蛋白組學(xué)概論課件

蛋白組學(xué)概況1編輯版ppt1.蛋白質(zhì)組學(xué)的概念及發(fā)展史2編輯版ppt蛋白質(zhì)組(proteome)是澳大利亞學(xué)者Williams和Wilkins于1994年首先提出，源于蛋白質(zhì)(protein)與基因組(genome)兩個(gè)詞的雜合，即”一個(gè)細(xì)胞或一個(gè)組織基因組所表達(dá)的全部蛋白質(zhì)"。蛋白質(zhì)組對應(yīng)于基因組的所有蛋白質(zhì)構(gòu)成的整體，不是局限于一個(gè)或幾個(gè)蛋白質(zhì)。在不同細(xì)胞、不同組織中，同一基因組的表達(dá)情況各不相同。蛋白質(zhì)組在空間和時(shí)間上是動(dòng)態(tài)變化著的整體。蛋白質(zhì)組(Proteome)3編輯版ppt蛋白質(zhì)組的概念與基因組的概念有許多差別，它隨著組織、甚至環(huán)境狀態(tài)的不同而改變。在轉(zhuǎn)錄時(shí)，一個(gè)基因可以多種mRNA形式剪接，并且同一蛋白可能以許多形式進(jìn)行翻譯后修飾。故一個(gè)蛋白組不是一個(gè)基因組的直接產(chǎn)物，蛋白質(zhì)組中蛋白質(zhì)的數(shù)目有時(shí)可以超過基因組的數(shù)目。蛋白質(zhì)組(Proteome)4編輯版ppt5編輯版ppt6編輯版ppt蛋白質(zhì)組學(xué)(proteomics)指應(yīng)用各種技術(shù)手段來研究蛋白質(zhì)組的一門科學(xué)，其目的是從整體的角度分析細(xì)胞內(nèi)動(dòng)態(tài)變化的蛋白質(zhì)組成成份、表達(dá)水平與修飾狀態(tài)，了解蛋白質(zhì)之間的相互作用與聯(lián)系，揭示蛋白質(zhì)功能與細(xì)胞生命活動(dòng)之間的規(guī)律。

7編輯版ppt蛋白質(zhì)組學(xué)研究內(nèi)容蛋白質(zhì)組表達(dá)模式的研究：了解不同狀態(tài)下細(xì)胞與組織的蛋白質(zhì)組分的變化；蛋白質(zhì)組功能模式的研究：明確各種蛋白質(zhì)分子之間如何相互作用。功能蛋白質(zhì)組：細(xì)胞在一定階段或與某一生理現(xiàn)象相關(guān)的所有蛋白質(zhì)。介于對個(gè)別蛋白質(zhì)的傳統(tǒng)蛋白質(zhì)化學(xué)研究和以全部蛋白質(zhì)為研究對象的蛋白質(zhì)組學(xué)之間。從局部入手研究蛋白質(zhì)組的各個(gè)功能亞群體。將多個(gè)亞群體組合起來，逐步描繪出接近于生命細(xì)胞的“全部蛋白質(zhì)”的蛋白質(zhì)組圖譜。8編輯版ppt蛋白質(zhì)組學(xué)產(chǎn)生的背景基因組時(shí)代→后基因組時(shí)代研究重點(diǎn)的轉(zhuǎn)移結(jié)構(gòu)基因組學(xué)→功能基因組學(xué)蛋白質(zhì)組學(xué)是核心內(nèi)容9編輯版ppt10編輯版ppt各國政府支持，國際著名研究和商業(yè)機(jī)構(gòu)加盟：1996年澳大利亞建立了世界上第一個(gè)蛋白質(zhì)組學(xué)研究中心(AustraliaProteomeAnalysisFacility,APAF)

發(fā)展11編輯版ppt美國國立癌癥研究院(NCI)投資1000萬美元建立肺、直腸、乳腺、卵巢腫瘤的蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)庫。NCI和FDA共同投資數(shù)百萬美元建立癌癥不同階段的蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)庫。英國建立三個(gè)蛋白質(zhì)組研究中心對已完成或即將完成全基因組測序的生物體進(jìn)行蛋白質(zhì)組研究。發(fā)展12編輯版ppt

