慢病毒載體的功能與改性

慢病毒載體的功能與改性

目前，反向重組中的病毒載體已被用作基因治療和其他研究領(lǐng)域的常用基因轉(zhuǎn)移工具。慢病毒為一類逆轉(zhuǎn)錄病毒的總稱,由慢病毒改建而來(lái)的載體系統(tǒng)以其高效而穩(wěn)定的基因轉(zhuǎn)移效率成為近來(lái)研究者們的常用選擇。與其他逆轉(zhuǎn)錄病毒載體相比,慢病毒載體主要有以下幾個(gè)優(yōu)點(diǎn):其一:慢病毒載體既可以轉(zhuǎn)染處于有絲分裂活躍期的細(xì)胞,又可以轉(zhuǎn)染分裂緩慢及處于分裂終末期的細(xì)胞,包括造血干細(xì)胞,神經(jīng)干細(xì)胞,處于分化終末的神經(jīng)元,肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞等;其二:由慢病毒載體攜帶整合入宿主基因組的目的基因?qū)D(zhuǎn)錄沉默作用有較強(qiáng)的抵抗能力,在體外培養(yǎng)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和體內(nèi)移植實(shí)驗(yàn)中,由慢病毒載體攜帶導(dǎo)入的目的基因可以在宿主細(xì)胞中得到長(zhǎng)期而穩(wěn)定的表達(dá);其三:慢病毒載體可以兼容多個(gè)轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子,包括細(xì)胞特異性啟動(dòng)子和在基因組中普遍存在的管家基因的啟動(dòng)子;其四:經(jīng)過(guò)改建后的慢病毒載體可以容納約10kb左右的外源基因,因此大多數(shù)的cDNA都能被克隆入慢病毒載體。慢病毒載體的上述優(yōu)點(diǎn)使其成為體內(nèi)和體外基因轉(zhuǎn)移的一種有效工具。1慢病毒載體基因整合原理慢病毒載體根據(jù)其來(lái)源不同,主要有以下幾種類型:HIV-1型(humanimmunodeficiencyvirustype1)載體系統(tǒng),HIV-2型(humanimmunodeficiencyvirustype2)載體系統(tǒng),猿類免疫缺陷病毒(simianimmunodeficiencyvirus,SIV),貓免疫缺陷病毒(felinesimmunodeficiencyvirus,FIV)等。其中HIV-1型載體系統(tǒng)研究得最為廣泛和深入。HIV-I型慢病毒載體構(gòu)建過(guò)程與其他逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的構(gòu)建原則相似,在研究應(yīng)用過(guò)程中,HIV-I型慢病毒載體通過(guò)改建逐步去除了野生型病毒基因組中的致病基因,并完全去除了3′端LTR中的U3序列,使LTR區(qū)的轉(zhuǎn)錄激活能力下降,成功構(gòu)建了自我滅活型載體系統(tǒng)(self-inactivationvectors,SIN)。這一系統(tǒng)保留了野生型病毒(圖1)基因的順式作用元件LTR,包裝信號(hào)(φ),及Rev基因的反應(yīng)元件。去除了vif,vpr,vpu,nef等致病基因,保證了載體的生物安全性。將編碼病毒衣殼和包膜結(jié)構(gòu)的基因分別克隆于另外兩個(gè)質(zhì)粒中,通過(guò)三個(gè)質(zhì)粒共同轉(zhuǎn)染包裝細(xì)胞產(chǎn)生完整的病毒顆粒。也就是說(shuō),慢病毒載體系統(tǒng)主要由三種包含不同結(jié)構(gòu)的質(zhì)粒構(gòu)成,分別是轉(zhuǎn)移質(zhì)粒(transfervectors),輔助質(zhì)粒(helperplasmids),包膜表達(dá)質(zhì)粒(envelopexpressionplasmids)。結(jié)構(gòu)如圖2。其中,轉(zhuǎn)移質(zhì)粒除包含我們感興趣的外源基因外,同時(shí)還保留了病毒的LTR區(qū)和其他對(duì)病毒的整合復(fù)制起重要作用的元件。