Cytiva：層析介質(zhì)壽命和清潔驗(yàn)證綜合設(shè)計(jì)的良好實(shí)踐白皮書

2清潔和保存驗(yàn)證的綜合設(shè)計(jì)4的開(kāi)發(fā)4清潔工藝的放大7的壽命和清潔驗(yàn)證7層析介質(zhì)壽命驗(yàn)證的設(shè)計(jì)8層析介質(zhì)縮小模型的清潔驗(yàn)證的設(shè)計(jì)11層析介質(zhì)壽命和清潔驗(yàn)證綜合設(shè)計(jì)案例13層析介質(zhì)商業(yè)化規(guī)模的清潔驗(yàn)證14商業(yè)化規(guī)模清潔驗(yàn)證案例15持續(xù)監(jiān)控和維持16166散裝條件下的層析介質(zhì)保存驗(yàn)證17裝柱條件下的層析介質(zhì)保存驗(yàn)證17生產(chǎn)工藝的預(yù)防步驟181920合格的供應(yīng)商具有充實(shí)的研究數(shù)據(jù)20污染物控制的數(shù)據(jù)21結(jié)論23縮略語(yǔ)23參考文獻(xiàn)24在整個(gè)生物藥物生產(chǎn)工藝中，層析介質(zhì)是至關(guān)重要的原材料。層析介質(zhì)對(duì)于實(shí)現(xiàn)生物制品的純度、有效性以及安全性都非常重要，需要對(duì)其進(jìn)行足夠的控制以實(shí)現(xiàn)工藝性對(duì)于生物藥物工藝，大多數(shù)時(shí)候?qū)游鼋橘|(zhì)是特定于專用產(chǎn)品使用，但通常會(huì)選擇多循環(huán)次數(shù)使用。從工藝經(jīng)濟(jì)性角度，如果能夠使用層析介質(zhì)至一定的循環(huán)次數(shù)，再使用層析介質(zhì)的多循環(huán)使用使得在生物藥物的注冊(cè)審評(píng)以及常規(guī)的生產(chǎn)檢查中，層析介質(zhì)FDA人用單克隆抗體產(chǎn)品的生產(chǎn)和分析考用重組單克隆抗體制品總論”中也提到需要驗(yàn)證純化用材料(如色譜柱介質(zhì))的重復(fù)適盡管眾多法規(guī)對(duì)層析介質(zhì)的壽命、清潔和保存都提出了要求，但近幾年的FDA483表格還是有不少針對(duì)層析介質(zhì)驗(yàn)證的審查評(píng)論(表1-1)[4]。層析介質(zhì)驗(yàn)證的問(wèn)題在各種會(huì)議上持續(xù)的被討論，以及在監(jiān)管機(jī)構(gòu)的許可審評(píng)和常規(guī)檢查中不斷的被質(zhì)疑，這并不令人驚訝，不過(guò)究其原因還是驗(yàn)證數(shù)據(jù)是否充分的問(wèn)題，這也凸顯了層析介質(zhì)驗(yàn)證毒和保存尚未完成驗(yàn)證壽命期間的清潔驗(yàn)證數(shù)據(jù)柱兩次使用之間的保存證不充分，因?yàn)槿鄙賹?duì)內(nèi)毒素和微生物限度的評(píng)估否基于驗(yàn)證過(guò)的分析方法清潔的驗(yàn)證數(shù)據(jù)本文將從現(xiàn)有的法規(guī)要求和生物藥物開(kāi)發(fā)實(shí)踐出發(fā)，提出層析介質(zhì)壽命和清潔驗(yàn)證的一種綜合設(shè)計(jì)，可以滿足產(chǎn)品和工藝需求以及監(jiān)管機(jī)構(gòu)的期望，并實(shí)現(xiàn)優(yōu)異的工藝經(jīng)4合設(shè)計(jì)層析介質(zhì)的壽命驗(yàn)證是證明層析介質(zhì)在其預(yù)期使用時(shí)間期限內(nèi)能夠維持其可接受的性能特征，并且可持續(xù)的生產(chǎn)出符合預(yù)期質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的產(chǎn)品。