新機(jī)體免疫功能檢測(cè)課件

機(jī)體免疫功能檢測(cè)免疫應(yīng)答的類型及組成分兩種類型一.非特異性免疫應(yīng)答二.特異性免疫應(yīng)答一.非特異性免疫應(yīng)答（固有性免疫應(yīng)答，)（一）概念：人類在種系發(fā)展過(guò)程中形成的并可遺傳給后代的免疫力，它是天生具有的，不專門針對(duì)某種物質(zhì)。（二）特點(diǎn)：.先天獲得，人人皆有；比較穩(wěn)定，并可遺傳給下一代.不因同一抗原進(jìn)入機(jī)體次數(shù)多少改變反應(yīng)強(qiáng)弱.發(fā)揮作用迅速（三）組成.皮膚、黏膜的機(jī)械阻擋作用及局部分泌的抑菌、殺菌物質(zhì).吞噬細(xì)胞的吞噬作用()細(xì)胞對(duì)病毒感染靶細(xì)胞的殺傷作用.血液、體液中的抗菌分子：補(bǔ)體、溶菌酶二.特異性免疫應(yīng)答（適應(yīng)性免疫應(yīng)答，)（一）概念：具有特異性，即針對(duì)某一特定物質(zhì)而發(fā)生反應(yīng)，包括細(xì)胞免疫和體液免疫（二）特點(diǎn)：.后天獲得.有個(gè)體差異.免疫發(fā)生強(qiáng)弱與抗原進(jìn)入次數(shù)有關(guān)（三）組成細(xì)胞免疫：由主導(dǎo)完成，其效應(yīng)物質(zhì)是致敏()體液免疫：由主導(dǎo)完成，其效應(yīng)物質(zhì)是第二節(jié)人體免疫功能檢測(cè)非特異免疫功能體液中殺菌物質(zhì)——補(bǔ)體、溶菌酶吞噬細(xì)胞——大、小吞噬細(xì)胞（數(shù)量、功能）

特異性免疫功能細(xì)胞免疫功能細(xì)胞數(shù)量功能體液免疫功能細(xì)胞數(shù)量功能人特異免疫功能的檢測(cè)一細(xì)胞數(shù)量的檢測(cè)二細(xì)胞功能的檢測(cè)三細(xì)胞數(shù)量的檢測(cè)四細(xì)胞功能的檢測(cè)一細(xì)胞的計(jì)數(shù)（細(xì)胞表面標(biāo)志的檢測(cè)）（一）特異性抗原的檢測(cè)細(xì)胞表面有一些特異的抗原，根據(jù)這些不同的抗原可鑒定不同的細(xì)胞群體抗原：淋巴細(xì)胞群（簇）分化抗原不同群淋巴細(xì)胞在分化成熟過(guò)程中，細(xì)胞表面出現(xiàn)或消失的抗原分子細(xì)胞表面主要抗原及其特異性

抗原特異性受體、全部細(xì)胞和部分細(xì)胞成熟細(xì)胞（輔助）細(xì)胞、、受體（殺傷抑制）細(xì)胞、細(xì)胞的亞型活化細(xì)胞、受體檢測(cè)淋巴細(xì)胞表面抗原中:的數(shù)量表示成熟的總淋巴細(xì)胞的數(shù)量，的數(shù)量表示是細(xì)胞的數(shù)量，的數(shù)量表示是細(xì)胞的數(shù)量。≥。免疫功能差或者免疫功能紊亂，該比值小于檢測(cè)方法：用已標(biāo)記的抗抗原的單克隆抗體檢測(cè).免疫熒光法：用熒光素標(biāo)記的單抗作為試劑染色淋巴細(xì)胞，計(jì)算出染上熒光的淋巴細(xì)胞百分率如：熒光標(biāo)記的抗單抗淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)個(gè)，染上熒光的為細(xì)胞染色.免疫細(xì)胞化學(xué)法：用酶標(biāo)記的單抗檢測(cè)淋巴細(xì)胞

