泌尿系統(tǒng)與男性生殖系統(tǒng)藥效學研究設計方法課件

泌尿系統(tǒng)與男性生殖系統(tǒng)藥效學研究的設計和方法更多內(nèi)容歡迎蒞臨天馬行空官方博客：/tmxk_docin泌尿系統(tǒng)與男性生殖系統(tǒng)藥效學研究的設計和方法更多內(nèi)容歡迎蒞臨1第一節(jié)急性腎功能衰竭藥一、試驗設計的醫(yī)學基礎急性腎功能衰竭(簡稱ARF)是危急重癥，屬中醫(yī)“癃閉”、“關(guān)格”、“腎風”等范疇。其臨床表現(xiàn)主要是小便點滴而下，或點滴全無，起病往往突然發(fā)作。治療乃根據(jù)“腑以通為用”的原則，著重于通。實證宜清濕熱、散瘀結(jié)、利氣機而通水道；虛證宜補脾腎、助氣化而達到小便自通的目的。改善少尿、氟質(zhì)血癥和腎小管壞死是治療ARF藥效學的主要研究內(nèi)容。泌尿系統(tǒng)與男性生殖系統(tǒng)藥效學研究設計方法課件2二、藥效學研究的實驗設計(一)急性腎衰動物模型l常用動物模型(1)大鼠血紅蛋白尿ARF模型；以甘油肌內(nèi)注，24h后即有尿素氮升高，少尿或無尿等類似人的ARF癥狀。(2)犬去甲腎上腺素模型：雄性犬麻醉以適當?shù)娜ゼ啄I上腺素經(jīng)—側(cè)腎動脈連續(xù)滴注，引起腎流量急劇下降，同側(cè)輸尿管收集的尿量也相減少等一系列腎衰癥狀。(3)犬夾閉腎動脈引起的ARF模型：麻醉犬用外科手術(shù)暴露腎動脈夾閉1h，引起的缺血性腎功能衰竭。(4)汞劑引起的動物ARF模型：以適當劑量的氯化汞靜脈注射家兔，皮下或靜脈給大鼠，l—2日引起腎小管損傷，出現(xiàn)急性腎功能障礙的—系列變化。(5)大鼠抗生素ARF模型：大劑量抗生素(慶大霉素)給大鼠腹腔注射，通過影響腎小管上皮細胞膜脂代謝及抑制線粒休的能量代謝，造成腎小管損害，引起尿量改變及尿蛋白和尿素氮升高等急性癥狀。二、藥效學研究的實驗設計3

2觀察指標(1)生化指標：①血肌酐(BUN)、血清尿素氮(Scr)水平；②24h肌酐、尿素總排出量；③24h肌酐清除率。(2)尿常規(guī)檢查：①24h總尿量；②24h蛋白和管型等。(3)病理形態(tài)學檢查。(4)其他可供分析的指標：①血清總蛋白和白蛋白；②對主要以損害腎小管功能的模型；如慶大霉素ARF模型可選擇NAG酶及溶菌酶作為觀察指標反映腎小管損傷的嚴重程度。2觀察指標43，方法學評價(1)ARF模型較多，從機制分為缺血性和中毒性。一般認為大鼠血紅蛋白尿性ARF模型二種機制均有，接近于人的創(chuàng)傷性ARF，特別是積壓綜合征。在此模型早期，腎血管阻力增加，腎血流量減少，腎皮質(zhì)區(qū)域的血管重度收縮，如所試藥物可能有類似于異博定的降低腎血管力、增加腎血流量等作用，采用此模型較適當。本模型所用動物價廉易得，方法簡便，病變穩(wěn)定，在—定時間內(nèi)做動態(tài)觀察，也可用家兔，以便多次采血檢查。此模型是新藥藥效較常用的模型。(2)家犬去甲腎上腺素及家犬夾閉動脈引起的ARF模型均屬缺血性ARF，機制相同，所用動物相同。(3)汞劑引起的ARF屬于中毒性ARF模型。特點為簡單易行，病變較穩(wěn)定，用家兔、大鼠、小鼠作模型動物。3，方法學評價5(二)相關(guān)藥效學試驗和機制研究1，輔助試驗對能反映解除主癥有作用的其他試驗，如藥物的利尿作用、血管擴張作用對高血鉀，酸中毒的控制作用，以及藥物對其他原因引起的氮質(zhì)肌癥的影響，均可酌情選用。