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文檔簡介
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專題一傳統(tǒng)發(fā)酵技術的應用
果酒 在 條件下,酒精與 反響呈 色果醋 果醋制作是否成功,除觀看酒膜、嘗、嗅外,還可以通過 ,發(fā)酵技術:指利用 來獲得微生物或微生物代謝產(chǎn)物的過程。一、微生物填菌種果酒: , 生物,代謝類型為 , 生殖,果醋: , 生物,代謝類型為 , 生殖,主要是 ,還有 ,腐乳 毛霉: 生物,代謝類型為 , 生殖, 狀真菌,具有興旺的 ,
腐乳亞硝酸鹽含量的測定1、亞硝酸鹽〔1〕色粉末,易容于水;可做食品添加劑〔2〕膳食中亞硝酸鹽含量,一般危害人體安康,膳食中大局部亞硝酸鹽〔3〕在適宜溫度、PH、肯定微生物的作用下,亞硝酸鹽會形成,亞硝胺有的作用在條件下,亞硝酸鹽與在條件下,亞硝酸鹽與發(fā)生反響后,與結合形成色染料,: , 生物,代謝類型為 , 生殖。泡菜常見的乳酸菌有 和 ,用于生產(chǎn)酸奶的是 ,二、菌種來源傳統(tǒng)做法:果酒的菌種來源于 ,果醋的菌種來源于 ,腐乳的菌種來源于 ,泡菜的菌種來源于 ,工業(yè)生產(chǎn): ,優(yōu)點: 。二、原理1、前期: 氧,讓酵母菌 呼吸 。反響式: 。果酒2、后期: 氧,讓酵母菌 呼吸 。反響式: 。1、當氧氣、碳源充分時:果醋2、當氧氣充分、碳源不充分時:毛霉產(chǎn)生 將 分解為 ,腐乳毛霉產(chǎn)生 將 分解為 ,泡菜 乳酸菌進展 呼吸產(chǎn)生 ,反響式為:四、溫度,時間氧氣 溫度 時間果酒果醋腐乳泡菜30—35條件下?為什么果醋發(fā)酵要有氧條件下?為什么果酒發(fā)酵要無氧條件下?為什么腐乳要密封?為什么腐乳要密封?五、檢測
泡菜 假設亞硝酸鹽多,則顏色深,將反響的顏色與濃度的標準顯色液目測比較,估算泡菜中亞硝酸鹽含量。把這樣的方法叫做 法3、測定亞硝酸鹽含量的操作步驟:配置溶液 制備標準顯色液 制備樣品處理液 比色4、亞硝酸鹽含量的計算方法思考:1、為什么要測定?2、①AB段上升的緣由?②BC段下降的緣由六、流程1、果酒和果醋選擇葡萄→ →榨汁→ 發(fā)酵→ 發(fā)酵發(fā)酵瓶A、標出各構造的名稱及作用,為什么排氣口要長而彎?B、發(fā)酵瓶裝果汁前用 消毒,葡萄汁裝后留 的空間,為什么?C、制作果酒需要將 充氣口,為什么 。制作果醋需要將 充氣口,為什么 。制作酸奶需要將 充氣口,為什么 。D、在葡萄酒的過程中,操作錯誤導致發(fā)酵瓶瓶塞被沖開,該操作的錯誤。E、假設用簡易瓶子進展果酒發(fā)酵,則每12小時后需要將瓶蓋擰松一次〔目的是 ,蓋緊瓶蓋〔為什么要蓋緊 ,而不是翻開瓶蓋〔是為了 ,當子內(nèi)產(chǎn)生酒精后,將瓶蓋翻開,獲得。F、甲同學的錯誤是,導致消滅的特別現(xiàn)象是 ;丙同學的錯誤是,導致消滅的特別現(xiàn)象是 ;甲、乙、丙得到的發(fā)酵產(chǎn)品依次是 、 、 。選擇 〔穎枯燥的葡萄用 沖洗葡萄沖洗的目的是 ,〔能、不能〕反復沖洗,為什么 。先沖洗還是先除去枝梗?為什么?果酒發(fā)酵時,當酒精濃度到達14-15%時,發(fā)酵停頓,主要緣由是?影響果酒發(fā)酵的因素有哪些?酒精發(fā)酵后假設要發(fā)酵得到果醋,需要轉(zhuǎn)變的環(huán)境條件是?酒放久了為什么會有酸味?果酒發(fā)酵過程中,發(fā)酵液的PH漸漸 。果酒發(fā)酵時,為什么酵母菌能生長,而其他微生物收到抑制?變酸的就外表觀看的的菌膜是 。葡萄酒呈現(xiàn)深紅色的緣由是什么?2、腐乳的制作流程選擇豆腐 讓豆腐長出 加 加 裝瓶 腌制選含水量為 左右的豆腐,加鹽腌制鹽的作用?豆腐與鹽的質(zhì)量分數(shù)比為 ;如何加鹽? 為什么?為什么接近瓶口外表的鹽要鋪厚一些?鹵湯由 和 制成。酒的含量? 酒的作用?香辛料的作用?瓶先用 消毒,參加鹵湯后,將瓶口用 滅菌〔為什么 〕,后用膠條密封〔為什么 〕。影響腐乳品質(zhì)的因素有哪些?A、為什么要掌握好鹽的用量?B、酒的含量為 ,為什么要掌握好酒的含量?C、溫度如何影響腐乳品質(zhì)?D、時間影響 。E、選含水量為 左右的豆腐,假設水多,則 ,水少,則 。腐乳的皮是 ,腐乳的毛是 ,腐乳為什么易于消化吸???為什么臭 ,為什么香 。3、制作泡菜的過程
為什么要選擇穎的蔬菜?為什么多吃穎的蔬菜,少吃腌制食品?水與鹽的質(zhì)量比為 ,鹽水需要 并 。為什么要煮沸?為什么要冷卻?什么樣的泡菜壇?如何檢測泡菜壇的密封性?如何裝壇?為什么要向壇蓋邊沿的水槽中注滿水?發(fā)酵時間長短受 影響掌握腌制的那些條件 ?假設溫度高、鹽少、時間段則易 ,溫度過低則 。泡菜外表的白膜是 ,思考:1、真空包裝的酸菜,有“脹袋”現(xiàn)象,緣由可能是“雜菌污染”還是“乳酸菌大量生殖”造成?為什么?2、泡菜制作過程,乳酸菌數(shù)量 ,其他雜菌 ,為什么 。微生物模塊一、微生物的試驗室:1.培育基概念:人們依據(jù)微生物對 的不同需求,配制出供其 的養(yǎng)分基質(zhì)。養(yǎng)分組成:一般都含有 和 。此外,還需要滿足微生物生長對 、氧氣以及 的要求。分類 培育基(含凝固劑); 培育基(不含凝固劑)〔凝固劑是 : 中提取到 物質(zhì),在 下凝固, 下熔化〕2.無菌技術獲得純潔培育物的關鍵:類型概念方法類型概念方法對象問題①.劃線時為什么要從上一次劃線的末端開頭?②.劃線時不能劃破培育基,假設劃破了會怎樣?③.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)?在劃線操作完畢時,仍舊需要灼燒接種環(huán)嗎?為什么?3.大腸桿菌的純化培育制備牛肉膏蛋白胨固體培育基步驟:計算→稱量→ → → →問題:①.培育基滅菌后,需要冷卻到 左右時,才能用來倒平板。你用什么方法來估量培育基的溫度?②.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰?③.為什么將平板倒置?純化大腸桿菌的方法①純化培育原理:想方設法在培育基上得到 的肉眼可見的 ,即可獲得較純的菌種。②純化大腸桿菌的關鍵步驟: ,接種時要在 旁,緣由是。③常用的微生物接種方法有兩種法:是通過 在瓊脂固體培育基外表 的操作,將聚攏的菌種逐步稀釋分散到培育基的外表。法:是將菌液進展一系列的 ,然后將 的菌液分別涂布到瓊脂固體培育基的外表,進展培育。問題:①在這兩種接種方法中,計數(shù)時只能選哪種接種方法?
