認(rèn)識(shí)微生物 普通光學(xué)顯微鏡的使用與維護(hù) 課件

項(xiàng)目一認(rèn)識(shí)微生物---普通光學(xué)顯微鏡的使用與維護(hù)一、普通光學(xué)顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)絮狀普通光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造可分為兩部分：1）機(jī)械裝置：鏡座、鏡筒、鏡臂、物鏡轉(zhuǎn)換器、載物臺(tái)、標(biāo)本移動(dòng)螺旋、粗調(diào)螺旋和細(xì)調(diào)螺旋等部件組成。2）光學(xué)系統(tǒng)：目鏡、物鏡、聚光器、虹彩光圈、光源等組成。絮狀要知道的幾個(gè)重要的分辨率人眼：0.2mm/250mm光學(xué)顯微鏡：0.2um電子顯微鏡：0.2nm顯微鏡的結(jié)構(gòu)組成光學(xué)放大系統(tǒng)照明系統(tǒng)機(jī)械和支架系統(tǒng)物鏡光源折光鏡聚光鏡濾光片目鏡絮狀放大倍數(shù)=物鏡放大倍數(shù)×目鏡放大倍數(shù)絮狀在顯微鏡的光學(xué)系統(tǒng)中，物鏡的性能最為關(guān)鍵，它直接影響著顯微鏡的分辨率。而在普通光學(xué)顯微鏡配置的幾種物鏡中，油鏡的放大倍數(shù)最大，對(duì)微生物學(xué)研究最為重要。與其他物鏡相比，油鏡的使用比較特殊，需在載玻片和鏡頭之間加滴鏡油。顯微鏡的光學(xué)原理成像原理光路：光源→虹彩光圈→聚光鏡→通光孔→標(biāo)本（一定要透明）→物鏡→鏡筒→目鏡→眼。二、油鏡的工作原理絮狀1.增加照明亮度油鏡的放大倍數(shù)可達(dá)100×，放大倍數(shù)這樣大的鏡頭，焦距很短，直徑很小，但所需要的光照強(qiáng)度卻最大。絮狀從承載標(biāo)本的玻片透過(guò)來(lái)的光線，因介質(zhì)密度不同（從玻片進(jìn)入空氣，再進(jìn)入鏡頭），有些光線會(huì)因折射或全反射，不能進(jìn)入鏡頭，致使在使用油鏡時(shí)會(huì)因射入的光線較少，物像顯現(xiàn)不清。所以為了不使通過(guò)的光線有所損失，在使用油鏡時(shí)需在油鏡和玻片之間加入與玻璃的折射率相仿的鏡油（通常使用香柏油，其折射率n=1.52）。增加了視野的進(jìn)光量，從而使物象更加清晰。絮狀2.增加數(shù)值孔徑(NA)，提高顯微鏡的分辨率顯微鏡的分辨率或分辨力（resolutionorresolvingpower）是指顯微鏡能辨別兩點(diǎn)之間的最小距離的能力。從物理學(xué)角度看，光學(xué)顯微鏡的分辨率受光的干涉現(xiàn)象及所用物鏡性能的限制，可表示為：式中：λ=光波波長(zhǎng)（平均0.55m)

NA=物鏡的數(shù)值孔徑值。絮狀數(shù)值孔徑則取決于物鏡的鏡口角和玻片與鏡頭間介質(zhì)的折射率，可表示為：

NA=n·sin(α/2）n:物鏡和被檢標(biāo)本間介質(zhì)的折射率。

：鏡口角。以香柏油為介質(zhì)的油鏡所能達(dá)到的數(shù)值孔徑（NA一般在1.2～1.4）要高于低倍鏡、高倍鏡等物鏡（NA都低于1.0）。數(shù)值孔徑通常在0.65左右的高倍鏡只能分辨距離不小于0.4μm的物體，而油鏡的分辨率卻可達(dá)到0.2μm左右。三、普通光學(xué)顯微鏡的使用與維護(hù)絮狀1、顯微觀察步驟低倍鏡觀察（10×）：高倍鏡觀察（40×）：油鏡觀察（100×）：低倍鏡的操作絮狀1.置顯微鏡于固定的桌上,，離桌邊8-10cm,大約一掌的距離。2.旋動(dòng)轉(zhuǎn)換器，將低倍鏡移到鏡筒下方與之對(duì)直。3.調(diào)整光源，同時(shí)用眼對(duì)準(zhǔn)目鏡，仔細(xì)觀察，視野亮度均勻。4.將標(biāo)本放在載物臺(tái)上，使觀察的目的物置于圓孔的正中央。5.將粗調(diào)節(jié)器向下旋轉(zhuǎn)，眼睛注視物鏡，以防物鏡和載玻片相碰，當(dāng)物鏡的尖端距載玻片約0.5cm處時(shí)停止旋轉(zhuǎn)。6.雙眼向目鏡觀察，調(diào)節(jié)粗、細(xì)調(diào)節(jié)器直至目的物清晰為止。高倍鏡的操作絮狀1.使用高倍鏡之前，先用低倍鏡觀察，將目的物移至視野正中央。2.旋動(dòng)轉(zhuǎn)換器換成高倍鏡，調(diào)節(jié)細(xì)調(diào)節(jié)器直至目的物清晰；如果高倍鏡觸及載玻片應(yīng)立即停止旋動(dòng)，說(shuō)明原來(lái)低倍鏡沒(méi)有調(diào)準(zhǔn)焦距，應(yīng)重調(diào)低倍鏡，找到目的物。油鏡的操作絮狀1.如果用高倍鏡未能看清目的物，則可用油鏡。應(yīng)先用低倍鏡和高倍鏡檢查標(biāo)本片，將目的物移到視野正中。2.下降載物臺(tái)在載玻片上滴一滴香柏油，將油鏡移至正中央，使油鏡頭浸沒(méi)在油中，剛好貼近載玻片。用細(xì)調(diào)節(jié)器微微向上調(diào)即可。油鏡的操作絮狀1.如果用高倍鏡未能看清目的物，則可用油鏡。應(yīng)先用低倍鏡和高倍鏡檢查標(biāo)本片，將目的物移到視野正中。2.下降載物臺(tái)在載玻片上滴一滴香柏油，將油鏡移至正中央，使油鏡頭浸沒(méi)在油中，剛好貼近載玻片。用細(xì)調(diào)節(jié)器微微向上調(diào)即可。2、顯微鏡用畢后的處理絮狀拔掉電源插頭下降載物臺(tái)取干凈擦鏡紙拭去鏡頭上的香柏油