淋巴細(xì)胞印片淋巴細(xì)胞表面抗原與相應(yīng)單抗結(jié)合加底物細(xì)胞上有顏色為陽(yáng)性細(xì)胞用酶標(biāo)記的單抗洗滌染色（二）細(xì)胞特異性受體（受體）的檢測(cè)花環(huán)形成試驗(yàn)()原理：淋巴細(xì)胞表面含有綿羊紅細(xì)胞（)受體（)，當(dāng)淋巴細(xì)胞與綿羊紅細(xì)胞相遇時(shí)，細(xì)胞通過(guò)該受體吸附綿羊紅細(xì)胞而形成花環(huán)。,紅細(xì)胞花環(huán)形成試驗(yàn)據(jù)實(shí)驗(yàn)條件不同又分兩種：花環(huán)形成試驗(yàn)（,總花環(huán)）花環(huán)形成試驗(yàn)（,活性花環(huán)）花環(huán)形成試驗(yàn)分離出淋巴細(xì)胞(:)°、低速離心°、計(jì)數(shù)個(gè)中形成花環(huán)的意義：代表細(xì)胞總數(shù)（凡是細(xì)胞均能形成花環(huán)），數(shù)量低于正常，說(shuō)明細(xì)胞免疫功能差。正常值：花環(huán)形成試驗(yàn)分離出淋巴細(xì)胞(:)、低速離心°、，計(jì)數(shù)個(gè)中形成花環(huán)的意義：能形成花環(huán)的細(xì)胞是活性強(qiáng)的細(xì)胞，花環(huán)形成率更能反映細(xì)胞免疫功能的情況。正常值：二細(xì)胞功能的檢測(cè)檢測(cè)細(xì)胞功能的試驗(yàn)有：（一）淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)（二）相關(guān)的細(xì)胞因子的檢測(cè)（在細(xì)胞因子章節(jié)介紹）（三）淋巴細(xì)胞的細(xì)胞毒性檢測(cè)（一）淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn).原理淋巴細(xì)胞在某些物質(zhì)刺激下，細(xì)胞增殖、分化（如細(xì)胞變大、胞漿增多、出現(xiàn)空泡）合成增加（核染色質(zhì)疏松，核仁出現(xiàn)），轉(zhuǎn)化成為淋巴母細(xì)胞。

.刺激物一般分有絲分裂原（非抗原）和抗原兩類：（）非抗原刺激物（有絲分裂原）可刺激相關(guān)的一類淋巴細(xì)胞發(fā)生增殖轉(zhuǎn)化，與機(jī)體是否曾受過(guò)某一抗原致敏無(wú)關(guān)。

非抗原刺激物刺激物能刺激發(fā)生轉(zhuǎn)化細(xì)胞植物血凝素（)刀豆素()脂多糖()、美洲商陸()、（）抗原刺激物只能使曾經(jīng)被相應(yīng)抗原刺激（致敏）過(guò)的淋巴細(xì)胞發(fā)生增殖轉(zhuǎn)化。.試驗(yàn)方法（）形態(tài)學(xué)檢測(cè)法將待測(cè)者血取出，加入一定量刺激物（一般用)培養(yǎng)，天后涂片染色，計(jì)數(shù)個(gè)中轉(zhuǎn)化淋巴細(xì)胞即淋巴母細(xì)胞（根據(jù)形態(tài)）的百分率。正常值～操作過(guò)程：試驗(yàn)管:抗凝血－培養(yǎng)液對(duì)照管：抗凝血培養(yǎng)液°培養(yǎng)天涂片染色計(jì)數(shù)個(gè)中轉(zhuǎn)化淋巴細(xì)胞的百分率轉(zhuǎn)化與未轉(zhuǎn)化淋巴細(xì)胞的區(qū)別轉(zhuǎn)化細(xì)胞未轉(zhuǎn)化細(xì)胞特點(diǎn)母細(xì)胞過(guò)渡型小淋巴細(xì)胞細(xì)胞大?。ㄖ睆剑│苔苔贪巳旧|(zhì)疏松疏松致密核仁個(gè)有或無(wú)無(wú)分裂相有或無(wú)無(wú)無(wú)量豐富稍寬窄嗜堿性強(qiáng)、深蘭色蘭色天青蘭空泡有或無(wú)有或無(wú)無(wú)偽足有或無(wú)有或無(wú)無(wú)胞漿形態(tài)學(xué)方法的優(yōu)缺點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)便、不需要特殊儀器，無(wú)有害物（放射性物質(zhì)）污染。缺點(diǎn)：判斷結(jié)果不客觀，受主觀因素影響，結(jié)果判斷難以規(guī)范化。（）同位素?fù)饺敕ǎ〒饺敕ǎ┰恚杭?xì)胞受刺激后，細(xì)胞進(jìn)入增殖周期,發(fā)生有絲分裂合成。試驗(yàn)中當(dāng)細(xì)胞進(jìn)入期時(shí)，在培養(yǎng)液中加入胸腺嘧啶核苷（)，細(xì)胞攝入，合成,根據(jù)摻入細(xì)胞內(nèi)的同位素量，推測(cè)細(xì)胞增殖程度，從而判斷淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化程度。步驟：外周血分離淋巴細(xì)胞洗滌次計(jì)數(shù)并配成×細(xì)胞°加μ孔°收集細(xì)胞于濾膜上°分鐘置有閃爍液的閃爍瓶中用閃爍計(jì)數(shù)儀測(cè)（每分鐘脈沖數(shù)）計(jì)算刺激指數(shù)：刺激指數(shù)()實(shí)驗(yàn)組對(duì)照組正常值：同位素?fù)饺敕ǖ膬?yōu)缺點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：結(jié)果客觀準(zhǔn)確，有取代形態(tài)學(xué)法的趨勢(shì)缺點(diǎn)：技術(shù)要求高，操作中每一個(gè)因素的改變都可影響結(jié)果；需要特殊儀器檢測(cè)；有同位素污染問(wèn)題（）比色法—四甲基偶氮唑鹽淋巴細(xì)胞受刺激物刺激培養(yǎng)過(guò)程中，細(xì)胞增殖活化，在細(xì)胞培養(yǎng)終止前小時(shí)，加入，繼續(xù)培養(yǎng)。

