食品中微生物的檢驗-微生物檢驗實驗室基本要求（食品微生物控制技術課件）

玻璃器皿的洗滌《食品微生物檢驗技術》目錄Contents新玻璃器皿洗滌1處理含菌玻璃器皿2處理含有油污和盛有固體的器皿3試管和三角瓶的清洗4吸管的清洗5BA方法新器皿里面含有游離堿，一般先將其浸于1%-2%的鹽酸溶液中數(shù)小時，然后用自來水洗干凈。將器皿用熱水浸泡，再用去污粉或肥皂粉刷洗，最后經(jīng)過熱水洗刷、自來水清洗，待干燥后滅菌備用。1、新玻璃器皿洗滌對于含菌的試管、燒杯、平皿及錐形瓶等，利用高壓蒸汽滅菌鍋滅菌（121℃，20-30min），然后取出清洗。載玻片、蓋玻片、吸管等器皿浸泡在5%石炭酸或2%來蘇爾消毒水中24-48h進行滅菌。2、處理含菌玻璃器皿先進行高壓蒸汽滅菌，然后趁熱倒掉內(nèi)容物，用溫水沖洗后再用5%肥皂水煮沸5min，然后用清水反復沖洗干凈。3、處理沾有油污和盛固體培養(yǎng)物的玻璃器皿a盛有廢棄物的試管和三角瓶因其內(nèi)含有大量微生物，洗刷前應高壓蒸汽滅菌。對只帶有細菌標本或培養(yǎng)物的試管等玻璃器皿，用過后應將其浸于2%的來蘇水消毒液中，經(jīng)過24h，才可以取出洗刷。4、試管或三角瓶的清洗acb吸過菌液的吸管，用完后應放入裝有5%石碳酸溶液的高玻璃桶內(nèi)消毒。吸過帶油液體的吸管，應先在10%氫氧化鈉溶液中浸泡0.5h，去掉油污，方可清洗。吸管上端有隔離棉花，可用普通鋼針制成的小鉤鉤出，然后用合適的橡皮管一端連著水龍頭，一端連著吸管底端，放水清洗。5、吸管的清洗帶有廢棄培養(yǎng)物的平皿，需先經(jīng)高壓蒸汽滅菌或沸水煮沸30min后，倒掉污物，方可清洗。洗干凈的平皿全部向下，一個壓著一個，扣于洗滌架或桌子上。6、培養(yǎng)皿的清洗LOREM