④.在灼燒接種環(huán)之后,為什么要等其冷卻后再進展劃線?菌種的保存方法①對于頻繁使用的菌種,可以承受 的方法,接種在試管的培育基上,將試管放入 保藏②對于需要長期保存的菌種,可以承受 的方法。4.試驗室中篩選微生物的原理是。二、土壤中分解尿素的細菌的分別與計數(shù)試驗原理:(1)能合成 的細菌才能分解尿素(2)配制以 為唯一 的培育基,能夠生長的細菌就是能分解尿素的細菌,還要涂布一個牛肉膏蛋白胨培育基,以此說明 。⑶可以用加了 的培育基進展鑒別,培育基變試驗流程:土壤取樣→配制土壤溶液和制備培育基→ →涂布平板與培育→菌落計數(shù)統(tǒng)計菌落數(shù)目的方法方法一: 〔活菌計數(shù)法;至少要涂布 個平板,最終求取 值,要設置一個 平板作為比照,以說明一般選擇菌落數(shù)在 的平板進展計數(shù)。統(tǒng)計菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目 ,緣由是方法二: ;用了哪種載玻片問題:①觀看酵母菌的數(shù)量的動態(tài)變化用 法,其中也用到了 板,因此也叫 法②如分別取0.1mL已稀釋102倍的水樣分別涂布到六個瓊脂固體培育基的外表進展培育,培育基記錄到大腸桿菌的菌落數(shù)分別為 26、161、155、158、170,302則每升原水樣中大腸桿菌數(shù)為 _ ,三、.分解纖維素的微生物的分別①組成:纖維素酶是一種 ,一般認為它至少包括三種組分,即。②作用:纖維素 纖維二糖 葡萄糖纖維素分解菌的篩選①原理: 纖維素分解菌
選擇培育為什么能夠“濃縮”菌種?選擇培育中用 培育基作比照,而菌落計數(shù)時用 的空白培育基作比照,用途有什么不同?點撥(1)兩種比照組作用比較①推斷培育基中“是否有雜菌污染”,需將未接種的培育基同時進展培育?;暇鋽?shù)目,進展比照得出結論。平板劃線法純化大腸桿菌時不同階段灼燒接種環(huán)的目的不同①第一次操作:殺死接種環(huán)上原有的微生物。③劃線完畢后:殺死接種環(huán)上殘存的菌種,避開細菌污染環(huán)境和感染操作者。
↓纖維素酶
一、果膠
果膠酶在果汁生產(chǎn)中的作用→
紅色消逝,消滅
植物 、 的主要組成成分,半 聚合而成的高分子化合物, 水〔渾濁;②篩選方法: 染色法,即通過是否產(chǎn)生 來篩選纖維素分解菌。③培育基:以 為唯一 的 培育基。④試驗流程:土壤取樣:富含 的環(huán)境選擇培育:用選擇培育基培育,作用是梯度稀釋:用 制備系列稀釋液涂布平板:將樣品涂布到 纖維素分解菌的培育基上選擇產(chǎn)生 的菌落問題:1.土壤中分解尿素的細菌的分別與分解纖維素的微生物的分別的試驗流程有哪些異同?
含有親水基團,果膠與水有強大結合力,是有力的凝膠化劑二、果膠酶:包括 、 、 等作用在:將果膠分解成可溶性的 , 水果的出汁率并使果汁變 。三、酶活力測定的一般原理和方法肯定條件下,酶催化的某一化學反響的反響速度來表示〔單位時間內(nèi)、單位體積中,反響物的削減量或 的增加量〕哪些因素會影響酶的活性?哪些因素會影響果汁產(chǎn)量?〔一〕探究果膠酶的最適溫度思路:在恒定PH下,設置步驟1、制蘋果泥2、將 和 保溫:在混合蘋果泥和果膠酶之前進展恒溫處理的目的是?3、將酶與蘋果泥混合:玻璃棒4、過濾果汁A同學:測B同學:測自變量:溫度因變量:果汁的 或 度無關變量:pH、果泥量、果膠酶的濃度和用量、反響的時間,酶的用量、過濾時間等。(二〕果膠酶的最適pH思路:在恒定PH下,設置步驟1、制蘋果泥2、將 和 :可用 和 調(diào)PH3、將酶與蘋果泥混合4、過濾果汁那些因素該保持不變只轉(zhuǎn)變PH,其他因素保持不變是為什么?〔三〕探究果膠酶的用量思路:在恒定PH、溫度下,設置如何推斷果膠酶的用量是否適宜?緣由是?探討加酶洗衣粉的洗滌效果一、 加酶洗衣粉自變量 無關變量①洗衣粉的種類②污染物的種類應溫度③洗衣粉的用量 ④反⑤攪拌時間⑥布料是指含有的洗衣粉,常用的酶制劑有四類:、、、自變量 無關變量①洗衣粉的種類②污染物的種類應溫度③洗衣粉的用量 ④反⑤攪拌時間⑥布料一般洗衣粉和加酶洗衣粉的洗滌效果不同溫度下加酶洗衣粉的洗滌效果不同類型加酶洗衣粉的洗滌效果 某同學用10℃、20℃、30℃、40℃、50℃、60℃、70℃來探究加酶洗衣粉的最適溫度,方案可行嗎、為什么?