其中LTR區(qū)包含了慢病毒的啟動(dòng)子、增強(qiáng)子、包裝信號(hào)、整合位點(diǎn)(attachmentsite,Att)等結(jié)構(gòu)。包裝序列能夠使識(shí)別病毒RNA將其衣殼化并裝配到病毒顆粒中,Att位點(diǎn)使病毒基因可以整合入宿主基因。同時(shí)轉(zhuǎn)移質(zhì)粒中還加入了內(nèi)部啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)外源基因轉(zhuǎn)錄。輔助質(zhì)粒整合進(jìn)入包裝細(xì)胞后表達(dá)蛋白多聚體gag,編碼病毒的衣殼蛋白及病毒的其他模序結(jié)構(gòu)(matrixstructure),同時(shí)表達(dá)蛋白pol,pol蛋白具有逆轉(zhuǎn)錄酶及整合酶的活性,負(fù)責(zé)對(duì)病毒載體基因的結(jié)構(gòu)元件進(jìn)行切割,促使載體基因整合入宿主細(xì)胞基因組中。包膜質(zhì)粒中用口腔炎皰疹病毒的包膜蛋白基因(VSV-G)取代了HIV-1型病毒的env基因,由于VSV-G受體廣泛存在于多種細(xì)胞表面,使慢病毒載體的宿主細(xì)胞傾向性大大增加。2現(xiàn)階段，緩慢病毒載體的設(shè)計(jì)正在開(kāi)展為進(jìn)一步提高載體的應(yīng)用范圍和生物安全性,現(xiàn)階段研究者對(duì)載體的結(jié)構(gòu)作了進(jìn)一步的改進(jìn),主要包含以下幾個(gè)方面。2.1最佳載體的研發(fā)由于SIN型慢病毒載體去除了大部分的HIV-IU3區(qū)自身的啟動(dòng)子,為了驅(qū)動(dòng)外源基因的轉(zhuǎn)錄,一些實(shí)驗(yàn)室在U3區(qū)插入了外源性的啟動(dòng)元件代替了U3區(qū)本身的啟動(dòng)結(jié)構(gòu)。這種改建的成功使得在U3區(qū)插入的外源啟動(dòng)子和外源基因可以有效表達(dá),也使得在慢病毒載體中同時(shí)表達(dá)兩種外源基因成為可能。因此,現(xiàn)階段應(yīng)用的慢病毒載體可以同時(shí)克隆入外源基因,抗生素篩選基因以及熒光標(biāo)記。這一方面的改進(jìn)對(duì)于體外細(xì)胞水平的基因表達(dá)研究和在體的基因治療研究都具有重要意義。另外,設(shè)計(jì)者們也通過(guò)這種改建認(rèn)識(shí)到可以通過(guò)更多地去除U3區(qū)的部分序列來(lái)提高載體的生物安全性。一些實(shí)驗(yàn)室將loxP位點(diǎn)插入到了3′LTR的U3區(qū),載體完成逆轉(zhuǎn)錄和整合的過(guò)程后,loxP位點(diǎn)也會(huì)通過(guò)復(fù)制出現(xiàn)在5′LTR區(qū),這樣載體中的轉(zhuǎn)入基因就會(huì)嵌入在兩端的loxP位點(diǎn)之間,這種設(shè)計(jì)一方面可以通過(guò)加入cre使兩端的loxP位點(diǎn)發(fā)生環(huán)化從而使轉(zhuǎn)入的外源基因沉默,提供了一種外源基因條件性表達(dá)的可能,同時(shí)也為轉(zhuǎn)入外源基因可能對(duì)組織或細(xì)胞產(chǎn)生副作用提供了安全保障。2.2逆轉(zhuǎn)錄相關(guān)基因表達(dá)增加由于病毒載體的基因組結(jié)構(gòu)是隨機(jī)整合入宿主基因組中的,整合部位宿主基因的調(diào)控元件會(huì)對(duì)整合入的外源基因表達(dá)起抑止作用。這種作用也被稱為位置效應(yīng)(positionaleffect)。引發(fā)這種效應(yīng)的原因最初被認(rèn)為是cpG胞嘧啶核苷二聚體的甲基化以及組蛋白脫乙酰作用所引起的染色體凝聚。后來(lái)在在利用逆轉(zhuǎn)錄病毒對(duì)干細(xì)胞進(jìn)行基因轉(zhuǎn)移的研究中發(fā)現(xiàn),不同的細(xì)胞中可能存在一種細(xì)胞特異性的轉(zhuǎn)錄沉默因子,這種因子在甲基化作用發(fā)生之前使基因表達(dá)處于靜息狀態(tài)。目前研究者主要通過(guò)以下幾種途徑來(lái)削弱這種效應(yīng)。