流式細胞術(shù)及在血液病臨床應(yīng)用

流式細胞術(shù)及在血液病臨床應(yīng)用流式細胞術(shù)（FlowCytometry）流式細胞術(shù)是以流式細胞儀為工具，在單細胞分析和分選基礎(chǔ)上發(fā)展起來的對細胞的物理或化學(xué)性質(zhì)，如大小、內(nèi)部結(jié)構(gòu)、DNA、RNA、蛋白質(zhì)等進行快速測量并可分類收集的高技術(shù)。是除航天技術(shù)以外，美國科學(xué)界對人類的又一重大貢獻。是受顯微鏡原理啟發(fā)而來。流式細胞儀（FlowCytometer）流式細胞儀是測量染色細胞熒光強度的細胞分析儀，是一項綜合了激光技術(shù)、計算機技術(shù)、半導(dǎo)體技術(shù)、流體力學(xué)、分子生物學(xué)等各門學(xué)科的新技術(shù)“雜交體”。Beckman-CoulterEpicsXLBeckman-CoulterAltra流式細胞儀與顯微鏡FLOWMICROSCOPE光源激光自然光、燈光、氙(汞)燈對象細胞、生物粒子細胞、生物粒子承載工具鞘液及流動室載(蓋)玻片檢測信號光學(xué)信號形態(tài)及染色放大方式

PMT，放大電路目鏡X物鏡統(tǒng)計計算機，>5000人工，200結(jié)果多參數(shù)，綜合分析簡單，單參數(shù)流式細胞術(shù)工作原理液流系統(tǒng)、光學(xué)系統(tǒng)、分選系統(tǒng)、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)

1.流式細胞儀系統(tǒng)結(jié)構(gòu)液流系統(tǒng):樣本流，鞘液InjectorTipFluorescencesignalsFocusedlaserbeamSheathfluid光學(xué)系統(tǒng)：激光光源，分光鏡，濾片，散射光和熒光探測器。

分選系統(tǒng)：壓電晶體，液流成滴，加電系統(tǒng)，偏轉(zhuǎn)系統(tǒng)。數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)：計算機工作站2.流式細胞術(shù)參數(shù)流式細胞術(shù)是對細胞在激光激發(fā)下產(chǎn)生的散射光和熒光信號進行收集與分析，從而得到細胞的理化特性。（1）散射光信號：前向角散射光（FSC）：反映細胞大小側(cè)向角散射光（SSC）：反映細胞粒度前向角散射光（FSC）FALSSensorLaser前向角散射光（FSC）側(cè)向角散射光（SSC）FALSSensor90LSSensorLaser側(cè)向角散射光（SSC）

OpticalDesignPMT1PMT2PMT5PMT4DichroicFiltersBandpassFiltersLaserFlowcellPMT3ScatterSensorSample（2）熒光信號：熒光抗體：膜表面抗原，受體，膜糖蛋白，胞漿抗原熒光染料：DNA，RNA每種熒光染料均有特定的激發(fā)波長,并激發(fā)后會有發(fā)射波長,流式細胞儀檢測的即是它特定的發(fā)射波長.利用各種不同波長的光學(xué)濾片來收集(檢測)這些光學(xué)信號常用熒光染料的特性熒光染料激發(fā)波長(nm)發(fā)射波長(nm)用途顏色FITC488525免疫熒光綠色PE(RD1)488575免疫熒光橙色ECD488620免疫熒光橙紅PeCy5488675免疫熒光紅

PI488620DNA染色橙紅PECy7488755免疫熒光深紅PerCP488670免疫熒光紅

APC488660免疫熒光紅熒光素的選擇PE最強，適用于弱表達抗原

FITC最便宜，適用于強表達抗原，適用范圍廣

biotin-avidin不適合弱抗原的檢測3.流式細胞術(shù)的數(shù)據(jù)顯示方式：直方圖：單參數(shù)點圖：雙參數(shù)假三維圖：雙參數(shù)等高圖：雙參數(shù)密度圖：雙參數(shù)三維點圖：三參數(shù)直方圖點圖等高圖，密度圖三維點圖流式細胞術(shù)的樣本來源含有生物學(xué)顆粒的懸液：單細胞懸液、微生物顆粒懸液、人工微球懸液標本類型：細胞懸液：外周血（溶血）、PBMC、骨髓灌洗液、體腔