離子絡(luò)合紫外分光光度法測(cè)定葛根素及其制劑的含量

離子絡(luò)合紫外分光光度法測(cè)定葛根素及其制劑的含量方崇波;龔燕波【摘要】目的建立葛根素及其制劑含量測(cè)定的方法.方法在一定pH值條件下，使葛根素和鋁離子形成絡(luò)合物，在339.8nm波長(zhǎng)處通過(guò)測(cè)定吸收度的改變來(lái)測(cè)定含量.結(jié)果吸收度和含量之間存在線性關(guān)系,線性回歸方程為C=-03.741A-5.3437,r=0.9994.線性范圍為3.648~29.184pg?mL-1,平均加樣回收率為99.87%,RSD=0.53%.結(jié)論該方法可用于測(cè)定葛根素及其制劑的含量.【期刊名稱】《醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)》【年(卷)，期】2005(024)003【總頁(yè)數(shù)】2頁(yè)(P229-230)【關(guān)鍵詞】葛根素;絡(luò)合反應(yīng);紫外分光光度法;含量測(cè)定【作者】方崇波;龔燕波【作者單位】浙江省寧波市醫(yī)療中心李惠利醫(yī)院藥劑科,315040;浙江省寧波市第二醫(yī)院藥劑科,315010【正文語(yǔ)種】中文［中圖分類】醫(yī)藥衛(wèi)生醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)2005年3月第24卷第3期。229.氨酸乙二胺含量的RSD為0.28%。3討論3.1色譜條件的優(yōu)化確定筆者首次采用RP-MPIC法測(cè)定了注射用酷甘氨酸乙二胺的含量和有關(guān)物質(zhì)。通過(guò)對(duì)不同濃度、pH值的磷酸鹽緩沖液流動(dòng)相的考察，在綜合考慮保留時(shí)間、峰形、理論塔板數(shù)、拖尾因子等因素的情況下，選擇pH值為2.2的磷酸二氫鈉緩沖液為流動(dòng)相。在此條件下，有關(guān)物質(zhì)和降解產(chǎn)物與主成分峰分離良好，因此，有關(guān)物質(zhì)和降解產(chǎn)物不影響含量測(cè)定。取醋甘氨酸乙二胺原料適量，用流動(dòng)相溶解，進(jìn)行紫外掃描(200—400nm)，在(200+1)nm處為末端吸收，故選擇200nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。3.2有關(guān)物質(zhì)的限量醋甘氨酸乙二胺的劑型主要是水針劑，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部頒標(biāo)準(zhǔn)，臨床常將其以25%葡萄糖注射液20mL稀釋后靜脈注射或以5%葡萄糖注射液250—500mL稀釋后靜脈滴注，這種方法在調(diào)配過(guò)程中，藥液暴露在空氣之中，易出現(xiàn)二次污染，存在很大的安全隱患，而將其制成注射用無(wú)菌粉末則可避免藥液與外界空氣接觸，避免二次污染。同時(shí)醋甘氨酸乙二胺原料藥對(duì)光不穩(wěn)定，需遮光保存，其水溶液的光穩(wěn)定性問(wèn)題更為突出，為提高產(chǎn)品穩(wěn)定性有必要將醋甘氨酸乙二胺注射液改劑型為注射用凍干滅菌粉末，確保藥品質(zhì)量穩(wěn)定、安全有效。因此，改劑型為注射用滅菌粉末時(shí)必須檢查其有關(guān)物質(zhì)，筆者用不加校正因子的主成分自身對(duì)照法進(jìn)行降解產(chǎn)物測(cè)定，并規(guī)定限度應(yīng)＜1.0%。［參考文獻(xiàn)］［1］于金玲，張?jiān)旅?，張成明，等，醋H‘氨酸乙二胺注射液對(duì)顱腦手術(shù)患者凝血功能的影響［J］?齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2003,24(4):364-365.離子絡(luò)合紫外分光光度法測(cè)定葛根素及其制劑的含量方崇波1,龔燕波2(1.浙江省寧波市醫(yī)療中心李惠利醫(yī)院藥劑科，315040；2.浙江省寧波市第二醫(yī)院藥劑科，315010)(摘要］目的建立葛根素及其制劑含量測(cè)定的方法。方法在一定pH值條件下，使葛根素和鋁離子形成絡(luò)合物，在339.8nm波長(zhǎng)處通過(guò)測(cè)定吸收度的改變來(lái)測(cè)定含量？