新生兒呼吸道微生物生態(tài)特性研究

新生兒呼吸道微生物生態(tài)特性研究

胎兒通常生長(zhǎng)在無(wú)菌環(huán)境中。新生兒出生后，各種有益的微生物逐漸被移植到新生兒的各個(gè)系統(tǒng)中，成為人類(lèi)生活中的有益微生物。因此，當(dāng)人類(lèi)從針頭下降到地面時(shí)，他們開(kāi)始與病毒和疾病進(jìn)行斗爭(zhēng)。在這個(gè)過(guò)程中，不同的生態(tài)因素對(duì)促進(jìn)微生物的原始形成并最終達(dá)到生態(tài)平衡起到了重要作用。因此，對(duì)呼吸正常微生物的早期生長(zhǎng)和群體形成的研究以及不同生態(tài)平衡的幾個(gè)方面的演變過(guò)程具有重要意義。這有助于維持呼吸的生態(tài)平衡，避免由微生物平衡失衡引起的炎癥、哮喘、支氣管炎、牙科疾病、口腔粘膜病、牙周病和其他感染疾病的發(fā)生。內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院就新生兒呼吸系統(tǒng)微生物的建群過(guò)程進(jìn)行了初步的研究,旨在確定不同生態(tài)因子在人類(lèi)呼吸系統(tǒng)正常微生物菌群建群、演替直至最終達(dá)到生態(tài)平衡的過(guò)程中所起的作用,并根據(jù)其這些作用對(duì)早期正確合理地養(yǎng)育新生兒、強(qiáng)化生態(tài)因子某個(gè)階段對(duì)于建群的有益作用提供合理的指導(dǎo)方針。1對(duì)象和方法1.1新生兒及母親樣本來(lái)源于2004年10月～2006月10月間內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院產(chǎn)科,選擇足月生產(chǎn)、無(wú)任何家族遺傳病及感染性疾病、發(fā)育正常的健康新生兒及其母親,共37例,其中冬春季18例,夏秋季19例;順產(chǎn)24例,剖腹產(chǎn)13例;胎膜早破者8例,正常產(chǎn)前破水29例;母乳喂養(yǎng)者26例,人工喂養(yǎng)者11例;參加每日游泳訓(xùn)練者12例,不參加者25例。在出生當(dāng)時(shí)采集1份咽部標(biāo)本,以后對(duì)納入研究的37例新生兒隔1d采集1次咽部標(biāo)本為期1周,并在出生第28天采集一次月齡標(biāo)本。收集前半小時(shí)不進(jìn)食,于晨起嬰兒洗澡時(shí)采樣。1.2采樣與培訓(xùn)1.2.1陰器、干物、腦心浸液的檢測(cè)用浙江拱東醫(yī)用塑料廠生產(chǎn)的無(wú)菌采樣拭子(浙食藥監(jiān)械準(zhǔn)字2005第2410058號(hào))在產(chǎn)婦臨產(chǎn)后按常規(guī)消毒外陰,窺陰器暴露后穹隆蘸取分泌物并立即放入1ml的腦心浸液中送檢。1.2.2新生兒喉嚨清潔用上述標(biāo)準(zhǔn)無(wú)菌采樣拭子擦拭嬰兒咽后壁,注意不要觸及唇、舌、牙齦等處。取后立即放入1ml的腦心浸液中送檢。1.3培養(yǎng)基及微生物培養(yǎng)方法將上述樣本原液3μl接種到哥倫比亞羊血瓊脂、哥倫比亞巧克力瓊脂和斯氏瓊脂上,用接種環(huán)鋪滿(mǎn)90mm平皿,分別放在有氧、CO2及厭氧環(huán)境下生長(zhǎng),35℃,18～72h,每18h記錄1次,厭氧菌培養(yǎng)采用產(chǎn)氣袋法,72h后觀察記錄。