公共衛(wèi)生微生物采樣檢測方法總結

年4月19日公共衛(wèi)生微生物采樣檢測方法總結文檔僅供參考空氣中微生物的檢測方法細菌總數(shù)（營養(yǎng)瓊脂，121℃高壓滅菌20min，培養(yǎng)時間37℃,48h）兩種方法撞擊法(二級或者六級微生物采樣器)自然沉降法（暴露5min）采樣：梅花布點，高度：1.2~1.5m；離墻：1m。茶具微生物檢驗方法（一）細菌總數(shù)1、生理鹽水的制法：將氯化鈉（8.5g）溶解于蒸餾水（1000mL）中，分裝到試管內(nèi)，每管10mL，121℃高壓滅菌20min。2、采樣：棉拭子濕潤生理鹽水，在茶具內(nèi)、外緣涂抹50cm2，即口唇接觸處一圈（1~1.5cm），用滅菌剪刀剪去棉簽手接觸處，將棉拭子放入10mL生理鹽水中，4h內(nèi)送檢。3、檢驗程序：檢樣→各1mL加入兩塊滅菌平皿（若污染嚴重，可十倍遞增稀釋）→37℃，48h培養(yǎng)→菌落計數(shù)→報告單位：cfu/cm2。大腸菌群培養(yǎng)基：乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)液（雙料的，每管10mL，115℃高壓滅菌15min）檢測方法：發(fā)酵法（具體內(nèi)容課本11頁）檢樣（測定細菌總數(shù)余下的樣品）革蘭氏染色過程：（陽性菌顯紫色，陰性菌顯紅色）初染：1min，水洗；碘染：1min，水洗；脫色：30s，水洗；復染：1min，水洗，待干，鏡檢。結果報告：凡乳糖發(fā)酵管最終產(chǎn)酸產(chǎn)氣，革蘭氏染色為陰性的無芽孢桿菌，即可報告檢出大腸菌群。三、毛巾、床上臥具微生物檢測方法（一）細菌總數(shù)1.采樣（1）毛巾、枕巾：對折后兩面的中央各25cm2；（2）床單、被單：在上下兩部中央25cm2來回涂抹；2、檢測程序同茶具細菌總數(shù)檢測3.計算單位：cfu/25cm2。(二)大腸菌群（檢測程序同茶具大腸菌群檢測）1.涂抹法：（用測定細菌總數(shù)時采集的樣品）四、理發(fā)用具微生物檢驗方法（一）大腸菌群1、采樣推子：在推子前部上下部分均勻各涂抹三次；理發(fā)刀、剪和修腳工具：在使用的刀、剪面的兩側各涂抹一次采樣；兩個刀或者兩個剪為一份樣品。檢樣5mL倒入雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管，37℃，24h培養(yǎng)；分離培養(yǎng)：接種伊紅美藍平板，做革蘭氏染色鏡檢；證實試驗：接種乳糖發(fā)酵管37℃，24h培養(yǎng)，觀察產(chǎn)氣情況。結果報告：乳糖管最終產(chǎn)酸產(chǎn)氣、革蘭氏染色為陰性的無芽孢桿菌，可報告為大腸菌群陽性。金黃色葡萄球菌培養(yǎng)基：7.5%的氯化鈉肉湯或胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基步驟：做大腸菌群剩余的5mL倒入培養(yǎng)基中，37℃，24h培養(yǎng)；接種血平板，37℃，24h培養(yǎng)；觀察形狀：圓形、金黃色、凸起、表面光滑、周圍有溶血圈；挑菌落做鏡檢：革蘭氏陽性（紅色），葡萄狀排列；甘露醇發(fā)酵試驗：接種到甘露醇發(fā)酵培養(yǎng)基中，37℃，24h培養(yǎng)，觀察是否產(chǎn)酸；血漿凝固酶試驗玻片法：在干凈的玻片兩邊，一端滴一滴生理鹽水，一端滴一滴血漿，接種環(huán)挑菌落分別與它們混合。5min后均無凝固現(xiàn)象的為陰性；若血漿中出現(xiàn)顆粒狀凝塊而生理鹽水中沒有，則為陽性。拖鞋微生物檢驗方法霉菌與酵母菌（生理鹽水中要加入玻璃珠）培養(yǎng)基：霉菌培養(yǎng)基、（虎紅）孟加拉紅培養(yǎng)基、馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）取樣：有棉拭子在每只拖鞋鞋面與腳趾接觸處的5cm×5cm面積上均勻涂抹3次，一雙拖鞋為一份樣品；將盛有棉拭子的試管在手心用力振蕩100次，使霉菌孢子分開；培養(yǎng)：在霉菌培養(yǎng)箱中25~28℃，培養(yǎng)觀察一周。單位是cfu/50cm2。浴盆、臉（腳）盆微生物檢測細菌總數(shù)

