藥物的體外抗菌技術(shù)-課件

ppt課件1藥物的體外抗菌技術(shù)項(xiàng)目八ppt課件2學(xué)習(xí)目標(biāo)1.熟悉藥物體外抗菌試驗(yàn)的用途及意義2.掌握體外抗菌試驗(yàn)的基本方法ppt課件3藥物的體外抗菌試驗(yàn)：又稱藥敏試驗(yàn)，是為了檢查藥物的抗菌能力，主要用于篩選抗菌藥物或測(cè)定細(xì)菌對(duì)藥物的敏感性。藥敏試驗(yàn)抑菌試驗(yàn)：殺菌試驗(yàn)：只能抑制微生物生長(zhǎng)，不能殺死微生物?？梢詺⑺牢⑸飌pt課件4藥物的體外抗菌試驗(yàn)用途：篩選抗菌藥物、測(cè)定血藥濃度測(cè)定抗菌譜、耐藥譜、效價(jià)提取過(guò)程中的生物追蹤

ppt課件5優(yōu)點(diǎn)：方法簡(jiǎn)便、需時(shí)短、用藥量少，不需要?jiǎng)游?。缺點(diǎn)：不能根據(jù)體外試驗(yàn)結(jié)果肯定或否定一個(gè)藥物的抗菌作用。藥物的體外抗菌試驗(yàn)ppt課件6抗菌試驗(yàn)的影響因素1、試驗(yàn)菌：用專門的供應(yīng)機(jī)構(gòu)提供的標(biāo)準(zhǔn)菌株。北京衛(wèi)生部藥品生物制品檢定所菌種保藏中心。試驗(yàn)菌應(yīng)合理保藏，用前加以純化及生物學(xué)特征鑒定。ppt課件7所用的試驗(yàn)菌株應(yīng)處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，因此期的微生物對(duì)外界因素變化最敏感。試驗(yàn)結(jié)果的靈敏度在一定程度上與試驗(yàn)菌的接種量成反比關(guān)系，故應(yīng)選用適宜的接種量。ppt課件8抗菌試驗(yàn)的影響因素2、培養(yǎng)基抗菌試驗(yàn)的培養(yǎng)基應(yīng)按試驗(yàn)菌的需求配制，如鏈球菌常用含血清的肉湯培養(yǎng)基，抗真菌藥物試驗(yàn)需用沙氏培養(yǎng)基。培養(yǎng)基的酸堿度、電解質(zhì)、還原性物質(zhì)等均可影響試驗(yàn)結(jié)果，實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)盡可能排除各種影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果因素的摻入。經(jīng)無(wú)菌檢查合格。ppt課件9抗菌試驗(yàn)的影響因素3、抗菌藥物藥物的濃度、pH及含有的其他成分均可影響試驗(yàn)結(jié)果，特別是中草藥制劑往往含有色素、雜質(zhì)和鞣質(zhì)等，這些均可造成錯(cuò)誤結(jié)果，應(yīng)加注意。

ppt課件10抗菌試驗(yàn)的影響因素4、對(duì)照試驗(yàn)：為精確判斷實(shí)驗(yàn)結(jié)果，試驗(yàn)時(shí)應(yīng)設(shè)各種對(duì)照，包括試驗(yàn)菌對(duì)照、已知藥物對(duì)照及溶劑和稀釋液對(duì)照等。ppt課件11

在實(shí)際工作中，往往可見(jiàn)到體外實(shí)驗(yàn)有作用的藥物，進(jìn)入機(jī)體后由于各種原因而失效，有的藥物毒性很大也不能用于臨床。ppt課件12常用的體外抑菌試驗(yàn)體外抑菌試驗(yàn)瓊脂擴(kuò)散法平板挖溝法紙片擴(kuò)散法連續(xù)稀釋法液體培養(yǎng)基稀釋法固體培養(yǎng)基稀釋法ppt課件13瓊脂擴(kuò)散法原理：

將含有定量抗菌藥物的紙片貼在已接種測(cè)試菌的瓊脂平板上，紙片中所含的藥物吸收瓊脂中水分，溶解后不斷向紙片周圍擴(kuò)散形成遞減的梯度濃度。在紙片周圍抑菌濃度范圍內(nèi)測(cè)試菌的生長(zhǎng)被抑制，從而形成無(wú)菌生長(zhǎng)的透明圈即為抑菌圈。抑菌圈的大小反映測(cè)試菌對(duì)測(cè)定藥物的敏感程度，并與該藥對(duì)測(cè)試菌的MIC呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，即抑菌圈愈大，MIC值愈小。

ppt課件14紙片擴(kuò)散法：制成含菌平板后，將濾紙片蘸取藥液置于平板上，培養(yǎng)后觀察結(jié)果，量取抑菌圈直徑以此判斷試驗(yàn)藥物抑菌作用的強(qiáng)弱。最常用的方法，適用于多種藥物或一種藥物的不同濃度對(duì)同一試驗(yàn)菌的抑菌試驗(yàn)，多用于新藥的初篩及臨床的藥敏試驗(yàn)。