2、固定化細胞的包埋法法,緣由細胞體積大,難以被吸取或結合3、包埋材料:不溶于水的多孔性載體材料,如明膠、瓊脂糖、海藻酸鈉、醋酸纖維素和聚丙烯酰胺等;包埋酵母細胞用海藻酸鈉做載體。三、固定化細胞試驗操作〔一〕制備固定化酵母細胞1、 細胞的活化活化:讓處于 狀態(tài)的微生物重恢復2、配制0.05mol/L的 溶液:用 溶解3、配制 溶液: 加熱,防止 :溶解后需要濃度過高,很難形成 ;濃度過低,會導致 ,結果:凝膠珠所包埋的酵母細胞的數(shù)目少4、海藻酸鈉溶液和酵母細胞混合:海藻酸鈉溶液需 ;5、固定化酵母細胞 速度肯定要 ,將上述混合溶液滴入 中,得到〔二〕用固定化酵母細胞發(fā)酵6、沖洗 7、發(fā)酵 密封:為酵母菌的酒精發(fā)酵供給缺氧條件。操作提示無菌:蒸餾水、CaCl2溶液、海藻酸鈉溶液和葡萄糖溶液都需要滅菌。得到的凝膠珠即固定化酵母細胞,由 和 組成。血紅蛋白的提取和分別導學案一、根底1、蛋白質(zhì)提取與分別的依據(jù):1.分子的大小2.電荷性質(zhì)和多少3.溶解度4.吸附性質(zhì)5.對其他分子親和力2、血紅蛋白由 條肽鏈組成,包括 和 ;因含 而成紅色;作用:2、凝膠色譜法:依據(jù)被分別物質(zhì)的酵母細胞的固定化凝膠①性質(zhì):一些微小的多孔球體,球內(nèi)含很多貫穿的 ;一、固定化技術背景②化學本質(zhì): 化合物,如 、 糖:1、直接使用酶制劑2、固定化酶:用、法,緣由原理: 的蛋白質(zhì)由于集中作用不進入凝膠顆粒內(nèi)部路程先流出, 的蛋白質(zhì)由于集中作用進入凝膠顆粒內(nèi)部,路程,移動速度,,實例:高果糖漿:葡萄糖固定化酶 果糖,這里固定化的是 酶優(yōu)點:酶既能與 接觸,又能與 分別,同時,固定在載體上的酶還可以被 。缺點:一種酶只能催化一種化學反響3、固定化細胞固定化細胞的 、 法,緣由選用不溶于水的 載體材料,如明膠、瓊脂糖、海藻酸鈉、醋酸纖維素和聚丙烯酰胺等優(yōu)點:本錢低、操作簡潔;對酶活性的影響 ;可以催化 的反響、簡潔回收缺點:固定后的細胞與反響物不簡潔接近,可能導致反響效果由于大分子物質(zhì)難以自由通過細胞膜,因此固定化細胞的應用也受到限制。二、將酶和細胞固定化的方法 包埋法、化學結合法、 物理吸附法1、固定化酶可用、化學結合法、物理吸附法,緣由酶分子很小,包埋簡潔從包埋材料中漏出
后流出,依此可對血紅蛋白進展分別和純化。3、透析法:利用透析袋 通過, 留下。透析袋一般用 又稱 制成4、電泳法:利用分別樣品中各種分子 ,使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速率,從而實現(xiàn)樣品中各種分子的分別。兩種常用電泳法 和 ;測定蛋白質(zhì)分子量常用SDS能消退 的影響,緣由:SDS使蛋白質(zhì)變成 鏈,SDS所帶負電荷大大超過蛋白質(zhì)分子原有的電荷量,因此掩蓋了不同種類蛋白質(zhì)的 ,使電泳遷移速率完全取決于二、蛋白質(zhì)提取與分別四步1、樣品處理〔1〕紅細胞的洗滌:目的: ,洗滌次數(shù)過少,無法除去低速短時離心,防止白細胞和淋巴細胞沉淀參加 ,防止血液凝固緩慢攪拌的目的,防止〔2〕血紅蛋白的釋放:加 和40%體積蒸餾水的作用: 甲苯的作用3〕分別血紅蛋白第1層〔最上層:無色透亮
甲裝置用于 ,目的是 。用乙裝置分別蛋白質(zhì)的方法叫 ,是依據(jù) 分別蛋白質(zhì)的有效方法。用乙裝置分別血紅蛋白時,待 時,用試管收集流出液,每5mL收集一管,連續(xù)收集。離心2層色薄層固體,物質(zhì)的層,3層:4層:色透亮其它雜質(zhì)的的色層層10.O2和局部CO2的運輸。請依據(jù)血紅蛋白的提取和分別流程圖答復以下問題:濾紙的作用:濾紙的作用: 分液漏斗的作用是: 2、粗分別〔4〕透析血紅蛋白目的 將透析袋放入緩沖溶液的作用:模擬細胞內(nèi)的pH環(huán)境,保證血紅蛋白的正常中。3、純化 法①膠色譜柱的制作②凝膠色譜柱的 .和③.留意:凝膠裝填時盡量嚴密,均勻,以低凝膠顆粒之間的空隙;裝填凝膠柱時不能有氣泡存在〔氣泡和空隙會 ,降低分別效果〕分別效果不能發(fā)生洗脫液 ,露出凝膠顆粒的現(xiàn)象。4、純度鑒定1.推斷常考語句,澄清易混易錯(1)純化主要是依據(jù)蛋白質(zhì)以及蛋白質(zhì)與其他物質(zhì)之間的理化性質(zhì)的差異進展( (2)透析法可去除小分子化合物雜質(zhì),原理是不同分子所攜帶凈電荷不同( )(3)通過掌握離心速率,可使分子大小、密度不同的蛋白質(zhì)沉降分層,從而分別不同的蛋白( (4)不同的物質(zhì)在同一電場中的泳動速度不同,因此可用電泳法分別蛋白質(zhì)( )(5)影響泳動速度的因素包括帶電顆粒的性質(zhì)、電場強度、溶液的pH等( 2.分析命題熱圖,明確答題要點以下圖是用凝膠色譜法分別a、b兩種蛋白質(zhì)的示意圖,請分析:先從層析柱中洗脫出來的是哪種蛋白質(zhì)? 為什么?d是什么?有什么特點?層析柱裝填時不能有氣泡的緣由是什么?4.如圖表示血紅蛋白提取和分別的局部試驗裝置,請據(jù)圖答復以下問題:(1)血紅蛋白是人和其他脊椎動物紅細胞的主要組成成分它在紅細胞中的作用表達了蛋白質(zhì)具有 功能(2)甲裝置中,B是血紅蛋白溶液,則A是 ;乙裝置中,C溶液的作用是 。