結(jié)果吸收度和含量之間存在線性關(guān)系，線性回歸方程為C=-03.741A-5.3437,,=0.9994。線性范圍為3.648~29.184yg.mL",平均加樣回收率為99.87%,RSD=0.53%。結(jié)論該方法可用于測(cè)定葛根素及其制劑的含量。［關(guān)鍵詞］葛根素；絡(luò)合反應(yīng)；紫外分光光度法；含量測(cè)定f中圖分類號(hào)］R927；R286［文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼］A葛根素為血管擴(kuò)張藥，臨床常用于降低心肌耗氧量，改善微循環(huán)，抗血小板聚集。葛根素制劑的含量測(cè)定常用高效液相色譜（HPLC）法〃“，由于葛根素為異黃酮類藥物，能和金屬離子絡(luò)合，絡(luò)合后其紫外吸收改變，故筆者應(yīng)用金屬離子絡(luò)合紫外分光光度法測(cè)定葛根素含量。l儀器與試劑UV-2401紫外分光光度計(jì)（日本島津），PH-420T智能酸度計(jì)（寧波力特公司生產(chǎn)），Agilentl100高效液相色譜儀；葛根素標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào):752-200108）.100/e三氯化鋁溶液（浙江省寧波市醫(yī)療中心李惠利醫(yī)院藥劑科配制，18.1lg結(jié)晶三氯化鋁配制成100mL溶液，過(guò)濾即得），［收稿日期］2004-02-27［修回日期］2004-03-26［作者簡(jiǎn)介］方崇波（】973-），男，浙江慈溪人，主管藥師，碩士，主要從事醫(yī)院藥學(xué)工作。電話7122,87018814.E—mail:fchgyb@163.com。［文章編號(hào)］1004-078】（2005）03-0229-02其他試劑均為色譜純。2方法與結(jié)果2.1吸收度測(cè)定用移液管準(zhǔn)確量取適量的2份等量葛根素待測(cè)試液，置于50mL容量瓶中，其中一份加入10%三氯化鋁溶液2.OmL,用純化水稀釋至刻度，搖勻后，以未加三氯化鋁溶液的樣品溶液作空白，測(cè)定溶液的吸收度（A）值。2.2測(cè)定波長(zhǎng)的選擇取葛根素標(biāo)準(zhǔn)品配制成約1mg.mL。的標(biāo)準(zhǔn)溶液，精密量取2份1.0mL標(biāo)準(zhǔn)溶液分別置于50mL容量瓶中，其中l(wèi)份加入10%三氯化鋁溶液2.OmL;另精密量取100/e三氯化鋁溶液2.0mL置于50mL容量瓶中。并分別用純化水將3種試液稀釋至刻度，分別用純化水作空白，在190~500nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描3種溶液，所得掃描圖譜見(jiàn)圖l。由圖】可見(jiàn)，在339.8nm波長(zhǎng)處葛根素有一肩峰，與鋁離子絡(luò)合后，此波長(zhǎng)處的4值降低，而在此波長(zhǎng)處三氯化鋁溶液沒(méi)有吸收，因此選用339.8nm波長(zhǎng)作為含量測(cè)定波長(zhǎng)。。229.3討論3.1色譜條件的優(yōu)化確定法測(cè)定了注射用酷甘氨酸乙二胺的含量和有關(guān)物質(zhì)。通過(guò)對(duì)不同濃度、pH值的磷酸鹽緩沖液流動(dòng)相的考察，在綜合考慮保留時(shí)間、峰形、理論塔板數(shù)、拖尾因子等因素的情況下，選擇pH值為2.2的磷酸二氫鈉緩沖液為流動(dòng)相。在此條件下，有關(guān)物質(zhì)和降解產(chǎn)物與主成分峰分離良好，因此，有關(guān)物質(zhì)和降解產(chǎn)物不影響含量測(cè)定。取醋甘氨酸乙二胺原料適量，用流動(dòng)相溶解，進(jìn)行紫外掃描(200—400nm)，在(200+1)nm處為末端吸收，故選擇200nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。