層析介質(zhì)的壽命驗(yàn)證一般在層析介質(zhì)的清潔驗(yàn)證則主要是證明清潔程序能夠?qū)游鼋橘|(zhì)的批次使用之間殘留物的量最小化。層析介質(zhì)清潔程序的開(kāi)發(fā)一般在縮小模型上進(jìn)行，而清潔程序的驗(yàn)證則需應(yīng)包括保存步驟，PDA技術(shù)報(bào)告60-3號(hào)曾明確指出應(yīng)證明層析有效的清潔程序往往是層析介質(zhì)的穩(wěn)定性與清潔有效性之間的平衡。因此，層析介質(zhì)的清潔程序同時(shí)還影響了層析介質(zhì)的壽命，需要對(duì)壽命驗(yàn)證、清潔和保存驗(yàn)證進(jìn)行綜結(jié)合法規(guī)要求、生物藥物開(kāi)發(fā)的實(shí)踐要求，建議的層析介質(zhì)壽命和清潔驗(yàn)證的程序步證層析介質(zhì)的清潔程序本應(yīng)是層析純化工藝固有的一部分。特定的層析純化必須要包含特定的層析介質(zhì)清潔程序(表2-1)。序能的重要性質(zhì)和有較染如壽命層析介質(zhì)清潔程序的開(kāi)發(fā)需要考慮兩方面的因素，一是層析純化工藝中所面臨的雜質(zhì)和污染物；二是選擇合適的清潔工藝試劑(表2-2)。、異丙醇、丙酮對(duì)于不耐堿的層析介質(zhì)則可以選擇酸性條件清潔，比如pH3的乙酸或者磷酸溶液。其MMM異丙se于核酸雜質(zhì)的去除，但是成本高，并且需要開(kāi)發(fā)分析方法檢測(cè)其殘留和驗(yàn)證其清除，清潔和消毒試劑的類型和使用濃度與層析介質(zhì)的兼容性密切相關(guān)。需要供應(yīng)商提供層許多清潔工藝參數(shù)都會(huì)對(duì)層析介質(zhì)清潔的有效性產(chǎn)生影響，這包括污染物與層析介質(zhì)之間的相互作用的性質(zhì)和程度、清潔工藝試劑與污染物之間相互作用的性質(zhì)、清潔時(shí)間(臟的維持時(shí)間和清潔時(shí)間)、清潔試劑的類型和濃度、溫度、清潔動(dòng)作(流動(dòng)特性，比如停滯、流動(dòng)和壓力)以及液體的特性(pH、電導(dǎo)率、粘度等)。除了清潔動(dòng)作，。需要進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究來(lái)考察清潔工藝參數(shù)。與層析純化工藝參數(shù)的研究類似，可以首先使用風(fēng)險(xiǎn)管理工具，比如失敗模式與效應(yīng)分析(FMEA)，對(duì)清潔工藝參數(shù)的失敗風(fēng)險(xiǎn)的實(shí)驗(yàn)研究。清潔工藝參數(shù)的實(shí)驗(yàn)研究可以在實(shí)驗(yàn)室規(guī)模上采用縮小模型進(jìn)行，關(guān)于縮小模型的構(gòu)建和確認(rèn)，我們將在下述的章節(jié)進(jìn)行詳細(xì)講述。實(shí)驗(yàn)室規(guī)模的清潔工藝參數(shù)研究可以使用單因素實(shí)驗(yàn)或者實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)(DoE)的方式進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的方法可以探索清潔工藝響。6A親和層析介質(zhì)的一步與兩步清潔試劑[8]。兩步清潔試劑可避免嚴(yán)苛的持層析介質(zhì)的穩(wěn)定性PDA”的概念[9]。設(shè)計(jì)空間是指能夠提供質(zhì)量保證的輸入變量和工藝參數(shù)的多維組合。清潔工藝的設(shè)計(jì)空間可由每個(gè)清潔可接受性。