用過的載玻片和蓋玻片如有香柏油，要先擦去香柏油或在二甲苯內(nèi)搖晃幾次，使油垢溶解；

再在肥皂水中煮沸5-10min，用軟布或脫脂棉擦拭，立即用自來水沖洗；

然后在稀洗液中浸泡0.5-2h，自來水沖洗；

最后用蒸餾水換洗幾次，晾干后浸于95%乙醇中保存?zhèn)溆谩?、載玻片和蓋玻片的清洗玻璃器皿的種類《食品微生物檢驗技術》目錄Contents試管1吸管2平皿3三角瓶與燒杯4載玻片與蓋玻片5涂布棒6微生物實驗室內(nèi)應用的玻璃器皿種類很多，選購時應根據(jù)不同的用途選購各種規(guī)格和質(zhì)量，一般能耐多次高熱滅菌，以中性為宜。多用于試管液體培養(yǎng)、制作斜面或分裝倒平板用的培養(yǎng)基。多用于試管液體培養(yǎng)、進行血清學實驗、制作斜面或樣品梯度稀釋等。1、試管18mm×180mm15mm×150mm微生物實驗室常用的吸管規(guī)格有3種：1mL、5mL、10mL，根據(jù)長短分為環(huán)標吸管和短直吸管。2、吸管常用的平皿規(guī)格皿底直徑為90mm，高15mm。主要是制作平板，用于分離、純化、鑒定菌種、活菌計數(shù)以及抗生素、噬菌體的效價等。3、平皿ba三角瓶：常用的有100mL、250mL、500mL、1000mL。主要用來裝無菌生理鹽水、培養(yǎng)基及振蕩培養(yǎng)微生物等。4、三角瓶與燒杯燒杯：常用的有50mL、100mL、500mL、1000mL。主要用來配制培養(yǎng)基與溶液等。載玻片規(guī)格一般為75mm×25mm；蓋玻片規(guī)格為18mm×18mm。主要用于微生物涂片和顯微鏡標本片觀察等。5、載玻片與蓋玻片如果在較厚的載玻片中央制一圓形凹窩，就形成凹玻片，可做懸滴觀察活菌以及微室培養(yǎng)。用涂布法在瓊脂平板上分離單個菌落時需用涂布棒。常見的玻璃涂布棒有T型涂布棒、L型涂布棒和三角形涂棒。6、涂布棒規(guī)格約為6mm×36mm。使用時倒置放于試管內(nèi)，主要用來觀察發(fā)酵時是否產(chǎn)氣。7、德漢氏小管滴瓶的規(guī)格大小不等，分為棕色和無色兩種。用來盛放各種染色劑、試劑和生理鹽水等。棕色瓶主要盛放需要避光保存的試劑，如碘液等。8、滴瓶（1）普通滴瓶由內(nèi)外兩個玻璃瓶組成，內(nèi)層為小的上粗下細的圓柱瓶，用于盛放香柏油，供油鏡頭觀察微生物時使用，外層為錐形瓶，用于盛放二甲苯，供擦凈油鏡頭時使用。8、滴瓶（2）雙層滴瓶普通光學顯微鏡的結構、原理《食品微生物檢驗技術》光學顯微鏡的原理光學顯微鏡的結構目錄Contents12341、光學顯微鏡的結構目鏡鏡臂物鏡鏡柱鏡座反光鏡遮光器載物臺鏡筒粗調(diào)焦螺旋細調(diào)焦螺旋鏡頭轉換器通光孔壓片夾341、光學顯微鏡的結構機械部分光學部分鏡座、鏡柱、鏡臂、鏡筒壓片夾、轉換器載物臺目鏡、物鏡遮光器反射鏡

鏡座a鏡座是顯微鏡的基本支架，是用來安裝光學放大系統(tǒng)部件的基礎。由底座和鏡臂兩部分組成，在它上面連接有載物臺和鏡筒。1、光學顯微鏡的結構（1）顯微鏡的機械部分物鏡轉換器c物鏡轉換器上可安裝3~4個接物鏡。轉動物鏡轉換器，可以按需要將其中的任何一個接物鏡和鏡筒接通，從而與鏡筒上面的接目鏡構成一個放大系統(tǒng)。1、光學顯微鏡的結構（1）顯微鏡的機械部分粗調(diào)焦螺旋e粗調(diào)焦螺旋是移動鏡筒，調(diào)節(jié)接物鏡和標本間距離的機件。粗調(diào)焦螺旋每轉一圈鏡筒或載物臺移動2mm左右。用粗調(diào)焦螺旋只可以粗放的調(diào)節(jié)焦距，要得到最清晰的物象，需要用微調(diào)焦螺旋做進一步調(diào)節(jié)。微調(diào)焦螺旋每轉一圈鏡筒或載物臺移動0.1mm(100μm)。新式顯微鏡的粗調(diào)焦螺旋和微調(diào)焦螺旋是共軸的。

1、光學顯微鏡的結構（1）顯微鏡的機械部分b聚光器：聚光器在載物臺下面，由聚光透鏡、虹彩光圈和升降螺旋組成的。其作用是將光源經(jīng)反光鏡反射來的光線聚焦于樣品上，以得到最強的照明，使物像獲得明亮清晰的效果。a反光鏡：在鏡座上裝有反光鏡，可以將投射在它上面的自然光反射到聚光器透鏡的中央，照明標本。新式顯微鏡鏡座上裝有光源，并有電流調(diào)節(jié)螺旋，可通過調(diào)節(jié)電流大小調(diào)節(jié)光照強度。（2）顯微鏡的光學系統(tǒng)1、光學顯微鏡的結構物鏡：安裝在鏡筒前端轉換器上，利用光線使被檢物體第一次造像。物鏡的性能取決于物鏡的數(shù)值孔徑(NA)，每個物鏡的數(shù)值孔徑都標在物鏡的外殼上，數(shù)值孔徑越大，物鏡的性能越好。

c（2）顯微鏡的光學系統(tǒng)1、光學顯微鏡的結構放大倍數(shù)數(shù)值孔徑鏡筒長度蓋玻片厚度干燥系物鏡：以空氣為介質(zhì)，如常用的40×以下的物鏡，數(shù)值孔徑均小于1。