一是刪除已知的逆轉(zhuǎn)錄病毒沉默元件。最近有研究表明,應(yīng)用HIV-1型慢病毒載體轉(zhuǎn)染鼠類細(xì)胞,轉(zhuǎn)錄沉默作用僅發(fā)生在非SIN型載體系統(tǒng)中,分析原因可能是非SIN型載體仍然保留有LTR區(qū)的轉(zhuǎn)錄起始元件,而這種元件會(huì)對(duì)整個(gè)載體基因在宿主基因中的轉(zhuǎn)錄起始起干擾作用。二是加入正向調(diào)控元件來(lái)增強(qiáng)轉(zhuǎn)移基因的表達(dá)。目前這些正向調(diào)控元件主要包括局部調(diào)控元件(localcontrolregion,LCR),染色質(zhì)絕緣體(chromatininsulator),模序結(jié)合位點(diǎn)(matrixattachmentsites)。如DNaseI高敏感性位點(diǎn)(highpersensetivesites,HS)是位于β-球蛋白基因簇上游的LCR,這一區(qū)域游離于核小體之外,對(duì)反式作用元件的親和性較高,并可以協(xié)調(diào)位點(diǎn)獨(dú)立性表達(dá)和復(fù)制依賴性表達(dá)的關(guān)系。有研究證實(shí)將這一區(qū)域插入慢病毒載體可以提高β-球蛋白基因在轉(zhuǎn)基因鼠中的表達(dá)。插入染色質(zhì)絕緣體(chromatininsulator)也可以提高目的基因的表達(dá)。模序結(jié)合位點(diǎn)是介導(dǎo)單個(gè)染色質(zhì)莖環(huán)結(jié)構(gòu)與類似蛋白質(zhì)的模序黏附結(jié)合的區(qū)域。將這一序列插入載體明顯提高了轉(zhuǎn)染效率和轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)時(shí)間。這些調(diào)控元件的發(fā)現(xiàn)為構(gòu)建慢病毒載體,使目的基因在靶細(xì)胞中持續(xù)高效表達(dá)提供了依據(jù)。2.3通過(guò)外源基因引導(dǎo)基因型的基因表達(dá)病毒載體攜帶的外源基因轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞后是否能夠表達(dá)還與啟動(dòng)外源基因的啟動(dòng)子及宿主細(xì)胞的類型均有關(guān)系,一般類型的慢病毒載體都選用管家基因的啟動(dòng)子來(lái)啟動(dòng)外源基因以保證其有效轉(zhuǎn)錄。研究者由此想到了應(yīng)用靶細(xì)胞特異性表達(dá)基因的啟動(dòng)子作為載體外源基因的啟動(dòng)序列,從而使轉(zhuǎn)入的外源基因只在特定類型的細(xì)胞中表達(dá)。有研究報(bào)道,利用星形膠質(zhì)細(xì)胞的特異性表達(dá)蛋白GFAP的啟動(dòng)子構(gòu)建的慢病毒載體在注入動(dòng)物模型的受損腦區(qū)后,其攜帶的外源基因特異性地在星形膠質(zhì)細(xì)胞中表達(dá),并且外源基因的表達(dá)水平可以伴隨內(nèi)源性GFAP基因的激活而得到調(diào)節(jié)。這一技術(shù)也被應(yīng)用于生產(chǎn)不同組織特異性表達(dá)GFP的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物,其方法是利用含不同組織特異表達(dá)蛋白啟動(dòng)子的慢病毒載體轉(zhuǎn)染胚胎細(xì)胞,如果胚胎發(fā)育成功,特定的組織細(xì)胞會(huì)呈GFP陽(yáng)性。應(yīng)用組織特異性的啟動(dòng)子和增強(qiáng)子來(lái)驅(qū)動(dòng)慢病毒載體中的外源基因能夠使其在特定的組織細(xì)胞中表達(dá),這一進(jìn)展為慢病毒載體介導(dǎo)的基因靶向性治療提供了理論基礎(chǔ)。2.4tet-oh轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)系統(tǒng)如何使慢病毒載體攜帶的外源基因根據(jù)機(jī)體的需要進(jìn)行有效調(diào)節(jié)也是保證基因治療的有效性和安全性的重要問(wèn)題。