ELISA標曲擬合方程解析

ELISA標曲擬合方程解析1762人閱讀發(fā)布時間：2021-03-0910:55ELISA標準曲線那么多的曲線計算公式，那么對于那么多的曲線計算公式，我該如何選擇最佳的擬合方程呢？樣本濃度的分析是根據(jù)標準品數(shù)據(jù)所生成的標準曲線完成的，要確保樣本結(jié)果的準確性，就要保證標準曲線盡量能還原抗原抗體的動力學反應過程。一般情況按照說明書推薦方法擬合標曲，可以用軟件繪制也可以手動制作。標曲呈現(xiàn)s型曲線，兩端趨于水平，中間趨于線性，中間部分為較佳的檢測范圍。當標準品的量超過與包被抗體結(jié)合的量，此時標準品已飽和，在增加標準品的量，其OD值不再變化，故當標準品達到一定濃度后，曲線趨于水平。按照科學分析方法，如果存在奇異點或者污點，直接采用線性分析不是很好，要對擬合曲線的幾個點進行取舍，同時也可以改用雙對數(shù)直線擬合或者四參數(shù)曲線擬合。那么常用的曲線擬合回歸方程主要為以下7種：01直線回歸直線回歸是最簡單的回歸模型，也是最基本的曲線擬合回歸分析方法，將所有的測試點擬合為一條直線。其擬合函數(shù)方程式為：y=a+bxXAxis(units)02二次多項式擬合回歸方程二次多項式成拋物線狀，開口向下或者向上，在很多ELISA實驗中，擬合近似于二次多項式的升段或者降段，由于曲線的特性，同一個濃度值在曲線圖上可能表現(xiàn)出沒有對應的OD值、有一個OD值，或者兩個OD值，所以使用二次多項式擬合時，最好保證取值的范圍都落在曲線的升段或者降段，否則哪怕是相關(guān)系數(shù)很好也很可能與實際的值不一致。其擬合函數(shù)方程式為：y=a+bx+cx2*7…3）*7…3）mt.XAxis(unit對03三次多項式擬合回歸方程三次多項式像倒狀的‘形，在實驗結(jié)果剛好在曲線的升段或者降段的時候，效果還可以，但是對于區(qū)間較廣的情形，由于其彎曲的波動，三次方程擬合模擬不一定很好?跟二次方程擬合一樣，看曲線的相關(guān)系數(shù)的同時也要看計算的點在曲線上的分布，這樣才算出理想的結(jié)果，本軟件計算值時，選擇性的取相對于濃度或者OD值，比較符合實際的那個結(jié)果，而沒有將多個結(jié)果列出。擬合函數(shù)方程式為：y二a+bx+cx2+dx3

暫34<r'r'*'1T11r*1*T11*T*1*i04J77411?147U4壯?XAxis(units)04半對數(shù)擬合回歸方程半對數(shù)擬合即將濃度值取對數(shù)值，然后再和對應的OD值進行直線回歸，理想的狀態(tài)下，在半對數(shù)坐標中是一條直線，常用于濃度隨著OD值的增加或者減低呈對數(shù)增加或者減少的情況，即濃度的變化比OD值的變化更為劇烈。在ELISA實驗中較常用(有很多用EXCEL畫圖時，也常使用半對數(shù))。擬合函數(shù)方程式為：y二alg(x)+bXAxis(unFts)05Log-Log擬合回歸方程Log-Log擬合和半對數(shù)相似,只是將OD值和對應的濃度值均取對數(shù)，然后再進行直線回歸。擬合函數(shù)方程式為：Log-Log擬合和半對數(shù)相似,只是將OD值和對應的濃度值均取對數(shù)，然后再進行直線回歸。擬合函數(shù)方程式為：lg(y)lg(x)+b06Logit-Log擬合回歸方程Logit-log則是免疫學檢測中的模型，可用于競爭法。它最早用于RIA，但在ELISA中也是可以應用的。Logit變換源于數(shù)學中的Logistic曲線。在競爭法放射免疫分析(RIA)及ELISA中，當競爭性反應物為0時結(jié)合率為100%，如果某一濃度下結(jié)合率為B，B=0D/0D(0)，在對B進行Logit變換：y=ln[B/(1-B)]之后y與濃度的對數(shù)成線性關(guān)系，即：y=a+blg(x擬合函數(shù)方程式為：lg(y)=alg(x)就得到了Logit-log直線回歸模型，這個模型一般適用于競爭法的擬合，所以擬合時要求只有少有一個零濃度測試的OD值，

競爭法和夾心法都可以用到。它的形狀，根據(jù)情況，可能是一個單調(diào)上升的類似指數(shù)，對數(shù)，或雙曲線的曲線，也可能是一個單調(diào)下降的上述曲線，還可以是一條S形曲線。它要求X值不能小于0因為指數(shù)是實數(shù)，故有此要求）。在很多情況下它都可以擬合ELISA的反應曲線，所以它也成了ELISA中應用最廣的模型之一。xtiWMJfiM<>----5■031308^3K磚xtiWMJfiM<>----5■031308^3K磚166011.U1471B-.3-Bf.OXAxis(units)