)：期刊摘要：根據(jù)基因庫(kù)中單抱子蟲(chóng)的基因保守序殞計(jì)了1對(duì)特異性引物和1條TaqMan探針，對(duì)反應(yīng)條件和試劑濃度進(jìn)行優(yōu)化建立了檢測(cè)單抱子蟲(chóng)的熒光定量PCR方法。該方法對(duì)單抱子蟲(chóng)的檢測(cè)敏感性達(dá)到40拷貝數(shù)比常規(guī)PCR敏感性高100倍;對(duì)派琴蟲(chóng)、折光馬爾太蟲(chóng)、熒光假單胞菌、副溶血弧菌、、［藻弧菌、河弧菌和擬態(tài)弧菌等病原體的檢測(cè)結(jié)果全為陰性。表明該研究建立的單抱子蟲(chóng)熒光定CR具有特異、敏感、快速、定量和重復(fù)性好等優(yōu)，可用于臨床單抱子蟲(chóng)感染的快速檢測(cè)。

貝類(lèi)奧爾森派琴蟲(chóng)實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法的建立及初步應(yīng)用作者：謝芝勛謝麗基;劉加波；謝志勤；龐耀珊；鄧顯文作者單位：廣西獸醫(yī)研究所文獻(xiàn)來(lái)源：中國(guó)病原生物學(xué)雜志發(fā)表時(shí)間：2009-07-30來(lái)源庫(kù)：期刊摘要：目的建立一種快速、靈敏、特異的用于檢測(cè)貝類(lèi)奧爾森派琴蟲(chóng)的實(shí)時(shí)熒光定CR方法。方法根據(jù)基因庫(kù)中奧爾森派琴蟲(chóng)的基因保守序殺計(jì)合成1對(duì)引物和1條TaqMan探針，建立熒光定量PCR方法，對(duì)采自廣西沿海的49份貽貝標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)并與常規(guī)PCR比較。結(jié)果建立的熒光定量PCR方法靈敏度可達(dá)20個(gè)拷貝，比常規(guī)PCR靈敏度高100倍。49份貽貝標(biāo)本的陽(yáng)性率為16.3%檢測(cè)的奧爾森派琴蟲(chóng)基因組DNA含量為2.38X106?9.21X102拷貝/“I。結(jié)論建立的熒光定量PCR方法可貝類(lèi)派琴蟲(chóng)實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法的建立和應(yīng)用作者：吳紹強(qiáng)李海艷；林祥梅；鄭騰；李西峰；劉建；梅琳；韓雪清；賈廣樂(lè)作者單位：中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)福建出入境檢驗(yàn)檢疫局黃島出入境檢驗(yàn)檢疫局文獻(xiàn)來(lái)源：漁業(yè)科學(xué)進(jìn)展發(fā)表時(shí)間：2009-10-15來(lái)源庫(kù)：期刊摘要：選擇派琴蟲(chóng)保守的核糖他NAITS-2區(qū)域設(shè)計(jì)引物和TaqMan探針,通過(guò)對(duì)反應(yīng)體系和反應(yīng)條件進(jìn)行優(yōu)化建立了實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)派琴蟲(chóng)的方法。所構(gòu)建方法檢測(cè)質(zhì)粒模板DNA的動(dòng)態(tài)范圍為2.6X101?2.6X107拷貝，敏感度可檢測(cè)到26拷貝質(zhì)粒DNA,而且與包拉米原蟲(chóng)、隱抱子蟲(chóng)等其他寄生性原蟲(chóng)無(wú)交叉反應(yīng)也不受貝類(lèi)組織DNA的干擾。利用本研究所建立的方法對(duì)來(lái)自我國(guó)山東、福建€不同沿海海域的30份貝類(lèi)樣品進(jìn)行檢測(cè)檢出陽(yáng)性樣品3份。研究表明本研究所構(gòu)建的派琴蟲(chóng)實(shí)時(shí)熒光...19.貝類(lèi)派琴蟲(chóng)LUX熒光PCR檢測(cè)方法的建立作者：許遐李海艷；王彩霞；吳紹強(qiáng)作者單位：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院文獻(xiàn)來(lái)源：中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2009學(xué)術(shù)年會(huì)論文集（上冊(cè)）發(fā)表時(shí)間：2009-10-11來(lái)源庫(kù)：會(huì)議摘要:為了滿(mǎn)足貝類(lèi)派琴蟲(chóng)病的快速檢測(cè)需！本研究選擇派琴蟲(chóng)保守的核糖體DNAITS-2區(qū)域設(shè)計(jì)引物，通過(guò)對(duì)反應(yīng)體系和反應(yīng)條件的優(yōu)禾首次建立了LUX熒光PCR檢測(cè)派琴蟲(chóng)的方法。試驗(yàn)表明所建立方法檢測(cè)質(zhì)粒模板DNA的動(dòng)態(tài)范圍為1.0X10?1?1.0X10?8,敏感性為10拷貝質(zhì)粒DNA。采用模擬陽(yáng)性樣品試驗(yàn)可檢測(cè)到100拷貝質(zhì)粒DNA。而且與貝類(lèi)的包拉米原蟲(chóng)、隱抱子蟲(chóng)等其它寄生性,蟲(chóng)無(wú)交叉反應(yīng)也不受組織DNA的干擾。50份采集樣品的檢測(cè)結(jié)果與RFTM培養(yǎng)方法一致。本研..20.貝類(lèi)派琴蟲(chóng)實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)方法的建立和應(yīng)用作者：李海艷吳紹強(qiáng)；林祥梅；鄭騰；李西峰作者單位：中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)福建出入境檢驗(yàn)檢疫局黃島出入境檢驗(yàn)檢疫局文獻(xiàn)來(lái)源:中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2008年學(xué)術(shù)年會(huì)暨第六屆全國(guó)畜牧獸醫(yī)青年科技工作者學(xué)術(shù)研討會(huì)論〔集發(fā)表時(shí)間：2008-11-01來(lái)源庫(kù)：會(huì)議摘要：派琴蟲(chóng)病Perkinsosis是影響貝類(lèi)養(yǎng)殖業(yè)的主要疾病之承統(tǒng)的液體巰基乙酸鹽培養(yǎng)基FTM）培養(yǎng)方法耗時(shí)過(guò)長(zhǎng)而且敏感性較低。