2．作用原理研究如用水清除率、截流分析實驗、腎小管微穿刺技術(shù)等探時藥物作用部位和功能。這研究對了解新藥特點很有意義。(三)陽性對照藥(1)地塞米松。(2)維拉帕米(異博定)。(二)相關(guān)藥效學試驗和機制研究6三、急性腎衰動物模型建立方法(一)大鼠血紅蛋白尿ARF模型1．原理肌內(nèi)注射甘油后，大鼠腎血流減少，腎小管內(nèi)皮細胞腫脹，增大了腎血管阻力，血管節(jié)段性壞死，外膜纖維化．血管自身調(diào)節(jié)功能喪失，導致腎小球濾過下降。另外，腎小球及腎小管用圍纖維蛋白沉積，血臂內(nèi)血液淤積，血栓形成，血流不暢，導致腎小球濾過率下降，腎小管壞死。2．操作方法采用體重150～250g雄性大鼠，置代謝籠中。紀錄正常飲水量從尿量，用藥前禁水24h。選體重減輕并有脫水的大鼠以50％甘油按10ml／kg分別在兩側(cè)后肢肌內(nèi)注射.大鼠自由進食和飲水，—般于2h后出現(xiàn)血紅蛋白尿，48h形成穩(wěn)定模型。1—5日內(nèi)進行實驗。三、急性腎衰動物模型建立方法73．造模成功指標和藥物療效觀察(1)24h尿量較對照組明顯減少，尿蛋白明顯升高。(2)BUN、Set明顯增高，血清總蛋白減少。(3)血清K、Na增高。(4)病理學檢杳可見明顯的腎小管病變。所試藥物的藥效可根據(jù)用藥后對以上指標的改善來評價，結(jié)果進行組間比較，統(tǒng)計學處理采用t檢驗。4．注意點(1)個別大鼠叫在肌注甘油后，腎臟損害過重而北亡。(2)禁水24h后體重減輕明顯，脫水嚴重的大鼠選作實驗動物效果較好。3．造模成功指標和藥物療效觀察8(二)犬去甲腎上腺素ARF模型l原理去甲腎上腺素引起腎血管收縮而致腎小球的血流減少，腎小球濾過減少；組織缺血、缺氧加重對腎組織損害從而產(chǎn)生ARF。2．操作方法取10—20kg雄性家犬，以戊巴比妥鈉30mg／kg，靜脈注射麻醉后，于術(shù)分離—側(cè)輸尿管，插入管收集尿液。從腎動脈按每分鐘0．75ug／kg，滴注去甲腎上腺素，連續(xù)40min停藥。1—4h內(nèi)可進行實驗。對照組用地塞米松或右旋糖酐(靜脈注射)。腎衰陰性對照組用等量生理鹽水，每組動物至少5只。3．藥物療效的評價指標(1)尿量及尿常規(guī)檢查(用藥前1h及用藥1h、2h、4h后)。(2)BUN、Scr、血清總蛋白和白蛋白、血清K和Na(藥前1h及用藥1h、2h、4h后)。(3)病理學檢查。所試藥物的藥效可根據(jù)以上指標的改善來坪價，結(jié)果進行檢驗作組間比較。4．注意點(1)集尿套管內(nèi)應預充滿溫水并防止導臂彎曲而阻礙尿液通暢。(2)實驗前勿給高蛋白飲食(如肉類)，否則影響B(tài)UN水平。(二)犬去甲腎上腺素ARF模型9(三)犬夾閉腎動脈引起的ARF模型1．操作方法取10-20kg雄性家犬，以戊巴比妥鈉30ug／kg靜脈汴射麻醉，于術(shù)暴露左側(cè)腎動脈，夾閉1h后放開，使血流再通，從側(cè)輸尿骨導管收集尿液。腎衰陽性對照組用地塞米松(0．1mg／kg)或右旋糖酐(相對分子質(zhì)量75000，10ml／kg，靜脈注射)。腎衰陰性對照組(只手術(shù)，不夾閉腎動脈)用等量生理鹽水，每組動物至少5只。2．原理、評價指標等同犬去甲腎上腺素模型。