隱球菌性腦膜炎的細胞學檢測

隱球菌性腦膜炎的細胞學檢測

隱形性腦炎（cnm）是由新型隱形性腦炎引起的中樞神經(jīng)系統(tǒng)急性、亞急性或慢性炎癥性疾病，約占新隱形性腦炎的77%80%。近年來,隨著免疫低下疾病的增多、免疫抑制劑和糖皮質(zhì)激素的廣泛應用以及AIDS的發(fā)病增加,CNM患病率明顯增加。CNM的診斷主要靠腦脊液檢查,為了更好的掌握其腦脊液細胞學特點,提高診斷水平,現(xiàn)將我院明確診斷的78例CNM患者臨床及腦脊液檢測資料分析如下。數(shù)據(jù)和方法1.病例就診時間78例我院2003.1~2008.7住院患者,其中男51例(65.4%),女27例(34.6%),年齡3~70歲,平均34.7歲。急性(<1個月)起病42例,亞急性(1~2個月)起病27例,慢性(>2個月)起病9例。就診時間為發(fā)病后3天~8個月,平均28.6天。合并基礎(chǔ)疾病26例(33.3%),其中結(jié)核性腦膜炎4例,乙型肝炎3例,系統(tǒng)性紅斑狼瘡3例,肺真菌病3例,肺部感染3例,浸潤性肺結(jié)核2例,化膿性腦膜炎1例,丙型肝炎后肝硬化1例,2型糖尿病1例,干燥綜合征1例,慢性腎炎1例,膽囊炎1例,妊娠1例,吸毒史1例。所有病例均由腦脊液直接鏡檢和(或)培養(yǎng)中發(fā)現(xiàn)新型隱球菌而確診。2.意識障礙、聽力和聽力下降所有病例病程中均有頭痛,且以頭痛為首發(fā)癥狀者66例(84.6%)。病程中伴有發(fā)熱者60例(76.9%),嘔吐46例(59.0%),意識障礙15例(19.2%),抽搐發(fā)作13例(16.7%),精神異常6例(7.7%),視力和(或)聽力下降5例(6.4%)。體檢腦膜刺激征陽性者65例(83.3%),腦神經(jīng)受損8例(10.3%),一側(cè)肢體偏癱3例(3.8%),病理征2例(2.6%)。3.腦細胞學檢查患者均在入院后治療前、治療后行腰穿檢查;在送檢腦脊液常規(guī)、生化檢查及墨汁染色的同時,留取1~2ml標本行腦脊液細胞學(CSFC)檢查,用自然沉淀法收集腦脊液細胞于玻片上,經(jīng)邁格姬(May-Grunwald-Giemsa,MGG)法染色后用光鏡檢測,得出細胞的反應類型、找隱球菌并且行真菌培養(yǎng)。4.不同時期商業(yè)生產(chǎn)腰穿腦脊液壓力>400mmHg者43例(55.1%),200~400mmHg30例(38.5%),<200mmHg5例(6.4%)。外觀正常者62例(79.5%),混濁者16例(20.5%)。白細胞數(shù)正常者7例(9.0%),余均不同程度增高。首次腦脊液生化:蛋白質(zhì)1.01±0.45g/L,高于正常者54例(69.2%);糖2.21±1.12mmol/L,低于正常者60例(76.9%);氯化物118.63±7.68mmol/L,低于正常者44例(56.4%)。5.小鼠骨髓嗜酸性細胞的合成本組78例患者中有68例曾送檢腦脊液細胞學1~10次不等。首次腦脊液細胞學分類除1例正常外,其余均呈混合細胞反應。嗜中性粒細胞、淋巴細胞及激活型淋巴細胞、單核細胞及激活型單核細胞各占一定比例,部分有溶解反應。有時可見漿細胞及吞噬細胞,偶見嗜酸性粒細胞。