1997年召開了第一次國際“蛋白質(zhì)組學(xué)”會(huì)議1998年在美國舊金山召開了第二屆國際蛋白質(zhì)組學(xué)會(huì)議

1999年1月在英國倫敦舉行了應(yīng)用蛋白質(zhì)組會(huì)議發(fā)展13編輯版ppt

我國也于1998年啟動(dòng)了蛋白質(zhì)組學(xué)研究，在中科院上海生物化學(xué)研究所舉辦了兩次全國性的蛋白質(zhì)組學(xué)研討會(huì)。2001年，中科院賀福初院士作為首席科學(xué)家，在全國范圍內(nèi)組織起一支研究隊(duì)伍，提出了“人類重大疾病的蛋白質(zhì)組學(xué)研究”973建議書并通過評(píng)審，并確立了9個(gè)相關(guān)課題組。2003成立了中國人類蛋白質(zhì)組組織(CHHUPO)，并分別于2003年9月、2004年8月以及2005年8月召開了中國蛋白質(zhì)組學(xué)首屆、第二屆及第三屆學(xué)術(shù)大會(huì)，2004年10月在中國北京召開了第三屆國際蛋白質(zhì)組學(xué)會(huì)議。科技部已將疾病蛋白質(zhì)組研究列入我國“973”計(jì)劃項(xiàng)目和“863”計(jì)劃項(xiàng)目;國家自然科學(xué)基金委員會(huì)也將“蛋白質(zhì)組研究”列為重點(diǎn)項(xiàng)目。我國已在鼻咽癌、白血病、肝癌和肺癌蛋白質(zhì)組研究方面取得了較大的進(jìn)展。發(fā)展14編輯版ppt2003年12月15日，國際人類蛋白質(zhì)組計(jì)劃(HPP)正式啟動(dòng)。首先開始執(zhí)行人類血漿蛋白質(zhì)組計(jì)劃(HPPP)和人類肝臟蛋白質(zhì)組計(jì)劃(HLPP)兩大先導(dǎo)項(xiàng)目。其中人類肝臟蛋白質(zhì)組計(jì)劃總部設(shè)在北京，由中國擔(dān)當(dāng)領(lǐng)導(dǎo)國，由中國科學(xué)家領(lǐng)銜組織。兩譜三圖三庫：“兩譜”即人類肝臟蛋白質(zhì)組的表達(dá)譜和修飾譜，“三圖”是指人類肝臟蛋白質(zhì)組的定位圖、連鎖圖和結(jié)構(gòu)圖，“三庫”即為人類肝臟蛋白質(zhì)組的樣本庫、抗體庫和數(shù)據(jù)庫。2009年北京蛋白質(zhì)組研究中心在頂級(jí)刊物《分子與細(xì)胞蛋白質(zhì)組學(xué)》同期刊發(fā)三篇論文。發(fā)展15編輯版ppt2.蛋白質(zhì)組學(xué)研究方法概述16編輯版ppt蛋白質(zhì)組研究較基因組學(xué)研究更為復(fù)雜和困難：蛋白質(zhì)數(shù)目大大超過基因的數(shù)目。蛋白質(zhì)隨時(shí)間和空間而變化。17編輯版ppt發(fā)展高通量、高靈敏度、高準(zhǔn)確性的研究技術(shù)平臺(tái)是現(xiàn)在乃至相當(dāng)一段時(shí)間內(nèi)蛋白質(zhì)組學(xué)研究中的主要任務(wù)。

當(dāng)前主要任務(wù)18編輯版ppt2.1蛋白質(zhì)組表達(dá)模式的

研究方法19編輯版ppt蛋白質(zhì)組表達(dá)模式

（expressionprofile）研究蛋白質(zhì)組的組成成分

支撐技術(shù)主要有雙向凝膠電泳、以質(zhì)譜為代表的蛋白質(zhì)鑒定技術(shù)及生物信息學(xué)分析。20編輯版ppt（一）蛋白質(zhì)組研究中的樣品制備

通?？刹捎眉?xì)胞或組織中的全蛋白質(zhì)組分進(jìn)行蛋白質(zhì)組分析。也可進(jìn)行樣品預(yù)分級(jí)，即將細(xì)胞或組織中的全體蛋白質(zhì)分成不同部分，分別進(jìn)行研究。21編輯版ppt樣品預(yù)分級(jí)的主要方法蛋白質(zhì)溶解性：可溶性蛋白、非可溶性蛋白等蛋白質(zhì)定位：膜蛋白、核蛋白等蛋白質(zhì)細(xì)胞器定位：線粒體、葉綠體、高爾基體、過氧化物酶體等