(三)犬夾閉腎動脈引起的ARF模型10(四)汞劑引起的動物ARF模型1．原理一般認為是由于汞離子經(jīng)腎小球濾過后，被腎小管上皮細胞重吸收，并在細胞內(nèi)累積．與細胞膜和細胞內(nèi)巰基(一SH)和二硫基(一S一S一)等結(jié)合，影響酶活性。受累細胞由于汞—硫反應而損害細胞及其膜的功能與結(jié)構(gòu)，細胞呼吸功能喪失，變性壞死，并部分脫落于管腔中阻塞腎小管，使原尿通過受阻。受損的腎小管通透性增高，原尿漏出并返回腎血管，因而產(chǎn)生少尿、無尿。原尿漏至腎間質(zhì)，形成間質(zhì)水腫，壓迫腎小管。氯化汞中毒還可引起腎血流重新分布，腎皮質(zhì)缺血，髓質(zhì)淤血，腎小管濾過減少，也是引起ARF的原因之—。2．操作方法2kg以上的健康成年家兔，雌雄均可。以氯化汞2．5mg／kg—次靜脈注射(氯化汞可用生理鹽水或蒸餾水配成適當濃度的溶液)。測定前3日的血，尿的尿素氮和肌酐含量，取平均值作自身對照；注射氯化汞后的的5日，每天作同樣測定，以后可改為隔天或多日測1次，至腎功能正常。進行尿常規(guī)檢查。3．注意點(1)HgCl2溶液必須是新鮮配制。(2)精確收集24h尿(在收集甜內(nèi)事先加入少量甲苯，以防腐敗)。(3)實驗動物所食飼料、青菜不加限制。(四)汞劑引起的動物ARF模型11(五)慶大霉素ARF模型1．原理大劑量氨糖類杭生索(AG)在動物體內(nèi)大部分以原形從尿中排出，小部分被近端小管吸收，導致藥物在腎皮質(zhì)蓄積。抑制腎皮質(zhì)細胞溶酶體內(nèi)的磷脂酶A和C，導致磷脂、磷脂酰肌醉在溶酶體內(nèi)菖積，溶酶體由于磷脂的沉積，最后破裂而致細胞損傷。此外，AG還作用于線粒體氧化磷酸化，造成腎小管損傷。2．操作方法Wistar雄性大鼠，體重250—300g，腹腔注射慶大霉素140mg／kg(體重)，共7日，治療組動物注射的同時給藥物；陽性藥用維拉帕米，每大鼠每日灌胃15mg／kg(體重)；空白對照則給溶劑。3．評價指標(1)尿量及尿常規(guī)檢查。(2)BUN、Scr，血清總白和白蛋白，血清K和Na。(3)尿NAG酶反溶曲酶的檢查。(4)病理組織學檢查。(五)慶大霉素ARF模型12第二節(jié)慢性腎功能衰竭藥一、實驗設計的醫(yī)學基礎慢性腎功能衰竭(簡稱CRF)由于多種慢性腎患發(fā)展到晚期，腎實質(zhì)損害引起腎功能嚴重損害，體內(nèi)氮質(zhì)及其代謝產(chǎn)物潴留，不能維持體內(nèi)水、電解質(zhì)及酸堿平衡而引起臨床癥狀，是一危重綜合征，祖國醫(yī)學雖無CRF這個病名，但根據(jù)其發(fā)病，癥狀及演變規(guī)律，可歸納為“關(guān)格”、“癃閉”、“溺毒”、“虛勞”等?；颊叨嘁娋氲》αΑ舛虘醒?、納差腹脹、惡心嘔吐、四肢麻木、皮膚瘙癢、腰腿酸軟、面色晦暗、肌膚甲錯、舌淡有齒痕或色紫暗并有瘀斑、舌苔白滑或厚膩、脈沉弱。綜上所述屬脾腎氣虛證并兼有濕濁或瘀血，故以“健脾益腎，通腑降濁、活血化瘀”法治療?，F(xiàn)代醫(yī)學則以改善腎功能，促進氮質(zhì)化合物等毒素的排出，糾正水、電解質(zhì)和酸堿紊亂，糾正貧血等方法以延緩病程進展。第二節(jié)慢性腎功能衰竭藥13二、藥效學研究的實驗設計(一)對疾病動物模型的治療作用試驗1．常用動物模型(1)大鼠腺嘌呤CRF模型：大鼠經(jīng)含0．