獸用抗菌藥物耐藥性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估課件

獸用抗菌藥物耐藥性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估沈建忠吳聰明中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院2007年9月甘肅蘭州獸用抗菌藥物耐藥性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估沈建忠吳聰明2007年9月1報(bào)告內(nèi)容一、開展耐藥性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的必要性二、耐藥性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估程序和方法三、國(guó)外耐藥性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估開展情況四、我國(guó)耐藥性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估開展情況及未來(lái)工作建議報(bào)告內(nèi)容一、開展耐藥性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的必要性2養(yǎng)殖業(yè)的持續(xù)發(fā)展離不開抗菌藥物!但廣泛使用抗菌藥物不僅帶來(lái)了獸藥殘留問(wèn)題，也帶來(lái)了耐藥性問(wèn)題，嚴(yán)重威脅食品安全及人類健康?？咕幬餁埩裟退幘退幓蚨拘宰饔梦⑸镉绊?轉(zhuǎn)移擴(kuò)散風(fēng)險(xiǎn)?一、開展耐藥性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的必要性養(yǎng)殖業(yè)的持續(xù)發(fā)展離不開抗菌藥物!抗菌藥物耐藥菌毒性作用轉(zhuǎn)移擴(kuò)3耐藥菌和耐藥基因的生態(tài)網(wǎng)絡(luò)(WolfgangWitte，Science,vol279，1998)

食品動(dòng)物住院病人社區(qū)居民肉產(chǎn)品糞便動(dòng)物飼料種植作物糞便選擇壓力主要宿主污水地表水泥漿食品促生長(zhǎng)預(yù)防治療用抗生素預(yù)防治療用抗生素

耐藥菌和耐藥基因的生態(tài)網(wǎng)絡(luò)食品住院社區(qū)肉產(chǎn)品糞便動(dòng)物種植作物4阿伏帕星在1974被歐盟批準(zhǔn)用于促生長(zhǎng)劑后，導(dǎo)致豬、雞體內(nèi)廣泛流行攜帶vanA基因的耐萬(wàn)古霉素腸球菌，而且耐藥腸球菌可通過(guò)接觸感染養(yǎng)殖人員及屠宰加工人員，也可通過(guò)肉品污染傳遞給社區(qū)健康人群。丹麥和英國(guó)90年代爆發(fā)的耐氟喹諾酮類沙門氏菌DT104感染，調(diào)查表明耐藥菌分別來(lái)源于豬場(chǎng)和奶牛場(chǎng)。