3.2是水針劑，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部頒標(biāo)準(zhǔn)，臨床常將其以25%葡萄糖注射液20mL稀釋后靜脈注射或以5%葡萄糖注射液250—500mL稀釋后靜脈滴注，這種方法在調(diào)配過(guò)程中，藥液暴露在空氣之中，易出現(xiàn)二次污染，存在很大的安全隱患，而將其制成注射用無(wú)菌粉末則可避免藥液與外界空氣接觸，避免二次污染。同時(shí)醋甘氨酸乙二胺原料藥對(duì)光不穩(wěn)定需遮光保存，其水溶液的光穩(wěn)定性問(wèn)題更為突出，為提高產(chǎn)品穩(wěn)定性有必要將醋甘氨酸乙二胺注射液改劑型為注射用凍干滅菌粉末，確保藥品質(zhì)量穩(wěn)定、安全有效。因此，改劑型為注射用滅菌粉末時(shí)必須檢查其有關(guān)物質(zhì)，筆者用不加校正因子的主成分自身對(duì)照法進(jìn)行降解產(chǎn)物測(cè)定，并規(guī)定限度應(yīng)＜1.0%。［學(xué)報(bào)，2003,24(4):364-365.離子絡(luò)合紫外分光光度法測(cè)定葛根素及其制劑的含量1,龔燕波2(1.浙江省寧波市醫(yī)療中心李惠利醫(yī)院藥劑科，315040;2.浙江省寧波市第二醫(yī)院藥劑科，315010)摘要］目的建立葛根素及其制劑含量測(cè)定的方法。方法在一定pH值條件下，使葛根素和鋁離子形成絡(luò)合物，在339.8nm波長(zhǎng)處通過(guò)測(cè)定吸收度的改變來(lái)測(cè)定含量？結(jié)果吸收度和含量之間存在線性關(guān)系，線性回歸方程為。=-03.741A-5.3437,,=0.9994。線性范圍為3.648~29.184ygmL"平均加樣回收率為99.87%RSD=0.53%結(jié)論該方法可用于測(cè)定葛根素及其制劑的含量。關(guān)鍵詞］葛根素；絡(luò)合反應(yīng)；紫外分光光度法；含量測(cè)定f中圖分類號(hào)］R927;R286文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼］A葛根素為血管擴(kuò)張藥，臨床常用于降低心肌耗氧量，改善微循環(huán)，抗血小板聚集。葛根素制劑的含量測(cè)定常用高效液相色譜（HPLC）法〃由于葛根素為異黃酮類藥物，能和金屬離l儀器與試劑UV-2401紫外分光光度計(jì)（日本島津），PH-420T智能酸度計(jì)（寧波力特公司生產(chǎn)），Agilentl100高效液相色譜儀；葛根素標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào):752-200108）.100/e三氯化鋁溶液（浙江省寧波市醫(yī)療中心李惠利醫(yī)院藥劑科配制，18.1lg結(jié)晶三氯化鋁配制成100mL溶液，過(guò)濾即得），修回日期］2004-03-26作者簡(jiǎn)介］方崇波（】973-），男，浙江慈溪人，主管藥師，碩士，主要從事醫(yī)院藥學(xué)工作。電話7122,87018814.E—mail:fchgyb@163.com。文章編號(hào)］1004-078】（2005）03-0229-022方法與結(jié)果2.1吸收度測(cè)定用移液管準(zhǔn)確量取適量的2份等量葛根素待測(cè)試液，置于50mL容量瓶中，其中一份加入10%三氯化鋁溶液2.OmL,用純化水稀釋至刻度，搖勻后，以未加三氯化鋁溶液的樣品溶液作空白，測(cè)定溶液的吸收度（A）值。2.2測(cè)定波長(zhǎng)的選擇取葛根素標(biāo)準(zhǔn)品配制成約1mgmL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，精密量取2份1.0mL標(biāo)準(zhǔn)溶液分別置于50mL容量瓶中，其中l(wèi)份加入10%三氯化鋁溶液2.OmL;另精密量取100/e三氯化鋁溶液2.0mL置于50mL容量瓶中。并分別用純化水將3種試液稀釋至刻度，分別用純化水作空白，在190-500波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描3種溶液，所得掃描圖譜見(jiàn)圖l。