對(duì)于成本較高的層析介質(zhì)，比如蛋白A親和層析介質(zhì)，則需要開(kāi)發(fā)特定的清潔和消毒382486420在實(shí)驗(yàn)室規(guī)模上選擇的清潔工藝試劑和清潔工藝參數(shù)應(yīng)能夠?qū)嵤┰诟笠?guī)模的工藝設(shè)備上。在進(jìn)行正式的清潔驗(yàn)證之前，還應(yīng)在大規(guī)模的生產(chǎn)中確認(rèn)污染物的去除和清潔在工藝放大階段可以基于工廠車間的歷史經(jīng)驗(yàn)和實(shí)驗(yàn)室規(guī)模的研究基礎(chǔ)進(jìn)行清潔工藝的調(diào)整。應(yīng)在大規(guī)模的生產(chǎn)工藝中建立最終的清潔工藝操作和性能參數(shù)的操作范圍，驗(yàn)證在縮小模型上進(jìn)行層析介質(zhì)的壽命驗(yàn)證可以前瞻性的提供層析介質(zhì)使用壽命的預(yù)估，在層析介質(zhì)的壽命驗(yàn)證中以空白運(yùn)行的方式設(shè)計(jì)加入清潔驗(yàn)證，則可以在縮小模型的為減少規(guī)模之間的可變性，應(yīng)盡可能使用與商業(yè)化規(guī)模生產(chǎn)工藝一致的原材料，包括使用相同質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的層析介質(zhì)、過(guò)濾器、試劑和溶液等。設(shè)備之間的差異也應(yīng)盡可能考慮后續(xù)還需要對(duì)壽命末期的層析介質(zhì)進(jìn)行病毒清除驗(yàn)證，層析介質(zhì)壽命驗(yàn)證的縮小8縮小模型的確認(rèn)一般采用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行。使用縮小模型進(jìn)行三批次的運(yùn)行，工藝性能數(shù)據(jù)和收集樣品的質(zhì)量數(shù)據(jù)分別與商業(yè)化規(guī)模的工藝性能數(shù)據(jù)和收集樣品的質(zhì)量數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)比較，比如雙單側(cè)T檢驗(yàn)(TOST)或者PCA分析，以確定縮小模型對(duì)商為減小模型與商業(yè)化規(guī)模工藝之間的差異，應(yīng)盡可能選擇與商業(yè)化規(guī)模工藝所用層析差異性最小的儀器設(shè)備。層析介質(zhì)應(yīng)選擇與商業(yè)化規(guī)模所用的具有相同質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的層析介質(zhì)，盡可能具有較小層析介質(zhì)壽命驗(yàn)證選擇使用的工藝參數(shù)可以設(shè)定在工藝表征研究(ProcessCharacterization以選擇設(shè)計(jì)空間的上限進(jìn)行，以層析介質(zhì)壽命驗(yàn)證的檢測(cè)指標(biāo)可以包括層析柱評(píng)價(jià)指標(biāo)，層析性能評(píng)價(jià)指標(biāo)和產(chǎn)品質(zhì)，比如理論塔板高度(HETP)和不對(duì)稱因子(As)有助于指出重復(fù)使用的層析柱完整性的下降。?壓力/流速性質(zhì)，雜質(zhì)的累積會(huì)導(dǎo)致壓力的升高或者流速的降低，壓力/流速性質(zhì)的?層析圖譜，包括UV、pH和電導(dǎo)率的層析圖譜，是觀察層析介質(zhì)性能變化的最簡(jiǎn)單層析性能評(píng)價(jià)指標(biāo)蛋白濃度測(cè)定(A280法)產(chǎn)品純度產(chǎn)品雜質(zhì)層析介質(zhì)壽命驗(yàn)證并不是每個(gè)循環(huán)的取樣樣品都要進(jìn)行全部檢測(cè)指標(biāo)的分析檢測(cè)。