培養(yǎng)基整體性能評估與快速檢測技術(shù)課件

培養(yǎng)基整體性能評估與快速檢測技術(shù)幻燈片PPT本課件PPT僅供大家學(xué)習(xí)使用學(xué)習(xí)完請自行刪除，謝謝！本課件PPT僅供大家學(xué)習(xí)使用學(xué)習(xí)完請自行刪除，謝謝！本課件PPT僅供大家學(xué)習(xí)使用學(xué)習(xí)完請自行刪除，謝謝！本課件PPT僅供大家學(xué)習(xí)使用學(xué)習(xí)完請自行刪除，謝謝！公司簡介廣東省科學(xué)院微生物研究所控股的國家級高新技術(shù)企業(yè)。國家食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)委員會微生物標(biāo)準(zhǔn)協(xié)作組的成員，承擔(dān)起草食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)GB478.28《培養(yǎng)基和試劑質(zhì)量控制方法》。起草GB/T8538-2008《飲用天然礦泉水檢驗(yàn)方法》及多項(xiàng)地方微生物檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。中國微生物學(xué)會培養(yǎng)基學(xué)組成員。公司生產(chǎn)研發(fā)基地總建設(shè)面積達(dá)12000m2，擁有GMP生產(chǎn)車間和6條先進(jìn)生產(chǎn)線。擁有華南地區(qū)最大的菌種資源保存中心。主要產(chǎn)品微生物干燥培養(yǎng)基標(biāo)準(zhǔn)化微生物干燥培養(yǎng)基抗干擾微生物培養(yǎng)基顯色微生物培養(yǎng)基一次性成品培養(yǎng)基標(biāo)準(zhǔn)菌株微生物生化鑒定盒HKM-MID生化鑒定系統(tǒng)HKM乳膠凝集快速鑒定系統(tǒng)霉菌、大腸菌群計數(shù)卡系列培養(yǎng)基產(chǎn)品食品衛(wèi)生微生物國家標(biāo)準(zhǔn)（GB4789）全系列天然礦泉水微生物國家標(biāo)準(zhǔn)（GB8537)全系列生活飲用水微生物檢測標(biāo)準(zhǔn)全系列美國FDA,EP，ISO，USPSN標(biāo)準(zhǔn)全系列中國藥典全系列化妝品檢驗(yàn)系列

培養(yǎng)基、試劑質(zhì)量控制-GB4789.28修訂依據(jù)：ISO/TS11133-1：2009；ISO/TS11133-2：2003；評估培養(yǎng)基整體性能的指標(biāo)：理化指標(biāo)；微生物學(xué)指標(biāo)。理化指標(biāo)培養(yǎng)基的色澤培養(yǎng)基的水分含量培養(yǎng)基的澄清度培養(yǎng)基的pH固體培養(yǎng)基的凝膠強(qiáng)度培養(yǎng)基的色澤培養(yǎng)基的水分含量培養(yǎng)基的澄清度培養(yǎng)基的色澤培養(yǎng)基的水分含量培養(yǎng)基的pH培養(yǎng)基的澄清度培養(yǎng)基的色澤培養(yǎng)基的水分含量固體培養(yǎng)基的凝膠強(qiáng)度培養(yǎng)基的pH培養(yǎng)基的澄清度培養(yǎng)基的色澤培養(yǎng)基的水分含量培養(yǎng)基的色澤培養(yǎng)基的澄清度培養(yǎng)基的水分含量培養(yǎng)基的色澤培養(yǎng)基的pH培養(yǎng)基的澄清度培養(yǎng)基的水分含量培養(yǎng)基的pH理化指標(biāo)通常由生產(chǎn)廠商通過對原材料、生產(chǎn)工藝、生產(chǎn)過程進(jìn)行質(zhì)控，使用者通常用感官檢查或pH測定進(jìn)行確認(rèn)。微生物學(xué)指標(biāo)培養(yǎng)基對非目標(biāo)菌的抑制能力(選擇性)培養(yǎng)基對目標(biāo)菌的促生長能力(生長率)培養(yǎng)基的指示能力(生化特性)微生物學(xué)評估方法-