5％～0.75％腺嘌吟(adenine)飼料喂養(yǎng)引起的。(2)大鼠5／6腎切除的CRF模型：經(jīng)兩期外科手術(shù)切除大鼠5／6腎造成的CRF。(3)大鼠經(jīng)液氮冷凍腎臟引起的模型：和模型(2)相似，只是用冷凍代替一期手術(shù)的大部分切除。(4)小鼠電凝摘除腎臟CRF模型：以電燒灼小鼠右側(cè)腎表面，2星期后摘除左腎的外科手術(shù)制作的模型。(5)其他模型，如柔紅霉素、阿霉素等致大鼠CRF模型。根據(jù)新藥可能的作用機制特點選擇適當?shù)哪Ｐ?。以上模型的具體建立方法將在后面敘述，試驗治療的給藥途徑應與臨床一致。二、藥效學研究的實驗設計142觀察指標(1)各組動物血液毒素物質(zhì)的比較:一般認為尿毒癥毒素物質(zhì)應具備以下幾個條件：①該物質(zhì)的理化性質(zhì)和結(jié)構(gòu)明確；②血液中的濃度增高；③該物質(zhì)與CRF特定的臨床發(fā)現(xiàn)相關(guān)；④隨血液中該物質(zhì)濃度降低，臨床癥狀和體癥改善；⑤在腎功正常的實驗動物中能用該物質(zhì)復制與CRF類似的臨床癥狀。目前已從CRF患者中分離出約200種蛋白質(zhì)代謝產(chǎn)物，其中100多種物質(zhì)成分比止常值高，這些毒素物質(zhì)分為小分子(相對分子質(zhì)量小于500)，如肌酐、尿素氮、胍類和胺類；中分子(相對分子質(zhì)量為500—5000)；大分子(相對分子質(zhì)量大5000)，如旁腺索、生長激素等。凡是公認為CRF毒素物質(zhì)應當是反應新藥療效最主要的指標，目前臨床和評價藥效多用的觀察指標是肌酐、尿素氮。(2)其他可供分析的指標：①各組動物間體重、死亡率的比較；②尿量及尿液成分分析(主要為尿蛋白含量的比較)；③各組動物紅細胞數(shù)、血紅蛋白和紅細胞比積的比較；④各組動物間血鈉、鈣、磷、鉀等電解質(zhì)含量的比較；⑤腎臟組織病理學觀察。2觀察指標15(二)相關(guān)藥效學試驗1．血壓試驗按常規(guī)方法觀察藥物對大鼠血壓的影響。2．利尿試驗用水負荷大鼠或CRF模型大鼠常規(guī)方法觀察藥物有無利尿作用。(三)陽性對照藥1．包醛氧淀粉或愛西特(活性炭)適用于以吸附腸道毒素來促進毒裹排除、緩解癥狀的新藥。2，尿毒清顆粒刑適用降低毒素、改善腎功能為主要功效，用于慢性腎功能衰竭、氮質(zhì)血癥和尿毒癥早期的新藥。3．地塞米松地塞米松0．1mg／kg(體重)肌內(nèi)注射，每日一次，屬非特異性作用，可減輕病情。(二)相關(guān)藥效學試驗16三、動物模型建立方法(一)大鼠腺嘌呤CRF模型1.原理高濃度腺嘌吟通過黃嘌呤氧化酶的作用生成極難溶于水的2，8—二羥腺嘌吟，后者沉積在腎小管，影響了氮質(zhì)化合物的排世，導致氮質(zhì)血癥、毒素蓄積從電解質(zhì)和氨基酸代謝紊亂，最終引起腎功能衰竭。2．制作方法用含0．75％腺嘌吟(adenine)飼料喂養(yǎng)大鼠，每日投放量約350mg／kg(體重)。全部動物自由攝取飼料和飲水。3．造模成功的指標和藥物療效觀察大鼠隨著進食腺嘌吟飼料的日數(shù)增加而日漸消瘦，畏寒拱背，體毛脫落，生長抑制．多尿；血肌酐、尿素氮水平升高(喂飼2星期后可見升高)；中分子物質(zhì)水平升高；電解質(zhì)代謝紊亂(高磷、高鉀、低鈉、低鈣等)；氨基酸紊亂(主要為必需氨基酸降低)；貧血。