Kassenborg等調(diào)查美國(guó)的氟喹諾酮類耐藥彎曲桿菌感染，發(fā)現(xiàn)感染者多食用過(guò)雞肉或火雞肉，且這些雞場(chǎng)都有使用恩諾沙星的經(jīng)歷。臺(tái)灣2002年采用分子亞型方法調(diào)查人耐氟喹諾酮沙門氏菌感染，發(fā)現(xiàn)豬是感染源。進(jìn)一步調(diào)查證明，豬用氟喹諾酮后，其體內(nèi)病原菌產(chǎn)生了對(duì)氟喹諾酮的耐藥性。美國(guó)Donabedian等2003年從人和超市雞肉分離到PFGE圖譜完全一致的慶大霉素耐藥腸球菌，說(shuō)明耐藥菌可通過(guò)食物鏈傳遞到人。阿伏帕星在1974被歐盟批準(zhǔn)用于促生長(zhǎng)劑后，導(dǎo)致豬、雞體內(nèi)廣5WHO、OIE等國(guó)際組織高度關(guān)注動(dòng)物使用抗菌藥物對(duì)食品安全和人類健康的影響，多次召開專家討論會(huì)，制定了“關(guān)于控制食用動(dòng)物抗生素耐藥性的全球?qū)t”、“動(dòng)物源耐藥菌對(duì)公共衛(wèi)生潛在影響的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估方法”等系列文件和指南，倡導(dǎo)對(duì)食品動(dòng)物謹(jǐn)慎使用抗菌藥物，建議成員國(guó)開展動(dòng)物源病原菌耐藥性監(jiān)測(cè)，開展風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。TheMedicalImpactofAntimicrobialUseinFoodAnimals.ReportofaWHOMeeting(Berlin,Germany,13-17October1997)UseofQuinolonesinFoodAnimalsandPotentialImpactonHumanHealth.ReportofaWHOMeeting(Geneva,Switzerland2-5June1998)WHOGlobalPrinciplesfortheContainmentofAntimicrobialResistanceinAnimalsIntendedforFood（Geneva,Switzerland5-9June2000）Monitoringantimicrobialusageinfoodanimalsfortheprotectionofhumanhealth.ReportofaWHOconsultation(Oslo,Norway10-13September2001)JointFirstFAO/OIE/WHOExpertWorkshoponNon-humanAntimicrobialUsageandAntimicrobialResistance:Scientificassessment(Geneva,Switzerland1-5December2003)SecondJointFAO/OIE/WHOExpertWorkshoponNon-HumanAntimicrobialUsageandAntimicrobialResistance:Managementoptions(Oslo,Norway15–18March2004)WHO、OIE等國(guó)際組織高度關(guān)注動(dòng)物使用抗菌藥物對(duì)食品安全和6基于預(yù)防原則，歐盟自2006年1月1日起，全面禁止食品動(dòng)物使用抗生素促生長(zhǎng)劑。美國(guó)雖不主張食品動(dòng)物全面禁用抗菌藥物添加劑，但也加強(qiáng)了食品動(dòng)物使用抗菌藥物對(duì)食品安全和人類健康的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。其對(duì)養(yǎng)禽業(yè)使用恩諾沙星引起人氟喹諾酮類耐藥彎曲桿菌感染的高風(fēng)評(píng)價(jià)結(jié)果，促使FDA于2000年撤消了恩諾沙星的使用。歐盟、美國(guó)、澳大利亞、加拿大、日本等已建立了動(dòng)物源病原菌耐藥性監(jiān)測(cè)國(guó)家系統(tǒng)，獲得了大量科學(xué)數(shù)據(jù)并進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估?；陬A(yù)防原則，歐盟自2006年1月1日起，全面禁止食品動(dòng)物使72003-2005年國(guó)家食品污染監(jiān)測(cè)網(wǎng)數(shù)據(jù)顯示：我國(guó)動(dòng)物性產(chǎn)品中沙門氏菌耐藥率已高達(dá)58%，多重耐藥達(dá)33%，耐10種以上藥物的菌株達(dá)5.6%。嚴(yán)重威脅人體健康。2005年雞源大腸桿菌對(duì)氟喹諾酮類藥物耐藥率已超過(guò)80%。2003-2005年國(guó)家食品污染監(jiān)測(cè)網(wǎng)數(shù)據(jù)顯示：我國(guó)動(dòng)物性產(chǎn)8近年來(lái)人醫(yī)和獸醫(yī)耐藥性調(diào)查結(jié)果表明，我國(guó)已成為世界上耐藥性最嚴(yán)重的國(guó)家之一。嚴(yán)重的耐藥性局面是否與我國(guó)養(yǎng)殖業(yè)長(zhǎng)期廣泛應(yīng)用抗菌藥物尤其是亞治療劑量抗菌促生長(zhǎng)劑有關(guān)？動(dòng)物源耐藥菌/耐藥基因的廣泛流行是否給食品安全和人類健康帶來(lái)風(fēng)險(xiǎn)？這些問(wèn)題，均需通過(guò)耐藥性的廣泛調(diào)查研究及風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估來(lái)回答。但至今我國(guó)尚缺乏完善的動(dòng)物源病原菌耐藥性監(jiān)測(cè)網(wǎng)，沒(méi)有充分、可靠的數(shù)據(jù)支撐耐藥性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的開展。近年來(lái)人醫(yī)和獸醫(yī)耐藥性調(diào)查結(jié)果表明，我國(guó)已成為世界上耐藥性最9抗菌藥物是我國(guó)規(guī)模化養(yǎng)殖不可或缺的物質(zhì)。在缺乏充分風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的前題下，我們不可能采取歐盟全面禁用的做法。加強(qiáng)耐藥性基礎(chǔ)研究，完善監(jiān)測(cè)網(wǎng)絡(luò)調(diào)查動(dòng)物源病原菌抗菌藥物耐藥性，建立規(guī)程開展獸用抗菌藥物風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，成為了目前亟待解決的問(wèn)題。開展耐藥性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，權(quán)衡風(fēng)險(xiǎn)和利益，科學(xué)管理和使用獸用抗菌藥物。不僅可促進(jìn)畜牧業(yè)的持續(xù)健康發(fā)展，而且可保障食品安全和人類健康。抗菌藥物是我國(guó)規(guī)模化養(yǎng)殖不可或缺的物質(zhì)。在缺乏充分風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的10二、耐藥性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估程序和方法風(fēng)險(xiǎn)分析是當(dāng)前廣泛應(yīng)用的食品安全和公共衛(wèi)生安全宏觀管理方法。風(fēng)險(xiǎn)分析RiskAnalysis風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估RiskAssessment風(fēng)險(xiǎn)管理RiskManagement風(fēng)險(xiǎn)交流RiskCommunication釋放評(píng)估ReleaseAssessment暴露評(píng)估ExposureAssessment后果評(píng)估ConsequenceAssessment二、耐藥性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估程序和方法風(fēng)險(xiǎn)分析是當(dāng)前廣泛應(yīng)用的食品安全11獸用抗菌藥物耐藥性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估是利用風(fēng)險(xiǎn)分析技術(shù)和原理，對(duì)養(yǎng)殖業(yè)使用抗菌藥物產(chǎn)生耐藥性/耐藥基因通過(guò)食物鏈暴露于人產(chǎn)生負(fù)面影響和潛在不良作用的科學(xué)評(píng)價(jià)。就獸用抗菌藥物耐藥性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估問(wèn)題，WHO、CAC和OIE多次召開專家討論會(huì)，并制定了風(fēng)險(xiǎn)分析框架性文件。JointFAO/OIE/WHOExpertWorkshoponNon-HumanAntimicrobialUsageandAntimicrobialResistance:Scientificassessment.Geneva,December1–5,2003