使用一套合適的質(zhì)控菌株進(jìn)行測試定量法—培養(yǎng)基生產(chǎn)廠家或?qū)ε囵B(yǎng)基質(zhì)量有特殊要求的實(shí)驗(yàn)室對培養(yǎng)基質(zhì)控；半定量法—實(shí)驗(yàn)室對培養(yǎng)基的質(zhì)控；定性法—實(shí)驗(yàn)室對培養(yǎng)基的質(zhì)控。質(zhì)控菌株的要求具典型反應(yīng)特性的生長良好的陽性菌株；弱陽性菌株（對培養(yǎng)基中選擇劑等試劑敏感性強(qiáng)的菌株）；不具有該特性的陰性菌株；部分或完全受抑制的菌株；固體培養(yǎng)基的生長率測試-定量法選擇合適稀釋度的質(zhì)控菌懸液(目標(biāo)菌)0.1mL，均勻涂布接種于待測平板和參比平板。每一稀釋度接種兩個平板。并按標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的培養(yǎng)條件培養(yǎng)平板。計算生長率PR：PR=NS/N0PR：生長率。NS：待測培養(yǎng)基平板上得到的菌落總數(shù)。N0：參比培養(yǎng)基平板上獲得的菌落總數(shù)(該菌落總數(shù)應(yīng)≥100CFU)。固體培養(yǎng)基的生長率測試-

半定量法將質(zhì)控菌株接種到非選擇性肉湯培養(yǎng)過夜。用1ul接種環(huán)按圖劃線接種：計算生長指數(shù)G：每條有比較稠密菌落生長的劃線則G為1，每個培養(yǎng)皿上G最大為16。如果僅一半的線有菌落生長，則G為0.5。如果劃線上沒有菌落生長或生長量少于劃線的一半，則G為0。記錄每個平板的得分總和便得到G。固體培養(yǎng)基的生長率測試-定性法將質(zhì)控菌株接種到非選擇性肉湯培養(yǎng)過夜。用1ul接種環(huán)取測試菌培養(yǎng)物在測試培養(yǎng)基表面劃平行直線（細(xì)菌），或用接種針直接挑取斜面培養(yǎng)物點(diǎn)種接種（霉菌）。并按標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的培養(yǎng)條件培養(yǎng)平板。培養(yǎng)后按以下方法對培養(yǎng)基計分：0表示無生長；1表示微弱生長；2表示生長良好。固體培養(yǎng)基生長率評價標(biāo)準(zhǔn)非選擇性固體培養(yǎng)基和固體計數(shù)培養(yǎng)基PR值應(yīng)不小于0.7；G值應(yīng)大于6。選擇性固體培養(yǎng)基PR值一般應(yīng)不小于0.5，最低應(yīng)為0.1。選擇性計數(shù)固體培養(yǎng)基上目標(biāo)菌的生長率一般不小于0.7。定性法目標(biāo)菌得分應(yīng)為2。固體培養(yǎng)基選擇性測試-半定量法將質(zhì)控菌株接種到非選擇性肉湯培養(yǎng)過夜。用1μl接種環(huán)取選擇性測試工作菌懸液1環(huán)，在待測培養(yǎng)基表面劃六條平行直線(如圖)，同時接種兩個平板，劃線時可在培養(yǎng)基下面放一個模板圖，按標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的培養(yǎng)條件培養(yǎng)平板。固體培養(yǎng)基選擇性測試-半定量法計算G：每條有比較稠密菌落生長的劃線則G為1，每個培養(yǎng)皿上最多為6分。如果僅一半的線有菌落生長，則G為0.5。如果劃線上沒有菌落生長或生長量少于劃線的一半，則G為0。