1.4評(píng)估1.4.1社會(huì)學(xué)的評(píng)價(jià)取出培養(yǎng)基觀察各培養(yǎng)基上菌落生長(zhǎng)情況,將不同形態(tài)特點(diǎn)的單個(gè)菌落取出涂片,革蘭氏染色,鏡檢觀察菌體形態(tài)。1.4.2致病菌鑒定和藥敏實(shí)驗(yàn)將典型菌落形態(tài)和菌體形態(tài)的單個(gè)菌落進(jìn)行細(xì)菌鑒定,采用API標(biāo)準(zhǔn)化的細(xì)菌生化和免疫凝集方法,致病菌藥敏實(shí)驗(yàn)選擇API推薦的K-B紙片法。2試驗(yàn)結(jié)果的分析2.1新生兒對(duì)呼吸道細(xì)菌的組成具有正常成人水平本次研究對(duì)象37例,其中正常順產(chǎn)組24例,剖腹產(chǎn)13例;其呼吸道微生物檢測(cè)結(jié)果如表1。從表1可以看出母親陰道對(duì)新生兒出生時(shí)咽部存在的微生物起著決定性的作用,因?yàn)樽畛醭霈F(xiàn)在咽腔的微生物全部是母體陰道的正常菌群,而無(wú)菌狀態(tài)下剖宮產(chǎn)娩出的新生兒口咽部無(wú)任何微生物生長(zhǎng),但是這種順產(chǎn)娩出時(shí)帶給新生兒的細(xì)菌如糞鏈球菌、埃希氏大腸桿菌等畢竟不是人類(lèi)咽腔應(yīng)該有的微生物,終究要被咽部正常菌所替代,正常人咽粘膜菌群豐度和密度4～5個(gè)菌屬,6～9個(gè)菌種,以α溶血性鏈球菌群、奈瑟菌屬、棒狀桿菌屬、葡萄球菌屬、厭氧鏈球菌群和梭桿菌屬為主,月齡兒的呼吸道細(xì)菌組成就已基本達(dá)到正常成人水平。2.2新生兒血肉蛋白及緩癥球形檢出率本次研究對(duì)象37例,母乳喂養(yǎng)者26例,因母乳不足補(bǔ)充其它乳類(lèi)即混合喂養(yǎng)9例,完全人工喂養(yǎng)者2例,將混合喂養(yǎng)9例劃入人工喂養(yǎng)組共11例,結(jié)果見(jiàn)表2。母乳喂養(yǎng)與人工喂養(yǎng)這兩個(gè)實(shí)驗(yàn)組是否受到出生方式的干擾?由表2可見(jiàn)隨著時(shí)間的推移無(wú)論出生時(shí)有無(wú)微生物、有何種微生物,母乳喂養(yǎng)與人工喂養(yǎng)新生兒咽部微生物檢出最終均被鏈球菌屬和奈瑟氏菌所替代,從出生次日起母乳喂養(yǎng)與人工喂養(yǎng)的緩癥鏈球菌檢出率就從0達(dá)到46.15%和45.5%,而涎鏈球菌則為42.3%和36.4%;到出生第4天從母親產(chǎn)道帶來(lái)的糞鏈球菌就完全被鏈球菌等替代;周齡兒的母乳喂養(yǎng)與人工喂養(yǎng)的緩癥鏈球菌檢出率達(dá)到69.2%和72.7%;而涎鏈球菌則為65%和72.7%;母乳喂養(yǎng)與人工喂養(yǎng)兩者之間并無(wú)顯著性意義(P>0.05);而月齡兒鏈球菌檢出率已穩(wěn)定在70%左右,同時(shí)奈瑟氏菌檢出率也達(dá)到30%,其他菌如表皮葡萄球菌、白色念珠菌的母乳喂養(yǎng)與人工喂養(yǎng)檢出率均無(wú)顯著性意義,與鄒靜等報(bào)告有所不同。