OIEInternationalStandardsonAntimicrobialResistance,2003.GuidelineonRiskAnalysisMethodologyforthePotentialImpactonPublicHealthofAntimicrobialResistantBacteriaofAnimalOrigin.獸用抗菌藥物耐藥性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估是利用風(fēng)險(xiǎn)分析技術(shù)和原理，對(duì)養(yǎng)殖業(yè)12釋放評(píng)估描述動(dòng)物應(yīng)用抗菌藥物導(dǎo)致耐藥菌/耐藥基因出現(xiàn)的概率暴露評(píng)估描述人體通過(guò)特定途徑暴露于耐藥菌/耐藥基因的概率后果評(píng)估描述人體暴露于特定耐藥菌/耐藥基因后引起不良后果的概率綜合風(fēng)險(xiǎn)估計(jì)釋放、暴露和后果評(píng)估結(jié)果整合危害鑒定(特征描述)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)耐藥性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估程序釋放評(píng)估暴露評(píng)估后果評(píng)估綜合風(fēng)險(xiǎn)估計(jì)危害鑒定(特征描述)風(fēng)13危害識(shí)別對(duì)動(dòng)物應(yīng)用特定抗菌藥物誘導(dǎo)的耐藥菌的識(shí)別。對(duì)動(dòng)物應(yīng)用特定抗菌藥物產(chǎn)生耐藥因子（耐藥基因及其載體）的識(shí)別。

危害識(shí)別必須考慮抗菌藥物的類型以及病原菌的亞型和血清型。危害識(shí)別對(duì)動(dòng)物應(yīng)用特定抗菌藥物誘導(dǎo)的耐藥菌的識(shí)別。14動(dòng)物飼料肉直接接觸醫(yī)院人類屠宰加工廠加工食品動(dòng)物羊奶牛豬家禽肉牛殘?jiān)閭H動(dòng)物植被,作物,水果污水養(yǎng)殖污水及糞便排放動(dòng)物飲用水人飲用水海洋/湖泊游泳水產(chǎn)河流/溪水企業(yè)/家用抗菌藥物其他家畜社區(qū)-城市-農(nóng)村野生動(dòng)物土壤烹飪制作消費(fèi)儲(chǔ)存耐藥性流行病學(xué)釋放暴露后果動(dòng)物肉直接醫(yī)院人類屠宰加工廠加工食品動(dòng)物羊奶牛豬家禽肉牛殘?jiān)?5釋放評(píng)估——描述動(dòng)物應(yīng)用抗菌藥物導(dǎo)致耐藥菌/耐藥基因出現(xiàn)的概率暴露評(píng)估——描述人體通過(guò)特定途徑暴露于耐藥菌/耐藥基因的概率后果評(píng)估——描述人體暴露于特定耐藥菌/耐藥基因后引起不良后果的概率耐藥性給人類健康帶來(lái)危害的途徑及風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估危害治療無(wú)效抗菌藥物治療耐藥菌感染抗菌藥物用于動(dòng)物篩選出耐藥菌/耐藥基因耐藥菌/耐藥基因擴(kuò)散屠宰加工過(guò)程耐藥菌污染零售食品中存在耐藥菌耐藥菌被人體攝入的概率釋放評(píng)估——描述動(dòng)物應(yīng)用抗菌藥物導(dǎo)致耐藥菌/耐藥基因出現(xiàn)的概16釋放評(píng)估應(yīng)用抗菌藥物的動(dòng)物種類、數(shù)量及其地理分布；應(yīng)用抗菌藥物數(shù)量、給藥途徑和方法；抗菌藥物藥效學(xué)/藥動(dòng)學(xué)；應(yīng)用抗菌藥誘導(dǎo)的耐藥菌種類；耐藥性的產(chǎn)生機(jī)制及傳遞機(jī)制；和其他抗菌藥的交叉耐藥性和/或協(xié)同耐藥性；對(duì)動(dòng)物、動(dòng)物性產(chǎn)品以及排泄物中是否存在耐藥菌的監(jiān)控；描述動(dòng)物應(yīng)用某種抗菌藥物后向特定環(huán)境釋放耐藥性菌或耐藥因子的生物學(xué)途徑，并定性或定量評(píng)價(jià)全過(guò)程發(fā)生的概率?？赡苄枰馁Y料包括：釋放評(píng)估應(yīng)用抗菌藥物的動(dòng)物種類、數(shù)量及其地理分布；描述動(dòng)物應(yīng)17暴露評(píng)估描述人暴露于使用某獸用抗菌藥物誘導(dǎo)產(chǎn)生的特定耐藥菌或耐藥因子的生物學(xué)途徑，并用定性或定量方法對(duì)暴露發(fā)生的概率進(jìn)行評(píng)估?？赡苄枰男畔ⅲ喝丝趯W(xué)及包括傳統(tǒng)和習(xí)俗在內(nèi)的食物消費(fèi)方式；被耐藥菌污染的動(dòng)物及其產(chǎn)品的流通；被耐藥菌污染的動(dòng)物飼料的流通；動(dòng)物產(chǎn)品處理過(guò)程（包括屠宰，加工，儲(chǔ)存，運(yùn)輸和銷售）中耐藥菌的存活能力及重新分布；被耐藥菌污染食品中微生物的生長(zhǎng)；對(duì)動(dòng)物排泄物處理及人類暴露于排泄物中耐藥菌或耐藥因子的機(jī)會(huì)；暴露評(píng)估描述人暴露于使用某獸用抗菌藥物誘導(dǎo)產(chǎn)生的特定耐藥菌或18耐藥菌在人體腸道菌群中存活的能力；耐藥菌在人與人之間的不自覺(jué)傳播；耐藥菌向其他共生菌轉(zhuǎn)移耐藥因子的能力；用于治療人類疾病的抗菌藥種類和數(shù)量；人類疾病治療時(shí)間的長(zhǎng)短及給藥途徑、劑量；藥物(代謝)動(dòng)力學(xué)因素（新陳代謝、生物利用率、能否作用于腸叢菌）。耐藥菌在人體腸道菌群中存活的能力；19后果評(píng)估描述特定人群暴露于特定耐藥菌或耐藥因子及其暴露后果之間關(guān)系的，并對(duì)其發(fā)生的可能性進(jìn)行評(píng)估。評(píng)估可以是定性的，也可以是定量的。