病理學觀察表明，腎臟明顯增大(第八星期較腎臟大4倍多)，腎組織內(nèi)有大量腺嘌崎代謝物結(jié)晶沉積，大部分腎小管破壞，有淋巴細胞浸潤，局部纖維縱織增生。三、動物模型建立方法17藥物療效觀察：(1)一般觀察：動物的體重、尿量、體毛和—般活動狀況。(2)生化及血液檢查。(3)尿液檢查：24h尿量及尿蛋白總量。(4)腎臟病理形態(tài)學觀察：肉眼及組織學觀察，有條件時可作病理切片的圖像分析。4．注意點(1)為了減少差異，最好用雄性動物。(2)采血時應特別住意防溶血.(3)配制飼料時，腺嘌呤要充分與飼料混合均勻。(4)亦可配成含0．5%腺嘌呤的飼料。藥物療效觀察：18(二)大鼠5／6腎切除的CRF模型1．原理大鼠5／6腎切除后殘余在腎單位中血液動力學改變，引起殘余腎單位的高濾過蛋白尿，導致腎小球硬化為主要特點的CRF。2．制作方法大鼠用戊巴比妥鈉30-35mg/kg體重腹注射麻醉，局部剪毛，常規(guī)皮膚消毒，背左側(cè)或腹部切口，充分暴露左側(cè)腎肌，剝離腎包膜，迅速切除上、下極，以明膠海綿壓迫止血．然后分層縫合。術(shù)后7—10日行第二次手術(shù)，同樣方法麻醉，右側(cè)背部切開暴露右腎，結(jié)扎腎蒂，摘除右腎。(二)大鼠5／6腎切除的CRF模型193.造模成功的指標和藥物療效觀察大鼠傷口應無出血和感染，術(shù)后大鼠體重明顯下降，食量，活動量均減少，體毛疏松不齊，術(shù)后7日可山現(xiàn)蛋白尿；BUN、Scr水平逐漸升高；電解質(zhì)紊亂；氨基酸代酣紊亂；貧血；組織病理學觀察?？梢姎堄嗄I臟代償性增大，鏡檢可見腎小球毛細管擴張，內(nèi)皮細胞肥大，系膜基質(zhì)增生，大鼠上皮內(nèi)皮細胞壞死，毛細管腔消失的腎小球玻璃樣變性從硬化的病理過程。藥物的療效觀察基本同腺嘌呤。4．注意點(1)手術(shù)要熟練，最好由1人切除，以減少損傷誤差。(2)手術(shù)注意防止損傷腎上腺；摘除腎臟時要結(jié)腎蒂。(3)切除腎臟時最好在腹膜外進行，盡量不打開腹膜進入腹腔，以減少感染機會。(4)如果用藥時間長或需要損傷程度輕，可在手術(shù)前用低蛋白飼料。(5)應設假手術(shù)組代替正常動物對照組。3.造模成功的指標和藥物療效觀察大鼠傷口應無20

(三)大鼠經(jīng)液氮冷凍腎臟引起的CRF模型1原理與大鼠5／6腎切除的CRF模型基本相同。2操作方法實驗用成年健康大鼠，雄性，體重200—300g，注射戊巴比妥鈉40mg／kg(體重)麻醉，常規(guī)消毒皮膚，背部一側(cè)切口，分離肌層，暴露左腎，用食指從腹部相應部位輕輕向上頂起，腎臟即滑出皮膚切口外面，這樣便操作，然后剝離筋膜。將預先浸入液氮瓶內(nèi)的冷刀依次在腎臟的上下極和外側(cè)前后共4個位，每處冷凍40s，然后復位腎臟，分層縫合。2星期后，以同樣的操作二期手術(shù)，摘右腎。術(shù)后6—12星期呈現(xiàn)穩(wěn)定的模型。3造模成功的指標和藥物療效觀察等與大鼠5／6腎的模型同。4注意用該模型評價新藥藥效成功的關(guān)鍵是冷凍損傷腎臟的程度要適當，多人操作，應冷凍損傷度一致。(三)大鼠經(jīng)液氮冷凍腎臟引起的CRF模型21(四)小鼠電凝摘除腎臟CRF模型1原理燒灼小鼠右腎表面2星期后左腎摘除，燒灼腎皮質(zhì)壞死，腎小球、腎小管大量破壞，殘余腎單位的功能代償性增強，形成以腎小球硬化，腎間質(zhì)組織纖維化為主要特點的模型。