2.3城市居民家庭建筑溫濕度低,正常自然環(huán)境在院新生兒出生后在溫度24～25℃,濕度50%～60%環(huán)境里生活,隨訪(fǎng)出院回家后的新生兒生活條件差異很大,家庭溫度和濕度也有較大差別,冬春季節(jié)北方農(nóng)村家庭取暖方式以燒煤或燃柴為主,室溫不穩(wěn)定,而且空氣污染嚴(yán)重;城市居民家庭以暖氣供暖為主,室內(nèi)溫度較穩(wěn)定在16～20℃,但較干燥,相對(duì)濕度僅在20%～30%之間,而正常生存環(huán)境的相對(duì)濕度在45%～60%之間;季節(jié)對(duì)月齡新生兒咽部微生物的影響見(jiàn)表3。由表3可以看出季節(jié)對(duì)新生兒咽部微生物檢出率的影響很大,冬春季表皮葡萄球菌、大腸桿菌、白色念珠菌、金黃色葡萄球菌甚至厭氧菌檢出率明顯高于夏秋季。北方農(nóng)村家庭的喂養(yǎng)環(huán)境差,導(dǎo)致新生兒呼吸道致病菌和條件致病菌大量生存于新生兒的鼻咽部,免疫力稍有下降就會(huì)導(dǎo)致呼吸道疾病的發(fā)生,這也是農(nóng)村家庭的新生兒生存率低于城市的原因所在.因此冬春和夏秋季節(jié)1月齡新生兒咽部菌群有所差異(P<0.05),有顯著性意義。2.4新生兒呼吸道微生物檢測(cè)結(jié)果比較結(jié)果新生兒在出生次日起即行游泳訓(xùn)練,每日15～20min,水溫38℃在室內(nèi)溫度28℃情況下進(jìn)行,經(jīng)過(guò)1個(gè)月訓(xùn)練和未經(jīng)過(guò)訓(xùn)練的新生兒其呼吸道微生物檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表4。表4可以看出游泳對(duì)新生兒咽部微生物檢出有一定的影響,如大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、產(chǎn)氣腸桿菌致病菌在游泳組中均未檢出,在非游泳組中卻能夠檢出,但不起決定性作用。無(wú)顯著性意義(P>0.05)。2.5胎膜早破對(duì)新生兒下頜微生物的影響胎膜早破是妊娠中晚期常見(jiàn)的并發(fā)癥之一,約占分娩總數(shù)的10%,胎膜早破致新生兒的感染在臨床處理上比較棘手,通過(guò)對(duì)初生新生兒咽部分泌物的細(xì)菌培養(yǎng)來(lái)客觀地評(píng)價(jià)胎膜早破對(duì)新生兒的影響。胎膜早破與正常破水新生兒咽部微生物檢出率見(jiàn)表5。由表5可以看出胎膜早破組新生兒咽部微生物檢出率高于正常對(duì)照組,而且檢出菌的種類(lèi)多,致病菌和條件致病菌比例高,這勢(shì)必給新生兒的呼吸道感染提供了條件。3生物特性的轉(zhuǎn)變胎兒在母體內(nèi)是無(wú)菌的,在出生至1個(gè)月內(nèi)各種生態(tài)因子的影響下新生兒最終確定了呼吸系統(tǒng)的微生物種類(lèi),達(dá)到了微生態(tài)平衡,在這個(gè)過(guò)程中諸多生態(tài)因子相互作用、相互影響最終使人體內(nèi)部的微生物達(dá)到內(nèi)穩(wěn)態(tài),這些微生物將伴隨人類(lèi)的一生直至生命的終結(jié)。因此研究影響人類(lèi)有益微生物定植過(guò)程中諸生態(tài)因子所起的作用有著極為重要的意義。