其中16例(23.5%)呈嗜中性粒細胞為主的混合反應,嗜中性粒細胞所占比例均大于50%;10例(14.7%)呈淋巴細胞為主的混合細胞反應,小淋巴細胞加上激活型淋巴細胞所占比例大于50%;3例(4.4%)呈單核細胞為主的混合細胞反應,單核細胞加上激活型單核細胞所占比例大于50%;其余39例(57.4%)呈混合型,部分以激活型單核細胞加激活型淋巴細胞為主。動態(tài)檢測抗真菌治療有效、臨床癥狀好轉(zhuǎn)的病例,腦脊液病理細胞亦逐漸減少。6.印度墨色檢查首次常規(guī)涂片行墨汁染色即發(fā)現(xiàn)隱球菌者48例(61.5%),26例(33.3%)重復送檢時發(fā)現(xiàn)隱球菌,余4例(5.1%)墨汁染色始終呈陰性,靠隱球菌培養(yǎng)確診。我院通常對同一標本在MGG染色的基礎(chǔ)上再行印度墨染色,以提高準確性。在送檢腦脊液細胞學的68例中,55例(70.5%)于光鏡下可直接觀察到隱球菌,隱球菌在鏡下為深藍色,無核,大小不等,壁薄,染色較淡,呈雙層反光圈。有些菌體呈葫蘆形或啞鈴形。有時可見圓形小芽孢從菌體長出。菌體間距離基本相同,多呈簇排列。隨著抗真菌治療,隱球菌的數(shù)目明顯減少或消失。臨床技術(shù)及設(shè)備檢結(jié)果CNM是一種病情相對較重、死亡率較高,且臨床癥狀不夠典型,容易被誤診的疾病。國內(nèi)文獻報道,CNM初診誤診率高達81%。在本組78例CNM患者中,癥狀、體征較為常見,大部分均以頭痛、發(fā)熱起病,進行性加重,顱高壓癥狀明顯,腦膜刺激征。腰穿腦脊液常規(guī)和生化檢查,主要表現(xiàn)為壓力升高明顯,白細胞輕度到中度增多,蛋白質(zhì)輕度增高,糖和氯化物降低,較其他感染性腦膜炎而言無較大的特異性。腦脊液病原學檢查是診斷CNM的關(guān)鍵,涂片墨汁染色鏡檢迅速而簡便易行,國內(nèi)報道其陽性率可達80.0%。但由于直接涂片墨汁染色涂片不均勻、雜質(zhì)污染等缺點可能造成陽性率降低,有報道通過13~19次墨汁涂片才找到隱球菌。本組病例首次墨汁染色陽性48例,陽性率為61.5%。其余病例重復送檢,有26例(33.3%)發(fā)現(xiàn)隱球菌,4例(5.1%)始終呈現(xiàn)陰性。將腦脊液自然沉淀后,行MGG染色找隱球菌,隱球菌在光鏡下有其獨特的形態(tài)學特點,能對CNM作出快速的、敏感性和特異性均較高的診斷。本組共68例病人送檢腦脊液細胞學,其中55例于首次檢查光鏡下即檢出隱球菌(陽性率70.5%),較常規(guī)涂片墨汁染色首檢陽性率更高。同時腦脊液細胞學顯示,細胞總數(shù)不同程度增高,多呈混合型細胞反應。隨著CNM病情的好轉(zhuǎn),細胞總數(shù)減少,故其對療效的監(jiān)測也有一定的意義。隱球菌培養(yǎng)是確診CNM的另一方法,準確率可達81%,但敏感性不高。本組病例中真菌培養(yǎng)僅4例陽性。鑒于真菌培養(yǎng)及鑒定所需時間長,不利于早期、快速作出診斷,因而需結(jié)合涂片等其它檢查輔助診斷。除此之外,乳膠凝集試驗、固相細胞計數(shù)對隱球菌的檢出也很有優(yōu)勢;據(jù)文獻報道,采用乳膠凝集試驗檢測隱球菌多糖抗原的敏感性與特異性均可達90.0%以上。而固相細胞計數(shù)尤其適用于標本真菌濃度低的患者。另有報道PCR技術(shù)可對CNM作出快速準確的診斷,國外報道用PCR基因擴增方法檢測