油浸系物鏡：常以香柏油為介質(zhì)，此物鏡又叫油鏡頭，其放大率為90×~100×，數(shù)值孔值大于1。按透鏡與被檢物之間介質(zhì)不同1、光學顯微鏡的結構（2）顯微鏡的光學系統(tǒng)低倍物鏡:指1×~6×，NA值為0.04~0.15。1、光學顯微鏡的結構（2）顯微鏡的光學系統(tǒng)高倍物鏡:指25×~63×，NA值為0.35~0.95。中倍物鏡:指6×~25×，NA值為0.15~0.40。油浸物鏡:指90×~100×，NA值為1.25~1.40。目鏡：作用是把物鏡放大了的實像再放大一次，并把物像映入觀察者的眼中。目鏡的結構較物鏡簡單，普通光學顯微鏡的目鏡通常由兩塊透鏡組成，上端的一塊透鏡稱“接目鏡”，下端的透鏡稱“場鏡”。上下透鏡之間或在兩個透鏡的下方裝有由金屬制的環(huán)狀光闌或叫“視場光闌”，物鏡放大后的中間像就落在視場光闌平面處，所以其上可安置目鏡測微尺。d（2）顯微鏡的光學系統(tǒng)1、光學顯微鏡的結構BA顯微鏡總的放大倍數(shù)是目鏡和物鏡放大倍數(shù)的乘積。物鏡的放大倍數(shù)越大，分辨率越高；而目鏡只能起放大作用，不能提高分辨率，標準目鏡放大倍數(shù)為10倍。顯微鏡的放大效能（分辨率）是由所用的光波長短及物鏡的數(shù)值孔徑?jīng)Q定的，縮短使用的光波波長或增加數(shù)值孔徑（提高介質(zhì)折射率）可以提高分辨率。2、光學顯微鏡的成像原理a第一次先經(jīng)過物鏡（凸透鏡1）成像，這時候的物體應該在物鏡(凸透鏡1）的一倍焦距和兩倍焦距之間，成的是放大的倒立的實像。b而后以第一次成的物像作為“物體”，經(jīng)過目鏡的第二次成像。根據(jù)光學原理，第二次成的像應該是一個虛像，這樣像和物才在同一側。第二次成的像是一個放大的正立的虛像。2、光學顯微鏡的成像原理34

AB-物體；A′B′-物鏡放大圖像；A′′B′′-目鏡放大圖像；L1-物鏡；L2-目鏡2、光學顯微鏡的成像原理染色劑的種類及選擇《食品微生物檢驗技術》染色劑的選擇染色劑的種類染色劑的條件目錄Contents123染色劑本身具有顏色1染色劑與被染組織間有親和力1211、染色劑的條件發(fā)色基團：能著色，但由于其溶解性很小，電離能力差，與細胞的親和力差，著色后容易除去。助色基團：使染料物質(zhì)離子化，極性增強，促進染料與組織間發(fā)生作用，產(chǎn)生染色效果。1、染色劑的條件按來源分類1按化學成分分類1212、染色劑的種類天然染料：胭脂蟲紅、地衣素、石蕊和蘇木素等，它們多從植物體中提取得到，其成分復雜。人工染料：是從煤焦油中提取的苯衍生物。在生物染色中還使用一些無機化合物，如硝酸銀，氯化金，鋨酸，高錳酸鉀等。按來源分類2、染色劑的種類

色原—助色團—Na→[色原-助色團]+Na+。常用的如伊紅、酸性品紅、苦味酸、橘黃G、剛果紅、水溶性苯胺藍、淡綠等，酸性染料常用以染細胞漿等堿性成份。酸性染色劑

色原—助色團—Cl→[色原-助色團]+Cl-。常用的如美藍、結晶紫、堿性復紅、孔雀綠、蘇木素、卡紅、次甲基藍、甲苯胺藍、美藍等，堿性染料常用以染細胞核等酸性成份。2、染色劑的種類按化學成分分類

又稱為復合染料。是由堿性染料和酸性染料配制而成。其中染色劑的分子很大，在水中溶解度較低，需用酒精做溶劑。血液涂片經(jīng)常使用的瑞氏染色劑及姬姆薩氏染色劑就是這種混合染色劑。中性染色劑

這類染料的化學親和力低