將試驗流程補充完整:A 為 ,B為 。凝膠色譜法是依據(jù) 而分別蛋白質(zhì)的有效方法洗滌紅細胞的目的是去除 ;離心速度過高和時間過長會使 一同沉淀,達不到分別的效果洗滌干凈的標志是 。釋放血紅蛋白的過程中起作用的是 。某同學利用瓊脂糖凝膠電泳技術將得到的蛋白質(zhì)進展分別,在電泳過程中,影響蛋白質(zhì)遷移速度的因素包括蛋白質(zhì)分子的 、分子的大小外形等。而另一位同學則利用凝膠過濾分別蛋白質(zhì)。待蛋白質(zhì)接近凝膠色譜柱底端時用試管連續(xù)收集流出液先收集到的蛋白質(zhì)與后收集到的蛋白質(zhì)的區(qū)分是 考點三植物有效成分的提取植物芳香油的提取可承受的方法有壓榨法、蒸餾法和 。(2)芳香油溶解性的特點是 。玫瑰精油的提取1、鮮玫瑰花+清水的比例:( )盛花期采摘,花朵含油量最高2、加NaCl的作用:增加鹽的濃度,使油和水分層加無水NaSO的目的:
①主要因素:萃取劑的 和 。②次要因素:原料顆粒的 、嚴密程度、含水量、萃取的溫度、萃取的時間等。2 43、水蒸氣蒸餾要適當 蒸餾時間,溫度不能太高。柑橘和檸檬不適用水中蒸餾法的緣由:水中蒸餾會導致 和 等問題4、水蒸氣蒸餾法特點①水中蒸餾設備簡潔、本錢低、易操作,而水上蒸餾和水氣蒸餾時間短,出油率高。②水中蒸餾對于柑橘和檸檬等原料不適用。由于水中蒸餾會導致原料焦糊和有效成分水解。于水的成分的提取。橘皮精油的提取壓榨時原料必需要浸透,這樣壓榨時不會滑脫,出油率高,不堵塞篩眼;物不清的病癥,該疾病稱為 ,胡蘿卜素是 物不清的病癥,該疾病稱為 ,胡蘿卜素是 (填“揮發(fā)性”或“非揮發(fā)性”)物質(zhì)。工業(yè)生產(chǎn)上,用養(yǎng)殖的巖藻作為原料提取胡蘿卜素時, (填“需要”或“不需要”)將穎的巖藻枯燥?,F(xiàn)有乙醇和乙酸乙酯兩種溶劑,應選用其中的 作為胡蘿卜素的萃取劑,不選用另外一種的理由是 ?!?)承受萃取法從胡蘿卜中提取胡蘿卜素的主要步驟是:粉碎、枯燥、萃取、 。干燥時,要留意掌握 ,否則會引起胡蘿卜素的分解;萃取的效率主要取決于萃取劑的 ,1、用于萃取的有機溶劑必需事先精制,除去雜質(zhì)。2、萃取劑分水溶性和水不溶性兩種。乙醇和丙酮屬于 萃取劑。3、萃取胡蘿卜素的有機溶劑的要求:有較高的沸點,不與水混溶,能夠充分溶解胡蘿卜素,且毒性較小〔如石油醚、乙酸乙酯等〕4、影響萃取的因素:
蒸餾裝置安裝挨次是由下而上,撤除時相反。承受水浴加熱的緣由:有機溶劑都是易燃物,直接使用明火加熱簡潔引起燃燒、爆炸。萃取時,在燒瓶口安裝冷凝回流裝置的目的是 。[補充]答復與胡蘿卜素有關的問題:(1)胡蘿卜含有的胡蘿卜素中,最主要的是 (填“α胡蘿卜素”“β胡蘿卜素”或“γ胡蘿卜素”),該胡蘿卜素在人體內(nèi)可以轉(zhuǎn)變成兩分子 ,后者缺乏會引起人在弱光下視同時還受原料顆粒的大小含水量等條件的影響萃取過程中宜承受 方式加熱以防止溫度過高;萃取液濃縮前需進展過濾其目的是 在對提取的胡蘿卜素粗品通過紙層析法進展鑒定時應與 作比照。請答復以下與試驗室提取芳香油有關的問題:植物芳香油的提取可承受的方法有壓榨法、蒸餾法和 。(2)芳香油溶解性的特點是 。
答案:
專題一傳統(tǒng)發(fā)酵技術的應用(3)對材料壓榨后可得到糊狀液體,為除去其中的固體物質(zhì)獲得乳狀液可承受的方法。(4)得到的乳狀液參加氯化鈉并放置一段時間后,芳香油將分布于液體的上層,緣由是油層的密度比 。參加氯化鈉的作用是 。(5)從乳狀液中分別得到的芳香油中要參加無水硫酸鈉,該試劑的作用。(6)某同學在試驗中設計了如下圖裝置提取玫瑰精油,指出該裝置中的兩個錯誤。①錯誤1: 。②錯誤2: 。
發(fā)酵技術:指利用微生物在有氧或無氧條件下的生命活動來獲得微生物或微生物代謝產(chǎn)物的過程。一、微生物果酒 :酵母菌,真核生物,代謝類型為異養(yǎng)兼性厭氧型,出芽或孢子生殖,果醋 :醋酸菌,原核生物,代謝類型為異養(yǎng)需氧型,二分裂生殖,主要是毛霉,還有青霉、酵母、曲霉等,腐乳毛霉:真核生物,代謝類型為異養(yǎng)需氧型,孢子生殖,絲狀真菌,具有興旺的白色菌絲:乳酸菌,原核生物,代謝類型為異養(yǎng)厭氧型,二分裂生殖。泡菜常見的乳酸菌有乳酸鏈球菌和乳酸桿菌,用于生產(chǎn)酸奶的是乳酸桿菌,二、菌種來源腐乳的菌種來源于空氣中的毛霉孢子;泡菜的菌種來源于附著在蔬菜上的乳酸菌,果酒1果酒1、前期:有氧,讓酵母菌有氧呼吸大量生殖。反響式:CH O+6O―→6CO+6HO。6 12 62222、后期:無氧,讓酵母菌無氧呼吸產(chǎn)生酒精。反響式:CH O―→2CHOH+2CO 。6 12 62 521、氧氣、糖源充分時:CH O+2O―→2CHCOOH+2CO+2HO;果醋6 12 623222、缺少糖源、氧氣充分時:CHOH+O―→CHCOOH+HO2 5232毛霉產(chǎn)生蛋白酶將蛋白質(zhì)分解為氨基酸+小分子的肽;腐乳毛霉產(chǎn)生將脂肪酶將脂肪分解為甘油+脂肪酸?!沧ⅲ焊橛袡C物含量削減,種類增加〕泡菜乳酸菌進展無氧呼吸產(chǎn)生乳酸,反響式為:CH O→2CHO6 12 63 6 3四、溫度,時間氧氣溫度時間果酒前期:需氧,后期:無氧18~2520℃左右10~12天果醋需要充分的氧氣30~35℃7~8天腐乳泡菜需氧無氧15~18_℃室溫610天30—35條件下?此為醋酸菌最正確生長生殖溫度為什么果醋發(fā)酵要有氧條件下?醋酸菌需要在有氧條件下才生長能生殖,產(chǎn)生醋酸為什么果酒發(fā)酵要無氧條件下?讓酵母菌在無氧條件下進展呼吸作用產(chǎn)生酒精為什么腐乳要密封?六、檢測果酒果酒在酸性條件下,酒精與重鉻酸鉀反響呈灰綠色色果醋制作是否成功,除觀看酒膜、嘗、嗅外,還可以通過檢測和比較發(fā)酵前果醋
E、假設用簡易瓶子進展果酒發(fā)酵,則每12〔目的是釋放CO
,再蓋緊六、流程