由圖】可見(jiàn)，在339.8nm波長(zhǎng)處葛根素有一肩峰，與鋁離子絡(luò)合后，此波長(zhǎng)處的4值降低，而在此波長(zhǎng)處三氯化鋁溶液沒(méi)有吸收，因此選用339.8nm波長(zhǎng)作為含量測(cè)定波長(zhǎng)。?230.HeraldofMedicineVol.24No.3March20052.3酸度對(duì)絡(luò)合反應(yīng)的影響精密量取若干份葛根素標(biāo)準(zhǔn)品溶液，每份l.0mL,按“2.1”項(xiàng)F實(shí)驗(yàn)方法配制溶液，改變pH值，測(cè)量其，4值，結(jié)果見(jiàn)圖2。由圖2可知，葛根素在一定pH值條件下才能和鋁離子絡(luò)合，酸度太強(qiáng)、太弱，絡(luò)合都會(huì)解離，并且堿度增加，易使溶液產(chǎn)生氫氧化鋁沉淀而影響測(cè)定。在pH值約為4.0時(shí)，絡(luò)合物穩(wěn)定性最好，故本實(shí)驗(yàn)選用pH值為4.0。3.5002.500-:1.5000.5000.0500A/nmJ葛根素+三氯化鋁溶液2.葛根紊標(biāo)準(zhǔn)溶液3.三氯化鋁溶液圖13種溶液的紫外掃描圖譜0.40.3弋0.20.1o.o345pH值圖2酸度對(duì)絡(luò)合反應(yīng)的影響2.4試劑用量對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響精密量取葛根素標(biāo)準(zhǔn)品溶液若干份，每份1?OmL,參照“2.1”項(xiàng)下方法，改變加入三氯化鋁的量，測(cè)定絡(luò)合后的A值。結(jié)果表明，三氯化鋁溶液用量在1.0mL時(shí)，葛根素與鋁離子的絡(luò)合反應(yīng)基本完全?？紤]試樣測(cè)定的樣品用量，筆者選擇加入量為2.0mL。2.5反應(yīng)時(shí)間對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響液若丁份，每份I.0mL,參照“2.1”項(xiàng)下方法，測(cè)量不同反應(yīng)時(shí)間后絡(luò)合物的4值。結(jié)果表明，葛根素與鋁離子的絡(luò)合反應(yīng)進(jìn)行比較迅速，溶液配制5min后能基本絡(luò)合完全。筆者在本實(shí)驗(yàn)中選用在溶液配制后即測(cè)定一值。2.6標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制分別精密量取0.2,0.4,0.6,0.8,1.0,1.2,1.4,1.6mL葛根素標(biāo)準(zhǔn)品溶液各2份，置于50mL容量瓶中，其中l(wèi)份加100/e三氯化鋁溶液2.0mL,均用純化水稀釋至刻度，并以含相同量葛根素標(biāo)準(zhǔn)品的未加三氯化鋁的溶液作空白，測(cè)定A值。月值與濃度C線性擬合得線性回歸方程：C=-103.741A-5.3437.r=0.9994，線性范圍為3.648~29.184vg.mL“。2.7日內(nèi)精密度和日間精密度測(cè)定按〃2.I”項(xiàng)下方法連續(xù)測(cè)定6次，所測(cè)得的A值保持不變，RSD=0.35%（凡=6）;樣品放置12,24,36h后測(cè)定，月值基本保持不變，RSD:0.51%（凡：6）。說(shuō)明樣品反應(yīng)比較穩(wěn)定。2.8加樣回收試驗(yàn)按“2.1”項(xiàng)下實(shí)驗(yàn)方法，在已知含量的樣品中加入一定量的葛根素標(biāo)準(zhǔn)品溶液，按實(shí)驗(yàn)操作測(cè)定A值，根據(jù)回歸方程計(jì)算樣品量，結(jié)果見(jiàn)表1。平均回收率為99.87%,RSD=0.53%。表l加樣回收試驗(yàn)結(jié)果肛gr T T 1I序號(hào)I已知量加入量測(cè)定量回收率/qcl卜-----+------+-------+--------+------日|1524.74J82.40707.98100.46273.60795.7999.07364.80890.75100.334456.00979.3299.69547.201069.5399.566729.601255.12100.11|L --1 1 1 1 」2.9樣品含量測(cè)定用純化水將葛根素制劑準(zhǔn)確稀釋至濃度約為lmgmL-1溶液，用移液管精密量取1.0mL稀釋溶液各2份，其中1份加10%三氯化鋁溶液2.OmL,按TOC\o"1-5"\h\z“2.1”項(xiàng)下方法測(cè)定A值，計(jì)算含量。