目前應(yīng)用最多、前景最好的是四環(huán)素調(diào)節(jié)系統(tǒng),即tet-on及tet-off系統(tǒng)。這一系統(tǒng)是根據(jù)大腸埃希氏菌屬TN10的四環(huán)素抗性操縱子的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)構(gòu)建的,這一抗性操縱子包含一個(gè)四環(huán)素抑制蛋白(TetR)、一個(gè)特異性的DNA結(jié)合位點(diǎn)及四環(huán)素操縱序列(TetO)。無(wú)四環(huán)素存在的條件下,TetR呈二聚體狀態(tài)并與TetO結(jié)合。四環(huán)素(tetracycline)或四環(huán)素類似物——強(qiáng)力霉素(doxycycline)可以與TetR結(jié)合使其構(gòu)象發(fā)生改變,從而導(dǎo)致TetR與TetO分離。后來(lái)發(fā)現(xiàn),TetR存在一種突變體結(jié)構(gòu),在這種突變體中決定TetR空間構(gòu)象的四個(gè)核心蛋白發(fā)生了突變,形成了一種反式的空間構(gòu)象,即當(dāng)dox存在時(shí),TetR呈二聚體結(jié)構(gòu)結(jié)合于TetO上阻礙了下游基因的轉(zhuǎn)錄。利用四環(huán)素原核操縱將單純皰疹病毒的轉(zhuǎn)錄激活域(VP16)與TetR或TetR的突變體融合分別組成四環(huán)素反式激活因子(tetracyclineresponsiveactivator,tTA)和rtTA(reversetetracyclineresponsivetransactivator)。為了在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá),研究者將CMV啟動(dòng)子與TetO重復(fù)序列融和,與tTA結(jié)合構(gòu)成了Tet-off轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)系統(tǒng),與rtTA結(jié)合構(gòu)成了tet-on轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)系統(tǒng)。由于tet-off系統(tǒng)需要長(zhǎng)期給予強(qiáng)力霉素來(lái)維持外源基因的表達(dá),這對(duì)于終身的基因治療不是一個(gè)理想的選擇。同時(shí),tet-off系統(tǒng)的誘導(dǎo)啟動(dòng)需要通過(guò)藥理作用清除強(qiáng)力霉素,這一過(guò)程較tet-on系統(tǒng)的誘導(dǎo)過(guò)程要緩慢。因此,tet-on轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)系統(tǒng)在目前基因治療領(lǐng)域的應(yīng)用更為廣泛。目前應(yīng)用的Tet-on基因調(diào)節(jié)系統(tǒng)多分別構(gòu)建于兩個(gè)質(zhì)粒中,其中一個(gè)含有由外源啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的rtTA,另一個(gè)質(zhì)粒中含有TRE及受其調(diào)控的外源基因。二者通過(guò)共同轉(zhuǎn)染同一細(xì)胞來(lái)發(fā)揮TRE和rtTA間的調(diào)控作用,這一過(guò)程需要通過(guò)兩步篩選來(lái)完成,即首先篩選出成功轉(zhuǎn)染TRE的細(xì)胞群,再用含rtTA的質(zhì)粒來(lái)轉(zhuǎn)染TRE陽(yáng)性的細(xì)胞群,然后通過(guò)第二次的分篩篩選出二者都轉(zhuǎn)染成功的細(xì)胞群。這一系統(tǒng)更適合于體外的實(shí)驗(yàn),在在體實(shí)驗(yàn)中的可控性較差。有研究者正試圖將二者構(gòu)建于同一載體中。