耐藥菌/耐藥因子及其危害之間的量-效關(guān)系；人群易感性的變化；由于抗菌藥失效而導(dǎo)致的人體健康效應(yīng)的變化和發(fā)生頻率；由于抗菌藥可信度的降低而導(dǎo)致了人類醫(yī)藥實(shí)踐的改變；由于對(duì)食品信任度的喪失以及相關(guān)聯(lián)的次要風(fēng)險(xiǎn)，人們的飲食方式發(fā)生的改變；與上述后果相關(guān)的各種消費(fèi)；與人類經(jīng)典抗菌藥治療發(fā)生的沖突；可預(yù)測(cè)的藥物未來(lái)狀況（與時(shí)間相關(guān)）；后果評(píng)估描述特定人群暴露于特定耐藥菌或耐藥因子及其暴露后果之20風(fēng)險(xiǎn)估計(jì)患病人數(shù)及感染耐藥菌株的比例；感染疾病和嚴(yán)重性及病程；感染死亡數(shù)量（每年死亡總數(shù)；每年的可能死亡數(shù)；隨機(jī)人口的壽命或?qū)δ退幘┞遁^多的特定人群的壽命）；靶微生物感染病理學(xué)的重要變化；在人體內(nèi)觀察到的耐藥性水平；其他抗菌素治療的缺乏情況；對(duì)于不同風(fēng)險(xiǎn)效應(yīng)的權(quán)重加的某些隨機(jī)的影響范圍（例如：疾病和就醫(yī)）；風(fēng)險(xiǎn)估計(jì)患病人數(shù)及感染耐藥菌株的比例；21三、國(guó)外耐藥性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估開展情況歐盟：Guidelineonpre-authorizationstudiestoassessthepotentialforresistanceresultingfromuseofantimicrobialveterinarymedicinalproductsEMEA/CVMP/244/01,EuropeanAgencyfortheEvaluationofMedicinalProducts日本：GuidelinefortheRiskAssessmentMethodologyfortheImpactonFoodSafetybytheAntimicrobialResistantOrganismsDerivedfromFoodAnimals.Japan,FoodSafetyCommission,September30th,2004