評價標(biāo)準(zhǔn)：G應(yīng)小于6。固體培養(yǎng)基生化特性測試-定性法分別觀察質(zhì)控菌株(包括目標(biāo)菌和非目標(biāo)菌)在培養(yǎng)基上形態(tài)、顏色及生化特征。評價培養(yǎng)基的指示系統(tǒng)是否正常。GB4789.28規(guī)范性附錄F-表F.1培養(yǎng)基狀態(tài)功能分類質(zhì)控指標(biāo)培養(yǎng)條件質(zhì)控菌株參比培養(yǎng)基方法質(zhì)控評定標(biāo)準(zhǔn)特征性反應(yīng)亞硫酸鉍瓊脂(BS)固體選擇性分離生長率36℃±1℃/40h～48h

傷寒沙門菌CMCC(B)50071

TSA定量PR≥0.5棕色或綠色菌落

鼠傷寒沙門菌ATCC14028選擇性大腸埃希菌ATCC25922

_半定量G≤1_糞腸球菌ATCC29212

_HE瓊脂固體選擇性分離生長率36℃±1℃/18h～24h鼠傷寒沙門菌ATCC14028TSA定量PR≥0.5綠-藍(lán)色菌落，有黑心

福氏志賀菌CMCC(B)51572

綠-藍(lán)色菌落

選擇性大腸埃希菌ATCC25922_半定量G＜6

_糞腸球菌ATCC29212G≤1_來自廣東省CDC的評估報告-目標(biāo)質(zhì)控菌株在不同廠家培養(yǎng)基上生長率的比較2009.11~2010.10培養(yǎng)基生產(chǎn)廠測試菌株檢測菌株數(shù)生長率PRF值P值XLD瓊脂HK鼠傷寒沙門菌CMCCB)50115600.964±0.09518.520.000X200.852±0.117HK福氏志賀菌CMCC(B)51572600.771±0.114-5.4860.000X200.448±0.199

HE瓊脂HK鼠傷寒沙門菌CMCCB)50115600.927±0.089

-4.233

0.000X200.784±0.162HK福氏志賀菌CMCC(B)51572600.683±0.155

-4.636

0.000X200.469±0.112沙門顯色培養(yǎng)基HK鼠傷寒沙門菌CMCCB)50115600.876±0.054

12.0670.001X200.825±0.066

注：X為國外某品牌培養(yǎng)基生產(chǎn)廠家。來自廣東省CDC的評估報告-目標(biāo)質(zhì)控菌株在不同廠家培養(yǎng)基上生長率的比較

2009.11~2010.10培養(yǎng)基生產(chǎn)廠測試菌株檢測菌株數(shù)生長率PRF值P值TCBS瓊脂HK副溶血性弧菌ATCC17802600.619±0.211-1.195

0.232X200.536±0.280HK霍亂弧菌VbO600.528±0.261-2.874

0.000X200.212±0.193弧菌顯色培養(yǎng)基HK副溶血性弧菌ATCC17802600.896±0.0626..325

0.000X200.628±0.125

HK霍亂弧菌VbO601.182±0.108

4.860

0.030

X201.116±0.137

來自廣東省CDC的評估報告-野生分離目標(biāo)菌株在不同廠家培養(yǎng)基上生長率的比較

2009.11~2010.10培養(yǎng)基生產(chǎn)廠測試菌株檢測菌株數(shù)生長率PRF值P值XLD瓊脂HK沙門菌野生分離株100.964±0.0956.4880.020X100.852±0.117HK志賀菌野生分離株100.468±0.2791.1730.293X100.309±0.371HE瓊脂HK沙門菌野生分離株101.002±0.0764.4730.049X100.927±0.089HK志賀菌野生分離株100.386±0.2651.0420.321X100.271±0.238沙門菌顯色培養(yǎng)基HK沙門菌野生分離株100.884±0.0966.205