在細(xì)胞線粒體琥珀酸脫氫酶的作用下，被還原成藍(lán)黑色的甲瓚，形成的甲瓚量與細(xì)胞增殖呈正相關(guān)。終止培養(yǎng)后加入二甲亞砜，使甲瓚溶解。在酶標(biāo)儀上測(cè)，可反映細(xì)胞增殖水平。以刺激指數(shù)（）判斷淋巴細(xì)胞增殖程度。試驗(yàn)孔對(duì)照孔本法敏感性不及摻入法，但操作簡(jiǎn)單，無(wú)放射性污染。（二）細(xì)胞因子檢測(cè)細(xì)胞因子的檢測(cè)應(yīng)注意的問(wèn)題.欲了解免疫功能情況，應(yīng)檢測(cè)多項(xiàng)細(xì)胞因子，如細(xì)胞免疫應(yīng)測(cè)、、等.局部取標(biāo)本：細(xì)胞因子由局部細(xì)胞產(chǎn)生，在血液中濃度極低，最好取局部體液或細(xì)胞.動(dòng)態(tài)檢測(cè)比較，如疾病的復(fù)發(fā)期、緩解期、恢復(fù)期.同一細(xì)胞因子選用多種方法檢測(cè)，生物活性檢測(cè)與其他方法檢測(cè)結(jié)果不一定平衡（一個(gè)是功能，一個(gè)是量）細(xì)胞因子檢測(cè)方法生物學(xué)方法免疫學(xué)方法分子生物學(xué)方法（一）生物學(xué)方法原理：根據(jù)不同細(xì)胞因子生物學(xué)活性（功能)不同而設(shè)計(jì)的方法如可促進(jìn)淋巴細(xì)胞生長(zhǎng)；可殺腫瘤細(xì)胞；可刺激造血細(xì)胞形成集落；可保護(hù)細(xì)胞免受病毒攻擊。具體方法：細(xì)胞增殖法靶細(xì)胞殺傷法誘導(dǎo)的產(chǎn)物分析法細(xì)胞病變抑制法.細(xì)胞增殖法原理：一些細(xì)胞因子可專一刺激某些細(xì)胞增殖，而且細(xì)胞增殖的程度與這些細(xì)胞因子活性呈正相關(guān)。如：——細(xì)胞，——肥大細(xì)胞，——漿細(xì)胞。這些只依賴某種細(xì)胞因子才能生長(zhǎng)的細(xì)胞系又稱為依賴細(xì)胞株。如人對(duì)鼠細(xì)胞有支持生長(zhǎng)作用一定數(shù)量鼠細(xì)胞每孔分別加不同劑量的培養(yǎng)根據(jù)鼠細(xì)胞生長(zhǎng)情況，可制作的標(biāo)準(zhǔn)曲線（數(shù)孔）.靶細(xì)胞殺傷法有的細(xì)胞因子能殺傷靶細(xì)胞（腫瘤細(xì)胞），利用同位素釋放法或染色法等可判定其殺傷率.細(xì)胞因子誘導(dǎo)的產(chǎn)物分析法某些細(xì)胞因子可刺激特定的細(xì)胞產(chǎn)生生物活性物質(zhì)，通過(guò)測(cè)定其誘生產(chǎn)物來(lái)反映細(xì)胞因子活性如、可誘導(dǎo)骨髓產(chǎn)生組胺；誘導(dǎo)肝細(xì)胞產(chǎn)生抗糜蛋白酶；.細(xì)胞病變抑制法干擾素可阻止病毒侵害細(xì)胞，可用相關(guān)試驗(yàn)來(lái)檢測(cè)驗(yàn)干擾素含量。如血凝素生成抑制試驗(yàn)：小鼠腦脊髓心肌炎病毒可感染人肺癌細(xì)胞，該病毒在生長(zhǎng)過(guò)程中可產(chǎn)生血凝素，使人型凝集試驗(yàn)管：細(xì)胞（已長(zhǎng)好）加一定量干擾素培養(yǎng)一定時(shí)間加病毒培養(yǎng)反復(fù)凍融稀釋不同倍數(shù)加型血球觀察凝集情況陽(yáng)性對(duì)照加標(biāo)準(zhǔn)；陰性對(duì)照不加。在標(biāo)準(zhǔn)劑量曲線上查出量（二）免疫學(xué)檢測(cè)法細(xì)胞因子為蛋白質(zhì)或多肽，具有較強(qiáng)的免疫原性，可用其特異抗體來(lái)檢測(cè)。最常用的檢測(cè)方法是和放免法、化學(xué)發(fā)光法。