3.1陰道菌群的組成剖宮產(chǎn)的新生兒最初幾乎是無(wú)菌的,而產(chǎn)道生產(chǎn)的新生兒雖然帶有母體陰道的菌群但很快(約5～6d)就被人類(lèi)咽部應(yīng)有的以鏈球菌為主的微生物所替代,說(shuō)明糞鏈球菌和大腸桿菌等只是過(guò)路菌,而非常駐菌,與同道研究結(jié)果基本相同。3.2口腔生物多樣性從母乳喂養(yǎng)與人工喂養(yǎng)的新生兒呼吸道微生物檢出來(lái)看,喂養(yǎng)方式對(duì)有益微生物的定植并不能起到?jīng)Q定性作用,無(wú)論采用哪種方式喂養(yǎng),28d齡的小兒所檢咽部?jī)?yōu)勢(shì)菌種均為球菌類(lèi),而桿菌類(lèi)較少;在鏈球菌中又以涎鏈球菌、緩癥鏈球菌及口腔鏈球菌出現(xiàn)比率較高,說(shuō)明鏈球菌屬是口腔的優(yōu)勢(shì)種群,在咽部有其可定植的生態(tài)位。而在鏈球菌的群落內(nèi)部不難看出涎鏈球菌是優(yōu)勢(shì)種,即為建群種,涎鏈球菌、緩癥鏈球菌及口腔鏈球菌共同組成咽腔的共優(yōu)種群落,奈瑟氏菌則為咽部的亞優(yōu)勢(shì)種,表皮葡萄球菌屬、白色念珠菌則屬于咽部正常菌群的伴生種,少量的厭氧菌如韋榮氏菌屬則屬于偶見(jiàn)種。在整個(gè)新生兒咽部微生物建群、演替直至生態(tài)平衡的過(guò)程中,有益微生物菌種的密度和梯度變化較大,群落演替過(guò)程復(fù)雜,大致是從剛出生以表皮葡萄球菌、糞鏈球菌甚或大腸桿菌等條件致病菌或致病菌為主的覆蓋形式演替成以鏈球菌屬、奈瑟氏菌為主的覆蓋形式,也說(shuō)明以鏈球菌屬、奈瑟氏菌為主的咽部正常的微生物菌群可以起到防止致病微生物建群及防止已經(jīng)存在的機(jī)會(huì)菌過(guò)度生長(zhǎng)的作用。3.3新生兒呼吸道感染北方地區(qū)冬春季節(jié)寒冷,必須有適合的取暖方式以保證室溫,而南方地區(qū)不存在冬季取暖問(wèn)題。北方城市居民有暖氣取暖,新生兒生存的溫度可以保障,但濕度不夠,相對(duì)濕度僅在20%～30%之間,而我們正常夏秋季生存環(huán)境的相對(duì)濕度為45%～60%;北方地區(qū)農(nóng)村家庭取暖方式以燒煤或燃柴為主,而且是同室,室溫不穩(wěn)定,煙霧和灰塵造成空氣污染嚴(yán)重,使新生兒生存環(huán)境的溫度和濕度都不能達(dá)標(biāo),因此呼吸道菌群不同于正常,使一些條件致病菌成為這些新生兒的咽部的優(yōu)勢(shì)種,而正常咽部應(yīng)有的菌群則成為亞優(yōu)勢(shì)種甚至伴生種,益生菌的密度和梯度變化很大,群落演替過(guò)程更加復(fù)雜,大致是從以鏈球菌種為主的覆蓋形式演替成以奈瑟氏菌為主的形式甚至表皮葡萄球菌、白色念珠菌甚或大腸桿菌等條件致病菌或致病菌為主的覆蓋形式,當(dāng)涎鏈球菌、口腔鏈球菌鏈球菌等呼吸道起始端應(yīng)有的鏈球菌從優(yōu)勢(shì)頂級(jí)演替成亞頂級(jí)時(shí)失去了其主宰地位,使條件致病菌占據(jù)主導(dǎo)地位,當(dāng)身體條件或環(huán)境條件稍向惡劣趨勢(shì)變化,即會(huì)發(fā)生呼吸系統(tǒng)的疾病。肖純凌等認(rèn)為當(dāng)吸入污染空氣中含有的低濃度顆粒物、SO2、NOX、O3后,呼吸道防御功能受到損害,呼吸道抵抗力下降導(dǎo)致外源性病原菌的侵入,或者內(nèi)源性條件致病菌的大量繁殖,即可引起呼吸系統(tǒng)感染的發(fā)生。