0.023

X100.726±0.176

來自廣東省CDC的評估報告-野生分離目標(biāo)菌株在不同廠家培養(yǎng)基上生長率的比較

2009.11~2010.10培養(yǎng)基生產(chǎn)廠測試菌株檢測菌株數(shù)生長率PRF值P值TCBS瓊脂HK副溶血性弧菌野生分離株100.643±0.23412.211

0.003

X100.329±0.161HK霍亂弧菌野生分離株100.500±0.16748.998

0.000X100.092±0.079弧菌顯色培養(yǎng)基HK副溶血性弧菌野生分離株100.930±0.0640.14

0.908

X100.933±0.049HK霍亂弧菌野生分離株101.198±0.1344.339

0.052X101.082±0.115來自廣東省CDC的評估報告-不同生產(chǎn)廠家培養(yǎng)基對非目標(biāo)質(zhì)控菌株的選擇性比較2009.11~2010.10培養(yǎng)基生產(chǎn)廠測試菌株檢測份數(shù)生長情況(份)F值P值01XLD瓊脂HK糞腸球菌ATCC29212605730.0000.995X20191HE瓊脂HK糞腸球菌ATCC2921260600X20200沙門顯色培養(yǎng)基HK糞腸球菌ATCC2921260600X20200TCBS瓊脂HK大腸埃希菌ATCC2592260600X20200弧菌顯色培養(yǎng)基HK大腸埃希菌ATCC2592260600X20200來自廣東省CDC的評估報告-不同生產(chǎn)廠家培養(yǎng)基對非目標(biāo)質(zhì)控菌株的選擇性比較2009.11~2010.7培養(yǎng)基測試菌株生產(chǎn)廠檢測份數(shù)菌落生理、生化特征XLD瓊脂鼠傷寒沙門菌CMCC(B)50115HK60黑心、無色、半透明菌落X20黑心、無色、半透明菌落福氏志賀菌CMCC(B)51572HK60無色、半透明菌落X20無色、半透明菌落HE瓊脂鼠傷寒沙門菌CMCC(B)50115HK60黑心、無色、半透明菌落X20黑心、無色、半透明菌落福氏志賀菌CMCC(B)51572HK60無色、半透明菌落X20無色、半透明菌落沙門菌顯色培養(yǎng)基鼠傷寒沙門菌CMCC(B)50115HK60紫紅、中等大小菌落X20紫紅、中等大小菌落來自廣東省CDC的評估報告-不同生產(chǎn)廠家培養(yǎng)基對非目標(biāo)質(zhì)控菌株的選擇性比較2009.11~2010.7培養(yǎng)基測試菌株生產(chǎn)廠檢測份數(shù)菌落生理、生化特征TCBS瓊脂副溶血性弧菌ATCC17802HK60綠色、中等大小菌落X20綠色、中等大小菌落霍亂弧菌VbOHK60黃色、中等大小菌落X20黃色、中等大小菌落弧菌顯色培養(yǎng)基副溶血性弧菌ATCC17802HK60紫紅、中等大小菌落X20紫紅、中等大小菌落霍亂弧菌VbOHK60藍(lán)綠色、中等大小菌落X20藍(lán)綠色、中等大小菌落來自廣東省CDC的評估報告-

不同批間培養(yǎng)基的穩(wěn)定性測試2009.11~2010.10培養(yǎng)基廠家與批次測試菌株檢測份數(shù)生長率PRF值P值HE瓊脂HK09110104Y鼠傷寒沙門菌CMCC(B)50115200.929±0.0970.0120.989HK09110204Y200.926±0.094HK09110304Y200.925±0.080HK09110104Y福氏志賀菌CMCC(B)51572200.678±0.1520.0690.934HK09110204Y200.694±0.168HK09110304Y200.678±0.152XLD瓊脂HK09102301Y鼠傷寒沙門菌CMCC(B)50115200.967±0.9010.1590.853HK09102401Y200.973±0.102HK09102501Y200.962±0.089HK09102301Y福氏志賀菌CMCC(B)51572200.781±0.1220.1410.868HK09102401Y200.771±0.097HK09102501Y200.761±0.126來自廣東省CDC的評估報告-