后的PH亞硝酸鹽含量的測定1、亞硝酸鹽〔1〕白色粉末,易容于水;可做食品添加劑〔2〕膳食中亞硝酸鹽含量低,一般不會危害人體安康,膳食中大局部亞硝酸鹽在人體中以過客的形式隨尿排出〔3〕在適宜溫度、PH、肯定微生物的作用下,亞硝酸鹽會形成亞硝胺,亞硝胺有致癌、同時對動物有致畸和致突變的作用2、測定亞硝酸鹽含量的原理:在鹽酸酸化條件下,亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反響后,與N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽結合形成玫瑰紅色〔高,顏色深些;溶液濃度低,顏色淺些〕將反響的顏色與濃度的標準顯色液進展目測比較,估算泡菜中亞硝酸鹽含量。把這樣的方法叫做比色法3、測定亞硝酸鹽含量的操作步驟:配置溶液 制備標準顯色液 制備樣品處理液 比色4、亞硝酸鹽含量的計算方法思考:1菜的最正確時機2、①AB段上升的緣由?壇內(nèi)環(huán)境有利于硝酸鹽復原菌的生殖,將硝酸鹽復原為亞硝酸鹽,曲線上升②BC段下降的緣由?由于乳酸菌的大量生殖,產(chǎn)生乳酸,對硝酸鹽復原菌產(chǎn)生抑制作用,同時形成的亞硝酸鹽又被分解,曲線下降。
瓶蓋〔為什么要蓋緊保證酵母菌進展無氧發(fā)酵產(chǎn)生酒精,而不是翻開瓶蓋〔是為了防止空氣中2的微生物進入發(fā)酵瓶造成污染,當瓶子內(nèi)產(chǎn)生酒精后,將瓶蓋打 開蓋上紗布連續(xù)發(fā)酵,獲得醋酸。2F、甲同學的錯誤是_未夾住發(fā)酵瓶的充氣管 ,導致消滅的特別現(xiàn)象是 _發(fā)酵液從充氣管流出,發(fā)酵液變酸_;丙同學的錯誤是瓶中發(fā)酵液過多,漂浮了排氣管在瓶內(nèi)的管口,導 致消滅的特別現(xiàn)象是_排氣時發(fā)酵液從排氣管流出;甲、乙、丙得到的發(fā)酵產(chǎn)品依次是葡萄醋、葡萄酒_、葡萄酒。選擇穎〔穎、枯燥〕的葡萄。用清水沖洗葡萄,沖洗的目的是洗去灰塵為目的,不能 〔能、不能〕反復沖洗,為什么防洗去野生型酵母菌。先沖洗還是先除去枝梗?先沖洗。為什么?以防葡萄汁流失及污染。果酒發(fā)酵時,當酒精濃度到達14-15%時,發(fā)酵停頓,主要緣由是?一般發(fā)酵在酒精濃度到達12%-15%時就會停頓,主要緣由酒精濃度過高,對酵母菌有毒害作用,使其失活。影響果酒發(fā)酵的因素有哪些?發(fā)酵時間、溫度酒精發(fā)酵后假設要發(fā)酵得到果醋,需要轉(zhuǎn)變的環(huán)境條件是?有氧、適當提高溫度果酒發(fā)酵過程中,發(fā)酵液的PH漸漸降低。果酒發(fā)酵時,為什么酵母菌能生長,而其他微生物收到抑制?果酒發(fā)酵時發(fā)酵液缺氧、呈酸性,酵母菌能生長,而其他微生物收到抑制變酸的酒外表觀看的的菌膜是醋酸菌 。葡萄酒呈現(xiàn)深紅色的緣由是什么?葡萄皮的色素進入了發(fā)酵液2、腐乳的制作流程選擇豆腐 讓豆腐長出毛霉 加鹽腌制 加鹵湯裝瓶 密封腌制選含水量為70%左右的豆腐,鹽的作用?抑制微生物的生長,避開豆腐塊腐敗變質(zhì);析出豆腐中的水分,使豆腐塊變硬。1、果酒和果醋選擇葡萄→沖洗→榨汁→酒精發(fā)酵→醋酸發(fā)酵〔1〕發(fā)酵瓶A、標出各構造的名稱及作用,為什么排氣口要長而彎?防止空氣中的 微生物進入發(fā)酵瓶造成污染B、發(fā)酵瓶裝果汁前用70%1/3①先讓酵母菌進展有氧
由于什么?鹽的濃度過低,缺乏以抑制微生物的生長,可能導致豆腐腐敗變質(zhì);鹽的濃度過高,會影響腐乳的口味。豆腐與鹽的質(zhì)量分數(shù)比為 豆腐:鹽=5∶1 ;如何加鹽?逐層加鹽,近瓶口外表的鹽要鋪厚一些。為什么接近瓶口外表的鹽要鋪厚一些?防止微生物污染;鹽下滲進入腐均勻。鹵湯由12%酒和香辛料制成。2O2
后再進展酒精發(fā)酵;②防止發(fā)酵過程中產(chǎn)生的CO
造成發(fā)酵液溢出。
酒的含量?12% 酒的作用?抑制微生物的生長,同時能使腐乳具有獨特的香味。2C制作果酒需要關閉充氣口為什么?保證酵母菌進展無氧發(fā)酵產(chǎn)生酒精制作果醋需要將 翻開充氣口,連接氣泵,輸入氧氣。為什么?醋酸發(fā)酵需要氧氣。制作酸奶需要將關閉充氣口,為什么?乳酸菌進展無氧呼吸產(chǎn)生乳酸。2D_發(fā)酵液裝的太滿_。
香辛料的作用?調(diào)制腐乳的風味,也具有防腐殺菌的作用。瓶先用沸水酒精燈的火焰〔為什么?防止瓶口被污染。〕,后用膠條密封〔〕。影響腐乳品質(zhì)的因素有哪些?發(fā)酵溫度、時間、鹽的用量、酒的種類和用量、香辛料的用量、豆腐含水量等A、為什么要掌握好鹽的用量?鹽的濃度過低,缺乏以抑制微生物的生長,可能導致豆腐腐敗變質(zhì);鹽 〔6〕泡菜外表的白膜是產(chǎn)膜酵母,的濃度過高,會影響腐乳的口味。B、酒的含量為12% ,為什么要掌握好酒的含量酒精含量過高,使腐乳成熟期延長。酒精含量過低,雜菌生殖快,豆腐易腐敗C、溫度如何影響腐乳品質(zhì)?溫度適宜,腐乳成熟快D、時間影響腐乳的成熟度。E、選含水量為 70% 左右的豆腐,假設水多,則豆腐不易成形,水少,則豆腐過硬 。腐乳的皮是毛霉菌絲及氨基酸、小分子肽等養(yǎng)分物質(zhì),腐乳的毛是毛霉的直立菌絲,腐乳為什么易于消化吸???毛霉等微生物能產(chǎn)生蛋白酶和脂肪酶,蛋白酶能將豆腐中的蛋白質(zhì)分解成小分子的多肽和氨基酸;脂肪酶可將脂肪水解成甘油和脂肪酸為什么臭?蛋白質(zhì)在蛋白酶的作用下分解產(chǎn)生一種叫硫化氫(H2S)的化合物,這種化合物具有刺鼻的臭味,為什么香將脂肪水解產(chǎn)生了甘油和脂肪酸。腐乳種類:紅方因加紅曲而呈深紅色;糟方參加酒糟而糟香撲鼻;青色腐乳是指臭腐乳,青方因不加輔料,呈豆青色。3、制作泡菜的過程類型 概念 方法 對象消毒 指使用較為溫順的物理或化 煮沸消毒法 泡菜壇〔1〕亞硝酸鹽含量低不耐高溫的液體,如牛奶亞硝