澳大利亞：Part10ofVeterinaryRequirementSeries:SubmissiontoWorkingPartyonAntibiotics,NationalRegistrationAuthorityforAgriculturalandVeterinaryChemicals.June2000美國(guó)：Guidanceforindustry#152EvaluatingtheSafetyofAntimicrobialNewAnimalDrugswithRegardtoTheirMicrobiologicalEffectsonBacteriaofHumanHealthConcern.U.S.DHHS,FDA,CVMOctober30,2003加拿大：GuidanceforIndustryPreparationofVeterinaryNewDrugSubmissions.VeterinaryDrugsDirectorateHealthCanada.March2007.已制定耐藥性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估規(guī)程或指南的國(guó)家三、國(guó)外耐藥性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估開展情況歐盟：Guideli22VDD2.1Guidance152CVMP644Part10FSCGuideline全球耐藥性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估OIEVDD2.1Guidance152CVMP644Par23已開展的針對(duì)特定病原菌耐藥性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的抗菌藥物阿伏帕星（avoparcin）-腸球菌（Enterococcus）(歐盟，肯定性結(jié)果）氟喹諾酮類（fluoroquinolone）-彎曲菌（Campylobacter）（美國(guó)，肯定性結(jié)果）鏈陽(yáng)菌素類（Streptogramin）-屎腸球菌（美國(guó)，否定性結(jié)果）大環(huán)內(nèi)酯類（Macrolides）-彎曲菌和腸球菌（美國(guó)，否定性結(jié)果）已開展的針對(duì)特定病原菌耐藥性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的抗菌藥物阿伏帕星（av24四、我國(guó)耐藥性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估開展情況及未來(lái)工作建議發(fā)達(dá)國(guó)家獸用抗菌藥物耐藥性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估方興未艾，國(guó)內(nèi)這方面的研究剛剛起步。近幾年在國(guó)家自然科學(xué)基金、國(guó)家科技攻關(guān)計(jì)劃、國(guó)家科技支撐計(jì)劃資助下，中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)、中國(guó)獸藥監(jiān)察所、華南農(nóng)業(yè)大學(xué)、解放軍農(nóng)牧大學(xué)、四川農(nóng)業(yè)大學(xué)等多家單位在耐藥分子機(jī)制、耐藥菌/耐藥基因流行病學(xué)等方面開展了廣泛研究，為耐藥性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估工作的開展奠定了一定的基礎(chǔ)。四、我國(guó)耐藥性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估開展情況及未來(lái)工作建議發(fā)達(dá)25不同年代動(dòng)物源大腸桿菌耐藥性的調(diào)查

70年代（63株）80年代（28株）90年代（69株）2000年（36株）青霉素類氨芐西林（AMP）19.0%25.0%60.9%52.8%阿莫西林（AMO）19.0%25.0%58.0%55.6%頭孢菌素類頭孢氨芐（CX）0.0%0.0%0.0%-頭孢呋辛（CXM）0.0%0.0%0.0%-頭孢曲松（CRO）0.0%0.0%0.0%0.0%頭孢噻呋（EFT）0.0%0.0%2.9%13.9%四環(huán)素類四環(huán)素（TET）63.5%57.1%85.5%97.2%多西環(huán)素（DOX）61.9%57.1%66.7%-土霉素（OYX）63.5%57.1%88.4%-氨基糖苷類鏈霉素（STP）9.5%35.7%62.3%61.1%慶大霉素（GEM）0.0%21.4%36.2%19.4%卡那霉素（KAN）6.3%17.9%29.0%25.0%安普霉素（APR）0.0%0.0%0.0%-氯霉素類氯霉素（CHL）39.7%28.6%55.1%44.4%氟本尼考（FFN）0.0%0.0%1.4%2.8%氟喹諾酮類環(huán)丙沙星（CIP）0.0%0.0%7.2%44.4%諾氟沙星（NOR）0.0%0.0%7.2%41.7%氧氟沙星（OFL）0.0%0.0%10.1%44.4%磺胺類磺胺異惡唑（SMZ）57.1%50.0%81.2%77.8%甲氧芐啶（WD）11.1%14.3%75.4%-

不同年代大腸桿菌耐藥率的變化趨勢(shì)動(dòng)物源病原菌耐藥流行病學(xué)研究不同年代動(dòng)物源大腸桿菌耐藥性的調(diào)查70年代（63株）26不同年代大腸桿菌多重耐藥的變化趨勢(shì)不同年代大腸桿菌多重耐藥的變化趨勢(shì)27年份耐藥譜菌株百分比%70年代TET15.9TETSMZ19.0TETSMZCHL11.1TETSMZCHLAMP9.5其它15.980年代TET10.7TETSMZ14.3TETSMZSTP7.1TETSMZCHLAMP7.1TETSMZCHLAMPGEN7.1其它28.590年代TET5.8TETSMZ10.1TETSMZSTP/CHL/AMP17.4AMPTETSMZSTP/CHL11.6AMPTETSMZSTPGEN/CHL23.8AMPTETSMZSTPCHLCIP5.8其它19.52000年TET5.6TETSMZ8.3TETSMZSTP/GEN11.1TETSMZSTPAMP16.7AMPTETSMZCIPSTP/CHL27.8AMPTETSMZSTPCHLGEN/CIP13.9AMPTETSMZSTPCHLGENCIP8.3其它5.6