為平衡驗(yàn)證數(shù)據(jù)需求和分析檢測(cè)的工作量，通常每隔一定循環(huán)次數(shù)進(jìn)行全部檢測(cè)指標(biāo)的對(duì)于可以簡(jiǎn)單分析檢測(cè)指標(biāo)或者可以高通量分析檢測(cè)的指標(biāo)可以每個(gè)循環(huán)都進(jìn)行檢測(cè)，表2-6：層析介質(zhì)壽命驗(yàn)證檢測(cè)計(jì)劃(舉例)T2TTTTTTTTTTTTT盡管不是每個(gè)循環(huán)的取樣樣品都需要進(jìn)行全部檢測(cè)指標(biāo)的分析檢測(cè)，但是每個(gè)循環(huán)都表2-7：層析介質(zhì)壽命驗(yàn)證取樣計(jì)劃(舉例)層析介質(zhì)的使用壽命根據(jù)檢測(cè)指標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)來(lái)定義。檢測(cè)指標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)可以設(shè)定為一個(gè)具如果可接受標(biāo)準(zhǔn)為循環(huán)批次間的一致性，推薦采用統(tǒng)計(jì)過(guò)程控制(SPC)或者趨勢(shì)分析表2-8：層析介質(zhì)壽命驗(yàn)證的可接受標(biāo)準(zhǔn)(舉例)無(wú)異常峰，洗脫峰一致符合規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)(或收率不低于80%)產(chǎn)品質(zhì)量評(píng)價(jià)指標(biāo)產(chǎn)品純度符合規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)，循環(huán)間一致(或純度不低于95%)產(chǎn)品雜質(zhì)間一致間一致層析介質(zhì)的使用壽命可以選擇達(dá)到檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)的循環(huán)次數(shù)數(shù)值，或者出現(xiàn)批間異常的循環(huán)次數(shù)數(shù)值，保守的做法還可以將確定的循環(huán)次數(shù)數(shù)值乘以一個(gè)安全系數(shù)，比如0.9，驗(yàn)證的設(shè)計(jì)為獲得層析介質(zhì)整個(gè)使用壽命期間的清潔驗(yàn)證數(shù)據(jù)，可以在層析介質(zhì)的壽命驗(yàn)證設(shè)計(jì)法對(duì)于層析介質(zhì)的清潔驗(yàn)證，目視檢查和擦拭取樣不太符合實(shí)際，因此淋洗水取樣方法淋洗水取樣是對(duì)包含層析介質(zhì)的整套層析系統(tǒng)進(jìn)行清潔后使用流水沖洗所有的相關(guān)淋洗水取樣驗(yàn)證可以選擇從清潔過(guò)程中的最終沖洗水中提取隨機(jī)樣品，另一個(gè)選擇則是完整清潔程序后，使用單獨(dú)的沖洗水定量沖洗，收集所有的沖洗水。兩種淋洗水取樣方法都適用于層析介質(zhì)的清潔驗(yàn)證，不過(guò)兩種方法也各有各的優(yōu)勢(shì)和劣勢(shì)，空白對(duì)照取樣驗(yàn)證通常不使用實(shí)際產(chǎn)品進(jìn)行，而是使用只包括注射用水或者沒(méi)有任何產(chǎn)品的水性緩沖液的生產(chǎn)加工過(guò)程。使用空白對(duì)照驗(yàn)證方法可以展現(xiàn)出真實(shí)加工期間使用模擬運(yùn)行/空白運(yùn)行(BlankRun)的方法來(lái)驗(yàn)證層析介質(zhì)清潔程序的有效存層析柱。