吸收放散實驗課件

吸收放散試驗

吸收試驗（absorptiontest）

抗原與抗體的結(jié)合是特異性的，因此具有抗體活性的血清加入相應(yīng)抗原后，抗體的活性下降或消失，這種作用稱為吸收試驗對一未知抗體可以用已知抗原進行吸收，吸收后抗體活性下降或消失，說明未知抗體中含有與已知抗原相對應(yīng)的抗體。有時被檢血清中有多種抗體，可用已知抗原分別吸收及鑒定抗體的性質(zhì)

放散試驗原理抗原與抗體的結(jié)合是可逆的。在物理條件改變時，抗體又會從抗原抗體復(fù)合物上分離下來，將抗體由抗原抗體復(fù)合物上分離下來的試驗稱為放散試驗

吸收試驗的方法冷吸收一份鹽水洗滌的已知抗原的壓積紅細胞加一份被檢血清，混勻后置4℃冰箱吸收1~2小時（ABO、MN、P系統(tǒng)等）熱吸收混勻后置37℃水浴箱中吸收（Rh系統(tǒng)等）吸收試驗可區(qū)別真假凝集：真凝集經(jīng)吸收后凝集減弱或呈陰性；假凝集經(jīng)吸收后凝集不變熱放散試驗主要應(yīng)用ABO血型系統(tǒng)新生兒溶血病及從紅細胞上洗脫掉IgM及IgG抗體。此方法制備抗體最容易，但抗體回收較差，即如果抗體較弱，放散試驗可得到假陰性的結(jié)果。其優(yōu)點是適用于一般化驗室，缺點是放散液中含有較多游離白蛋白。熱放散試驗方法將疑有抗體包被的紅細胞用生理鹽水洗滌3-4次，最后一次盡量壓積紅細胞和吸取紅細胞上層的生理鹽水。在壓積紅細胞中加等量生理鹽水（也可用AB血清或6%白蛋白），置56℃水浴箱中7~8分鐘，期間搖動數(shù)次。取出后立即高速離心，3000轉(zhuǎn)/分2分鐘；取上清液（櫻紅色的上清液即為放散液），與已知紅細胞試驗。按不同試驗要求做試驗，將放散液作為抗體使用。熱放散試驗注意事項鑒定放散液應(yīng)與原抗原抗體反應(yīng)方法相同，如抗體較弱，可用酶處理紅細胞做試驗放散液用生理鹽水制備不穩(wěn)定，若要保存放散液，用AB血清進行放散受檢血清與吸收用紅細胞比例要高一些，若抗體弱，可以充分與紅細胞結(jié)合加熱放散溫度要準確，如溫度降低，放散出的抗體又回重新與抗原結(jié)合放散抗體時，應(yīng)不斷搖動，促使抗體從抗原抗體復(fù)合物上分離下來乙醚放散試驗主要應(yīng)用于溫自身抗體（IgG）或同種抗體引起的直抗陽性，以及用于分離IgG抗體混合物其最大優(yōu)點是適用于檢查獲得性溶血性貧血，鑒定Rh抗體效果最好，不宜用于ABO抗體鑒定乙醚放散試驗方法取經(jīng)洗滌3次的受檢壓積紅細胞1份加1份生理鹽水，2份乙醚，用木塞蓋緊，顛倒試管，用力振搖1~2分鐘，然后以3000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘離心后分成3層，上層是乙醚，中層是紅細胞基質(zhì)，下層是具有抗體的放散液（為櫻紅色或深紅色）用吸管插入試管底部吸出放散液，若有渾濁可重新離心1次將放散液置37℃水浴10分鐘，除盡乙醚，然后與一組譜紅細胞做間接抗球蛋白試驗，以鑒定抗體特異性酸放散放散試驗的應(yīng)用鑒定新生兒溶血病患兒紅細胞上的抗體在溶血性貧