植酸測定方法的篩選

植酸測定方法的篩選

植物酸是一種含有6個醇和6個磷酸酯的環(huán)己六醇酯，它的測定方法有很多。目前，國家和地區(qū)關(guān)于種植酸的標準制定了不同的規(guī)定。到目前為止，還沒有統(tǒng)一的標準植物和測定方法。為此,我們選用國內(nèi)外多種植酸標準品,采用多種測定方法進行對比測定,并進行評價,篩選了4種適合于不同情況下的植酸測定方法。現(xiàn)報告如下。1材料和方法1.1phs-2酸值計及l(fā)xj-空氣LC-5A高效液相色譜儀(日本島津);UV-260紫外可見光譜儀(日本島津);721-B分光光度計(上海第三分析儀器廠);PHS-2酸度計;LXJ-Ⅱ離心機(上海醫(yī)用分析儀器廠);THZ-82恒溫振蕩器(上海躍進醫(yī)療器械四廠)。植酸(瑞士Fluka公司、美國Aldrich公司、日本東京化成工業(yè)株式會社、上海試劑二廠);植酸鈉(美國Sigma公司、Aldrich公司);三氯乙酸、硫酸鈉、磷酸二氫鉀、鉬酸銨、三氯化鐵、磺基水楊酸、硫酸、硝酸鈉均為分析純。1.2磺化、鐵、分光光度法稱取5g粉碎的樣品(過40目篩)于提取器中,加入5%三氯乙酸及10%硫酸鈉100ml,室溫下振蕩30min.以3600r/min離心10min,取上清液5ml,用蒸餾水稀釋至25ml后,通過陰離子交換樹脂。用0.1mol/LNaCl15ml洗脫除去溶液中無機磷和其他干擾物,再用0.7mol/LNaCl洗脫收集植酸溶液,并用蒸餾水稀釋定容至100ml,待用。①硝酸釷滴定法:移取含植酸的樣品溶液(約含植酸180mg)于250ml錐形瓶中,加入50ml蒸餾水,用0.02mol/LHCl調(diào)節(jié)pH至1.9～2.2,加熱至60℃,加入1%二甲酚橙溶液1ml,迅速用硝酸釷溶液滴定,終點時溶液由橙黃色變?yōu)榉奂t色。②測磷分光光度法:移取含一定量植酸的樣品溶液(含植酸5～20mg)于50ml燒杯中,加0.5ml濃硫酸和3ml的濃硝酸,控溫200℃左右消化,冷卻后,移至50ml容量瓶中,用蒸餾水稀釋至刻度。再取1.0ml稀釋液置于50ml容量瓶中,加磷鉬酸銨和硫酸混合試劑5ml,加水稀釋至刻度,然后置于45℃水浴30min,冷卻后在660nm處測定吸光度。由磷酸二氫鉀標準曲線查出樣品中植酸磷含量,再乘以因子3.55換算出植酸含量。③測鐵分光光度法:移取含一定量植酸的樣品溶液(含植酸0.2～1.0mg)于25ml比色管中,依次加入0.05%FeCl33ml,0.5%磺基水楊酸和緩沖液各5ml,再加蒸餾水定容至25ml.混勻后離心分離10min,取上清液,以試劑空白為參比,于500nm波長測其吸光度。由標準曲線查出植酸含量。④高壓液相色譜法:取含植酸的樣品溶液(植酸濃度為2～10g/L),通過0.45μm的醋酸纖維膜過濾,用10μl微量注射器,吸取濾液直接注入高壓液相色譜儀內(nèi)測定。色譜柱為ZorboxC8,流動相為0.025mol/LKH2PO4水溶液,流速為0.5ml/min,于254nm處測出植酸色譜峰的峰面積,由標準曲線查出植酸含量。1.3統(tǒng)計處理結(jié)果用xˉ±sxˉ±s表示,組間比較采用方差分析。2結(jié)果2.1采用分光光度法測定了不同植物酸的標準溶液不同植酸標準品實測含量與標簽含量的差異程度不同,其中Aldrich植酸的差值最小。見表1.2.2硝酸鹽滴定法與其他方法所測結(jié)果比較,見表1同種樣品不同測定方法所測結(jié)果的差別均呈高度顯著性(F=126.44～408.31;P均<0.001),經(jīng)兩兩比較,硝酸釷滴定法所測結(jié)果均高于其他3種方法,差別均呈高度顯著性(q=22.23～41.49,P均<0.001);其他3種方法的結(jié)果差別均無顯著性(q=0.46～2.89,P均>0.05)。見表2.3討論3.1兩種植酸標準品的比較本文結(jié)果顯示,不同植酸標準品實測含量與標簽含量不同,其中以Aldrich植酸和Sigma植酸鈉差值較小,適宜作為植酸標準品,而上海植酸和Fluka植酸的差值較大,不宜作為植酸標準品。本文結(jié)果為正確選用植酸標準品提供了依據(jù),同時建議盡快確立統(tǒng)一的植酸標準品。3.2測磷分光光度法硝酸釷滴定法結(jié)果偏高,其原因可能是將樣品中的植酸和無機磷同時測定,未能正確反映植酸的實際含量,但由于該方法操作簡單快速,故適合于無植酸標準品情況下高含量分析及工業(yè)生產(chǎn)的快速粗略檢測。測磷分光光度法采用高純度磷酸二氫鉀為標準,測定準確度高,精密度好,但消化較麻煩,適合于無植酸標準品的測定及微量測定。測鐵分光光度法采用植酸為標準,測定準確度與測磷法相近,但它不需消化