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文檔簡介

離體蛙心灌流第1頁【目標(biāo)要求】1、學(xué)習(xí)斯氏離體蛙心灌流法。2、觀察離子及藥品等對離體心臟活動影響。第2頁【基本原理】心臟正常節(jié)律性活動需要一個適宜內(nèi)環(huán)境(如Na+,K+,Ca2+等濃度及百分比、pH值和溫度),內(nèi)環(huán)境改變直接影響到心臟正常節(jié)律性活動。將失去神經(jīng)支配離體心臟保持于適宜理化環(huán)境中(任氏液Ringersolution),在一定時間內(nèi)仍能產(chǎn)生自動節(jié)律性興奮和收縮。第3頁

離子對心臟活動影響改變?nèi)问弦航M成成份,離體心臟活動就會受到影響。K+參加心肌細(xì)胞復(fù)極化和自律細(xì)胞4期自動去極化過程,其改變不但取決于細(xì)胞內(nèi)外K+濃度梯度,還與細(xì)胞膜對K+通透性相關(guān),所以其影響是多方面。Ca2+對Na+內(nèi)流存在競爭抑制作用,稱膜屏障作用,對靜息電位無影響。[Ca2+]o↑,可使心肌細(xì)胞興奮性降低,傳導(dǎo)減慢,收縮力增強(qiáng)。第4頁在體心臟受交感神經(jīng)和迷走神經(jīng)雙重支配交感神經(jīng)末梢釋放去甲腎上腺素,與心肌細(xì)胞β受體結(jié)合,使心肌收縮力加強(qiáng),傳導(dǎo)速度加緊,心率加緊;阻斷劑心得安迷走神經(jīng)末梢釋放乙酰膽堿,與心肌細(xì)胞M受體結(jié)合,使心肌收縮力減弱,心肌傳導(dǎo)速度減慢,心率減慢;阻斷劑阿托品第5頁【動物、器材與試劑】蟾蜍或蛙、紗布、毀髓針、眼科鑷、手術(shù)剪、眼科剪、蛙板、蛙釘、玻璃分針、滴管、細(xì)棉線、蛙心夾、鐵支架、萬能滑輪、小燒杯、斯氏蛙心套管、雙凹夾、套管夾、張力換能器、生物信號計算機(jī)采集系統(tǒng)任氏液、0.65%NaCl、2%CaCl2、1%KCl、1/10000腎上腺素、1/10000乙酰膽堿、阿托品、300U/ml肝素。第6頁【方法與步驟】1、儀器準(zhǔn)備2、離體蛙心制備3、連接試驗裝置4、試驗觀察第7頁1、儀器準(zhǔn)備打開計算機(jī)生物信號采集系統(tǒng),選擇試驗項目-循環(huán)試驗-離體蛙心灌流。熟悉試驗標(biāo)識使用。參考:生理模擬試驗軟件-離子和藥品對離體蛙心影響第8頁2、離體蛙心制備(斯氏蛙心插管法)在左主動脈下方穿線,靠上端結(jié)扎,作插管時牽引用在主動脈干下方穿線,在動脈圓錐上方打一活結(jié)備用(用以結(jié)扎和固定插管)。取蛙或蟾蜍,雙毀髓后背位置于蛙板上,暴露心臟。仔細(xì)識別心臟周圍大血管。第9頁左手提起左主動脈上方結(jié)扎線,右手用眼科剪在結(jié)扎線下方、沿向心方向?qū)用}管壁剪一斜口(注意要剪破血管內(nèi)膜,每次心縮時有血自切口涌出,但不要把血管剪斷,剪口位置視套管尖端長度與心臟大小而定)。選擇大小適宜斯氏蛙心套管,盛入少許任氏液(內(nèi)加一滴肝素溶液,套管內(nèi)2-3cm高度)。左手用眼科鑷提起切口緣,右手將注有任氏液斯氏套管插入動脈干內(nèi),然后左手持左側(cè)血管分支上結(jié)扎線向外拉,右手將蛙心套管送入動脈圓錐。第10頁當(dāng)套管尖端抵達(dá)動脈圓錐基部時,應(yīng)將套管稍向后退(因主動脈內(nèi)有螺旋瓣會妨礙插管前進(jìn)),并將套管尾端稍向右主動脈方向及腹側(cè)面傾斜,使插管尖端向動脈圓錐背部后下方及心尖方向推進(jìn),在心室收縮時經(jīng)主動脈瓣進(jìn)入心室。第11頁注意插管不可插得過深,插管斜面應(yīng)朝向心室腔,以免插管下口被心室壁堵住。此時可見血液沖入套管,并使液面隨心臟搏動而上下移動,表明操作成功(不然需退回并重新插入)用滴管吸去套管中血液,換新鮮任氏液。第12頁穩(wěn)定住套管后,輕輕提起備用線,將左、右主動脈連同插入套管用雙結(jié)扎緊(不得翻液),再將結(jié)線固定在套管小玻璃鉤上,然后剪斷結(jié)扎線上方血管??辞屐o脈竇位置,在心臟下方繞一線,將左右肺靜脈及前后腔靜脈一起結(jié)扎(注意切勿損壞靜脈竇)。輕輕提起套管和心臟,于靜脈竇下方剪斷有牽連組織,僅保留靜脈竇與心臟聯(lián)絡(luò),使心臟離體。第13頁用任氏液重復(fù)沖洗心室內(nèi)余血,使套管內(nèi)灌流液不再有殘留血液。保持套管內(nèi)液面高度一致(1.5-2cm,或在套管下1/3處結(jié)一線作為標(biāo)志,每次換任氏液時使液面與此線相平),即可進(jìn)行試驗。