定量測(cè)定（三）分子生物學(xué)方法利用細(xì)胞因子基因探針檢測(cè)特定的細(xì)胞因子表達(dá)的技術(shù)常用的方法：斑點(diǎn)雜交、逆轉(zhuǎn)錄、、細(xì)胞或組織原位雜交等試劑：核酸探針——一段用放射性同位素或其他標(biāo)記物（生物素、地高辛等）標(biāo)記的一段片段，或單鏈、，它可與目的基因（細(xì)胞因子)互補(bǔ)此法靈敏、快速三種方法優(yōu)缺點(diǎn)比較優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)生物學(xué)敏感、測(cè)功能長(zhǎng)期培養(yǎng)依賴細(xì)胞株、費(fèi)時(shí)步驟煩瑣、影響因素多免疫學(xué)簡(jiǎn)單、迅速只檢測(cè)量，不代表活性，敏感重復(fù)性好度低（較生物學(xué)法低倍）分子生敏感、快速測(cè)基因表達(dá)情況，不能直接提物學(xué)供濃度和活性（三）細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗(yàn)細(xì)胞毒性細(xì)胞（)具有殺傷靶細(xì)胞的功能，它是評(píng)價(jià)機(jī)體細(xì)胞免疫水平的指標(biāo)。檢測(cè)這種殺傷作用的試驗(yàn)稱為細(xì)胞毒試驗(yàn)。與靶細(xì)胞表面相應(yīng)抗原結(jié)合通過(guò)脫顆粒，釋放穿孔素、顆粒酶，使靶細(xì)胞溶解、凋亡。靶細(xì)胞穿孔素、顆粒酶靶細(xì)胞溶解、凋亡致敏淋巴細(xì)胞殺傷靶細(xì)胞的顆粒外排途徑和途徑聯(lián)合殺傷靶細(xì)胞的過(guò)程殺傷具有高度的抗原特異性及嚴(yán)格的限制性連續(xù)殺傷靶細(xì)胞的殺傷特點(diǎn)：抗原特異性、限制性、高效性與連續(xù)性方法.形態(tài)學(xué)方法淋巴細(xì)胞與靶細(xì)胞按一定比例加在一起培養(yǎng)一段時(shí)間，染色后計(jì)數(shù)殘留靶細(xì)胞（腫瘤細(xì)胞）數(shù)，計(jì)算淋巴細(xì)胞抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率。對(duì)照組（不加，只有腫瘤細(xì)胞）：對(duì)照組平均殘留腫瘤細(xì)胞數(shù)實(shí)驗(yàn)組（腫瘤細(xì)胞）：實(shí)驗(yàn)組平均殘留腫瘤細(xì)胞數(shù)抑制率對(duì)照組實(shí)驗(yàn)組對(duì)照組.同位素法：常用釋放試驗(yàn)原理：用標(biāo)記靶細(xì)胞（一般為腫瘤細(xì)胞），將它與待測(cè)淋巴細(xì)胞（效應(yīng)細(xì)胞）一起培養(yǎng)，效應(yīng)細(xì)胞（）破壞靶細(xì)胞，釋放出來(lái)，測(cè)定其數(shù)量，即可推知效應(yīng)細(xì)胞的殺傷能力。方法：效應(yīng)細(xì)胞：受檢者外周血單個(gè)核細(xì)胞靶細(xì)胞：用鉻酸鈉（)標(biāo)記傳代腫瘤細(xì)胞分三組：.最大釋放組：μ靶μ(靶細(xì)胞全溶).自發(fā)釋放組：μ靶μ培養(yǎng)液.實(shí)驗(yàn)組：μ靶μ培養(yǎng)液μ效應(yīng)效：靶分別為：；：；：培養(yǎng)后取上清測(cè)計(jì)算特異溶解百分率：實(shí)驗(yàn)組自發(fā)釋放組最大釋放組自發(fā)釋放組特異溶解百分率大于為陽(yáng)性細(xì)胞免疫功能體內(nèi)檢測(cè)法—Ⅳ型超敏反應(yīng)皮試原理：Ⅳ型超敏反應(yīng)的本質(zhì)是細(xì)胞免疫，Ⅳ型超敏反應(yīng)如為陽(yáng)性，可反映細(xì)胞免疫功能好。所用抗原：或以為例：