無菌生理鹽水：分裝125mL/瓶供浴盆采樣；50mL供臉（腳）盆采樣。采樣部位：在盆內(nèi)側二分之一到三分之一高度；布點：浴盆梅花布點；臉（腳）盆相對兩側壁布點；方法：涂抹法（與茶具方法一致）單位：cfu/25cm2。大腸菌群(同茶具)七、游泳池水微生物檢測、細菌總數(shù)1.采樣瓶：無酸、無堿、無毒的玻璃容器。2.滅菌前要加入足量的10%的硫代硫酸鈉溶液，一般125mL水樣加0.1mL。3.采樣游泳池水面積，㎡兒童池成人池天然游泳池≦1000>1000≦2500>2500采樣點數(shù)1~2235>5注：在水面下30cm處取水樣450mL操作步驟（與茶具細菌總數(shù)一樣）大腸菌群培養(yǎng)基：三倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)液（蒸餾水量不變，其它成分三倍）步驟推測性試驗2個裝有50mL三倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的大試管內(nèi)（裝有小試管）各加入100mL的水樣；在10支裝有5mL三倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的試管里（裝有小試管）加入10mL水樣。搖勻，培養(yǎng)。平板分離接種伊紅美藍，培養(yǎng)、觀察；典型菌落形態(tài)：黑紫色或紅紫色，具有金屬光澤。復發(fā)酵試驗進行革蘭氏染色，同時接種乳糖發(fā)酵管，培養(yǎng)，觀察。查表：1000mL水樣中大腸菌群的MPN值。生活飲用水微生物檢驗方法采樣1.采樣容器應采用潔凈、無色、無毒的聚乙烯塑料和硬質玻璃（又稱硼硅玻璃）。樣品瓶必須專瓶專用，切不可用實驗室盛裝過濃溶液的瓶作采樣瓶。一般我們使用500ml的高壓滅菌的細口瓶采樣。2.容器及瓶塞、瓶蓋應能經(jīng)受滅菌的溫度。3.檢驗中所用的一切用品必須是完全滅菌的。在滅菌前應徹底洗滌干凈，121℃高壓蒸汽滅菌20min，或160℃干烤2h。4.冷藏，4h內(nèi)檢測。如有游離余氯應在采樣瓶消毒前每125ml加0.1ml硫代硫酸鈉溶液。細菌總數(shù)（操作步驟同茶具，記得做空白對照）總大腸菌群乳糖發(fā)酵試驗（1）10mL水樣加入10mL雙料乳糖發(fā)酵管中；1mL水樣加入10mL單料乳糖發(fā)酵管中；0.1mL水樣加到10mL單料乳糖發(fā)酵管中；每一稀釋度接種5管。（2）37℃培養(yǎng)24小時，觀察產(chǎn)酸產(chǎn)氣現(xiàn)象分離培養(yǎng)（接種伊紅美藍，培養(yǎng)）證實實驗（革蘭氏染色，鏡檢，接種乳糖發(fā)酵管）結果報考：查表。耐熱大腸菌群培養(yǎng)基：EC培養(yǎng)基操作步驟：同大腸菌群多管發(fā)酵法。培養(yǎng)溫度：44.5℃培養(yǎng)24h。大腸埃希氏菌培養(yǎng)基：EC-MUG培養(yǎng)基（培養(yǎng)基加熱溶解后要先在366nm紫光下檢查有無熒光）培養(yǎng)溫度：44.5℃培養(yǎng)24h。觀察：在暗處用366nm的紫外燈照射，是否有藍色熒光產(chǎn)生；計算陽性管數(shù)，查表得出最可能數(shù)，結果以MPN/100mL報告。公共場所集中空調系統(tǒng)冷凝水、冷卻水中嗜肺軍團菌（1）采樣采樣容器：可選擇玻璃瓶或聚乙烯瓶，廣口瓶，用前滅菌。2.采樣量：每個采樣點依無菌操作取水樣（或沉積物、軟泥等樣品）約500ml。3.中和：經(jīng)氯或臭氧等消毒的樣品，采樣容器滅菌前加硫代硫酸鈉溶液中和。4.樣品運輸與貯存：樣品最好2天內(nèi)送達實驗室，不必冷凍，但要避光和防止受熱，室溫下貯存不得超過15天。（2）熱處理：取1ml洗脫樣品置50℃水浴加熱30min。酸處理：取5ml洗脫樣品，調pH至2.2，輕輕搖勻，放置5min。接種平板靜置于濃度為2.5%的CO2培養(yǎng)箱中，35~37℃，觀察到有培養(yǎng)物生成時，反轉平板，孵育10d，注意保濕。觀察軍團菌生長緩慢，易被其它菌掩蓋，需每天在體式鏡上觀察。軍團菌的菌落顏色多樣，一般呈白色、灰色、藍色或紫色，也能顯深褐色、灰綠色、深紅色；菌落整齊，表面光滑，呈典型毛玻璃狀，在紫外燈下，部分有熒光。送風中細菌總數(shù)以無菌操作，使用六級篩孔空氣撞擊式采樣器，以空氣流量為28.3L/min，在采樣點采集5~15min。將采集細菌后的營養(yǎng)瓊脂平皿置35~37℃培養(yǎng)48h，計數(shù)菌落數(shù)。送風中真菌總數(shù)采樣方法同上將采集真菌后的沙氏瓊脂培養(yǎng)基平皿置28℃培養(yǎng)5~7d，逐日觀察并于第7d記錄結果。若真菌數(shù)量過多可于第5d計數(shù)結果，并記錄培養(yǎng)時間，換算成cfu/m