TSH熒光酶免疫分析法1

TSH熒光酶免疫檢測法相關(guān)幫助需要相關(guān)抗體試劑的可以訪問Fantibody全球抗體搜索引擎fantibody全球抗體搜索引擎是一個供公共檢索的抗體數(shù)據(jù)庫，其抗體信息數(shù)據(jù)來源于全球范圍的研究機(jī)構(gòu)與商業(yè)公司。該引擎由商品化抗體數(shù)據(jù)庫與抗體應(yīng)用評價(jià)數(shù)據(jù)庫兩部分組成，以幫助研究者更高效的尋找并評估該抗體的性能。全球抗體搜索引擎是繼基因與蛋白數(shù)據(jù)庫之后更為復(fù)雜的應(yīng)用型檢索平臺需要相關(guān)的實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備、生物試劑、醫(yī)療器械、制藥設(shè)備、醫(yī)藥原料、體外診斷試劑及耗材與技術(shù)服務(wù)信息的，可以訪問探生網(wǎng)biomean進(jìn)行咨詢，期待您的加入本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!一、先天性甲低的新生兒篩查方法1、酶免疫分析法(enzymelmmunoassay，EIA)2、放射免疫分析法(radioimmunoassay，RIA)3、免疫放射法(immunoradiometricassay，IRMA)

本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!一、先天性甲低的新生兒篩查方法4、時間分辨熒光免疫分析法TRFIAme-resolvedfluorescenceimmunoas—say5、熒光酶免疫分析法FEIAfluoreseenceenzymeimmunoassay6、自動新生兒疾病篩查系統(tǒng)(automatednewbornscreeningsystem)本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!TSH熒光酶免疫分析法FEIAFluorescenceenzymeimmunoassay本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!1、原理本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!1．原理熒光酶免疫分析法(FEIA)是一種高度靈敏的檢測方法，用FEIA測定血hTSH基于一步夾心法原理，采用固相、雙位點(diǎn)熒光酶免疫分析法。干血斑中洗滌出的hTSH，同時與包被在酶標(biāo)板上抗hTSH的單克隆抗體分子和辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的抗hTSH—亞基的第二抗體結(jié)合。本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!被測TSH抗原被測TSH抗原有兩個抗原決定簇故叫雙位點(diǎn)β位點(diǎn)α位點(diǎn)本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!TSH單克隆抗體TSH單克隆抗體TSH單克隆抗體包被在反應(yīng)板上的TSH單克隆抗體故叫固相本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!HPR標(biāo)記的抗TSH亞基單克隆抗體HRP辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的抗hTSH—亞基（β位點(diǎn)）的第二抗體本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!TSH單克隆抗體被測TSH抗原TSH單克隆抗體TSH單克隆抗體被測TSH抗原被測TSH抗原HPR標(biāo)記的抗TSH亞基單克隆抗體HPR標(biāo)記的抗TSH亞基單克隆抗體HPR標(biāo)記的抗TSH亞基單克隆抗體HPR標(biāo)記的抗TSH亞基單克隆抗體HRP被測TSH抗原被測TSH抗原HRPHRPHRP打入血斑（TSH）并加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的抗hTSH—亞基的第二抗體溶液于已包被TSH單克隆抗體的酶標(biāo)反應(yīng)孔內(nèi)。（一步法）PH：6.5本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!TSH單克隆抗體被測TSH抗原TSH單克隆抗體TSH單克隆抗體被測TSH抗原被測TSH抗原HPR標(biāo)記的抗TSH亞基單克隆抗體HPR標(biāo)記的抗TSH亞基單克隆抗體HPR標(biāo)記的抗TSH亞基單克隆抗體HPR標(biāo)記的抗TSH亞基單克隆抗體HRP被測TSH抗原被測TSH抗原HRPHRPHRPHPR標(biāo)記的抗TSH亞基單克隆抗體HPR標(biāo)記的抗TSH亞基單克隆抗體被測TSH抗原被測TSH抗原HRPHRP干血斑中洗滌出的hTSH，同時與包被在酶標(biāo)板上抗hTSH的單克隆抗體分子和辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的抗hTSH—亞基的第二抗體結(jié)合。本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!TSH單克隆抗體被測TSH抗原TSH單克隆抗體TSH單克隆抗體被測TSH抗原被測TSH抗原HPR標(biāo)記的抗TSH亞基單克隆抗體HPR標(biāo)記的抗TSH亞基單克隆抗體HPR標(biāo)記的抗TSH亞基單克隆抗體HRPHRPHRP過量的酶結(jié)合物和未結(jié)合的hTSH被洗滌去掉。只剩下TSH同時與包被在酶標(biāo)板上抗TSH的單克隆抗體和辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的抗TSH—亞基的第二抗體結(jié)合物。被檢測TSH抗原被夾在中間，故又稱夾心法。本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!TSH單克隆抗體被測TSH抗原TSH單克隆抗體TSH單克隆抗體被測TSH抗原被測TSH抗原HPR標(biāo)記的抗TSH亞基單克隆抗體HPR標(biāo)記的抗TSH亞基單克隆抗體HPR標(biāo)記的抗TSH亞基單克隆抗體HRPHRPHRP加入熒光底物3-P-羥基苯丙酸(HPPA)和雙氧水進(jìn)行酶反應(yīng)。HPPAH2O2HPPAHPPAHPPAHPPAHPPAHPPAHPPAHPPAHPPAH2O2H2O2H2O2H2O2H2O2H2O2H2O2H2O2H2O2PH：7.8本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!