樣品預(yù)分級(jí)主要作用在于提高低豐度蛋白質(zhì)的上樣量和檢測靈敏度。22編輯版ppt組織水平上的蛋白質(zhì)組樣品制備臨床樣本都是各種細(xì)胞或組織混雜，而且狀態(tài)不一，如腫瘤中癌變的上皮類細(xì)胞總是與血管、基質(zhì)細(xì)胞等混雜。利用激光切割直接在顯微鏡下從組織切片中精確分離特定的細(xì)胞或細(xì)胞群，從根本上解決細(xì)胞異質(zhì)性問題。主要考慮怎樣提高樣品收集的特異性23編輯版ppt24編輯版ppt25編輯版ppt26編輯版ppt（二）蛋白質(zhì)組研究中的樣品分離

雙向凝膠電泳(two-dimensionalelectrophoresis，2-DE)：利用蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)和分子量，結(jié)合凝膠化學(xué)特性，分離各種蛋白質(zhì)的方法。27編輯版ppt2-DE原理

第一向在高壓電場下對蛋白質(zhì)進(jìn)行等電聚焦電泳(IEF),再在第一向垂直方向上進(jìn)行第二向SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS)。28編輯版ppt29編輯版ppt特點(diǎn)可分離10～100kD分子量的蛋白質(zhì)高靈敏度和高分辨率便于計(jì)算機(jī)進(jìn)行圖像分析處理與質(zhì)譜分析匹配30編輯版ppt第一向IEF電泳

傳統(tǒng)O’Farrell系統(tǒng)雙向電泳的缺陷。Bjellgvist等發(fā)展并完善了固相pH梯度等電聚焦技術(shù)，G?rg等成功地將之應(yīng)用于雙向電泳。31編輯版ppt固相pH梯度等電聚焦的優(yōu)點(diǎn)克服了載體兩性電解質(zhì)陰極漂移等缺點(diǎn)。穩(wěn)定的可以隨意精確設(shè)定的pH梯度。尤其可在較窄的pH范圍內(nèi)進(jìn)行第二輪分析，大大提高了分辨率及重復(fù)性。32編輯版ppt33編輯版ppt第二向SDS電泳

垂直板電泳水平超薄膠電泳34編輯版ppt35編輯版ppt2-DE技術(shù)的缺點(diǎn)極酸、極堿性蛋白質(zhì)，疏水性蛋白質(zhì)，極大蛋白質(zhì)、極小蛋白質(zhì)以及低豐度蛋白質(zhì)用此種技術(shù)難于有效分離。

膠內(nèi)酶解過程費(fèi)時(shí)、費(fèi)力，難于與質(zhì)譜聯(lián)用實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化。36編輯版ppt新型非凝膠技術(shù)液相色譜法liquidchromatography，LC毛細(xì)管電泳capillaryelectrophoresis，CE37編輯版ppt液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(liquidchromatography/massspectrometry,LC/MS)

簡稱液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)。蛋白質(zhì)混合物直接通過液相色譜分離以代替2-DE的分離，然后進(jìn)入MS系統(tǒng)獲得肽段分子量，再通過串聯(lián)MS技術(shù)，得到部分序列信息，最后通過計(jì)算機(jī)聯(lián)網(wǎng)查詢、鑒定蛋白質(zhì)。38編輯版ppt39編輯版ppt多維液相色譜技術(shù)（LC/LC-MS/MS）

多維蛋白質(zhì)鑒定技術(shù)(multidimensionalproteinidentificationtechnology,MudPIT)

最常用的是離子交換色譜-反相液相色譜聯(lián)用

把不同分離模式的色譜柱串聯(lián)在一根色譜柱中，對蛋白質(zhì)進(jìn)行分離的定性定量技術(shù)。40編輯版ppt41編輯版ppt42編輯版ppt（三）蛋白質(zhì)組研究中的樣品分析鑒定傳統(tǒng)方法：蛋白質(zhì)微量測序氨基酸組成分析43編輯版ppt新型蛋白質(zhì)鑒定技術(shù)