按照正常的操作規(guī)程進(jìn)行層析過(guò)程，只是在正常的上樣步驟中使用等體積的緩沖液按照正常的操作規(guī)程進(jìn)行后續(xù)的層析純化操作，在洗脫步驟中按照常規(guī)運(yùn)行的收集檢測(cè)，側(cè)重檢測(cè)產(chǎn)品和雜質(zhì)的殘留物?？瞻走\(yùn)行可以周期性運(yùn)行，比如每隔10個(gè)循環(huán)進(jìn)行一次空白運(yùn)行，直到層析介質(zhì)壽命對(duì)于一個(gè)清潔驗(yàn)證程序來(lái)講，選擇合適的分析檢測(cè)方法是非常必要的。合適的分析檢。清潔驗(yàn)證常用的分析檢測(cè)方法包括特定分析方法和非特定分析方法(表2-9)[9]。特定分析方法，是檢測(cè)特定殘留物的方法，比如具有生物活性的物質(zhì)。特定分析方法分析方法的選擇取決于清潔程序后殘留物的性質(zhì)。盡管在大多數(shù)的層析純化工藝中可能會(huì)殘留具有生物活性的物質(zhì)，比如相關(guān)產(chǎn)品物質(zhì)。但是清潔工藝常使用堿洗或者酸質(zhì)降解/滅活，因此特定分析方法可能不再科學(xué)合理，使含碳有機(jī)物的殘留(ppb、ng/L)低分子量有機(jī)物殘留(ng/Kg)蛋白質(zhì)/核酸(ug/ml)蛋白質(zhì)(10ng/ml)核酸(pg)FDA的法規(guī)指南“清潔工藝的驗(yàn)證(7/93)”中明確指出監(jiān)管機(jī)構(gòu)不期望對(duì)清潔工藝驗(yàn)證設(shè)定可接受標(biāo)準(zhǔn)，因?yàn)榍鍧嶒?yàn)證的設(shè)備和方法都有所不同。生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)提供所設(shè)定的殘留物可接受標(biāo)準(zhǔn)的科學(xué)依據(jù)，并且該標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)是實(shí)際可行的、可達(dá)到的并且如果是非特定分析方法，比如TOC。生物藥物企業(yè)常建立的可接受標(biāo)準(zhǔn)通常為上游工ppmppm和超濾膜這些產(chǎn)品專用原材，但是要具有一定的科學(xué)依據(jù)[9]。對(duì)于特定生物藥物工藝的相關(guān)雜質(zhì)，生產(chǎn)企業(yè)則可自行設(shè)定可接受標(biāo)準(zhǔn)，低于檢測(cè)限下面的案例即是一個(gè)層析介質(zhì)壽命和清潔驗(yàn)證綜合設(shè)計(jì)的案例，本案例設(shè)計(jì)層析介質(zhì)121個(gè)循環(huán)，每隔10個(gè)循環(huán)的收集樣品進(jìn)行全部檢測(cè)指同時(shí)在壽命驗(yàn)證期間周期性的進(jìn)行了模擬運(yùn)行，模擬運(yùn)行是每隔10個(gè)循環(huán)進(jìn)行一次。循環(huán)次數(shù)HCP(ppm)SEC-HPLC(%)HCD(ppb)蛋白A(ppm)19bHCD(ppm)?不僅提供了層析介質(zhì)使用壽命相關(guān)的預(yù)估信息，同時(shí)還提供了層析介質(zhì)使用壽命期?層析介質(zhì)壽命驗(yàn)證中的模擬運(yùn)行次數(shù)并不計(jì)入層析介質(zhì)的壽命，因此提供了層析介質(zhì)預(yù)估壽命的更加保守的估計(jì)，對(duì)于商業(yè)化規(guī)模上的層析介質(zhì)壽命持續(xù)確認(rèn)提供了盡管在縮小規(guī)模上綜合設(shè)計(jì)了層析介質(zhì)的壽命和清潔驗(yàn)證，但是還是需要在商業(yè)化規(guī)層析介質(zhì)使用壽命的確認(rèn)需要多批次的循環(huán)運(yùn)行，這個(gè)在正式的商業(yè)化生產(chǎn)之前很難積累所需要的批次數(shù)目。