不同批間培養(yǎng)基的穩(wěn)定性測試2009.11~2010.10培養(yǎng)基廠家與批次測試菌株檢測份數(shù)生長率PRF值P值沙門顯色培養(yǎng)基HK09110104Y鼠傷寒沙門菌CMCC(B)5011520O.879±0.0400.7090.496HK09110204Y20O.876±0.055HK09110304Y200.875±0.067弧菌顯色培養(yǎng)基HK10072101Y副溶血性弧菌ATCC17802200.897±0.0660.0180.982HK10072304Y200.894±0.051HK10072401Y200.897±0.070HK10072101Y霍亂弧菌VbO201.185±0.1030.230.795HK10072304Y201.169±0.105

HK10072401Y201.192±0.120小結(jié)目標(biāo)菌(目標(biāo)質(zhì)控菌和野生分離株)在受試培養(yǎng)基上的生長率(PR均>0.5)高于對照的培養(yǎng)基，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，差異有顯著性(P<0.05)。非目標(biāo)菌在受試培養(yǎng)基上的生長受抑制，與對照培養(yǎng)一致，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，差異無顯著性(P>0.05)。質(zhì)控菌株在受試培養(yǎng)基上呈現(xiàn)正常的特征性反應(yīng)，與對照培養(yǎng)基完全。不同批次培養(yǎng)基之間的整體性能差異無顯著性(P>0.05)。結(jié)論依據(jù)ISO/TS11133.2-2003培養(yǎng)基的性能評價標(biāo)準(zhǔn)判斷，受試培養(yǎng)基符合標(biāo)準(zhǔn)要求，整體性能穩(wěn)定、一致。GB4789中快速檢測技術(shù)的應(yīng)用顯色培養(yǎng)基沙門菌；志賀菌；副溶血性弧菌；O157：H7大腸埃希菌；單增李斯特菌；阪崎腸桿菌；大腸桿菌計數(shù)。商品化的微生物生化鑒定系統(tǒng)全自動微生物生化分析系統(tǒng)；數(shù)值編碼的微生物生化鑒定條。顯色培養(yǎng)基顯色培養(yǎng)檢測基本原理：利用不同種屬細(xì)菌代謝所產(chǎn)生的酶的特異性，在培養(yǎng)基中加入相應(yīng)的特異性酶底物和抑制劑，當(dāng)具有某特異酶的細(xì)菌與酶底物作用時，使顯色基團(tuán)游離出來附著于菌落上，形成顏色獨(dú)特的菌落。根據(jù)菌落的顏色直接對菌屬(種)作出鑒定。顯色培養(yǎng)基的優(yōu)勢快速、簡便、節(jié)省時間-大多數(shù)顯色培養(yǎng)基只需在樣品增菌后，分離培養(yǎng)18~24h，即可根據(jù)菌落的顏色作出初步的鑒定。(陰性-棄去；陽性-進(jìn)一步鑒定)。結(jié)果直觀，一目了然(根據(jù)顏色判定結(jié)果)。靈敏度高、特異性強(qiáng)，大大減少了后續(xù)的鑒定步驟(確證試驗(yàn))。顯色培養(yǎng)的缺陷假陽性：97%的大腸埃希氏菌含有β-葡萄糖苷酶，約10%的沙門氏菌屬中也含有此酶。假陰性：O157：H7大腸埃希氏菌不產(chǎn)生β-葡萄糖苷酶。另外，不是所有具有特征性酶的微生物均在含底物的培養(yǎng)基中陽性反應(yīng)。與普通選擇性培養(yǎng)基比較，顯色培養(yǎng)基的假陽性、假陰性的機(jī)率相對要低得多。目標(biāo)菌在顯色培養(yǎng)基上生長率的比較顯色培養(yǎng)基廠家目標(biāo)菌生長率PR沙門菌顯色培養(yǎng)基HK鼠傷寒沙門菌ATCC140280.92進(jìn)口0.62阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基HK阪崎腸桿菌ATCC295440.92進(jìn)口0.86O157大腸桿菌顯色培養(yǎng)基HK大腸埃希氏菌O157：H7NCTC129000.78進(jìn)口0.53弧菌顯色培養(yǎng)基HK副溶血性弧菌ACC178020.93進(jìn)口0.54MUG-VRBHK大腸埃希菌ATCC259221.08進(jìn)口0.7顯色培養(yǎng)基對非目標(biāo)菌的選擇性比較顯色培養(yǎng)基廠家非目標(biāo)菌生長情況沙門菌顯色培養(yǎng)基HK大腸埃希菌ATCC25922不生長進(jìn)口不生長阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基HK糞腸球菌ATCC29212不生長進(jìn)口不生長O157大腸桿菌顯色培養(yǎng)基HK大腸埃希氏菌ATCC29522、糞腸球菌ATCC29212不生長進(jìn)口不生長弧菌顯色培養(yǎng)基HK大腸埃希菌ATCC25922不生長進(jìn)口不生長MUG-VRBHK糞腸球菌ATCC29212不生長進(jìn)口不生長非目標(biāo)菌在顯色培養(yǎng)基上的

