熒光熒光第三部分

熒光熒光第三部分第1頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月八、熒光標(biāo)記物和標(biāo)記反應(yīng)和氨基反應(yīng)的和巰基反應(yīng)的和其他基團(tuán)反應(yīng)的第2頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月1.和氨基反應(yīng)的第3頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月fluorescein-5-isothiocyanate(FITC'IsomerI')

MolecularFormula:C21H11NO5S

MolecularWeight:389.38CASNumber/Name:3326-32-7/Spiro(isobenzofuran-1(3H),9'-(9H)xanthen)-3-one,3',6'-dihydroxy-5-isothiocyanato-第4頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月fluorescein-6-isothiocyanate(FITC'IsomerII')

MolecularFormula:C21H11NO5SMolecularWeight:389.38CASNumber/Name:18861-78-4/Spiro(isobenzofuran-1(3H),9'-(9H)xanthen)-3-one,3',6'-dihydroxy-6-isothiocyanato-第5頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月4-dimethylaminoazobenzene-4'-sulfonylchloride(dabsylchloride)

MolecularFormula:C14H14ClN3O2SMolecularWeight:323.80CASNumber/Name:56512-49-3/Benzenesulfonylchloride,4-((4-(dimethylamino)phenyl)azo)第6頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月RhodamineRed?-X,succinimidylester

MolecularFormula:C37H44N4O10S2MolecularWeight:768.90CASNumber/Name:N/A第7頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月TexasRed?sulfonylchloride

MolecularFormular:C31H29ClN2O6S2MolecularWeight:625.15CASNumber/Name:82354-19-6/1H,5H,11H,15H-Xantheno[2,3,4-ij:5,6,7-i'j']diquinolizin-18-ium,9-[2(or4)-(chlorosulfonyl)-4(or2)-sulfophenyl]-2,3,6,7,12,13,16,17-octahydro-,innersalt第8頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月Spectra—TexasRed-BSAconjugate

AbsorptionandfluorescenceemissionspectraoftheTexasRedconjugateofbovineserumalbumin(A-23017)inpH7.0buffer.第9頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月牛肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞微絲成像用AlexaFluor430標(biāo)記抗體實(shí)現(xiàn)微絲染色第10頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月斑馬魚視網(wǎng)膜綠色：AlexaFluor488標(biāo)記藍(lán)色：Hoechst33258染核第11頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月2.和巰基反應(yīng)第12頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月AlexaFluor488C5maleimine第13頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月5-(bromomethyl)fluorescein第14頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月Tetramethylrhodamine-5-maleimide第15頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月AlexaFluor350,488,568：核、微管、特殊蛋白第16頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月3.標(biāo)記其他基團(tuán)羥基：蛋白質(zhì)中絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸殘基；糖類第17頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月NBD-Cl第18頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月第19頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月第20頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月肼和芳香胺用來標(biāo)記醛、酮第21頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月APTSFluorescein-5-thiosemicarbazide第22頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月九、熒光分析方法常規(guī)熒光分析法三維熒光分析法時(shí)間分辨熒光分析法能量轉(zhuǎn)移熒光分析法熒光免疫分析超靈敏技術(shù)（信號放大）第23頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月1、常規(guī)熒光分析法熒光生成/增敏法熒光猝滅法同步熒光分析法第24頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月（1）、熒光生成/增敏法

1.待測物本身有熒光，可以直接進(jìn)行測定

2.待測物沒有熒光或熒光較弱，則反應(yīng)產(chǎn)生熒光衍生物進(jìn)行測定第25頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月熒光強(qiáng)度與物質(zhì)濃度的關(guān)系

It=AI0e-kcldI=AI0e-kcx－AI0e-kc(x+dx)

=AI0e-kcx(1－e-kcx)因dxkc很小dI=AI0kce-kcx.dxdF=KdI=KAI0kce-kcxdx液槽中溶液熒光強(qiáng)度

F=KAI0kc∫0le-kcxdx=KAI0[1－e-kcl]=AKI0[kcl－(kcl)2/2!+(kcl)3/3!－…]=AKI0kcl[1－kcl/2+(kcl)2/6－…]第26頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月當(dāng)kcl≤0.05則括號內(nèi)第二項(xiàng)開始可忽略不計(jì)F=AKI0kcl對1cm2吸光截面F=2.3φI0εclA不超過0.05第27頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月（2）、熒光猝滅法待測物沒有熒光，但它可以通過動態(tài)猝滅或靜態(tài)猝滅的過程使一熒光物的熒光猝滅進(jìn)行測定。

如：O2猝滅芘丁二酸的熒光，用于測定血液中的氧

S2-猝滅熒光素汞的熒光用于測定環(huán)境中石油及天然氣中的痕量硫

第28頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月（3）、同步熒光分析法同步熒光是在同時(shí)掃描兩個(gè)單色器波長的情況下測繪的熒光光譜，根據(jù)激發(fā)和發(fā)射兩個(gè)單色器在同時(shí)掃描過程中彼此間所應(yīng)保持的關(guān)系，同步熒光測定可分為三個(gè)類型：1．

固定波長同步熒光，在同時(shí)掃描過程中使激發(fā)波長和發(fā)射波長彼此保持固定的波長間隔，即λem-λex=常數(shù)。2．

固定能量同步熒光，在同時(shí)掃描過程中使激發(fā)波長和發(fā)射波長之間保持一個(gè)固定的能量差（1/λex-1/λem）X107=△v=常數(shù)△v表示能量差（cm-1）即激發(fā)和發(fā)射兩個(gè)單色器之間保持固定波數(shù)差進(jìn)行掃描可變角（或可變波長）同步熒光：在同時(shí)掃描過程中使激發(fā)和發(fā)射兩個(gè)單色器以不同的速率同時(shí)進(jìn)行掃描，第29頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月第30頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月同步熒光法優(yōu)點(diǎn)光譜簡化譜帶窄化減小光譜重疊減小散射光的影響第31頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月2、三維熒光分析法第32頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月3、時(shí)間分辨熒光分析法第33頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月4、能量轉(zhuǎn)移熒光分析法第34頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月茶葉堿的測定第35頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月HIV的測定HIVprotease檢測原理第36頁，課件共43頁，創(chuàng)作于2023年2月5、熒光免疫分析

(FluorescenceImmunoassay)

BersonandYalowRIA1959

Antigen,AgAntibody,Ab

RIAELIAFIACLIA第37頁，課件共43頁，創(chuàng)作