思考:1、真空包裝的酸菜,有“脹袋”現(xiàn)象,緣由可能是“雜菌污染”還是“乳酸菌大量生殖”造成?2、泡菜制作過程,乳酸菌數(shù)量先增加〔后削減,其他雜菌漸漸削減,為什么?泡菜變酸,利于生長,乳酸菌較耐酸 。答案一、微生物的試驗室:1.培育基概念:人們依據(jù)微生物對養(yǎng)分物質(zhì)的不同需求,配制出供其生長生殖的養(yǎng)分基質(zhì)。養(yǎng)分組成:一般都含有水、碳源、氮源和無機鹽。此外,還需要滿足微生物生長對pH、氧氣以及特別養(yǎng)分物質(zhì)的要求。①自養(yǎng)微生物能夠利用空氣中的CO2合成有機物,培育基中不需參加有機碳源(可參加無機碳源)。②固氮微生物能夠固定空氣中的N2,合成氨態(tài)氮,培育基中不需添加氮源。③培育乳酸菌需要添加維生素;培育霉菌需要將PH調(diào)至酸性;培育細菌需要將PH調(diào)至中性或微堿性;厭氧微生物需要供給無氧環(huán)境?!?〕分類 固體培育基(含凝固劑);液體培育基(不含凝固劑)〔凝固劑是瓊脂 :紅藻中提取到多糖物質(zhì),在44℃下凝固,98℃下熔化〕部一局部對人體有害的微生酸鹽含量低,腌制食品亞硝酸鹽含量高
化學藥劑 酒精擦拭雙手,氯氣消毒水源;
無菌技術〔3〕4后冷卻
。為什接種箱;工作臺
獲得純潔培育物的關鍵:防止外來雜菌的么要煮沸?一是除去水中的氧氣,二是殺滅鹽水中的其他細滅菌 指用猛烈的理化因素殺死物
接種環(huán)、接種針或其他金屬工具污染菌。為什么要冷卻?防止溫度過高殺死菌種。干熱滅菌微〔裂紋、無砂眼、壇沿
玻璃器皿()和金屬用具等
大腸桿菌的純化培育深、蓋子孢菜壇
高壓蒸汽滅菌 培育基等〔100kPa121℃〕
制備牛肉膏蛋白胨固體培育基如何檢測泡菜壇的密封性?壇口向上壓入水中,看壇內(nèi)有無滲水現(xiàn)象如何裝壇?將穎蔬菜混合均勻裝入壇內(nèi),裝至半壇,放入香辛料,連續(xù)裝至八成滿,注入鹽水,使為什么要向壇蓋邊沿的水槽中注滿水?保證壇內(nèi)乳酸菌發(fā)酵所需的無氧環(huán)境。發(fā)酵時間長短受溫度影響,溫度過高則易滋生雜菌,溫度過低則發(fā)酵時間延長。掌握腌制的那些條件?掌握腌制的時間、溫度和食鹽的用量。防止雜菌污染,嚴格密封假設
步驟:計算→稱量→溶化→〔調(diào)PH〕→滅菌→ 倒平板問題:①.培育基滅菌后,需要冷卻到50℃左右時,才能用來倒平板。你用什么方法來估量培育基的溫度?用手觸摸,冷卻到剛不燙手為止②.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰?殺滅瓶口雜菌③.為什么將平板倒置?使培育基外表的水分更好地揮發(fā);防止冷凝后形成的水珠滴落在培育基上污染培育基純化大腸桿菌的方法①純化培育原理:想方設法在培育基上得到由單個細胞生殖而來的肉眼可見的菌落,即可獲得較純的菌種。③常用的微生物接種方法有兩種平板劃線法:是通過接種環(huán)在瓊脂固體培育基外表連續(xù)劃線的操作,將聚攏的菌種逐步稀釋分散到培育基的外表。稀釋涂布平板法:是將菌液進展一系列的梯度稀釋,然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培育基的外表,進展培育。問題:①在這兩種接種方法中,計數(shù)時只能選哪種接種方法?稀釋涂布平板法②兩種接種方法的目的是:得到由單個細菌生殖而來的菌落問題①.劃線時為什么要從上一次劃線的末端開頭?能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而漸漸削減,最終得到由單個細菌生殖而來的菌落。②.劃線時不能劃破培育基,假設劃破了會怎樣?劃破了,細菌會沿劃粘連生長,無法到達分別單個菌落的目的③.為什么在操作的第一步要灼燒接種環(huán)?殺死接種環(huán)上原有的微生物每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)?殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種次劃線的末端,使每次劃線菌種數(shù)目削減
試驗原理:(1)能合成脲酶的細菌才能分解尿素;脲酶能催化尿素分解成氨。(2)配制以尿素為唯一氮源的培育基,能夠生長的細菌就是能分解尿素的細菌,還要涂布一個牛肉膏蛋白胨培育基,以此說明選擇培育基具有篩選作用。⑶可以用加了酚紅指示劑的培育基進展鑒別,氨使PH紅試驗流程:土壤取樣→配制土壤溶液和制備培育基→梯度稀釋→涂布平板與培育→菌落計數(shù)統(tǒng)計菌落數(shù)目的方法方法一:稀釋涂布平板法〔活菌計數(shù)法;至少要涂布3個平板,最終求取平均值值,還要設置一未接種的培育基作為比照,以說明 這些培育基未被雜菌污染一般選擇菌落數(shù)在30~300的平板進展計數(shù)。統(tǒng)計菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目低,緣由是當兩個或多個菌體連在一起時,平板上觀看到的只是一個菌落。方法二:顯微鏡直接計數(shù)法;用了哪種載玻片 血細胞計數(shù)板問題:①觀看酵母菌的數(shù)量的動態(tài)變化用 抽樣檢測法,其中也用到了血細胞計數(shù)板,因此也叫血細胞計數(shù)板計數(shù)法②如分別取0.1mL已稀釋102倍的水樣分別涂布到六個瓊脂固體培育基的外表進展培育,培育基記錄到大腸桿菌的菌落數(shù)分別為 26、161、155、158、170,302則每升原水樣中大腸桿菌數(shù)為 _1.61*108三、.分解纖維素的微生物的分別(1)①組成:纖維素酶是一種復合酶,一般認為它至少包括三種組分,即C酶、C酶、葡萄糖苷酶。1C酶 葡萄糖苷酶C②作用:纖維素1 纖維二糖――→葡萄糖C感染操作者④.在灼燒接種環(huán)之后,為什么要等其冷卻后再進展劃線?以免溫度太高殺死菌種菌種的保存方法 ①對于頻繁使用的菌種,可以承受臨時保的方法,接種在試管的固體斜面
酶x(2)纖維素分解菌的篩選①原理: 纖維素分解菌↓培育基上,將試管放入4℃冰箱保藏