2HPPA+H2O2DPDPA+2H2O

無熒光3-P-羥基苯丙酸HRPH2O22HPPADPDPA2H2O熒光物質(zhì)作用1小時本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!原理以甘氨酸緩沖液終止酶反應(yīng)。DPDPA甘氨酸緩沖液DPDPAPH：10.3本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!原理用熒光讀數(shù)儀以320nm為激發(fā)光，405nm為發(fā)射光測定熒光值。由于熒光強(qiáng)度與酶標(biāo)反應(yīng)板上結(jié)合的hTSH數(shù)量成正比，因此，通過已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)血斑熒光值和樣本的熒光值，也就可換算出樣本血斑中hTSH的含量。用TSH熒光酶免疫分析法FEIA檢測hTSH的靈敏度達(dá)0.037mIU／L本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!特點(diǎn)：①熒光物質(zhì)為DPDPA，是由HPPA與雙氧水在HRP的作用下脫氫結(jié)合而成，它吸收特定波長（320nm）的光能后，發(fā)生原子重排，同時發(fā)射出更長波長（405nm）的光。DPDPA激發(fā)光波長320nm發(fā)射光波長405nm本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!特點(diǎn)：②鑒于HPPA（3-P-羥基苯丙酸）敏感性高、動力學(xué)范圍廣，已被廣泛用于替代傳統(tǒng)EIA顯色劑，作為辣根過氧化物酶的底物。以HPPA作底物的FEIA可檢測極低和極高濃度，具有明顯優(yōu)勢，由于hTSH樣本正常值與非正常值之間差異大，故該法特別適用于hTSH檢測。本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!特點(diǎn)：③HPPA／H2O2反應(yīng)生成的熒光強(qiáng)度的影響因素中，最重要的是底物濃度、反應(yīng)液和終止液的pH值。酶反應(yīng)最佳pH值為7.8。加入堿性緩沖液終止酶反應(yīng)，又可顯著增強(qiáng)熒光強(qiáng)度。經(jīng)測定，使用pH10.3、1.5mol／L甘氨酸緩沖液可獲得最大熒光強(qiáng)度。在低濃度hTSH下，該緩沖液可使熒光強(qiáng)度增加5倍，當(dāng)hTSH濃度高于80mIU／L時，增強(qiáng)作用依次減弱。本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!特點(diǎn)：④熒光產(chǎn)物穩(wěn)定，可放置過夜后測定。無論在室溫(20～25℃)或30℃孵育用FEIA測定hTSH的敏感性無變化；而在37℃條件下孵育會增加背景熒光，降低靈敏度。建議底物孵育溫度為20～30℃。本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!特點(diǎn)⑤FEIA檢測法方法先進(jìn)，重復(fù)性高。一般情況下，批內(nèi)分析變異系數(shù)和批間分析變異系數(shù)均小于10％。本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!特點(diǎn)⑥應(yīng)用FEIA法進(jìn)行hTSH檢測時，其他垂體激素和人絨毛膜促性腺激素(HCG)對實(shí)驗(yàn)的干擾極小。本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!2、儀器和試劑本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!以下儀器均由

