貝類種質(zhì)基因組DNA保存

貝類種質(zhì)基因組DNA保存基因組DNA含有物種個體的遺傳信息，可用于構(gòu)建基因組文庫、分離所需的基因和檢測相關的分子標記等。由于基因組DNA所含的遺傳信息量大，易獲得和保存，是目前種質(zhì)資源收集和保存的主要內(nèi)容之一。1程序圖

基因組DNA收集——→測定——→保存

2一、基因組DNA的收集利用各種方法（包括傳統(tǒng)的基因組DNA提取方法、各種商品化的基因組DNA提取試劑盒）提取貝類基因組DNA3二、測定對收集的基因組DNA進行純度、濃度、完整性的測定4紫外分光光度法檢測DNA純度取一定量的樣品DNA，稀釋50倍，用分光光度計分別測定A250、A280的值。根據(jù)A250/A280之比值判斷DNA純度。5

基因組DNA完整性的測定瓊脂糖凝膠電泳檢測基因組DNA完整性采用0.4%瓊脂糖凝膠電泳，以標準DNA分子標記對比,檢測基因組DNA的完整性，以堿基數(shù)（kb）表示。6基因組DNA的定量對于濃度大于0.25μg/mL的DNA溶液，采用紫外分光光度法測定：在波長260nm紫外線下，1OD值的光密度相當于雙鏈DNA濃度為50μg/mL。7對于濃度小于0.25μg/mL的DNA溶液，也可采用熒光光度法：DNA樣品與溴化乙錠（EB）結(jié)合后，在紫外線照射下激發(fā)熒光，其熒光強度與核酸含量成正比。使用一系列已知的不同濃度DNA溶液作標準對照，可比較出被測DNA溶液的濃度。靈敏度可達1ng～5ng。8三、貝類基因組DNA保存標準完整性要求要求基因組DNA大于50kb。

純度要求要求1.6<A260/A280≤1.8，同時凝膠電泳檢測不到RNA污染。9濃度要求要求基因組DNA濃度大于0.25μg/mL。含量要求每個保存樣本的DNA含量應大于50μg10保存方法及保存期限D(zhuǎn)NA溶于pH8.0的TE中，-20℃可保存2年，-60℃可保存5年。每個個體分3個保存樣本分開保存。11生物技術在貝類種質(zhì)資源保護中的應用

對某一種質(zhì)資源進行保護之前，需要了解有關該物種的遺傳背景和群體遺傳結(jié)構(gòu)，從而建立種質(zhì)資源的遺傳背景檔案。同工酶和蛋白質(zhì)電泳技術、以及近年迅速發(fā)展的各種DNA標技術，使人們能夠從不同角度和不同層次，更加全面地揭示物種的遺傳信息，也為貝類種質(zhì)資源保護提供了重要的基礎資料。121、同工酶技術的應用

同工酶技術是通過檢測DNA表達產(chǎn)物電泳譜帶的不同，在蛋白質(zhì)水平研究遺傳多樣性的一種方法。

喻子牛等(1998)利用同工酶技術研究了秦皇島、大連、青島和韓國釜山4個魁蚶群體的等位基因酶遺傳變異，通過比較4個群體之間的遺傳相似度和遺傳距離表明，秦皇島和大連兩個群體之問的遺傳同一性最大，這與兩個群體的地理距離較近，基因交流不存在明顯障礙有關；其次為秦皇島與青島及大連與青島群體之間，而韓國釜山和其他3個群體之間存在一定的遺傳分歧.。

132、隨機擴增多態(tài)性DNA(randomamplifiedpolymorphismDNA，RAPD)技術的迅速發(fā)展和應用，促進了貝類遺傳多樣性的研究。3、線粒體DNA具有進化速度快，母系遺傳，有效群體的大小較小，因而用較小的樣本即可反映群體結(jié)構(gòu)等特點，已成為研究近緣種間和種內(nèi)群體間遺傳分化的有力工具.144、微衛(wèi)星DNA是基因組中普遍存在的2～6個核苷酸的簡單串聯(lián)重復序列，微衛(wèi)星標記具有密度大、多態(tài)性豐富、高度雜合且穩(wěn)定性好、遵循盂德爾分離定律共顯性遺傳、易于PCR擴增等特點，是近年發(fā)展起來的一種新的DNA標記技術.15種質(zhì)資源的評價與保護群體的雜合度高低是衡量一個種群種質(zhì)資源質(zhì)量的重要標準，為種質(zhì)資源調(diào)查和保護以及遺傳育種提供了豐富的數(shù)據(jù)。貝類人工繁育的一個重要內(nèi)容是要明確繁育群體遺傳變異的大小，從而制定出科學的管理措施，防止人工繁殖過程中進行遺傳背景相似品系交配所造成遺傳多樣性的丟失。非科學的人工增殖常常造成子代雜和度降低和等位基因頻率發(fā)生變化，特別是稀有等位基因的丟失。165、低溫冷凍保存貝類種質(zhì)細胞