3.4游泳對(duì)新生兒呼吸道微生物的作用在水溫37～38℃這樣一個(gè)與母體子宮內(nèi)環(huán)境相似的水域里游泳使新生兒不僅能達(dá)到自由運(yùn)動(dòng)鍛煉身體的目的,而且讓他(她)們重溫了安全溫暖、舒適愜意的感覺(jué),增強(qiáng)了新生兒的快樂(lè)感、安全感,有助于增強(qiáng)體質(zhì),增強(qiáng)免疫力,增強(qiáng)抵御致病菌的侵襲能力,因此游泳對(duì)新生兒呼吸道微生物的建群有幫助。通過(guò)檢測(cè)可以看出游泳對(duì)新生兒咽部微生物檢出有一定的影響,但不起決定性作用,出生后每日在水溫接近母體子宮內(nèi)的水體里游泳,雖然不能對(duì)呼吸道的微生物建群起決定作用,但讓新生兒每日重溫模擬母體的環(huán)境給新生兒愉悅、安全的感覺(jué),并培養(yǎng)了對(duì)水的自然認(rèn)知的過(guò)程,對(duì)新生兒健康的成長(zhǎng)甚至作為游泳健將的培養(yǎng)打下了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。3.5胎膜早破的預(yù)防方法胎膜早破使新生兒在娩出時(shí)因缺氧發(fā)生誤咽、誤吸羊水胎糞而致感染,在臨床處理上比較棘手。我們的研究表明胎膜早破組新生兒咽部微生物檢出率高于正常對(duì)照組,而且檢出的菌的種類(lèi)多,致病菌中以革蘭氏陰性菌所占比例較大,條件致病菌比例高,這勢(shì)必給新生兒的呼吸道感染提供了條件,當(dāng)新生兒機(jī)體免疫力稍有下降,就會(huì)表現(xiàn)出病癥。這與司進(jìn)研究結(jié)果相近。李世珍等認(rèn)為胎膜早破導(dǎo)致胎兒感染的途徑有:破膜后細(xì)菌上行感染,胎兒經(jīng)口吞咽或吸入細(xì)菌污染的羊水;上行性羊膜外感染,經(jīng)胎盤(pán)感染胎兒;經(jīng)子宮及胎盤(pán)血行擴(kuò)散而致胎兒感染。所以,一旦發(fā)生胎膜早破要及早使用預(yù)防性抗生素,并盡量縮短破膜距胎兒娩出的時(shí)間,要使用藥物引產(chǎn),甚至可以手術(shù)終止妊娠。總之,新生兒呼吸系統(tǒng)微生態(tài)平衡的最初建立是諸多生態(tài)因子的綜合作用,其中生產(chǎn)方式、喂養(yǎng)方式、游泳對(duì)微生物的建群影響不大,而季節(jié)和胎膜早破影響較大。咽部黏膜的營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)、氧化還原電位、和微生物的黏附力是最終確定微生物種群、數(shù)量的決定因素,要使新生兒咽部黏膜的營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)、氧化還原電位朝著有利于微生物黏附的方向發(fā)展,讓新生兒盡早建立呼吸系統(tǒng)微生態(tài)平衡,建立自身抵御疾病的屏障,健康成長(zhǎng)。有資料表明新生兒上呼吸道感染率為45%,而且感染途徑多種,可以通過(guò)母嬰垂直傳播、胎膜早破吸入感染的羊水、通過(guò)產(chǎn)道時(shí)發(fā)生吸入性肺炎、胎兒宮內(nèi)窘迫、新生兒窒息等造成。當(dāng)涎鏈球菌、口腔