而清潔有效性的確認(rèn)可以不需要多批次的循環(huán)進(jìn)行，因此可PQ傳統(tǒng)方式的清潔驗(yàn)證方案一般要求評(píng)估至少連續(xù)三個(gè)批次的清潔過(guò)程。伴隨著工藝性能確認(rèn)(PPQ)批次進(jìn)行商業(yè)化規(guī)模上的清潔程序驗(yàn)證可以在申報(bào)商業(yè)化生產(chǎn)時(shí)提供關(guān)。除此之外，層析介質(zhì)的商業(yè)化規(guī)模清潔驗(yàn)證還可以提供常規(guī)生產(chǎn)規(guī)模上的微生物限度與縮小規(guī)模的清潔驗(yàn)證類似，商業(yè)化規(guī)模的清潔驗(yàn)證也可采用淋洗水驗(yàn)證方法或者采用空白對(duì)照運(yùn)行(模擬運(yùn)行/空白運(yùn)行)方法?？瞻讓?duì)照運(yùn)行方法需要準(zhǔn)備更多的緩沖液，所需時(shí)間也要長(zhǎng)于淋洗水驗(yàn)證方法，但是空白對(duì)照運(yùn)行方法能夠更好的代表實(shí)際生產(chǎn)工藝中的殘留物是否有機(jī)會(huì)進(jìn)入到下一批商業(yè)化規(guī)模的模擬運(yùn)行程序與縮小模型的模擬運(yùn)行程序一致，除了使用注射用水或者水性緩沖液來(lái)代替上樣樣品進(jìn)行上樣外，其余程序均一致。商業(yè)化規(guī)模的模擬運(yùn)行使商業(yè)化規(guī)模清潔驗(yàn)證的分析方法和可接受標(biāo)準(zhǔn)的制定與縮小模型清潔驗(yàn)證可以保持一案例的層析介質(zhì)清潔驗(yàn)證是伴隨三批次的工藝性能確認(rèn)(PPQ)進(jìn)行，采用模擬運(yùn)行的包括正常的消毒、清潔和保存程序，進(jìn)行模擬運(yùn)行，上樣階段使用平衡緩沖液來(lái)代替洗脫階段，按照正常批次的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，常規(guī)收集標(biāo)準(zhǔn)是在0.8CV開(kāi)始，共收集該案例生產(chǎn)工藝共包括蛋白A親和層析、陽(yáng)離子交換層析和陰離子交換層析三步層析09nan/a此工藝驗(yàn)證的概念逐步進(jìn)化。監(jiān)管結(jié)構(gòu)也逐漸意識(shí)到三批次成功的驗(yàn)證批次并不意味在產(chǎn)品獲批進(jìn)入商業(yè)化生產(chǎn)之后，仍需要一個(gè)持續(xù)工藝確認(rèn)的方案來(lái)確認(rèn)在商業(yè)化生產(chǎn)規(guī)模上，層析介質(zhì)可一致的處于驗(yàn)證過(guò)的受控狀態(tài)，比如使用壽命、殘留物累積、對(duì)于層析介質(zhì)使用壽命，應(yīng)持續(xù)監(jiān)控在預(yù)估的使用壽命期間的層析步驟收率、工藝相關(guān)雜質(zhì)和產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)的去除，以及該步驟相關(guān)的其他檢測(cè)指標(biāo)，以確認(rèn)層析介質(zhì)和對(duì)于層析介質(zhì)的清潔狀態(tài)，可通過(guò)持續(xù)的監(jiān)控清潔工藝參數(shù)，比如清潔劑濃度、接觸時(shí)間、清潔溫度等確認(rèn)清潔工藝處于受控狀態(tài)。也可進(jìn)行商業(yè)化規(guī)模的模擬運(yùn)行，比PAT工藝過(guò)程控制的準(zhǔn)確性和精確性，后變更的原因可能來(lái)自于工藝改進(jìn)、新技術(shù)的引入、廠址變化、設(shè)備/原材料的變層析介質(zhì)的變更需要重復(fù)上述的驗(yàn)證研究，針對(duì)特定的變更方面可能還需要加入新的。