特征性反應(yīng)比較顯色培養(yǎng)基廠家非目標(biāo)菌菌落顏色沙門菌顯色培養(yǎng)基HK奇異變形桿菌CMCC(B)49005大腸埃希菌ATCC25922奇異變形桿菌CMCC(B)49005大腸埃希菌ATCC25922無色進(jìn)口藍(lán)綠色無色藍(lán)綠色阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基HK普通變形桿菌CMCC(B)49027大腸埃希菌ATCC25922普通變形桿菌CMCC(B)49027大腸埃希菌ATCC25922無色進(jìn)口無色無色無色O157大腸桿菌顯色培養(yǎng)基HK大腸埃希氏菌ATCC29522藍(lán)綠色進(jìn)口藍(lán)綠色弧菌顯色培養(yǎng)基HK霍亂弧菌VbO藍(lán)綠色進(jìn)口藍(lán)綠色MUG-VRBHK弗氏檸檬酸桿菌ATCC43864無熒光進(jìn)口無熒光來自河南CDC的驗(yàn)證-

二種沙門菌顯色培養(yǎng)基實(shí)際應(yīng)用效果比對研究

樣品nCHROMagarHKM有可疑菌落樣品數(shù)確認(rèn)陽性樣品數(shù)陽性分離率(%)有可疑菌落樣品數(shù)確認(rèn)陽性樣品數(shù)陽性分離率(%)生雞肉86474754.65565665.12生豬肉768810.5310810.53雞肛拭子488816.6710816.67合計210636330.00767234.29結(jié)果沙門氏菌在HKM沙門菌顯色培養(yǎng)基上較CHROMagar沙門菌顯色培養(yǎng)基菌落大，色澤濃，數(shù)量相似；對162份生肉食品檢測，HKM沙門菌顯色培養(yǎng)基陽性分離率為39.51％，CHROMagar沙門菌顯色培養(yǎng)基陽性了率為33.95％，二者無顯著性差異；48份雞肛拭子樣品，二者檢出率相同，無差異；HKM沙門菌顯色培養(yǎng)基的假陰性率低于CHROMagar沙門菌顯色培養(yǎng)基（2.38％和6.67％），但二者無顯著性差異。微生物生化鑒定系統(tǒng)生化鑒定條：操作簡便，不需儀器完成實(shí)驗(yàn)；提供龐大的鑒定數(shù)據(jù)庫；進(jìn)行數(shù)值分類鑒定；良好的鑒定效果；快速報告。HKM-MID細(xì)菌生化鑒定條MID革蘭陰性桿菌生化鑒定條(MID-GNA、MID-GNB)GNA+B主要用來鑒定非苛養(yǎng)革蘭氏陰性桿菌（包括氧化酶陰性和陽性菌），共包括28個屬。GNA主要用來鑒定非苛養(yǎng)革蘭氏陰性桿菌(氧化酶陰性)，共9個屬(不動桿菌屬、腸桿菌屬、埃希菌屬、克雷伯菌屬、沙雷菌屬、變形桿菌屬、志賀菌屬、沙門菌屬、小腸結(jié)腸炎耶爾森菌等)。免費(fèi)提供數(shù)據(jù)庫軟件。檢測原理GNA和GNB鑒定條均分別由12個含干燥培養(yǎng)基的小管組成；將需鑒定的菌懸液接種于小管中。培養(yǎng)一定時間后，通過代謝作用(或是加入配套試劑后)所產(chǎn)生的顏色變化，進(jìn)行數(shù)值編碼；根據(jù)數(shù)據(jù)庫提供的資料，判定結(jié)果。HKM-MID細(xì)菌生化鑒定條

