外源基因在真核細(xì)胞中表達(dá)及調(diào)控課件

第一節(jié)真核細(xì)胞基因表達(dá)的調(diào)控、真核生物基因表達(dá)的特點(diǎn)及優(yōu)勢(shì)、真核細(xì)胞表達(dá)及調(diào)控元件外源基因在真核細(xì)胞中表達(dá)及調(diào)控【PPT】第一節(jié)真核細(xì)胞基因表達(dá)的調(diào)控、真核生物基因表達(dá)的特點(diǎn)及優(yōu)勢(shì)、真核細(xì)胞表達(dá)及調(diào)控元件第二節(jié)哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)的選擇標(biāo)記基因一、胸苷激酶基因選擇標(biāo)記(定義)、二氫葉酸還原酶基因選擇標(biāo)記三、新霉素抗性基因選擇標(biāo)記四、氯霉素已酰轉(zhuǎn)移酶基因選擇標(biāo)記五、黃嘌呤-鳥嘌呤轉(zhuǎn)移酶(XGPRT)基因第三節(jié)真核細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)的載體種類一、載體的類型、幾種常用的真核表達(dá)載體第二節(jié)哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)的選擇標(biāo)記基因一、胸苷激酶基因選擇標(biāo)記(定義)、二氫葉酸還原酶基因選擇標(biāo)記三、新霉素抗性基因選擇標(biāo)記四、氯霉素已酰轉(zhuǎn)移酶基因選擇標(biāo)記五、黃嘌呤-鳥嘌呤轉(zhuǎn)移酶(XGPRT)基因第三節(jié)真核細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)的載體種類一、載體的類型、幾種常用的真核表達(dá)載體真核生物基因表達(dá)的特點(diǎn)及優(yōu)勢(shì)1.細(xì)胞的全能性2轉(zhuǎn)錄和翻譯分開進(jìn)行3.有相當(dāng)大的非編碼區(qū)(調(diào)控序列)4.有三種不同RNA聚合酶參與轉(zhuǎn)錄5.初級(jí)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物能進(jìn)行剪接加工修飾6不存在操縱子結(jié)構(gòu)7.基因多拷貝,功能基因分散在不同區(qū)域,分別轉(zhuǎn)錄真核細(xì)胞表達(dá)及調(diào)控元件-)真核生物基因轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控二)轉(zhuǎn)錄后水平的調(diào)控三)翻譯水平的調(diào)控胸苷激酶胸腺嘧啶核苷激酶簡(jiǎn)稱胸苷激酶(thymidineKinase,TK)在所有真核細(xì)胞中都有表達(dá),是嘧啶生物合成補(bǔ)救代謝途徑中的一個(gè)關(guān)鍵酶,它可催化胸苷磷酸化轉(zhuǎn)變成為dTMP,繼續(xù)磷酸化生成dTTP,參與DNA的生物合成。載體的類型1質(zhì)粒型載體2.病毒載體3整合型表達(dá)載體4游離型表達(dá)載體5瞬時(shí)表達(dá)載體6.穩(wěn)定性表達(dá)載體7.非復(fù)制性HSV-Ⅰ病毒(單純皰疹病毒HSVⅠ型)載體8.裂解性HSV-Ⅰ病毒載體幾種常用的真核表達(dá)載體)逆轉(zhuǎn)錄病毒載體1卸甲載體2.穿梭載體痘類病毒載體HsV-I單純皰疹病毒載體1.重組病毒型載體2重組質(zhì)粒型載體3.裂解型病毒載體(一)真核生物基因轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控1.基因調(diào)控的順式作用元件1)啟動(dòng)子2)增強(qiáng)子3)RNA剪接信號(hào)4)負(fù)調(diào)控元件5)終止子和polyA信號(hào)2.基因調(diào)控的反式作用因子1)概念2)反式作用因子主要作用規(guī)律(二)轉(zhuǎn)錄后水平的調(diào)控mRNA前體加工:轉(zhuǎn)錄的mRNA前體經(jīng)5’加帽