但是,Tet-on系統(tǒng)不足之處在于背景效應(yīng)的存在,所謂背景效應(yīng)是指在四環(huán)素不存在的情況下,rtTA也會(huì)與TetO結(jié)合,這種情況會(huì)導(dǎo)致受其調(diào)控的蛋白表達(dá)量的下降,這對(duì)于在低劑量水平發(fā)揮作用的蛋白表達(dá)更為不利,如生長(zhǎng)因子類蛋白。針對(duì)這一問(wèn)題,有些實(shí)驗(yàn)室正對(duì)rtTA作進(jìn)一步的改進(jìn),如經(jīng)過(guò)改建后的反式轉(zhuǎn)錄激活因子rtTA2s-M26,經(jīng)過(guò)TetR區(qū)的突變和遺傳密碼的優(yōu)勢(shì)選擇,以及VP16區(qū)的激活域改建為含12個(gè)氨基酸的重復(fù)序列,其特異性、穩(wěn)定性、可調(diào)性都得到了很大提高。它可以在四環(huán)素濃度較最初的rtTA低10倍的情況下發(fā)揮作用,在四環(huán)素不存在的情況下,沒(méi)有背景效應(yīng)的產(chǎn)生。并且外源基因的表達(dá)水平與四環(huán)素的濃度在一定范圍內(nèi)呈劑量依賴關(guān)系,即隨著外源給予四環(huán)素濃度的增加,外源基因的表達(dá)量也會(huì)相應(yīng)增加。因此,通過(guò)對(duì)rtTA的改建,對(duì)逆轉(zhuǎn)錄病毒載體中加入的外源基因表達(dá)水平可以進(jìn)行準(zhǔn)確的調(diào)節(jié),使載體和外源基因的可控性更強(qiáng),為慢病毒載體應(yīng)用于臨床打下了基礎(chǔ)。最新型的四環(huán)素可調(diào)控系統(tǒng)與慢病毒載體相結(jié)合,使基因的條件性表達(dá)和基因敲除都成為可能,為探索基因的功能提供了有利的工具。Szulc等利用KRAB結(jié)構(gòu)域(Kruppel-associatedbox)的結(jié)構(gòu)和功能特點(diǎn)構(gòu)建了一種新型的TET-on/off調(diào)控系統(tǒng)。接近三分之一的參與轉(zhuǎn)錄調(diào)控的鋅指結(jié)構(gòu)中包含KRAB結(jié)構(gòu)域,當(dāng)DNA與鋅指結(jié)構(gòu)相互作用時(shí),KRAB結(jié)構(gòu)域環(huán)化成為多分子復(fù)合體,引發(fā)組蛋白的脫乙酰作用和甲基化,從而導(dǎo)致染色體的變構(gòu)而抑制轉(zhuǎn)錄激活。KRAB結(jié)構(gòu)域與tetR結(jié)構(gòu)相融合構(gòu)成了轉(zhuǎn)錄激活抑制結(jié)構(gòu),研究者證實(shí)利用這種結(jié)構(gòu)與四環(huán)素操縱子結(jié)構(gòu)相互作用(圖4)在體外細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)和在體試驗(yàn)中都能得到了更為嚴(yán)格的基因調(diào)控表達(dá)效果。3慢病毒載體的安全性分析現(xiàn)階段將目的基因?qū)氚屑?xì)胞和組織的方法主要包括真核表達(dá)質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染,和病毒載體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移方法等。其中真核表達(dá)質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染對(duì)于分裂增殖比較旺盛的體外培養(yǎng)細(xì)胞轉(zhuǎn)染效果較好,但表達(dá)的目的基因常常隨時(shí)間的延長(zhǎng)而發(fā)生丟失。與真核表達(dá)質(zhì)粒相比,病毒載體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移可以整合入宿主的基因組中,具有更好的穩(wěn)定性。最初研究的鼠干細(xì)胞病毒和后來(lái)的腺病毒載體在轉(zhuǎn)染分裂增殖旺盛期的細(xì)胞時(shí)都取得了較好的效果,但對(duì)于分裂增殖緩慢和處于靜息期的細(xì)胞基因轉(zhuǎn)染的效果卻不盡人意。