另一份以HPLC法測(cè)定。兩組比較，結(jié)果見(jiàn)表2。表2樣品測(cè)定結(jié)果。=3「 t T- T t 1II規(guī)格葛根素II紫外分光HPLC法藥物名稱批號(hào)IIIII/mL含量/mg光度法/7e/L7eI卜 +- + + + 1I葛根素注射液525003081598.8799.20〕卜 + + +-- + 1III03082799.02100.0103111398.7599.86030125100.2099.98葛根素葡萄糖注射液10020003051298.96100.03030807100.2103022499.54葛根素氯化鈉注射液100200030504100.32100.25030414、l99.85100.09葛根素滴眼液550030717.198.8699.89031018'2100.3499.78〕L 1 1 1 1 」3討論在一定的pH值條件下，葛根素能和鋁離子絡(luò)合，并能形成穩(wěn)定絡(luò)合物，在339.8nm波長(zhǎng)處出現(xiàn)爿值改變，并且A值的改變值在一定范圍內(nèi)和含量成線性關(guān)系。樣品在紫外分光光度法中測(cè)定的結(jié)果與HPLc法測(cè)定的結(jié)果比較，差異無(wú)顯著性(P>0.05)，且紫外分光光度法可以減少樣品的色差影響。筆者在本實(shí)驗(yàn)中建立的方法可以為葛根素及其制劑的質(zhì)量控制提供依據(jù)，具有可行性。［參考文獻(xiàn)］［1］冉曉靜，閆洪軍，高效液相色譜法測(cè)定葛根素注射液中葛根素的含量［J］。藥物分析雜志，1998,18(6):400-401.［2］劉新元，何永志，王倩.HPLC法測(cè)定葛根素氯化鈉注射液中葛根素的含量［J］.中草藥，2001,32(9):795-796.［3］李群力，蔣曉萌.HPLC法測(cè)定葛根素葡萄糖注射液中葛根素的含量［J］.中草藥，2002,33(5):428.-230HeraldofMedicineVol.24No.3March2005溶液，每份l.0mL，按2.1”項(xiàng)F實(shí)驗(yàn)方法配制溶液,改變pH值，測(cè)量其，4值，結(jié)果見(jiàn)圖2。由圖2可知，葛根素在一定pH值條件下才能和鋁離子絡(luò)合，酸度太強(qiáng)、太弱，絡(luò)合都會(huì)解離,并且堿度增加，易使溶液產(chǎn)生氫氧化鋁沉淀而影響測(cè)定。在pH值約為4.0時(shí)，絡(luò)合物穩(wěn)定性最好，故本實(shí)驗(yàn)選用pH值為4.0。3.5002.500-:1.0.500-0.0500人/nmJ圖l3種溶液的紫外掃描圖譜0.40.3弋0.20.1o.o液若干份，每份1.OmL,參照項(xiàng)下方法，改變加入三氯化鋁的量，測(cè)定絡(luò)合后的A值。結(jié)果表明，三氯化鋁溶液用量在1.0mL時(shí)，葛根素與鋁離子的絡(luò)合反應(yīng)基本完全?？紤]試樣測(cè)定的樣品用量，筆者選擇加入量為2.0mL。液若丁份，每份I.0mL,參照項(xiàng)下方法，測(cè)量不同反應(yīng)時(shí)間后絡(luò)合物的4值。結(jié)果表明，葛根素與鋁離子的絡(luò)合反應(yīng)進(jìn)行比較迅速，溶液配制5min后能基本絡(luò)合完全。筆者在本實(shí)驗(yàn)中選用在溶液配制后即測(cè)定一值。標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制分別精密量取0.2,0.4,0.6,0.8,1.0,1.2,1.4,1.6mL葛根素標(biāo)準(zhǔn)品溶液各2份，置于50mL容量瓶中，其中l(wèi)份加100/e三氯化鋁溶液2.0mL,均用純化水稀釋至刻度，并以含相同量葛根素標(biāo)準(zhǔn)品的未加三氯化鋁的溶液作空白，測(cè)定A值。月值與濃度C線性擬合得線性回歸方程：C=-103.741A-5.3437.r=0.9994，線性范圍為3.648~29.184vg2.7I項(xiàng)下方法連續(xù)測(cè)定6次，所測(cè)得的A值保持不變,RSD=0.35%(凡=6);樣品放置12,24,36h后測(cè)定，月值基本保持不變,RSD:0