——質(zhì)譜（MS）法基本原理：蛋白質(zhì)分子離子化后，根據(jù)離子間質(zhì)量與電荷比值（m/z）的差異來分離并確定樣品的分子量。一臺(tái)質(zhì)譜儀一般有進(jìn)樣裝置、離子化源、質(zhì)量分析器、離子檢測器和數(shù)據(jù)分析系統(tǒng)組成。

44編輯版ppt電噴霧電離質(zhì)譜(Electrosprayionizationmassspectrometry，ESI-MS)主要質(zhì)譜類型待測分子溶解在溶劑中，以液相方式通過毛細(xì)管到達(dá)噴口；在噴口高電壓作用下形成帶電荷的液滴，隨著液滴中溶劑蒸發(fā)，液滴表面的電場隨半徑減少而增加，到達(dá)某一臨界點(diǎn)時(shí)，發(fā)生液滴的“爆裂”，重復(fù)此過程，最終產(chǎn)生分子離子。45編輯版ppt46編輯版ppt“軟電離”的特點(diǎn)分子電離時(shí)保留整個(gè)分子的完整性，不會(huì)形成碎片離子。靈敏度高、快速、能同時(shí)提供樣品的精確分子量和結(jié)構(gòu)信息、既可定性又可定量、并能有效地與各種色譜聯(lián)用來分析復(fù)雜體系。47編輯版ppt48編輯版ppt基質(zhì)輔助激光解吸/電離飛行時(shí)間質(zhì)譜基質(zhì)輔助激光解吸電離離子化（MALDI）：樣品包埋在固體基質(zhì)中，基質(zhì)吸收激光而蒸發(fā)，攜帶部分樣品分子進(jìn)入氣相，將部分能量傳遞給樣品分子使其離子化。飛行時(shí)間質(zhì)量分析器（TOF）：離子在電場作用下加速飛過飛行管道，根據(jù)到達(dá)檢測器的飛行時(shí)間不同而被檢測（離子的質(zhì)荷比與離子的飛行時(shí)間成正比）。（matrix-assistedlaserdesorption/ionizationtimeofflightmassspectrometry，MALDI-TOFMS）49編輯版ppt50編輯版ppt51編輯版ppt鑒定蛋白質(zhì)的方法肽質(zhì)量指紋圖譜法（peptidemassfingerprinting，PMF）對蛋白酶解后的多肽混合物進(jìn)行質(zhì)譜分析，與多肽蛋白數(shù)據(jù)庫中蛋白質(zhì)的理論肽斷進(jìn)行比較，判斷出所測蛋白是已知還是未知。由于不同的蛋白質(zhì)具有不同的氨基酸序列，不同蛋白質(zhì)所得肽斷具有指紋特征。52編輯版ppt53編輯版ppt肽質(zhì)譜指紋圖在數(shù)據(jù)庫中匹配

不成功的可能原因樣品量太少，PMF圖信噪比太低，輸入庫中搜尋的數(shù)據(jù)質(zhì)量不好。2-DE膠上所取的一個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)并非單一蛋白質(zhì)，所獲PMF圖實(shí)際上是兩個(gè)以上蛋白質(zhì)的混合圖。操作中角蛋白或其他蛋白質(zhì)的污染蛋白質(zhì)發(fā)生了較多的轉(zhuǎn)譯后修飾，數(shù)據(jù)庫中未有記載所用胰蛋白酶質(zhì)量不夠好，蛋白酶自酶解片段多未知的新蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫規(guī)模太小54編輯版ppt串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)(MS/MS)

是指多個(gè)質(zhì)量分析器相連，分離母離子，進(jìn)行碰撞解離，并檢測子離子。即選擇一定質(zhì)量的離子通過一級(jí)質(zhì)譜(MS1)，使其進(jìn)入碰撞室，與室內(nèi)充有的碰撞氣體(常用氣體為He、Ar、Xe、CH4等)進(jìn)行碰撞誘導(dǎo)裂解(collision-induceddissociation,CID)，發(fā)生離子-分子碰撞反應(yīng)，產(chǎn)生子離子，再經(jīng)第二級(jí)質(zhì)譜(MS2)進(jìn)行分析，最終導(dǎo)出肽序列。鑒定蛋白質(zhì)的方法55編輯版ppt56編輯版ppt57編輯版ppt組織切片或印片原位質(zhì)譜分析技術(shù)兩級(jí)飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜（MALDI-TOF/TOF）傅里葉轉(zhuǎn)換回旋共振質(zhì)譜（FTMS）表面增強(qiáng)激光解吸/電離飛行時(shí)間質(zhì)譜（SELDI-TOF-MS）聯(lián)合技術(shù)精確鑒定蛋白質(zhì)