不同年代大腸桿菌耐藥譜CIP(環(huán)丙沙星)；NOR(諾氟沙星)；LMF(羅美沙星)；AMP(氨芐西林)；AMO(阿莫西林)；NAL(萘啶酸)；CEF(頭孢噻吩)；TET(四環(huán)素)；CRO(頭孢曲松)；STP(鏈霉素)；KAN(卡那霉素)；AMK(阿米卡星)；GEN(慶大霉素)；EFX(恩諾沙星)；CHL(氯霉素)；FFN(氟苯尼考)；OFL(氧氟沙星)；SXT(復(fù)方新諾明)；SMZ(磺胺異甲基惡唑)；DAN(達(dá)氟沙星)；DOX(多西環(huán)素)；LOM(洛美沙星)；CFZ(頭孢唑林)；OXY(土霉素)；COL(多黏菌素)；SD(磺胺嘧啶)；SMD(磺胺對(duì)甲氧嘧啶)。年份耐藥譜菌株百分比%70年代TET15.9TET28我國(guó)部分地區(qū)分離動(dòng)物源大腸桿菌的耐藥性監(jiān)測(cè)抗菌藥物北京（42株）河南（108株）抗菌藥物內(nèi)蒙（58株）R%I%S%R%I%S%R%I%S%AMP11.97.181.075.02.822.2AMP77.593.4518.97AMO9.519.071.475.02.822.2AMO65.5210.3424.13AMK0.02.497.62.80.097.2AMK1.72098.28CHL7.10.090.549.18.342.6CHL22.411.7275.86CIP0.00.0100.023.15.671.3CIP22.413.4574.14CEF4.87.188.19.315.775.0CEF6.9093.1CRO0.016.783.34.63.791.7DAN22.41077.59EFX2.411.985.727.823.139.8DOX46.5512.0741.4FFN4.89.583.335.29.359.3FFN5.17—94.83GEN2.40.097.625.97.466.7GEN18.97081.03KAN4.814.381.030.68.361.1KAN17.24089.66LMF4.84.890.028.717.653.7LOM22.416.970.69NAL0.00.0100.059.320.420.4OXY55.178.6236.2NOR0.02.495.224.11.974.1NOR22.41077.59OFL0.00.0100.022.21.975.9OFL22.41077.59STP16.711.947.655.616.727.8STP48.28—51.27SMZ11.90.088.186.10.013.9CFZ56.913.7929.31SXT16.70.083.384.30.913.0COL1.72—98.28TET73.82.423.895.40.93.7SD100—0SMD100—0CIP(環(huán)丙沙星)；NOR(諾氟沙星)；LMF(羅美沙星)；AMP(氨芐西林)；AMO(阿莫西林)；NAL(萘啶酸)；CEF(頭孢噻吩)；TET(四環(huán)素)；CRO(頭孢曲松)；STP(鏈霉素)；KAN(卡那霉素)；AMK(阿米卡星)；GEN(慶大霉素)；EFX(恩諾沙星)；CHL(氯霉素)；FFN(氟苯尼考)；OFL(氧氟沙星)；SXT(復(fù)方新諾明)；SMZ(磺胺異甲基惡唑)；DAN(達(dá)氟沙星)；DOX(多西環(huán)素)；LOM(洛美沙星)；CFZ(頭孢唑林)；OXY(土霉素)；COL(多黏菌素)；SD(磺胺嘧啶)；SMD(磺胺對(duì)甲氧嘧啶)。我國(guó)部分地區(qū)離大腸桿菌體外藥敏試驗(yàn)結(jié)果

我國(guó)部分地區(qū)分離動(dòng)物源大腸桿菌的耐藥性監(jiān)測(cè)抗菌北京（4229北京、河南地區(qū)大腸桿菌多重耐藥情況北京、河南地區(qū)大腸桿菌多重耐藥情況30內(nèi)蒙呼和浩特地區(qū)乳源大腸桿菌多重耐藥情況內(nèi)蒙呼和浩特地區(qū)乳源大腸桿菌多重耐藥情況31抗菌藥物SIR耐藥率％抗菌藥物SIR耐藥率％青霉素G1015399.35克林霉素8047045.45氨芐西林00154100桿菌肽152200阿莫西林52010266.23慶大霉素11483220.78苯唑西林1390159.74卡那霉素10334831.17頭孢唑啉13251711.04阿米卡星10744327.92頭孢噻呋1355149.09磺胺嘧啶2015298.70恩諾沙星11833321.43甲氧芐啶00154100環(huán)丙沙星10783925.32氯霉素1232742.60氧氟沙星11743321.43氟苯尼考1143285.19諾氟沙星10064831.17土霉素13002415.58紅霉素4314795.45多西環(huán)素143295.84替米考星8546542.21萬(wàn)古霉素154000林可霉素6098555.19內(nèi)蒙呼和浩特地區(qū)154株乳源金葡菌的藥敏試驗(yàn)結(jié)果

金黃色葡萄球菌流行病學(xué)調(diào)查研究抗菌藥物SIR耐藥率％抗菌藥物SIR耐藥率％青霉素G101532內(nèi)蒙古呼和浩特地區(qū)154株乳源金葡菌多藥耐藥情況

內(nèi)蒙古呼和浩特地區(qū)154株乳源金葡菌多藥耐藥情況33大腸桿菌耐藥性分子流行病學(xué)調(diào)查研究

北京地區(qū)牛源大腸桿菌流行的Ⅰ型整合子及攜帶的耐藥基因盒Ⅰ型整合子類型大小(bp)插入的耐藥基因盒編碼產(chǎn)物A1318dfrA1二氫葉酸還原酶orf功能未知B1740dfrA17二氫葉酸還原酶aadA5氨基糖-3'-腺苷?；D(zhuǎn)移酶C3225aadB氨基糖-2''-腺苷?；D(zhuǎn)移酶aadA1氨基糖腺苷酰基轉(zhuǎn)移酶cmlA氯霉素泵D3075aadB氨基糖-2''-腺苷?；D(zhuǎn)移酶orf功能未知cmlA氯霉素泵大腸桿菌耐藥性分子流行病學(xué)調(diào)查研究北京地區(qū)牛源大腸桿菌流34北京地區(qū)牛源大腸桿菌Ⅰ型整合子的各種流行形式