ppt課件15(二)培養(yǎng)基和抗菌藥物紙片1．抗菌藥物紙片選擇直徑為6.35mm，吸水量為20μl的專用藥敏紙片，用逐片加樣或浸泡方法使每片含藥量達(dá)規(guī)定要求。含藥紙片密封貯存于2℃-8℃，且不超過(guò)1周。2．培養(yǎng)基水解酪蛋白（M-H）培養(yǎng)基是兼性厭氧菌和需氧菌藥敏試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基，4℃保存。ppt課件16試驗(yàn)程序ppt課件171.用接種環(huán)分別在瓊脂平板上挑取形態(tài)相似的大腸桿菌菌落4～5個(gè)，接種于3～5mL肉湯管中2.35℃溫箱培養(yǎng)2～8h，與標(biāo)準(zhǔn)比濁管比較，若菌液濃度太濃時(shí)，可用肉湯或生理鹽水稀釋至與0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)比濁管濁度相同3.在15min內(nèi)，用無(wú)菌棉簽蘸取菌液，并在管壁上擠去多余的菌液后涂布于M-H瓊脂平板上（注意：涂布要均勻、致密），待干（三）試驗(yàn)步驟ppt課件184.用鑷子蘸取95%乙醇并通過(guò)火焰，待燒干后再蘸取乙醇重復(fù)上述操作，共三次即可達(dá)到滅菌的效果。待冷卻后，用此無(wú)菌鑷子夾取不同藥敏紙片，按一定間隔貼在平板的不同區(qū)域，即兩紙片間距不小于24mm，紙片距平板邊緣不小于15mm。5.35℃溫箱培養(yǎng)18～24h觀察結(jié)果。ppt課件19紙片法的原理ppt課件20（四）結(jié)果判斷和報(bào)告用精確度為1mm的游標(biāo)卡尺量取抑菌圈直徑。根據(jù)NCCLS標(biāo)準(zhǔn)，作出“敏感”、“耐藥”和“中介”的判斷。幾種抗生素抑菌環(huán)解釋標(biāo)準(zhǔn)及相應(yīng)的最低抑菌濃度≤4≥8≥1513～14≤1210IU慶大霉素GEN≤0.5≥8≥2314～22≤1315IU紅霉素ERY≤0.1≥2921～28≤2010IU青霉素GP-G敏感耐藥敏感中介耐藥相應(yīng)的MIC（μg/ml）抑菌環(huán)直徑（mm）紙片含藥量抗生素代號(hào)ppt課件21（五）藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果解釋

“敏感”（susceptible，S）：表示測(cè)試菌可被測(cè)定藥物常規(guī)劑量給藥后在體內(nèi)達(dá)到的血藥濃度所抑制；“耐藥”（resistant，R）：表示測(cè)試菌不能被在體內(nèi)感染部位可能達(dá)到的抗菌藥物濃度所抑制，臨床治療無(wú)效?！爸薪椤保╥ntermediate，I）：表示測(cè)試菌對(duì)常規(guī)用藥體液或組織中的藥物濃度的反應(yīng)率低于敏感株，使用高于正常給藥量有療效。ppt課件22挖溝法：1、在瓊脂平板上挖溝，溝兩邊垂直劃線接種各種試驗(yàn)菌，溝內(nèi)加入藥液。2、培養(yǎng)后，根據(jù)溝兩邊所生長(zhǎng)的試驗(yàn)菌離溝的距離來(lái)判斷藥物對(duì)試驗(yàn)菌的抗菌作用強(qiáng)弱。適用于在一個(gè)平板上試驗(yàn)一種藥物對(duì)幾種不同試驗(yàn)菌的抗菌作用。ppt課件23ppt課件24

瓊脂擴(kuò)散法具有方法簡(jiǎn)便，技術(shù)要求不高，易掌握操作的特點(diǎn)。但精確度不高，一般能用于定性或初步判斷其作用的強(qiáng)弱。液體稀釋法是一種測(cè)定藥物的抗菌作用定量方法，較瓊脂擴(kuò)散法精確，因而運(yùn)用較普遍。

ppt課件25凡能抑制試驗(yàn)菌生長(zhǎng)的最高藥物稀釋度為該藥的最低抑菌濃度（Minimalinhibitoryconcentration，MIC）。

以培養(yǎng)后無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)的最高藥物稀釋度為最小殺菌濃度（Minimalbactericidalconcentration，MBC）。ppt課件26液體連續(xù)稀釋法

1、在一系列的試管中用液體培養(yǎng)基將試驗(yàn)藥物作連續(xù)對(duì)倍稀釋，使藥物的濃度沿試管順序成倍遞減。2、再于各管中加入等量的實(shí)驗(yàn)菌，經(jīng)16～24h培養(yǎng)后，與陰性及陽(yáng)性對(duì)照管進(jìn)行對(duì)照觀察。3、將未長(zhǎng)細(xì)菌的培養(yǎng)液取出，分別轉(zhuǎn)種瓊脂平皿。如培養(yǎng)后重新長(zhǎng)出試驗(yàn)菌，說(shuō)明該藥僅有抑菌作用。如無(wú)菌生長(zhǎng)則可以認(rèn)為該藥物有殺菌作用。ppt課件27MIC及MBC的測(cè)定不含藥的平板MBCppt課件28

在測(cè)定中草藥煎劑時(shí)，由于有些煎劑顏色較深，肉眼不易分辨是否有效；需再于每管中取數(shù)環(huán)移種于適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基上，經(jīng)培養(yǎng)后觀察有無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)而決定之。ppt課件29體外殺菌試驗(yàn)技術(shù)殺菌試驗(yàn)是用來(lái)評(píng)價(jià)藥物對(duì)微生物的致死活性1.最低殺菌濃度測(cè)定（MBC）2.活菌計(jì)數(shù)法每毫升的活菌=菌落數(shù)*稀釋倍數(shù)/稀釋液用量致死率=（總菌數(shù)-活菌數(shù)）/總菌數(shù)*100%ppt課件30體外殺菌試驗(yàn)技術(shù)3.化學(xué)消毒劑的效力測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)：苯酚酚系數(shù)=消毒劑的殺菌稀釋度/苯酚的殺菌稀釋度酚系數(shù)越大，化學(xué)消毒劑的效力越高ppt課件31聯(lián)合抗菌試驗(yàn)