纖維素酶②對于需要長期保存的菌種,可以承受甘油管藏的方法。試驗室中篩選微生物的原理是 人為供給有利于目的菌株生長的條件〔包括養(yǎng)分、溫度、pH等養(yǎng)、溫度、pH等〕,同時抑制或阻擋其他微生物生長 。二、土壤中分解尿素的細菌的分別與計數(shù)
→紅色復合物 紅色消逝,消滅透亮圈纖維②篩選方法:剛果紅〔CR〕染色法,即通過透亮圈大小來篩選纖維素分解菌。③培育基:以纖維素為唯一碳源的選擇培育基。參加剛果紅后是鑒別培育基④試驗流程:土壤取樣:富含纖維素 的環(huán)境
〔一〕探究果膠酶的最適溫度探究內(nèi)容自變量無關變量一般洗衣粉和加酶洗衣粉的洗滌效果①探究內(nèi)容自變量無關變量一般洗衣粉和加酶洗衣粉的洗滌效果①②③④⑤⑥不同溫度下加酶洗衣粉的洗滌效果④①②③⑤⑥不同類型加酶洗衣粉的洗滌效果①②③④⑤⑥選擇培育:用選擇培育基培育,作用是有利于纖維素分解菌的生殖,抑制其他細菌的生殖,可以 度梯度,探究果膠酶的活性提高纖維素分解菌的濃度梯度稀釋:用無菌水制備系列稀釋液涂布平板:將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培育基上問題:1.土壤中分解尿素的細菌的分別與分解纖維素的微生物的分別的試驗流程有哪些異同?分解纖維素的微生物的分別的試驗多了選擇培育這一步。選擇培育為什么能夠“濃縮”菌種?選擇培育基有利于目的菌株的生殖,抑制其他雜菌的生殖,可以提高目的菌株的濃度選擇培育中用 牛肉膏蛋白胨培育基作比照,而菌落計數(shù)時用未接種 的空白培育基作比照,用途有什么不同?未接種的空白培育基作比照是為了說明培育基未被有雜菌污染”;牛肉膏蛋白胨培育基作比照是為了說明選擇培育基具有選擇作用點撥(1)兩種比照組作用比較①推斷培育基中“是否有雜菌污染”,需將未接種的培育基同時進展培育?;暇鋽?shù)目,進展比照得出結論。(2)平板劃線法純化大腸桿菌時不同階段灼燒接種環(huán)的目的不同①第一次操作:殺死接種環(huán)上原有的微生物。③劃線完畢后:殺死接種環(huán)上殘存的菌種,避開細菌污染環(huán)境和感染操作者。
步驟1、制蘋果泥2、將蘋果泥和果膠酶保溫:分別保溫在混合蘋果泥和果膠酶之前進展恒溫處理的目的是?保證混合后溫度不變3、將酶與蘋果泥混合:玻璃棒4、過濾果汁A同學:測果汁的體積B同學:測果汁的澄清度自變量:溫度因變量:果汁的體積或澄清度無關變量:pH、果泥量、果膠酶的濃度和用量、反響的時間,酶的用量、過濾時間等。(三〕pH思路:在恒定溫度下,設置一系列PH梯度,探究果膠酶的活性步驟1、制蘋果泥2、pH梯度:0.1%NaOH和鹽酸調(diào)PH3、將酶與蘋果泥混合4、過濾果汁那些因素該保持不變?無關變量:溫度、果泥量、果膠酶的濃度和用量、反響的時間、酶的用量等只轉(zhuǎn)變PH,其他因素保持不變是為什么?滿足單一變量原則,保證明驗結果只有PH一個因素引起?!踩程骄抗z酶的用量思路:在恒定PH、溫度下,設置一系列酶用量〔酶濃度〕梯度,探究果膠酶的活性如何推斷果膠酶的用量是否適宜?假設隨酶的用量增加,果汁體積也增加,說明酶用量缺乏;當酶的用量增加到某個值后,再增加酶的用量,果汁體積也不在轉(zhuǎn)變,說明酶用量足夠,這個值就是酶的最適用量緣由是?酶的活性與果汁體積關系為正相關二、 加酶洗衣粉:答案
探討加酶洗衣粉的洗滌效果果膠酶在果汁生產(chǎn)中的作用〔渾濁;含有親水基團,果膠與水有強大結合力,是有力的凝膠化劑二、果膠酶:包括多聚半乳糖醛酸酶、果膠分解酶和果膠酯酶等作用在:將果膠分解成可溶性的半乳糖醛酸,提高水果的出汁率并使果汁變澄清。三、酶活力測定的一般原理和方法肯定條件下,酶催化的某一化學反響的反響速度來表示〔單位時間內(nèi)、單位體積中,反響物的削減量或產(chǎn)物的增加量〕哪些因素會影響酶的活性?溫度、PH、底物濃度、反響時間等哪些因素會影響果汁產(chǎn)量? 溫度、pH果泥量果膠酶的濃度和用量反響的時間酶的用量、過濾時間等。
是指含有酶制劑的洗衣粉, 常用的酶制劑有四類:蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、纖維素酶 。其中應用最廣泛、效果最明顯的是: 堿性蛋白酶和堿性脂肪酶某同學用10℃、20℃、30℃、40℃、50℃、60℃、70℃來探究加酶洗衣粉的最適溫度,方案可行嗎、為什么?不行行,溫度差太大,得出結果不準確 一、根底1、蛋白質(zhì)提取與分別的依據(jù):1.分子的大小2.電荷性質(zhì)和多少3.溶解度4.吸附性質(zhì)5.對其他分子親和一、固定化技術背景1、直接使用酶制劑2、固定化酶:
酵母細胞的固定化
力2、血紅蛋白由四條肽鏈組成,包括2個和2個β一肽鏈〔4含血紅素運輸氧氣和二氧化碳2、分別蛋白質(zhì)的方法:凝膠色譜法也叫安排色譜法:依據(jù)被分別物質(zhì)的相對分子質(zhì)量的大小來分別實例:高果糖漿:葡萄糖固定化酶 果糖,這里固定化的是葡萄糖異構酶酶優(yōu)點:酶既能與反響物接觸,又能與產(chǎn)物分別,同時,固定在載體上的酶還可以被反復利用。缺點:一種酶只能催化一種化學反響3、固定化細胞優(yōu)點:本錢低、操作簡潔;對酶活性的影響更??;可以催化一系列的反響、簡潔回收。缺點:固定后的細胞與反響物不簡潔接近,可能導致反響效果下降由于大分子物質(zhì)難以自由通過細胞膜,因此固定化細胞的應用也受到限制。二、將酶和細胞固定化的方法 包埋法、化學結合法、 物理吸附法1、固定化酶可用、化學結合法、物理吸附法,緣由酶分子很小,包埋簡潔從包埋材料中漏出2、固定化細胞的包埋法法,緣由細胞體積大,難以被吸取或結合3、包埋材料:不溶于水的多孔性載體材料,如明膠、瓊脂糖、海藻酸鈉、醋酸纖維素和聚丙烯酰胺等;包埋酵母細胞用海藻酸鈉做載體。三、固定化細胞試驗操作〔一〕制備固定化酵母細胞1、酵母細胞的活化活化:讓處于休眠狀態(tài)的微生物重恢復正常生活狀態(tài)的過程?;罨瘯r要用足夠大容器,由于液體體積會增大2、配制0.05mol/L的CaCl2溶液蒸餾水