商業(yè)化規(guī)模的驗(yàn)證或者確認(rèn)是必須的，需要確認(rèn)變更前后的層析介質(zhì)在工藝性能和產(chǎn)如果該步驟的變更導(dǎo)致產(chǎn)品雜質(zhì)含量或者產(chǎn)品質(zhì)量超出了之前建立的可接受范圍，那盡管層析介質(zhì)供應(yīng)商可以提供相應(yīng)層析介質(zhì)在其保存試劑條件下的長(zhǎng)期穩(wěn)定性數(shù)據(jù)和?層析介質(zhì)供應(yīng)商的保存實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)都是使用新介質(zhì)(未使用過(guò)介質(zhì))獲得。散裝保存條件下進(jìn)行。真正的生產(chǎn)過(guò)程中，層析介質(zhì)的保存有可能是拆裝后的散裝保存，也可能是直接在裝驗(yàn)證選擇使用次數(shù)≥10次的層析介質(zhì)，按照其相應(yīng)的保存條件(保存緩沖液、保存緩沖液濃度和體積)在供應(yīng)商提供的盛放容器或者生產(chǎn)條件下的盛放容器中進(jìn)行保存，保存確保完整記錄層析介質(zhì)的批次、使用次數(shù)、純化的產(chǎn)品、保存緩沖液類型、保存緩沖液的批號(hào)、保存緩沖液濃度及其配制日期，還需要記錄保存容器的材質(zhì)、保存的房間層析介質(zhì)初始進(jìn)入保存緩沖液的日期即為開(kāi)始保存的日期，該日期設(shè)置為T=0點(diǎn)。在T定的需要進(jìn)行的功能性檢測(cè)，比如動(dòng)態(tài)結(jié)合載量、配基密度含量、粒徑分布或者壓力流在上述保存條件下保存該層析介質(zhì)至規(guī)定期限，比如一年。在更換保存緩沖液之前，按照T=0點(diǎn)的取樣方法進(jìn)行取樣，檢測(cè)微生物限度、內(nèi)毒素以及設(shè)定的需要進(jìn)行的功能性檢測(cè)。取樣完畢后，更換新鮮的保存緩沖液，并進(jìn)行記錄。直至完成三次的保存微生物限度和內(nèi)毒素的可接受標(biāo)準(zhǔn)可依據(jù)供應(yīng)商提供的標(biāo)準(zhǔn)，或者生產(chǎn)車間自定的標(biāo)準(zhǔn)。功能性測(cè)試的可接受標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)該是新填料的放行分析標(biāo)準(zhǔn)范圍。對(duì)于使用次數(shù)有影響的層析填料，比如蛋白A親和層析填料，則需要跟T=0點(diǎn)的數(shù)據(jù)來(lái)比較。±20%的存驗(yàn)證裝柱條件下的層析介質(zhì)保存驗(yàn)證也需要選擇使用次數(shù)≥10次的層析介質(zhì)。如果層析介質(zhì)沒(méi)有達(dá)到使用次數(shù)，應(yīng)更換其他批次的填料。在進(jìn)行層析介質(zhì)裝柱之前按照散裝填料的取樣方法進(jìn)行取樣，后續(xù)進(jìn)行相應(yīng)的功能性測(cè)試，比如動(dòng)態(tài)結(jié)合載量、配基密度按照相應(yīng)的裝柱操作規(guī)程進(jìn)行層析介質(zhì)裝柱，并檢測(cè)柱效(HETP和As)合格。使用平測(cè)流出液的pH和電導(dǎo)率與平衡緩沖液一致，收集流出的平衡緩沖液進(jìn)行微生物限度和內(nèi)毒素檢測(cè)，此時(shí)設(shè)定為T=0點(diǎn)。取樣完畢后，使用保存緩至保存期限，比如4個(gè)月后，使用平衡緩沖液沖洗層析柱，檢測(cè)流出液的pH和電導(dǎo)率與平衡緩沖液一致，收集流出的平衡緩沖液進(jìn)行微生物限度和內(nèi)毒素檢測(cè)。