第14頁其它方法技巧用蛙心夾提起心尖,使心室與動脈圓錐約呈100°-200°鈍角,然后當(dāng)心室縮緊時把套管平直往心室方向推進(jìn)。當(dāng)感覺套管進(jìn)入心室后再把心尖放平,隨即將套管稍向心室推進(jìn),調(diào)整適當(dāng)位置,可見套管內(nèi)液面隨心跳而升降。第15頁3、連接試驗裝置將套管固定在支架上,用蛙心夾在心舒期夾住少許心尖部肌肉(不要夾多,以免夾破心室而漏液)。將蛙心夾上系線繞過一個滑輪與張力傳感器相連。勿使灌流液滴到傳感器上。調(diào)整統(tǒng)計儀器上收縮曲線幅度適中。第16頁4、試驗觀察1)統(tǒng)計正常心搏曲線。2)改用0.65%NaCl溶液灌流,并作好加藥標(biāo)識,觀察心搏改變。待曲線出現(xiàn)顯著改變時,馬上吸去套管中灌流液,同時做好沖洗標(biāo)識,并用新鮮任氏液清洗2-3次,待心搏恢復(fù)正常。注意:換液時切勿碰套管,以免影響描記曲線基線,同時保持灌流液面一致(下同)。第17頁3)向套管內(nèi)加2-6滴5%NaCl溶液,作好加藥標(biāo)識,觀察心搏曲線頻率及振幅改變。當(dāng)曲線出現(xiàn)顯著改變時,應(yīng)馬上吸去套管中灌流液,并做好沖洗標(biāo)識,快速用新鮮任氏液清洗2-3次,待心搏恢復(fù)正常。4)向套管內(nèi)加1-2滴2%CaCl2溶液,作好加藥記號,觀察心搏曲線頻率及振幅改變。標(biāo)識、沖洗至心搏恢復(fù)正常5)向套管內(nèi)加入1-2滴1%KCl溶液,統(tǒng)計心搏曲線改變。當(dāng)心搏曲線改變時,同法更換灌流液,待心搏恢復(fù)正常。第18頁6)同法統(tǒng)計套管中加入1-2滴腎上腺素溶液(1/10000)后心搏曲線改變。7)同法統(tǒng)計套管中加入1-2滴乙酰膽堿溶液(1/10000)后心搏曲線改變。8)同法統(tǒng)計套管中先加入阿托品后再加1-2滴乙酰膽堿溶液(1/10000)后心搏曲線改變。第19頁【注意事項】1、制備離體心臟標(biāo)本時,勿傷及靜脈竇。2、蛙心夾應(yīng)在心室舒張期一次性夾住心尖,防止因夾難過臟而造成漏液。3、每一觀察項目都應(yīng)先描記一段正常曲線,然后再加藥并統(tǒng)計其效應(yīng)。加藥時應(yīng)在心跳曲線上給予標(biāo)識,方便觀察分析。4、各種滴管應(yīng)分開,不可混用。5、在試驗過程中,插管內(nèi)灌流液面高度應(yīng)保持恒定;儀器各種參數(shù)一經(jīng)調(diào)好,應(yīng)不再變動。第20頁6、標(biāo)本制備好后,若心臟功效狀態(tài)不好(不搏動),可向插管內(nèi)滴加1~2滴2%CaCl2或1:10000腎上腺素,以促進(jìn)(起動)心臟搏動。在試驗程序安排上也可考慮促進(jìn)和抑制心臟搏動藥品交換使用。7、給藥后若效果不顯著,可再適量滴加,并親密注意藥品劑量添加后試驗結(jié)果。給藥量必須適度,加藥出現(xiàn)改變后,就應(yīng)馬上更換任氏液,不然會造成不可挽回后果,尤其是K+稍有過量,即可造成難以恢復(fù)心臟停跳。8、謹(jǐn)防灌流液沿絲線流入張力傳感器內(nèi)而損壞其電子元件。第21頁試驗結(jié)果試驗項目收縮強(qiáng)度心率處理前處理后處理前處理后0.65%NaCl2%CaCl21%KCl1:10000E1:10000Ach阿托品+Ach第22頁第23頁第24頁第25頁CaCl2灌流[Ca2+]o↑Ca2+內(nèi)流↑[Ca2+]i↑興奮-收縮耦聯(lián)↑收縮力↑第26頁第27頁第28頁KCl灌流[K+]o↑AP平臺期縮短Ca2+內(nèi)流↓興奮-收縮耦聯(lián)↓收縮力↓第29頁第30頁第31頁1:10000E灌流4期If、ICaT通道↑4期自動去極速度↑自律性↑心率↑與心肌β1受體結(jié)合Ca2+內(nèi)流↑肌漿網(wǎng)釋放Ca2+↑興奮-收縮耦聯(lián)↑收縮力↑c(diǎn)AMP第32頁第33頁第34頁1:10000Ach灌流與心肌M受體結(jié)合K+外流↑,Ca2+內(nèi)流↓E-C耦聯(lián)↓收縮力↓最大復(fù)極電位↑4期K+外流↑

自律性↓心率↓[Ca2+]i↓第35頁【思索題】1、心臟灌流說明心肌哪些生理特征?2、用試驗說明內(nèi)環(huán)境相對恒定主要意義。3、試分析任氏液中適量鈉離子、鈣離子與鉀離子對心肌作用。4、為何強(qiáng)調(diào)試驗中保持灌流液面恒定?灌流量對心臟活動會有什么影響?5、試想,活機(jī)體在心交感神經(jīng)興奮或心迷走神經(jīng)興奮時對心臟會有什么影響?第36頁試

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