SDS-PAGE原理及結果分析技巧

SDS原理及結果分析技巧

SDS原理及結果分析技巧聚丙烯酰胺凝膠聚丙烯酰胺凝膠是由丙烯酰胺單體（acrylamide,Acr）和交聯(lián)劑N’N’-甲叉雙丙烯酰胺（methylene-bisacrylamide,Bis）以29:1的比例在聚合劑過硫酸銨(ammoniumpersulfate，APS)和催化劑TEMED的作用下聚合交聯(lián)成三維網(wǎng)狀結構的凝膠。優(yōu)點：

凝膠孔徑可調(diào)節(jié)（改變單體和交聯(lián)劑的濃度），因此可根據(jù)被分離物的分子量范圍選擇合適的濃度靈敏度可達1mg

分辨率高，可分離大小相差僅3%的多肽。尤其在不連續(xù)凝膠電泳中，集濃縮、分子篩和電荷效應為一體無電滲作用，只要純度高，操作條件一致，樣品分離重復性好凝膠透明，有彈性，機械效能好化學性能穩(wěn)定，與分離物不發(fā)生化學反應;對pH和溫度變化較穩(wěn)定SDS原理及結果分析技巧PAGE電泳原理分子篩效應:分子大小和形狀電荷效應：大部分的蛋白質在pH8.3電泳緩沖液的條件下帶有負電荷，表面負電荷多的蛋白質遷移快，反之則慢（強陰離子去污劑SDS使蛋白結構松散，并帶上大量負電荷，導致本身電荷差別消失，因此SDS分離蛋白主要依賴分子大小，而非電荷或形狀）不連續(xù)系統(tǒng)具有對樣品的濃縮效應

pH值的不連續(xù)緩沖液離子成分的不連續(xù)電位梯度的不連續(xù)凝膠濃度的不連續(xù)以及電壓的不連續(xù).SDS原理及結果分析技巧分離膠(8-15%,pH8.8)濃縮膠(5%,pH6.8)加樣加電場，樣品濃縮在界面上電泳結束—+SDS原理及結果分析技巧電泳的應用

測定蛋白質分子量（亞基）；結合凝膠過濾層析可用來測定蛋白質的分子量和聚合狀態(tài)分析純度測定蛋白質的含量蛋白質水解分析鑒定修飾（糖基化）分離純化結合WesternBlot、免疫共沉淀等方法可用來鑒別蛋白質相互作用SDS原理及結果分析技巧電泳的應用

SDS原理及結果分析技巧測定分子量

蛋白質分子量在15,000～200,000之間時，電泳遷移率與分子量的對數(shù)值線性相關：若將已知分子量的標準蛋白質的遷移率對分子量的對數(shù)作圖，可以獲得一條標準曲線，而從未知蛋白質在相同電泳條件下的遷移率即可在標準曲線上求得其分子量。注意：①SDS單體的濃度，為保證蛋白質與SDS的充分結合，它們的重量比應該為1:4或1:3；②樣品緩沖液的離子強度；③二硫鍵是否完全被還原，許多蛋白質是由亞基或兩條以上肽鏈組成的，這一類蛋白質，測定時只是它們的亞基或單條肽鏈的分子量；④使用軟件分析需要圖片調(diào)正；⑤上樣量少，條帶越寬分析偏差（偏?。┰酱?。SDS原理及結果分析技巧測定分子量

非還原/還原蛋白質狀態(tài)的比較：為什么要用還原性電泳測分子量？SDS原理及結果分析技巧測定分子量

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SDS原理及結果分析技巧純度分析

SDS原理及結果分析技巧含量測定

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SDS原理及結果分析技巧蛋白質水解分析

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