58編輯版ppt（四）蛋白質(zhì)組學(xué)研究的生物信息學(xué)

生物信息學(xué)是蛋白質(zhì)組學(xué)研究的一個(gè)不可缺少的部分。蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)庫是蛋白質(zhì)組研究水平的標(biāo)志和基礎(chǔ)，數(shù)據(jù)庫的種類繁多，包括蛋白質(zhì)序列數(shù)據(jù)庫、質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫、雙向電泳圖譜數(shù)據(jù)庫等等。

59編輯版ppt蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)庫是蛋白質(zhì)組研究水平的標(biāo)志和基礎(chǔ)瑞士的SWISS-PROT擁有目前世界上最大、種類最多的蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)庫。目前應(yīng)用最普遍的數(shù)據(jù)庫是NRDB和dbEST數(shù)據(jù)庫。60編輯版ppt（五）定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究概念：把一個(gè)基因組表達(dá)的全部蛋白質(zhì)或一個(gè)復(fù)雜體系中所有的蛋白質(zhì)進(jìn)行精確的定量和鑒定。定量蛋白質(zhì)研究的難點(diǎn)：1.低豐度蛋白質(zhì)檢測困難；2.蛋白質(zhì)表達(dá)量差異很小，如在50%以下時(shí)，精確定量成為瓶頸；3.蛋白質(zhì)表達(dá)的瞬時(shí)變化。61編輯版ppt1．基于雙向凝膠電泳及其染色的定量技術(shù)雙向凝膠電泳(2-DE)是目前唯一能分離展示大量蛋白質(zhì)并進(jìn)行蛋白質(zhì)定量分析的一種方法。傳統(tǒng)的染色方法：銀染、考馬斯亮藍(lán)染色熒光染料染色技術(shù)：雙向熒光差異顯示等。62編輯版ppt2．基于生物質(zhì)譜的定量技術(shù)

原理：對于具有相同離子化能力的蛋白質(zhì)或多肽，可以通過比較質(zhì)譜峰的強(qiáng)度（或峰面積）得到待比較蛋白質(zhì)的相對量。63編輯版ppt二、蛋白質(zhì)組功能模式的

研究方法64編輯版ppt揭示蛋白質(zhì)組成員間的相互作用、相互協(xié)調(diào)的關(guān)系，并深入了解蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能的相互關(guān)系，以及基因結(jié)構(gòu)與蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)功能的關(guān)系。

主要研究目標(biāo)65編輯版ppt（一）蛋白質(zhì)翻譯后修飾的研究翻譯后修飾糖基化乙酰化甲基化羧基化二硫鍵磷酸化去磷酸化66編輯版ppt修飾肽的檢測的高靈敏度方法蛋白質(zhì)翻譯后修飾的定量分析合適的修飾狀態(tài)下處理和電離條件測定工作量巨大研究面臨的困難：67編輯版ppt（二）蛋白質(zhì)相互作用研究技術(shù)生命的基本過程是不同功能蛋白質(zhì)在時(shí)空上有序和協(xié)同作用；新陳代謝以蛋白質(zhì)復(fù)合體或多蛋白質(zhì)網(wǎng)絡(luò)協(xié)同作用實(shí)現(xiàn)；細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及病原體感染和免疫反應(yīng)。68編輯版ppt1989年Field和Song等人在酵母細(xì)胞中設(shè)計(jì)的分析蛋白質(zhì)相互作用的方法。以真核細(xì)胞轉(zhuǎn)錄激活因子的結(jié)構(gòu)和活性特點(diǎn)為基礎(chǔ)的。酵母雙雜交系統(tǒng)（yeasttwo-hybridsystem）69編輯版ppt