操作程序第一步：挑取可疑菌落純培養(yǎng)物(或單個菌落)于3~5mL滅菌生理鹽水中制備成菌懸液。并按說明書要求作氧化酶試驗(yàn)，根據(jù)結(jié)果選用鑒定條。12第二步：小心的打開鑒定條的粘性封口膜，用無菌滴管加3-4滴（約100微升）菌懸液至每個小管，按說明書在需滴加礦物油的小管加入礦物油。34第三步：用粘性封口膜封住管口，放至35-37℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18~24h。5第四步：結(jié)果判讀：參考說明表及反應(yīng)結(jié)果對照卡讀GNA和GNB的反應(yīng)結(jié)果。6第五步：將每三個反應(yīng)分為一組，每組中反應(yīng)底物下面均標(biāo)有1、2、4數(shù)值，將每組中陽性反應(yīng)對應(yīng)的數(shù)值加起來，將得到一個四位數(shù)（GNA）、或者八位數(shù)（氧化酶陰性GNA+B）或者九位數(shù)（氧化酶陽性GNA+B），將這個數(shù)值輸入選擇的GNA或GNA+B電腦鑒定軟件系統(tǒng)，將得到鑒定結(jié)果；鑒定結(jié)果將顯示五個最有可能的結(jié)果，以及每個結(jié)果的可能性幾率以及相似性。并且對鑒定結(jié)果給予總的評價。7第六步：軟件檢索將結(jié)果編碼輸入電腦樣品信息區(qū)可選的數(shù)值輸入自動提示可疑測試可能的錯誤測試提示廣泛的結(jié)果分析概率百分比概率可能性可疑測試第七步：報告結(jié)果HKM-MID常用生化鑒定條HKM-MID產(chǎn)品：革蘭陰性桿菌鑒定系統(tǒng)；葡萄球菌鑒定系統(tǒng)；李斯特菌鑒定系統(tǒng)(經(jīng)AOAC驗(yàn)證)；芽胞桿菌鑒定系統(tǒng)；鏈球菌鑒定條系統(tǒng)。常用的MID鑒定條鑒定結(jié)果副溶血性弧菌沙門菌阪崎腸桿菌單核細(xì)胞增生李斯特菌菌株測試菌數(shù)APIMIDGNAE.coli大腸埃希氏菌434343Shigellaspp.志賀菌屬444S.sonnei宋內(nèi)志賀氏菌333K.pneumoniae肺炎克雷伯氏菌131313K.oxytoca產(chǎn)酸克雷伯菌111111E.cloacae陰溝腸桿菌887E.aerogenes產(chǎn)氣腸桿菌333S.marcescen粘質(zhì)沙雷菌222C.freundii弗氏檸檬酸桿菌999Cdiversus差異檸檬酸桿菌222H.alvei蜂房哈夫尼菌111P.mirabilis奇異變形桿菌111111P.vulgaris普通變形桿菌222P.stuartii斯氏普羅威登斯菌222Salmonellaspp.