本研究在FTM培養(yǎng)方法的基礎(chǔ)上選擇派琴蟲(chóng)保守的核糖體DNAITS-2區(qū)域設(shè)計(jì)引物和TaqMan探針，建立了實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)派琴蟲(chóng)的方法。所構(gòu)建方法檢測(cè)質(zhì)粒模板DNA的動(dòng)態(tài)范圍為2.6X10?1?2.6X10?7敏感度可檢測(cè)到26拷貝質(zhì)粒DNA而且與包拉米原蟲(chóng)、隱抱子蟲(chóng)等其它寄生性原蟲(chóng)無(wú)交叉反融不受貝類(lèi)組織DNA的干擾。利..21.FasterdetectionofVibrioParahaemolyticusinfoodsbyFQ-PCRtechniqi熒］光PCR技術(shù)快速檢測(cè)食品中副溶血弧菌。作者:Jiao,Hong；Weng，Wen-Chuan；Wang，F(xiàn)ang-Jin；Cheng，Gang；Wang，Weiyi；Xie，Junxian來(lái)源出版物WeiShengYanJiu卷:34 期:4 頁(yè):457-60出版年2005Jul摘要：OBJECTIVE:ToestablisharapidandaccuratequalitativeandquantitativemethodtodetectVibrioceasParahaemolyticusinfood.METHODS:PrimersandTaqmanprobeweredesignedaccordingtothesequenceasofVibriowasclonedintoPTMvectorandwasused

ofVibrioceaepositivetemplateforestablishingthecriterioncurve.Thesimulatedsamples,madefromnegativefoodsampleswithVibrioParahaemolyticuspositivestrain,wereusedtoevaluatethesensitivityofthePCRreaction.8VibrioParahaemolyticusstandardstrainsandother24negativestrains(8strainswereVibrionaotherthanVibrioParahaemolyticus,therest16strainswerenone-Vibrionaceae)weretreatedinthesamewaytoevaluatethespecificity.AllsamplesweredetectedwithPE7000sequencedetectionsystemandDA620fluorescenedetectionsystem.RESULTS:FQ-PCRmethodhadgoodspecificityandhighsensitivity.All8strainsofVibrioParahaemolyticustestedshowedpositiveresultswhileallother24strainswerenegative(strainswereVibrionaceae,16strainwerefromdifferent).Thecorrelationwas0.9871betweentheceaedty?tconcentrationofpositivetemplateandthequantitativecurvecircularthreshold.ThethresholdfordetectingVibrioParahaemolyticusinpurecultureis10cfu/ml,andthethresholdisaslowas2cfu/mlwith16simulativesamplesafterthesesampleswereincubatedforaperiodoftime.Bydirectquantitativedetectionforuncultured16foodsamples,thethresholdis100cfu/g.CONCLUSION:FQ-PCRmethodhashighsensiti、andspecificity,anditisahandyandrapiddetectionmethod.ComparingwithregularPCRmethod,itisnodty?t22.題名 AnewfluorescentquantitativePCR-basedinvitroneutralizationassayforwhitespotsyndromevirus熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)白斑綜合癥病毒。作者Yuan,L;Zhang,X;Chang,M;Jia,C;Hemmingsen,SM;Dai,H單位ChineseAcademyofSciences,EastLakeSouthernRoad#7,Wuhan430072,Hubei,PRChina,hpdai@來(lái)源JournalofVirologicalMethods[J.Virol.Methods].Vol.146,no.1-2,pp.96-103.Dec2007.