2．制作方法小鼠麻醉后，背右側(cè)切口0．8cm，暴腎臟，剝離周圍脂肪組織及腎包膜，用電燒灼電凝右腎表面，深度約1mm，保留距腎門周圍2mm的皮質(zhì)部分不受燒灼。將經(jīng)燒灼的腎臟放回，縫合肌層與皮膚．操作全過程不超過l0min。14日后二期手術(shù)，依法麻醉，摘除左腎。3．注意點(1)電灼燒要掌握好深淺度，最好1人操作以減少誤差。(2)小鼠血清肌酐水平甚低(0．1mg／dl)，常規(guī)方法測不出。(四)小鼠電凝摘除腎臟CRF模型22

第三節(jié)慢性腎炎藥一、實驗設計的醫(yī)學基礎慢性腎炎(慢性腎小球腎炎)屬中醫(yī)“水腫”、“水氣”、“腫脹”等范疇．是較難治的癥，病因難除。常見有肺腎氣虛、脾腎陽虛、肝腎虛、水濕、濕熱、血瘀。其臨床表現(xiàn)為水腫、高血壓、蛋白尿、血尿及腎功能損傷等?，F(xiàn)代醫(yī)學認為，慢性腎炎僅少數(shù)是由急性腎炎發(fā)展來，而大多數(shù)由病理類型決定其病情必然遷延發(fā)展，起病即為慢性。治療慢性腎炎的中藥，應有①治本作用，去外、內(nèi)致病因子的繼續(xù)作用。②治標作用。第三節(jié)23二、藥效學研究的實驗設計(一)對慢性腎炎動物模型的治療作用實驗1常用動物模型(1)兔Masugi模型：以抗兔(大鼠)腎血清靜肺注射兔，至蛋白尿出現(xiàn)，形成模型。(2)大鼠Heymann模型：以大鼠腎皮質(zhì)勻漿弗氏完全佐劑制成同種免疫復合物，給同種大鼠腹腔注射，至蛋白尿出現(xiàn)，形成模型。(3)兔C-BSA血清免疫復合物腎炎模型：以天然牛血清蛋白(C-BSA)，靜脈注射給家兔．形成模型。2觀察指標①尿蛋白定量。②血肌酐及血尿素氮。③病理學檢查。(二)陽性對照藥藥典或中成藥中用治療慢性腎炎的新藥，均可用作對照藥。與待測藥物一樣，給藥劑量以臨床成人給藥劑量來計算。二、藥效學研究的實驗設計24三、慢性腎炎動物模型建立方法(一)兔(或大鼠)Masugi腎小球腎炎模型1．原理本方法用羊抗兔血清引起兔或大鼠腎小球腎炎。2．操作方法本模型為抗腎小球基底膜腎炎模型，預先制備羊抗兔的抗腎血清。取2-2．5kg家兔，不計性別，處死后，取腎臟，插入導管，生理鹽水反復沖洗后，取腎皮質(zhì)5g研漿，與弗氏完全佐劑混勻成10ml。加生理鹽水20ml，制成懸液。給綿羊皮下或肌內(nèi)分5處汁射。每處1ml，每1星期1次，4次。于末次注射后2星期，采羊血分離血清；加入生理鹽水洗漂3次的等量兔紅細胞，混勻，過夜充分吸附，離心棄除血細胞。吸取上清液。水浴中o．5h滅活用。即抗腎血清。制備腎炎模型：用上述抗腎血清，給2～2．5kg家兔每次靜脈注射1.5—2ml，每半小時1次，1—8次，至出現(xiàn)蛋白尿，模型形成。實驗分組：腎炎模型組均注射抗腎血清。新藥組分三個劑量組，陽性對照組可用地塞米松0.1mg/kg，每日1次；或環(huán)磷酰胺6mg/kg，每日1次；陰性對照組用等量生理鹽水，正常組不注射抗腎血清，僅用等量的生理鹽水。每組用動物至少6只。三、慢性腎炎動物模型建立方法25(二)大鼠Heymann腎小球腎炎模型1．原理本方法用大白鼠腎組織，注射給同種大鼠，經(jīng)過一段時間，受試動物產(chǎn)生抗原—抗體復合物，沉淀于腎小球血管壁而形成腎小球腎炎。2．