對(duì)于功能性檢測(cè)的取樣，則需要在潔凈條件下拆開(kāi)層析柱，使用平衡緩沖液重懸層析介質(zhì)，并進(jìn)行取樣。最后按照相應(yīng)的裝柱操作規(guī)程進(jìn)行層析介質(zhì)裝柱，并檢測(cè)柱效(HETP和As)合格。直至完成三次檢測(cè)。裝柱條件下的層析介質(zhì)保存驗(yàn)證的可接受標(biāo)準(zhǔn)與散裝條件一致。微生物限度和內(nèi)毒素的可接受標(biāo)準(zhǔn)可依據(jù)供應(yīng)商提供的標(biāo)準(zhǔn)，或者生產(chǎn)車間自定的標(biāo)準(zhǔn)。功能性測(cè)試的可接受標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)該是新填料的放行分析標(biāo)準(zhǔn)范圍。對(duì)于使用次數(shù)有影響的層析填料，比如T最后，如果有條件，建議進(jìn)行散裝或裝柱條件下保存驗(yàn)證的相同批號(hào)的層析介質(zhì)在完介質(zhì)的性能。盡管可以開(kāi)發(fā)清潔程序?qū)游鼋橘|(zhì)進(jìn)行清潔和消毒以維持生產(chǎn)工藝的性能和產(chǎn)品質(zhì)量，但嚴(yán)苛的清潔程序也會(huì)對(duì)層析介質(zhì)自身帶來(lái)不利的影響，影響層析介質(zhì)的壽命。在生產(chǎn)工藝中采用一些預(yù)防步驟可減少對(duì)清潔程序的負(fù)擔(dān)，甚至可以減少對(duì)壽命和清潔驗(yàn)可以采取預(yù)防步驟來(lái)減少收獲上清中的雜質(zhì)蛋白、低分子量物質(zhì)和脂類物質(zhì)。這些雜質(zhì)都會(huì)非特異性結(jié)合層析介質(zhì)，堵塞層析介質(zhì)的孔道，造成層析介質(zhì)的污染。采用絮去除上述雜質(zhì)。操作人員是污染物最大的來(lái)源。GMP操作可以最大限度的防止污染物的引入，合適的人員培訓(xùn)、正確的潔凈穿衣、清潔程序的維持、生產(chǎn)區(qū)域的嚴(yán)格控制進(jìn)入都可以減少層析純化工藝中，層析介質(zhì)是直接接觸產(chǎn)品的原材料，也是潛在的污染物污染源。供污染物數(shù)量。0另外，層析介質(zhì)封閉操作，比如智能自動(dòng)層析柱裝填、操作和拆卸，不僅可以實(shí)現(xiàn)高水平的污染物控制標(biāo)準(zhǔn)，還能獲得很好的層析工藝重現(xiàn)性和一致性。這對(duì)于某些步驟生產(chǎn)工藝。82364751層析純化所需要的大體積的緩沖液是引入污染物的潛在來(lái)源。減少緩沖液配制的手動(dòng)在線配液系統(tǒng)(IC)，既減少了需要配制的緩沖液的體積，同時(shí)使得污高。3：Cytiva在線配液(IC)系統(tǒng)可以減少人工操作和污染物引入風(fēng)險(xiǎn)層析介質(zhì)作為生產(chǎn)工藝中的關(guān)鍵原材料，對(duì)生產(chǎn)工藝和產(chǎn)品質(zhì)量的一致性控制至關(guān)重?產(chǎn)品放行報(bào)告(COA)。數(shù)據(jù)質(zhì)量體系完善的層析介質(zhì)供應(yīng)商都會(huì)提供其層析介質(zhì)在推薦的CIP條件下的穩(wěn)定性數(shù)據(jù)，盡管該數(shù)據(jù)并不能完全代表實(shí)際生產(chǎn)工藝條件下層析介質(zhì)的穩(wěn)定性，但是該數(shù)據(jù)可以為實(shí)際生產(chǎn)工藝中層析介質(zhì)的使用壽命提供預(yù)期的估計(jì)，并為層析介質(zhì)的壽命驗(yàn)P還可以減少清潔驗(yàn)證中殘留物的累積風(fēng)險(xiǎn)。從工藝經(jīng)濟(jì)性來(lái)講，還降低了清潔工藝的關(guān)于層析