皮內(nèi)注射，—觀察結(jié)果。紅腫硬結(jié)直徑大于，為陽(yáng)性該試驗(yàn)設(shè)計(jì)是基于人群中的人均感染過(guò)結(jié)核菌（被結(jié)核抗原致敏），致敏淋巴細(xì)胞再次接觸抗原（如)后，釋放出細(xì)胞因子，使局部產(chǎn)生以巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)為主的炎癥反應(yīng)（表面為紅腫硬結(jié)）。陽(yáng)性（直徑>)：曾感染過(guò)結(jié)核菌，細(xì)胞免疫功能好陰性(直徑<)：細(xì)胞免疫功能差或從未感染過(guò)結(jié)核菌強(qiáng)陽(yáng)性（直徑>)：表明現(xiàn)處于結(jié)核的活動(dòng)期

三細(xì)胞數(shù)量的檢測(cè)（一）細(xì)胞表面識(shí)別抗原受體（）（,)的檢測(cè)是細(xì)胞表面膜免疫球蛋白，存在于成熟淋巴細(xì)胞膜上，為細(xì)胞結(jié)構(gòu)蛋白。類型為：、型。作用及意義：.是細(xì)胞的表面標(biāo)志.是細(xì)胞識(shí)別抗原的受體.檢測(cè)外周血淋巴細(xì)胞時(shí)，表面有者為細(xì)胞，故可作為檢測(cè)細(xì)胞數(shù)量的方法。.方法（常用免疫熒光法）（）試劑：熒光標(biāo)記的抗人、抗體（）外周血淋巴細(xì)胞涂片，熒光抗體染色（）觀察：陽(yáng)性細(xì)胞呈均染上熒光.正常值：（二）細(xì)胞表面抗原的檢測(cè)細(xì)胞表面特有的抗原有：、，用抗的單抗（免疫熒光法、酶免疫組化法）檢測(cè)外周血淋巴細(xì)胞，陽(yáng)性細(xì)胞為淋巴細(xì)胞，約占總淋巴細(xì)胞的。以上兩種方法中，檢測(cè)細(xì)胞膜表面的方法用得多些。四細(xì)胞功能的檢測(cè)（一）血清中的測(cè)定人的體液免疫功能正常（細(xì)胞功能正常），應(yīng)反映在血清中有正常量的免疫球蛋白檢測(cè)人免疫球蛋白常用方法：?jiǎn)蜗颦傊瑪U(kuò)散試驗(yàn)、免疫比濁法正常值：()