芬蘭Labsystems公司提供熒光讀數(shù)儀孵育振蕩儀自動洗板儀3mm打孔器單道加樣器八道加樣器電腦顯示屏本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!(1)、儀器：①、熒光讀數(shù)儀；

②、孵育／振蕩儀；

③、自動洗板儀；

④、3mm打孔器，或打孔鉗；

⑤、加樣器；八道加樣器。

以上儀器均由芬蘭Labsystems公司提供。

⑥、3mm實(shí)驗(yàn)血片塑料支架；

⑦、電腦、打印機(jī)；

⑧、冰箱。本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!材料①、新生兒篩查濾紙干血斑標(biāo)本：用S&S903濾紙，按新生兒疾病篩查濾紙干血斑標(biāo)本采集方法采集；

本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!試劑芬蘭LabsystemshTSH-FEIA試劑盒，包含如下物品抗hTSH包被的酶標(biāo)板（1）抗hTSH—HRP酶結(jié)合物（2）酶結(jié)合物稀釋液（3）HPPA熒光底物（4a）H2O2溶液（4b）終止液（5）洗滌液（6）本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!試劑①、抗hTSH包被的酶標(biāo)板（1）：抗hTSH抗體IgG(小鼠單克隆抗體)包被的酶標(biāo)板，濃度>1.0μg/m1。所有包被酶標(biāo)板均置于有干燥劑的錫箔密封袋中以防止潮濕。潮濕將破壞酶標(biāo)板的包被，嚴(yán)重縮短試劑盒保存期。試劑盒通常儲存在2—8℃，為防止打開錫箔密封袋時水蒸氣凝結(jié)破壞酶標(biāo)板性能，試劑盒使用前需置室溫半小時后再打開。若錫箔密封袋在使用前受損或干燥劑變色，請勿使用；本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!②、抗hTSH—HRP酶結(jié)合物（2）：辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗hTSH(小鼠單克隆抗體濃度>50ngIgG／m1)抗體，加0．2％的KathonCGe作為防腐劑；試劑本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!③、酶結(jié)合物稀釋液（3）：緩沖鹽溶液，pH6.5，加0.2％的KathonCG~作為防腐劑。用于酶結(jié)合物的稀釋；試劑本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!④、HPPA熒光底物（4a）：3—P—羥基苯丙酸溶于Tris緩沖液(pH7.8)中，加0.2％的KathonCGe作為防腐劑；試劑本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!⑤、H2O2溶液（4b）：檸檬酸—醋酸緩沖液，pH6.0，含過氧化氫。避免與氧化／還原劑接觸；試劑本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!⑥、終止液：甘氨酸緩沖液（5），pH10.3；試劑本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!⑦、洗滌液（6）：含有吐溫20的磷酸鹽緩沖液，加入0.05％Broni—dox作為防腐劑。按1:9比例加入蒸餾水稀釋。由于儲于4℃可能形成結(jié)晶，稀釋前溫度需達(dá)18—30℃；試劑本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!⑧、hTSH標(biāo)準(zhǔn)品（7）：TSH存在于干血濾紙片的血斑中，包括一個零空白。存于裝有干燥劑的鋁箔袋中。加入0.05％Bronidox作為防腐劑。標(biāo)準(zhǔn)品由紅細(xì)胞壓積為50％一55％的人血液制得，所含的hTSH濃度經(jīng)過WHO2ndIRP(80／558)校正；試劑本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!⑨、質(zhì)控物（8）：hTSH存在于濾紙上的干血濾紙血斑中。加入0．05％Bronidox作為防腐劑。1張濾紙中具有5套2種濃度質(zhì)控物(品)，存于裝有干燥劑的鋁箔袋中。標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控物(品)的TSH濃度有批號差異，需參照每一試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控物(品)的記錄單。試劑全血樣品中TSH含量與血清樣品中TSH含量的轉(zhuǎn)化公式TSHmIU／L血清＝TSHmIU／L全血×lOO／(100—HCR)本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!試劑盒內(nèi)的TSH標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控物的濃度本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!3、實(shí)驗(yàn)操作本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!實(shí)驗(yàn)操作步驟(1)用編碼機(jī)給每一張血片按次序蓋上卡片號，此卡片號也就是我們的檢驗(yàn)編號。在檢驗(yàn)前，所有的試劑和酶標(biāo)反應(yīng)板應(yīng)放置