細(xì)菌分離株intI1PCR產(chǎn)物的大小插入的基因盒形式C260＋3.2kb,1.3kbA+CC261＋3.0kb,1.3kbA+DC262＋1.8kb,1.3kbA+BC286＋3.0kb,1.3kbA+DC287＋3.0kb,1.3kbA+DC288＋1.8kbBC207＋3.0kb,1.3kbA+DC209＋3.0kb,1.3kbA+DC306＋1.3kbAC307＋1.8kb,1.3kbA+BC312＋1.3kbAC914＋3.0kb,1.3kbA+DC916＋3.0kb,1.3kbA+D

牛源大腸桿菌中以A類Ⅰ型整合子最流行，占檢出菌的92%，D類次之，占檢出菌的54%。多數(shù)菌株存在兩種Ⅰ型整合子共存同一宿主菌的情況，其中以A+D組合最多，占檢出菌的54%。北京地區(qū)牛源大腸桿菌Ⅰ型整合子的各種流行形式細(xì)菌分離株in35Ⅰ型整合子類型可變區(qū)大?。╞ps）基因盒A1088aadA21B1662dhfrIaadA1C1740dhfrA17aadA5D1991dhfrⅩⅡaadA2E2710sataadA2F4084blaP1aaadA2ereA該豬場(chǎng)大腸桿菌Ⅰ型整合子流行普遍，檢出率達(dá)54.7%。其中以Ⅰ型整合子D最流行，檢出率達(dá)42.8%。兩種Ⅰ型整合子共存同一宿主菌的情況，以A+C組合最多，檢出率達(dá)15.2%。華南地區(qū)某豬場(chǎng)大腸桿菌流行的各種Ⅰ型整合子及攜帶的耐藥基因盒

華南地區(qū)某豬場(chǎng)大腸桿菌Ⅰ型整合子的8種流行組合Ⅰ型整合子類型可變區(qū)大?。╞ps）基因盒A1088aadA2361-4泳道：雞分離大腸桿菌；5-9泳道：飼養(yǎng)員分離大腸桿菌；10-20泳道：環(huán)境分離大腸桿菌；Marker：LambdaladderDNAstandard華南地區(qū)某雞場(chǎng)人源、雞源及環(huán)境源多重耐藥大腸桿菌的PFGE圖譜分析雞源株（2）、飼養(yǎng)員源株（7、8、9）和環(huán)境源株（20）屬于同一PFGE分型的不同亞型，存在親緣關(guān)系。表明養(yǎng)殖場(chǎng)動(dòng)物、環(huán)境及飼養(yǎng)員之間存在多重耐藥大腸桿菌的垂直傳播。1-4泳道：雞分離大腸桿菌；5-9泳道：飼養(yǎng)員分離大腸桿菌37調(diào)查雞源大腸桿菌耐藥性過(guò)程中從120株菌中篩選出17株喹諾酮類耐藥株，以qnr基因引物PCR擴(kuò)增，獲得3株陽(yáng)性菌。序列測(cè)定結(jié)果顯示3株菌的qnr基因同源性為100%，與GenBank注冊(cè)qnr基因序列（AY655485）同源性為95.3%。3株qnr陽(yáng)性菌對(duì)16～19種抗菌藥物呈高水平多重耐藥。我國(guó)雞源大腸桿菌喹諾酮耐藥株中qnr基因的發(fā)現(xiàn)qnr基因序列同源性比較

調(diào)查雞源大腸桿菌耐藥性過(guò)程中從120株菌中篩選出17株喹諾酮38大腸桿菌對(duì)氟苯尼考耐藥機(jī)制的研究圖a

HPLC法測(cè)定氟苯尼考在野生敏感菌和耐藥菌內(nèi)的聚集耐藥菌株C260(▲)、C262(■)和敏感菌株C305(◆)、ATCC25922(●)對(duì)氟苯尼考的積聚量圖b

HPLC法測(cè)定氟苯尼考在基因工程敏感菌和耐藥菌內(nèi)的聚集基因工程菌株JM109(○)和JM109-R(●)對(duì)氟苯尼考的積聚量動(dòng)物源病原菌耐藥機(jī)理的研究大腸桿菌對(duì)氟苯尼考耐藥機(jī)制的研究圖aHPLC法測(cè)定氟39