沙門氏菌838383總共197197196HKM-MIDGNA與API20E鑒定結(jié)果比較HKM乳膠凝集快速鑒定系統(tǒng)原理：乳膠凝集試驗(yàn)是以乳膠微粒為載體的間接凝集試驗(yàn)；用人工方法將抗體包被于與免疫無關(guān)的大分子乳膠顆粒上；利用抗原抗體特異性結(jié)合的特性，當(dāng)致敏的乳膠顆粒與待檢細(xì)菌的菌懸液混合后，迅速形成肉眼可見的凝集團(tuán)塊，用于篩選鑒定可疑菌。乳膠凝集試驗(yàn)的優(yōu)勢特異、敏感；操作簡便、快速；結(jié)果易判讀。常用的HKM乳膠凝集快速鑒定系統(tǒng)李斯特菌（listeria）沙門氏菌（salmonella）彎曲桿菌（camylobacter）大腸桿菌O157（E.coliO157）軍團(tuán)菌（legionella）葡萄球菌（staph）HKM金黃色葡萄球菌乳膠凝集試劑盒操作步驟將可疑菌落涂布于檢測板的反應(yīng)環(huán)內(nèi)。HKM金黃色葡萄球菌乳膠凝集試劑盒滴加1滴乳膠測試試劑。HKM金黃色葡萄球菌乳膠凝集試劑盒用攪拌棒混勻5-10秒鐘HKM金黃色葡萄球菌乳膠凝集試劑盒輕輕搖動檢測板，2分鐘。HKM金黃色葡萄球菌乳膠凝集試劑盒觀察凝集結(jié)果。產(chǎn)生凝集反應(yīng)(陽性)陰性反應(yīng)陽性對照陰性對照快速檢測技術(shù)應(yīng)用案例分析基本情況：2003.9.23上午8時，當(dāng)?shù)谻DC接報22日晚10時左右某市第4中學(xué)有29名學(xué)生因發(fā)熱、惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉到醫(yī)院就診。到23日上午10時已有96人患病。23日下午14時，該市與第4中學(xué)鄰近的一個鎮(zhèn)，出現(xiàn)相同癥狀的病人，病人主要是當(dāng)?shù)鼐幼〉拇迕瘛?3日晚上22時左右，兩地共有236人就診。主要癥狀：發(fā)熱：39℃以上5%，39℃以下75%；腹瀉91.7%，腹痛82.9%；惡心44.8%，嘔吐41.7%，頭痛9.4%。流行病學(xué)調(diào)查報告：第4中學(xué)22日7時30分左右，早餐供應(yīng)涼拌河粉，午餐除繼續(xù)供應(yīng)河粉外，還有米飯、豬肉炒菜、豆腐、咸蘿卜。發(fā)病村民均在22日或23日進(jìn)食過河粉。河粉由某鎮(zhèn)生產(chǎn)點(diǎn)生產(chǎn)，9.21晚生產(chǎn)了800斤。22日早上6時30份供應(yīng)第四中學(xué)450斤，其余由4名小販在附近銷售。該生產(chǎn)點(diǎn)衛(wèi)生狀況差，盛粉的容器及生產(chǎn)用具4天清洗一次，盛粉的容器旁放著豬飼料桶，生產(chǎn)點(diǎn)與豬圈相連。首例發(fā)病潛伏期：15h。實(shí)驗(yàn)室接收第一批樣本的時間：23日下午17時30分。樣本種類：嘔吐物2份；病人肛拭子37份；剩菜、豆腐各1份；家庭用井水、自來水各1份；食用油、生產(chǎn)河粉的工具拭子等4份；共46份樣品。23日下午17時30分：通過對流行病學(xué)調(diào)查報告分析：確