慢病毒載體出現(xiàn)以后,先后在造血干細(xì)胞,胚胎干細(xì)胞,以及在體的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞,神經(jīng)元的基因轉(zhuǎn)移中都取得了成功。隨著慢病毒載體的構(gòu)建更加完善和基因組學(xué)蛋白質(zhì)組學(xué)的進(jìn)展,基因治療成為一些疾病的最佳選擇。而慢病毒載體的一些生物學(xué)特性使許多基因治療的設(shè)想具備了可行性。由于慢病毒家族中的HIV-1及其他類型的病毒對(duì)人類和動(dòng)物有極大的危害性,因此慢病毒載體的生物安全性成為阻礙其應(yīng)用的主要問(wèn)題。第三代的慢病毒載體雖然已經(jīng)進(jìn)一步提高了載體系統(tǒng)的安全性,并且在以前的研究中并沒(méi)有在載體生產(chǎn)過(guò)程中產(chǎn)生野生型病毒的報(bào)道。但要使慢病毒載體系統(tǒng)應(yīng)用于臨床,還需要從以下幾個(gè)方面作出進(jìn)一步的努力。首先在載體設(shè)計(jì)過(guò)程中應(yīng)進(jìn)一步縮短載體及包裝質(zhì)粒中的病毒編碼序列,這樣可以降低病毒基因重組的幾率,但是載體中的包裝信號(hào)和包裝質(zhì)粒中的gag序列之間的重復(fù)不可能完全避免,因此有必要在生產(chǎn)過(guò)程中通過(guò)長(zhǎng)期培養(yǎng)和PCR技術(shù)對(duì)生產(chǎn)出來(lái)的病毒載體進(jìn)行分析。另外在載體設(shè)計(jì)時(shí)應(yīng)避免出現(xiàn)潛在的自殺基因,這類基因一旦被激活,會(huì)導(dǎo)致靶細(xì)胞的死亡。如果慢病毒載體真正應(yīng)用于臨床,那么機(jī)體的免疫系統(tǒng)會(huì)引發(fā)針對(duì)注入的病毒顆粒的免疫應(yīng)答,這些病人就可能在HIV抗原檢測(cè)中呈陽(yáng)性結(jié)果,導(dǎo)致診斷的混淆和病人心理上的壓力。因此為進(jìn)一步提高慢病毒載體的生物安全性,應(yīng)在臨床應(yīng)用前對(duì)其進(jìn)行多方面的安全檢測(cè)和分析。通過(guò)以上的介紹,慢病毒載體是理想的真核細(xì)胞基因轉(zhuǎn)移工具,通過(guò)對(duì)其結(jié)構(gòu)和功能的進(jìn)一步的完善,在科學(xué)研究中有著廣泛的應(yīng)用前景。慢病毒載體可以轉(zhuǎn)化處于分裂靜止期和分化終末狀態(tài)的細(xì)胞,今后應(yīng)用在一些可以通過(guò)基因治療方式治愈的疾病的實(shí)驗(yàn)和臨床研究中。比如一些神經(jīng)系統(tǒng)疾病。在神經(jīng)系統(tǒng)中,絕大多數(shù)的神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞處于一個(gè)相對(duì)靜止的時(shí)期,其它的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體對(duì)于神經(jīng)系統(tǒng)疾病的基因治療顯得無(wú)能為力,而實(shí)驗(yàn)證實(shí),慢病毒載體無(wú)論是在體外細(xì)胞及組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中,還是在在體的基因治療實(shí)驗(yàn)中,對(duì)神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞都具有穩(wěn)定的轉(zhuǎn)染能力。因此,慢病毒載體為一些神經(jīng)系統(tǒng)疾病的基因治療帶來(lái)了希望。近期的研究表明,由慢病毒載體系統(tǒng)介導(dǎo)的應(yīng)用GDNF(膠質(zhì)源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子)對(duì)帕金森氏病進(jìn)行基因治療已經(jīng)在靈