轉(zhuǎn)錄激活因子GAL4的特點(diǎn)N端含NLS和與酵母GAL1基因啟動(dòng)子上游激活序列結(jié)合的結(jié)構(gòu)域（BD）C端含GAL1轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域（AD）功能上相互獨(dú)立又互相依賴，只有通過某種方式結(jié)合在一起才具有完整的轉(zhuǎn)錄因子活性。70編輯版ppt71編輯版ppt系統(tǒng)構(gòu)建構(gòu)建與GAL4BD融合的蛋白表達(dá)載體

構(gòu)建與GAL4AD融合的蛋白表達(dá)載體；建立帶有一個(gè)或多個(gè)報(bào)告基因的酵母菌株

72編輯版ppt73編輯版ppt主要特點(diǎn)和優(yōu)勢高效酵母轉(zhuǎn)化方法操作簡單，轉(zhuǎn)化率高；真實(shí)反應(yīng)體內(nèi)蛋白質(zhì)間相互作用情況；不需分離靶蛋白；敏感性高。74編輯版ppt1.假陽性結(jié)果2.假陰性結(jié)果3.限于核內(nèi)表達(dá)的蛋白質(zhì)的相互作用

缺點(diǎn)75編輯版ppt

噬菌體展示技術(shù)

(phagedisplay)將多肽或蛋白質(zhì)的編碼基因或目的基因片段克隆入噬菌體外殼蛋白結(jié)構(gòu)基因的適當(dāng)位置，使外源多肽或蛋白與外殼蛋白融合表達(dá)，融合蛋白隨子代噬菌體的重新組裝而展示在噬菌體表面。被展示的多肽或蛋白可以保持相對獨(dú)立的空間結(jié)構(gòu)和生物活性，以利于靶分子的識(shí)別和結(jié)合。76編輯版ppt主要應(yīng)用篩選與特異抗體或受體相互作用的蛋白質(zhì)研究抗體或受體的結(jié)合位點(diǎn)構(gòu)建隨機(jī)肽庫、抗體庫和蛋白文庫改造和提高蛋白質(zhì)的生物學(xué)和免疫學(xué)特性研究新型多肽藥物、疫苗和抗體研究涉及到蛋白質(zhì)與核酸相互作用的生物學(xué)過程和新型的基因治療導(dǎo)向系統(tǒng)77編輯版ppt基于質(zhì)譜的蛋白質(zhì)相互作用研究方法靶蛋白制備蛋白質(zhì)復(fù)合體的純化蛋白質(zhì)復(fù)合體的質(zhì)譜鑒定基本步驟：78編輯版ppt（1）親和層析耦聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)基本原理：將某種蛋白質(zhì)以共價(jià)鍵固定在基質(zhì)（如瓊脂糖）上，含有與之相互作用的蛋白質(zhì)的細(xì)胞裂解液過柱，先用低鹽溶液洗脫下未結(jié)合的蛋白質(zhì)，然后用高鹽溶液或SDS溶液洗脫結(jié)合在柱子上的蛋白質(zhì)，最后用多維液相色譜耦聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)（MDLC-ESI-MS/MS）鑒定靶蛋白的結(jié)合蛋白。79編輯版ppt主要優(yōu)點(diǎn)靈敏度高：高濃度靶蛋白候選蛋白質(zhì)與靶蛋白的結(jié)合機(jī)會(huì)均等檢測多亞基蛋白質(zhì)之間的相互作用

80編輯版ppt（2）免疫共沉淀耦聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)原理：以細(xì)胞內(nèi)源性靶蛋白為誘餌，用抗靶蛋白抗體與細(xì)胞總蛋白進(jìn)行免疫共沉淀（immuno-precipitation，IP）純化靶蛋白免疫復(fù)合物，凝膠電泳分離后，質(zhì)譜鑒定靶蛋白的結(jié)合蛋白。81編輯版ppt82編輯版ppt研究鼻咽癌細(xì)胞系中的p53

相互作用蛋白抗p53抗體與HNE1和HNE2總蛋白進(jìn)行免疫共沉淀SDS分離免疫沉淀復(fù)合物切取p53結(jié)合蛋白條帶，酶解后進(jìn)行電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜（LC-ESI-MS/MS）分析，得到相應(yīng)的肽序列標(biāo)簽搜索