免疫球蛋白IgM測(cè)定

免疫球蛋白IgM測(cè)定1檢驗(yàn)?zāi)康闹笇?dǎo)本室工作人員規(guī)范操作本檢測(cè)項(xiàng)目，確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確。2原理免疫透射比濁法抗免疫球蛋白M抗體和樣本中的抗原形成抗原抗體復(fù)合物，出現(xiàn)凝集，進(jìn)行透射比濁檢測(cè)。通過(guò)加入PEG可促使反應(yīng)迅速達(dá)到終點(diǎn)，可增加靈敏度，降低樣本中抗原過(guò)剩導(dǎo)致假陰性的風(fēng)險(xiǎn)。3標(biāo)本要求3.1使用新鮮血清,不使用血漿.3.2在采集血液后2h分離血清.3.38h內(nèi)不能及時(shí)測(cè)定血清可存放于2-80C冰箱保存,3天后測(cè)定的血清置―150C――200C冰凍保存,但冰凍血清只能復(fù)融一次.3.4嚴(yán)重溶血或脂血的標(biāo)本不能作測(cè)定.4試劑4.1試劑：上海羅氏診斷產(chǎn)品有限公司IgM試劑盒,國(guó)械注進(jìn)20142405056YZB/GER5724-2014）4.1.1試劑組成R1:TRIS緩沖液：20mmol/l，pH8.0；氯化鈉：200mmol/L；PEG：3.6%；防腐劑和穩(wěn)定劑。R2:抗人免疫球蛋白M抗體（羊）：取決于滴度；TRIS緩沖液：20mmol/l；氯化鈉：150mmol/L；防腐劑4.1.2試劑準(zhǔn)備：試劑為即用式。4.1.3試劑穩(wěn)定性與貯存：2-8°C下保存期限：見(jiàn)試劑標(biāo)簽上的有效期。機(jī)上穩(wěn)定期：90天。4.1.4變質(zhì)指示：當(dāng)試劑有濁度時(shí)，表明有細(xì)菌污染則試劑不能使用。4.2校準(zhǔn)品：使用羅氏多項(xiàng)生化校準(zhǔn)品提供的IgM校準(zhǔn)品對(duì)自動(dòng)分析儀進(jìn)行校準(zhǔn)4.3質(zhì)控品：使用正常值、病理值復(fù)合控制品。5儀器AU2700生化分析儀，羅氏P800生化分析儀,西門(mén)子ADVIA-2400生化分析儀，東芝TBA-120生化分析儀6操作步驟6.1樣品的準(zhǔn)備：將標(biāo)好號(hào)的樣品離心后放到儀器規(guī)定的位置。6.2試劑的檢測(cè)：儀器開(kāi)機(jī)后，檢查各種試劑的位置，體積等確認(rèn)無(wú)誤后方可進(jìn)行測(cè)定。6.3項(xiàng)目基本參數(shù)：參見(jiàn)生化檢驗(yàn)AU2700生化分析儀，羅氏P800生化分析儀,西門(mén)子ADVIA-2400生化分析儀，東芝TBA-120生化分析儀項(xiàng)目測(cè)定參數(shù)。6.4儀器操作步驟：參見(jiàn)生化檢驗(yàn)AU2700生化分析儀，羅氏P800生化分析儀,西門(mén)子ADVIA-2400生化分析儀，東芝TBA-120生化分析儀操作規(guī)程。7質(zhì)量控制在每一批標(biāo)本中都應(yīng)把非定值血清水平I與II質(zhì)控做為未知標(biāo)本進(jìn)行分析，以2S為質(zhì)控警告限，3S為失控限，繪制質(zhì)控圖，判斷是否在控。8計(jì)算方法以IgM復(fù)合校準(zhǔn)品校準(zhǔn)儀器后，在病人結(jié)果可報(bào)告范圍內(nèi)，儀器直接報(bào)告可靠的檢測(cè)結(jié)果，以g/l報(bào)告。9參考值成人0.4-2.3g/L(40-230mg/dL；0.4-2.4umol/L)兒童及青少年0-1歲0.00-1.45g/L(0-145mg/dL；0.00-1.49umol/L)1-3歲0.19-1.46g/L(19-146mg/dL；0.19-1.50umol/L)4-6歲0.24-2.10g/L(24-210mg/dL；0.25-2.16umol/L)7-9歲0.31-2.08g/L(31-208mg/dL；0.32-2.14umol/L)10-11歲0.31-1.79g/L(31-179mg/dL；0.32-1.84umol/L)12-13歲0.35-2.39g/L(35-239mg/dL；0.36-2.46umol/L)14-15歲0.15-1.88g/L(15-188mg/dL；0.15-1.94umol/L)16-19歲0.23-2.59g/L(23-259mg/dL；0.24-2.67umol/L)我室的參考范圍:0.35-2.6g/l10臨床意義:正常的IgM由10個(gè)重μ鏈和10個(gè)κ或λ輕鏈組成，IgM分子中的κ或λ輕鏈總是相等的。還有1個(gè)J鏈將所有的μ鏈連接在一起，簡(jiǎn)言之，IgM與IgG相比，是五聚體的結(jié)構(gòu)。