蛋白質(zhì) 凝膠①性質(zhì):一些微小的多孔球體,球內(nèi)含很多貫穿的通道;②化學本質(zhì):多糖類化合物化合物,如葡聚糖、瓊脂糖原理:相對分子質(zhì)量的較大較短,移動速度較快相對分子質(zhì)量的較小的蛋白質(zhì)由于集中作用進入凝膠顆粒內(nèi)部,路程較長,移動速度較慢,后流出。3、透析法:透析袋又稱玻璃紙;一般用硝酸纖維素制成。利用透析袋小分子自由通過,大分子留下。4、電泳法:利用分別樣品中各種分子帶電性質(zhì)的差異以及分子本身大小,使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速率,從而實現(xiàn)樣品中各種分子的分別。兩種常用電泳法瓊脂糖凝膠電泳法和聚丙烯酰胺凝膠電泳法;測定蛋白質(zhì)分子量即鑒定方法:常用SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳SDS能消退凈電荷對遷移速率的影響,緣由:SDS使蛋白質(zhì)變成單鏈,SDS所帶負電荷大大超過分子大小。三、蛋白質(zhì)提取與分別四步2、樣品處理〔1〕紅細胞的洗滌:目的:去除雜蛋白,洗滌次數(shù)過少,無法除凈;洗滌干凈的標志:上清液不在呈現(xiàn)黃色;洗滌用生理鹽水低速短時離心,防止白細胞和淋巴細胞沉淀參加檸檬酸鈉,防止血液凝固CaCl2
的作用:使海藻酸鈉聚沉,形成凝膠珠〔做凝固劑〕。
緩慢攪拌的目的,防止防止紅細胞裂開3、配制海藻酸鈉溶液:小火或者連續(xù)加熱,防止海藻酸鈉發(fā)生焦糊:加熱過程中,蒸餾水會蒸發(fā),導致濃度偏大,所以海藻酸鈉溶解后需要定容。濃度過高,很難形成凝膠珠,會形成條狀,品相極差濃度過低,包埋不嚴密,細胞簡潔從包埋材料中漏出,會導致形成的凝膠珠所包埋的酵母細胞的數(shù)目少。4、海藻酸鈉溶液和酵母細胞混合:海藻酸鈉溶液需冷卻至室溫,以免海藻酸鈉溫度過高殺死酵母菌,參加已活化的酵母細胞,進展充分攪拌,再轉(zhuǎn)移至注射器中。25、固定化酵母細胞 速度肯定要恒定且緩慢,以便形成的凝膠珠呈均勻的圓形或橢圓形。將上述混合溶液滴入CaCl中,得到凝膠珠。2〔二〕用固定化酵母細胞發(fā)酵6、沖洗將固定化酵母細胞〔凝膠珠〕用蒸餾水沖洗2-3次。7、發(fā)酵:2524h,密封〔為酵母菌的酒精發(fā)酵供給缺氧條件〕操作提示無菌:蒸餾水、CaCl2溶液、海藻酸鈉溶液和葡萄糖溶液都需要滅菌。得到的凝膠珠即固定化酵母細胞,由酵母細胞和海藻酸鈉組成。發(fā)酵效果看是否氣泡產(chǎn)生〔二氧化碳,是否有酒味〔酒精〕答案血紅蛋白的提取和分別導學案
〔3〕血紅蛋白的釋放:加蒸餾水和40%體積甲苯。蒸餾水的作用:使紅細胞大量吸水脹裂;甲苯的作用溶解紅細胞的細胞膜〔3〕分別血紅蛋白第1層〔最上層甲苯層離心 第2層白色薄層固體,脂溶性物質(zhì)的沉淀層,第3層:紅色透亮,血紅蛋白的水溶液層4層:其它雜質(zhì)的暗紅色,沉淀層濾紙的作用:過濾除去脂質(zhì)和細胞裂開物分液漏斗的作用是:分別血紅蛋白和有機溶劑2、粗分別—透析血紅蛋白目的除去樣品中分子量較小的雜質(zhì)。將透析袋放入磷酸緩沖溶液中,透析12h 緩沖溶液的作用:模擬細胞內(nèi)的pH環(huán)境,保證血紅蛋白的正常構造和功能。3、純化—凝膠色譜法 ①膠色譜柱的制作②凝膠色譜柱的裝填. ③.樣品的參加和洗脫觀看到紅色區(qū)域均勻移動,說明色譜柱制作成功留意:凝膠裝填時盡量嚴密,均勻,以低凝膠顆粒之間的空隙;參加洗脫液的濕凝膠用沸水浴加熱節(jié)約時間除去凝膠中可能帶有的微生物和排解凝膠內(nèi)的空氣。裝填凝膠柱時不能有氣泡存在〔氣泡和空隙會擾亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序,降低分別效果液面不要低于凝膠外表否則可能有氣泡混入影響液體在柱內(nèi)的流淌與最終生物大分子物質(zhì)的分別效果 不能發(fā)生洗脫液洗脫液流干,露出凝膠顆粒的現(xiàn)象。4、純度鑒定常用SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳推斷??颊Z句,澄清易混易錯(1)純化主要是依據(jù)蛋白質(zhì)以及蛋白質(zhì)與其他物質(zhì)之間的理化性質(zhì)的差異進展( (2)透析法可去除小分子化合物雜質(zhì),原理是不同分子所攜帶凈電荷不同( )(3)通過掌握離心速率,可使分子大小、密度不同的蛋白質(zhì)沉降分層,從而分別不同的蛋白( (4)不同的物質(zhì)在同一電場中的泳動速度不同,因此可用電泳法分別蛋白質(zhì)( )(5)影響泳動速度的因素包括帶電顆粒的性質(zhì)、電場強度、溶液的pH等( (1) √ (2)× (3)√ (4)√ (5)√分析命題熱圖,明確答題要點以下圖是用凝膠色譜法分別a、b兩種蛋白質(zhì)的示意圖,請分析:先從層析柱中洗脫出來的是哪種蛋白質(zhì)?a。為什么?,由于a分子質(zhì)量較大,被排阻在凝膠顆粒外面,在顆粒之間快速通過d是什么?有什么特點?d是多孔板,蛋白質(zhì)可以通過,凝膠顆粒不能通過。層析柱裝填時不能有氣泡的緣由是什么?氣泡會擾亂蛋白質(zhì)的洗脫次序,干擾試驗結果。4.如圖表示血紅蛋白提取和分別的局部試驗裝置,請據(jù)圖答復以下問題:血紅蛋白是人和其他脊椎動物紅細胞的主要組成成分,它在紅細胞中的作用表達了蛋白質(zhì)具有 功能甲裝置中,
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