操作方法本模型為同種免疫復合物型腎炎模型。取150-200g的大鼠，不計性別，處死取出腎臟插入導管，用生理鹽水反復沖洗后，取腎皮質(zhì)5g研成勻漿與弗氏完全佐利混勻成10ml。加生理鹽水20ml，給同種大鼠做腹腔內(nèi)注射．2星期1次。每次2ml，3-6次，直至出現(xiàn)蛋白尿，說明模型形成。3．造模成功的指標和藥物療效觀察同Masugi腎炎模型。實驗可延長1-4星期，每星期測1-3次，4．注意點Heymann腎炎常需l-4星期或更長，生化指標的測量應進行多次，并和造模前后、給藥前后作比較。(二)大鼠Heymann腎小球腎炎模型26第四節(jié)前列腺增生藥一、實驗設計的醫(yī)學基礎西醫(yī)學認為，前列腺增生是由于體內(nèi)性激素平衡失調(diào)，前列腺平滑肌增生形成。臨床表現(xiàn)為：尿頻、尿急、排尿不暢、夜尿增多等。西醫(yī)藥物治療—般用雌激素、睪酮還原酶抑制劑或受體阻滯劑等處理。中醫(yī)認為前列腺肥大屬”癃閉”范疇。常以“溫補腎氣，清熱利尿，破瘀散結(jié)”或“補陽行陽，活血杜瘀，攻實散結(jié)”的原則來治療。第四節(jié)前列腺增生藥27二、藥效學研究的實驗設計(一)對前列腺增生動物模型的治療作用試驗1．常用動物模型(1)激素法前列腺增生模型：以內(nèi)酸睪丸素皮下注射而形成前列腺增生。(2)老年犬前列腺增生模型：選擇有自發(fā)性前列腺增生的老齡犬觀察藥物療效。(3)尿生殖竇植入法模型：向前列腺內(nèi)植入胎鼠的尿生殖竇組織而形成前列腺增生。以上模型和建立方法將在后面敘述，試驗治療和給藥途徑符合臨床要求，局部用藥的劑量大小應以有關(guān)給藥的頻度或藥物濃度確定。二、藥效學研究的實驗設計282．觀察指標(1)前列腺指數(shù)[前列腺重mg／g(體重)]。(2)前列腺的形態(tài)學觀察：鏡檢可見腺上皮和平滑肌前列腺細胞肥大者呈高柱狀，胞核也增大。前列腺肥大者腺體直徑增大。腺體間質(zhì)甚少，彼此緊貼，呈“背靠背”形，間質(zhì)可見彌散的淋巴細胞反應或出現(xiàn)淋巴濾泡。(3)血清酸性磷酸酶的含量：可用麝香草酚肽法測定。(4)前列腺DNA：可用牛胸腺DNA作為標準，按二苯胺法測定。(5)前列腺組織的多巴胺含量：因為多巴胺主要來自前列腺，測定前列腺組織中的多巴胺可作為探索藥物作用機制和手段。3．方法學評價上述多種方法造成的模型各有特點。激素法前列腺肥大模型方法簡便迅速，適宜藥物篩選，但與人類疾病的相關(guān)性較?。焕夏昵傲邢僭錾c人類發(fā)病機制相似，是公認的研究人類前列腺增生的合適動物模型，但來源較少，難于廣泛用作藥物篩選；胚胎尿生殖竇植入法小鼠前列腺肥大模型上需外源性激素，可在短期內(nèi)產(chǎn)生預期的增生，不干擾前列腺肥大藥物檢測，動物操作容易，一般認為此模型可用于探索人類前列腺肥大的疾病過程。2．觀察指標29(二)其他試驗1．抗炎試驗前列腺肥大者常見炎細胞浸潤，具有局部抗炎作用的藥物也利于本癥癥狀的改善，通過制造一般的炎癥模型來評價其抗炎藥效即可。本癥常口服給藥．應注意劑量的合理性。2．鎮(zhèn)痛試驗前列腺肥大者常因膀胱流道梗阻，排尿不暢，具有脹痛感，如新藥有(局部)鎮(zhèn)痛作用，可用相適應的實驗加以證實。3．體外抗菌試驗見有關(guān)章節(jié)。(三)陽性對照藥物．