文摘 AfluorescentquantitativePCR(FQ-PCR)assayutilizingSYBRgreenIdyeisdescribedortoforquantitationofwhitespotsyndromevirus(WSSV)particlesisolatedfrominfectedcrayfish,Cambarusclarkii.Forthisassay,aprimersetwasdesignedwhichamplifies,withhighefficiencyandspecificity,a129bptargetsequencewithinORF167oftheWSSVgenome.Conveniently,WSSVparticlescanbeaddedintotheFQ-PCRassaywithasimpleandconvenientmethodtoreleaseitsDNA.Toestablishthebasisforaninvitroneutralizationtest,primaryculturesofshrimpcellswerechallengedwithWSSVthathadbeenincubatedwithapolyclonalanti-WSSVserumorwithcontrolproteins.ThenumberofWSSVparticlesreleasedfromthecellsafterthesetreatmentswereassayedbyFQ-PCR.Thistestmayserveasamethodtoscreenmonoclonalantibodypoolsorrecombinantantibodypoolsforneutralizingactivitypriinvivoanimalexperiments.orto23.題名 ComparativeevaluationofnewTaqManreal-timeassaysforthedetectionofhepatitisAvirus實(shí)時(shí)探針RT-PCR技術(shù)分析肝炎23.題名 ComparativeevaluationofnewTaqManreal-timeassaysforthedetectionofhepatitisAvirus實(shí)時(shí)探針RT-PCR技術(shù)分析肝炎A病毒。作者單位Quebec來(lái)源2007.文摘Houde,A;Guevremont,E;Poitras,E;Leblanc,D;Ward,P;Simard,C;Trottier,FoodResearchandDevelopmentCentre,3600CasavantBlvd.West,Saint-Hyacinth*,J2S8E3,Canada,houdea@agr.gc.caJournalofVirologicalMethods[J.Virol.Methods].Vol.140,no.1—2,pp.80—89.MarYLThreenovelreal-timeTaqManRT-PCRassaystargetingthe5'-UTR,theviralproteaseatedandtheviralpolymeraseregionsofthehepatitisAvirus(HAV)weredeveloped,evaluandcomparedagainstanewpublished5'-UTRTaqManassay(JN)andawidelyusedconventionalRT-PCRassay(HAVc).AllconventionalRT-PCR(HAV,SH-ProtandSH-Polysystems)andT(SH-Prot,SH-Poly,JNandSH-5Usystems)assaysevaluatedwereconsistentforthedetectionofthethreedifferentHAVstrains(HM-175,HAS-15andLSH/S)usedandreproducibleforbothRNAduplicateswiththeexceptionoftworeproducibilitydiscrepanciesobservedwithaqManboth5'-UTRreal-timesystems(JNandSH-5U).LimitsofdetectionforconventionalHAV,SH-ProtandSH-PolyRT-PCRsystemswerefoundtobeequivalentwhentestedwithseriallydilutedsuspensionsoftheHM-175strain.Althoughthefourreal-timeRT-PCRTaqManassaysevaluated

hereinproducedsimilarandconsistentquantificationdatadowntothelevelofonegenomicequivalentcopywiththeirrespectivelyclonedamplicons,significantandimportantdifferenceswereobservedforthedetectionofHAVgenomicRNA.Resultsshowedthattireal—timeTaqManSH—PolyandSH—Protprimerandprobesystemsweremoreconsistentansensitiveby5logsascomparedtoboth5'-UTRdesigns(JNandSH-5U)usedforthedetectionofHAVgenomicRNAaswellasforthedetectionincellculturebycytopathiceffect.Consideringtheirhigheranalyticalsensitivity,theproposedSH—PolyandSH—ProtamplificationsystemscouldthereforerepresentvaluabletoolsforthedetectionofH.clinical,environmentalandfoodsamples.24.題名 DetectionandquantificationofhepatitisAvirusinseawaterviareal-timeRT—PCR實(shí)時(shí)RT-PCR技術(shù)分析海水中肝炎A病毒。作者Brooks,HA;Gersberg,RM;Dhar,AK單位SanDiegoStateUniversity,SanDiego,California,CA,USA,adhar@abn—來(lái)源JournalofVirologicalMethods[J.Virol.Methods].Vol.127,no.2,pp.109—118.Aug2005.文摘Areal-timeRT—PCRmethodutilizingSYBRGreenchemistrywasdevelopedtodetectandenumeratehepatitisAvirus(HAV)inoceanwater.Oceanwatersamplesweretakena11heTijuanaRivermouth(Tijuana,Mexico)andImperialBeachpier(1.4kmnorthoftheTijua