IgM的相對(duì)分子量為900000，在免疫球蛋白中最大，但其只占血漿免疫球蛋白的6％。在感染后，IgM是最早出現(xiàn)的特異性抗體，能激活補(bǔ)體系統(tǒng)協(xié)助殺滅細(xì)菌。但是和IgG相比，在感染控制后IgM水平就會(huì)較快地下降。臨床上比較IgG及IgM的滴度來(lái)鑒別急性與慢性感染。如以IgM為主，感染是急性的；以IgG為主，感染為慢性的（如：風(fēng)疹、病毒性肝炎）。多克隆IgM水平升高見(jiàn)于病毒、細(xì)菌、和寄生蟲(chóng)感染，肝病，類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，硬皮病，膽囊纖維化，和海洛因吸毒等。單克隆IgM水平升高見(jiàn)于Waldenstrom巨球蛋白血癥。IgM流失增加見(jiàn)于腸道病和燒傷的蛋白流失。IgM的合成減低見(jiàn)于獲得性及先天性免疫缺陷綜合征。11操作性能11.1線(xiàn)性范圍：0.25-6.5g/l11.2精密度采用內(nèi)部協(xié)議重復(fù)檢測(cè)人樣本和質(zhì)控品（n=21），結(jié)果如下：標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用（IGM-2）樣本批內(nèi)精密度批間精密度均值變異系數(shù)%均值變異系數(shù)%g/Lumol/Lg/Lumol/L低值質(zhì)控0.750.771.811.091.122.00高值質(zhì)控1.241.281.312.562.642.08人血清5.405.560.815.265.421.54敏感應(yīng)用（IGMP2）樣本批內(nèi)精密度批間精密度均值變異系數(shù)%均值變異系數(shù)%g/Lumol/Lg/Lumol/L高值質(zhì)控0.0340.0353.850.0340.0351.99低值質(zhì)控0.7610.7840.510.7460.7680.49人血清1.3831.4240.501.3971.4390.3412超出范圍結(jié)果處理本法線(xiàn)性上限為6.5g/l。如樣品測(cè)定值超過(guò)上限時(shí)，應(yīng)將樣品用0.9％氯化鈉溶液作1：4稀釋?zhuān)匦聹y(cè)定，結(jié)果乘以5。13病危報(bào)警值的處理無(wú)警告/危急值14方法局限性14.1準(zhǔn)則：回收率在初始值±10%的范圍內(nèi)。14.2標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用（IGM-2）14.2.1黃疸：I指數(shù)達(dá)到60（近似結(jié)合和非結(jié)合膽紅素的濃度為60mg/dL或1026μmol/L）時(shí)，未出現(xiàn)明顯干擾。14.2.2溶血：H指數(shù)達(dá)到1000（近似血紅蛋白濃度為：621umol/L（1000mg/dL））時(shí)未出現(xiàn)明顯干擾。14.2.3脂血（脂肪乳劑Intralipid）：L指數(shù)達(dá)到3000時(shí)未出現(xiàn)明顯干擾。L指數(shù)（相當(dāng)于濁度）和甘油三酯濃度之間的相關(guān)性較差。14.2.4多克隆樣本中由于抗原過(guò)?？赡茉斐慑e(cuò)誤的低值在濃度達(dá)到230g/L（23000mg/dL；236.9umol/L）時(shí)。14.2.5免疫球蛋白A,G,M之間沒(méi)有交叉反應(yīng)。14.3敏感應(yīng)用（IGMP2）：14.3.1黃疸：I指數(shù)達(dá)到60（近似結(jié)合和非結(jié)合膽紅素的濃度為60mg/dL或1026μmol/L）時(shí)，未出現(xiàn)明顯干擾。14.3.2溶血：H指數(shù)達(dá)到1000（近似血紅蛋白濃度為：621umol/L（1000mg/dL））時(shí)未出現(xiàn)明顯干擾。14.3.3脂血（脂肪乳劑Intralipid）：L指數(shù)達(dá)到3000時(shí)未出現(xiàn)明顯干擾。L指數(shù)（相當(dāng)于濁度）和甘油三酯濃度之間的相關(guān)性較差。14.3.4多克隆樣本中由于抗原過(guò)?？赡茉斐慑e(cuò)誤的低值在濃度達(dá)到30g/L（3000mg/dL；187.5umol/L）時(shí)。14.3.5免疫球蛋白A,G,M之間沒(méi)有交叉反應(yīng)。14.3.6聯(lián)合其他比濁方法測(cè)定時(shí)，由于個(gè)體樣本特性的差異（可使用電泳評(píng)估），本測(cè)試尚不能為單克隆γ-球蛋白病病人提供準(zhǔn)確結(jié)果。15補(bǔ)救措施當(dāng)儀器發(fā)生故障時(shí)，迅