對于清熱利尿，破瘀散結(jié)的本類新藥可以前列泰片、前列寧、癃閉散、祛癃膠囊等作對照藥物。(二)其他試驗30三、動物模型建立方法(一)激素法(丙酸睪丸素)模型1．原理根據(jù)前列腺增生由體內(nèi)性激素失衡有關(guān)理論，添加外源性激素可使前列腺迅速增生。2操作方法小鼠每日皮下注射丙酸睪丸素5mg／kg，21日后形成前列腺肥大，可開始進行試驗治療。3．造模成功指標與藥物療效觀察鏡檢前列腺，與空白對照組比較增生程度，或取前列腺稱重計算前列腺指數(shù)以及測前列腺中DNA含量與空白對照組比較，藥效可根據(jù)前列腺鏡檢、前列腺指數(shù)、DNA含量、磷酸酶含量來評價。4．注意點選用小鼠盡可能體重相近，鼠齡相同，雄性激素水平無顯著差異。三、動物模型建立方法31(二)老年犬前列腺增生模型1．原理犬的前列腺增生與人發(fā)病機制相似。因此，犬的前列腺增生與人類的前列腺增生最為相近，是迄今公認為研究人類前列腺增生，觀察藥物的治療作用合適的動物模型。2．動物和實驗步驟選取雄性雜種家犬，先經(jīng)直腸指診斷及前列腺明顯增大者，再經(jīng)B超檢查測定前列腺體積，證實為前列腺增大者供實驗。3．藥物療效觀察用B型超聲顯象法測定前列腺體積(近似值：最大橫徑x縱桿x厚徑)，比較用藥前后體積變化。4．注意點(1)犬前列腺增生與年齡有關(guān)，實驗用犬宜選老年(7—10歲齡)前列腺增生明顯者。(2)從外地(非本地動物房)選來的犬必須在本地動物房飼養(yǎng)2個月使之適應實驗環(huán)境和飲食條件。(二)老年犬前列腺增生模型32(三)小鼠尿生殖竇植入法模型1．原理胚胎與成年前列腺細胞相互作用，誘導成年前列腺細胞增小(可能是由于成年前列腺胚胎生長能力的重新恢復)。2．操作方法取體重250—300g，7—10周齡雄性大鼠在戊巴比妥鈉60mg/kg(體重)腹腔注射麻醉下剖開腹部，仔細分離前列腺，用針尖或有鋒利尖端的小鑷向前列腺內(nèi)植入16日胎鼠的尿生殖竇組織，對照組進行同樣手術(shù)操作，但僅用針頭探刺兩次作為假手術(shù)，然后縫合腹壁。3．造模成功的指標和藥物療效觀察指標同激素法模型。4，注意點(1)胎鼠的尿生殖竇誘導前列腺增生有雄激素依敕性，必須選用成年雄性小鼠(7—10周齡)。(2)增生程度與胚胎尿生殖竇植入的數(shù)目成比例，所以每只小鼠植入的胎鼠尿生殖竇的數(shù)目必須相同。(3)尿生殖竇不同部分植人誘導成年大鼠前列腺增生度差異大，所以植入小鼠前列腺的胎鼠尿生殖竇必須無明顯差異。(三)小鼠尿生殖竇植入法模型33

第五節(jié)前列腺炎藥一、實驗設計的醫(yī)學基礎前列腺炎是泌尿科疾病，癥狀包括會陰不適，尿痛，殘尿感，腰痛，尿道灼熱，尿頻，小腹痛等主要癥狀。根據(jù)其產(chǎn)生的病因．臨床分為細菌性和非細菌前列腺炎兩類。前列腺炎多由大腸桿菌，金黃色葡萄球菌感染所致。而非細菌性炎癥。主要由炎細胞浸潤腺腔梗阻，間質(zhì)纖維化產(chǎn)生，治療以清熱解毒，活血祛瘀、利水通淋。中醫(yī)認為，前列腺炎屬“癃閉”范疇。第五34二、藥效學研究的實驗設計(一)對前列腺炎藥動物模型的治療作用試驗1.常用動物模型(1)大鼠實驗性非細菌前列腺炎病理模型：以l％角叉菜膠生理鹽水0．1ml注射在前列腺頭相連接的精囊內(nèi)。(2)大鼠前列腺纖維增生炎癥病理模型：以25％消痔靈注射0．2ml注射囊內(nèi)側(cè)前列腺背。(3)大鼠實驗性