抗體對(duì)細(xì)菌內(nèi)藥物蓄積量的影響抗體對(duì)細(xì)菌內(nèi)藥物蓄積量的影響40雞毒支原體大環(huán)內(nèi)酯類抗生素耐藥分子機(jī)理研究大腸桿菌GenBank登錄號(hào)為J01695；*隨機(jī)挑取的3株BG44T-EMr，2株的rrnA發(fā)生了A2058G突變，但rrnB未發(fā)生任何突變；1株的rrnA未發(fā)生任何突變，而rrnB發(fā)生了G2057A、A2059G突變。雞毒支原體紅霉素、替米考星、泰樂(lè)菌素誘導(dǎo)耐藥株23SrRNA基因V域部分核苷酸序列分析比較雞毒支原體大環(huán)內(nèi)酯類抗生素耐藥分子機(jī)理研究大腸桿菌Ge41雞毒支原體MIC(μg/ml)23SrRNAV區(qū)域突變位點(diǎn)EMTLTMLMrrnArrnBS60.0320.0160.0084----S6-EMr256-＞5121-24-8＞512A2058Ga(3)

b--S6-TMr≥51216-32256＞512--A2058G

(3);A2503T

(3)S6-TLr1-20.125-0.250.125-0.2564-128----BG44T0.0630.0080.0048----BG44T-EMr2562-648-128＞512A2058G(2)G2057A(1);A2059G(1)BG44T-TMr＞51216-32256-512＞512--A2058G

(3);A2503T

(3)BG44T-TLr1-20.125-0.250.125-0.2564-128----

雞毒支原體誘導(dǎo)耐藥株MIC及其23SrRNA基因V域堿基突變

a按大腸桿菌23SrRNA核苷酸序列編號(hào)；b括號(hào)內(nèi)數(shù)字為在該位置發(fā)生堿基替換突變的突變數(shù)。

雞毒支原體MIC(μg/ml)23SrRNAV區(qū)域突變42

檢測(cè)FloR1蛋白的間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線

用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法建立檢測(cè)FloR1蛋白的標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)曲線在6.25ng/ml~200ng/ml之間，呈良好的線性相關(guān)，OD值與濃度（LogC，母液為1mg/ml）之間的線性回歸方程為：y=-0.1744Ln(x)+1.1563，相關(guān)系數(shù)R2=0.9979。耐藥性檢測(cè)方法研究——大腸桿菌氟苯尼考耐藥臨床株間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)方法的建立檢測(cè)FloR1蛋白的間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線用間接競(jìng)43臨床氟苯尼考耐藥大腸桿菌ELISA檢測(cè)及細(xì)菌體內(nèi)FloR1蛋白含量的測(cè)定E.colistrainMIC(μg/mL)floRgeneELISAFloR1concentrationUntreatedAntibodytreated

OD*(ng/mL)JM10922－1.147±0.0091.053±0.058T/JM10922－1.119±0.0411.238±0.324CVM1841>12832＋0.330±0.058113.983±45.381JM109-R6432＋0.419±0.02768.424±11.620C8326012864＋0.287±0.048145.854±45.762C8326122－1.166±0.0130.946±0.075C832623216＋0.641±0.04619.196±5.804C83286328＋0.557±0.05231.133±10.713C8328722－1.100±0.0661.348±0.635C8330244－0.973±0.0282.866±0.496C8330522－1.147±0.0341.055±0.131C8391412832＋0.433±0.02063.388±7.718C839166432＋0.499±0.04043.416±11.088臨床氟苯尼考耐藥大腸桿菌ELISA檢測(cè)及細(xì)菌體內(nèi)FloR1蛋44圖aMICs和FloR1蛋白量的線性關(guān)系圖圖bMICs和OD值的線性關(guān)系圖圖aMICs和FloR1蛋白量的線性關(guān)系圖圖bMIC45通過(guò)數(shù)據(jù)分析得出，無(wú)FloR1蛋白抑制時(shí)平均OD值減去3倍標(biāo)準(zhǔn)偏差(OD=0.8879)或?qū)?yīng)的蛋白濃度(3.04ng/mL)可作為臨界點(diǎn)來(lái)篩選臨床細(xì)菌是否含有floR基因以及是否對(duì)氟苯尼考耐藥。該方法能在2-3小時(shí)內(nèi)確定細(xì)菌是否耐藥，與常規(guī)的藥敏試驗(yàn)相比，能快速簡(jiǎn)便地對(duì)細(xì)菌耐藥性進(jìn)行監(jiān)測(cè)。通過(guò)數(shù)據(jù)分析得出，無(wú)FloR1蛋白抑制時(shí)平均OD值減去3倍46

發(fā)表的相關(guān)論文WuB,XiaC,DuX,CaoX,ShenJ.Influenceofanti-FloRantibodyonflorfenicolaccumulationinflorfenicol-resistantEscherichiacoliandenzyme-linkedimmunosorbentassayfordetectionofflorfenicol-resistantE.coliisolates.JClinMicrobiol.2006Feb;44(2):378-82.WangZ,ShenJ,SuoX,ZhaoS,CaoX.Experimentallyinducedmonensin-resistantEimeriatenellaandmembranefluidityofsporozoites.VetParasitol.2