生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)參考答案

《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)Ⅰ》總復(fù)習(xí)思考題部分是自己做的，部分是百度的，各位看官如果要借鑒請酌情考慮，后果自負(fù)?！巫?.請掌握下列生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)常用儀器的正確操作使用方法，并能回答以下問題：（1）離心機(jī)使用時(shí)為什么要平衡？普通離心機(jī)與高速離心機(jī)在平衡時(shí)有什么不同要求？平衡是為了讓轉(zhuǎn)動(dòng)物體重心正好在轉(zhuǎn)軸上，如果不在，會對轉(zhuǎn)軸產(chǎn)生很大作用力，有時(shí)整臺機(jī)器會跟著晃動(dòng)。這對機(jī)器損耗很大。轉(zhuǎn)速越高的離心機(jī)不光重量很重，使用時(shí)還要特別放平衡，就連離心管里面的試液都要放置等量，離心管還要對稱放入轉(zhuǎn)子試管孔內(nèi)，以確保轉(zhuǎn)子平衡運(yùn)行，而且在調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)速時(shí)，還要使用分段升速法。(2)為什么用高速組織搗碎機(jī)進(jìn)行動(dòng)、植物組織搗碎時(shí)，需采用間歇式方式進(jìn)行操作？為了防止產(chǎn)熱過高，破壞組織內(nèi)的蛋白質(zhì)。防止蛋白變性。(3)用真空泵進(jìn)行減壓抽濾時(shí)，為什么要連接緩沖瓶？防止負(fù)壓產(chǎn)生，引起水泵里的水或油泵里的油倒吸，進(jìn)入濾瓶中，污染濾液。為什么肝糖元只能從剛宰殺的動(dòng)物肝臟中獲取？在提取肝糖元過程中，三氯乙酸、95%乙醇各起什么作用？糖元水解產(chǎn)物中如果存在提取中殘留蛋白質(zhì)時(shí)，在用班氏試劑檢測水解產(chǎn)物，有什么影響！動(dòng)物死亡后，體內(nèi)的細(xì)胞還能存活一段時(shí)間，由于進(jìn)行細(xì)胞呼吸作用，肝細(xì)胞會消耗肝糖元，所以必須用新鮮的肝臟細(xì)胞。三氯乙酸是固定作用（蛋白質(zhì)能被三氯乙酸沉淀）；乙醇：糖元不溶于乙醇，可以提取糖元。班氏試劑使用時(shí)需要加熱，而加熱會時(shí)殘留的蛋白質(zhì)變性水解，對最終測得的水解產(chǎn)物顏色可能有影響。（水解的產(chǎn)生的氨氣結(jié)合銅離子，是銅離子的氧化性失去，導(dǎo)致生產(chǎn)絳藍(lán)色沉淀，實(shí)驗(yàn)將失?。┱堦U述分光光度儀的主要部件及其功能；闡述紫外與可見光的光波長范圍；在紫外與可見光范圍內(nèi)測定物質(zhì)吸光度時(shí)，對光源與吸收池有何要求？光電管的功能是什么？為什么說光電管是分光光度儀最脆弱和最易損的部件？光源（鎢燈）：發(fā)光。單色器：把混合光波分解為單一波長光的裝置。吸收池：盛放待測流體（液體、氣體）試樣的容器。該容器應(yīng)具有兩面互相平行、透光且有精確厚度的平面。它藉助機(jī)械操作能把待測試樣間斷或連續(xù)地送到光路中，以便吸收測量的輻射（光）通量。檢測器：將單色器分出的光信號進(jìn)行光電轉(zhuǎn)換，電信號在工作站顯示成出峰。測量裝置：通過測得的電流表·記錄器·數(shù)字示值讀書單元的數(shù)據(jù)來繪制吸收曲線。紫外光：200至350nm可見光波長:350至760nm紫外測定：其應(yīng)用波長范圍為200～400nm的紫外光做光源，在低于350nm的紫外光區(qū)工作時(shí)，必須采用石英池或熔凝石英池。可見光測定：用波長為400～850nm的可見光作光源，可以用玻璃池·石英池·熔凝池。光電管的功能：光電轉(zhuǎn)換，將光信號轉(zhuǎn)化成電信號。光電管容易產(chǎn)生光電管疲勞：所以不測定時(shí)必須將試樣室蓋蓋好，使光路切斷，以延長光電管的使用壽命。

請闡述Beer-Lamber定律，并用該定律闡述分光光度儀工作原理？用分光光度儀定制某物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，需將OD值測定范圍確定在0.2～0.8區(qū)域內(nèi)，為什么？（這題沒找到答案，自己寫的）朗伯(Lambert)定律闡述為：光被透明介質(zhì)吸收的比例與入射光的強(qiáng)度無關(guān)；在光程上每等厚層介質(zhì)吸收相同比例值的光。比爾(Beer)定律闡述為：光被吸收的量正比于光程中產(chǎn)生光吸收的分子數(shù)目。log(Io/I)=εCl(1—4)式中Io和I分別為入射光及通過樣品后的透射光強(qiáng)度；log（Io/I）稱為吸光度(ab—sorbance)舊稱光密度(opticaldensity)；C為樣品濃度；l為光程；ε為光被吸收的比例系數(shù)。當(dāng)濃度采用摩爾濃度時(shí)，ε為摩爾吸收系數(shù)。它與吸收物質(zhì)的性質(zhì)及入射光的波長λ有關(guān)。工作原理：通過測得的吸光度，帶入Beer-Lamber定律，可以求得該物質(zhì)的濃度；通過確定該物質(zhì)的最大吸收波長，可以確定該物質(zhì)的種類。OD值小于0.2時(shí)，底物濃度低，誤差大；OD值大于1時(shí)，線性關(guān)系不好，所以取0.2到0.8.可以用來進(jìn)行分析測定用的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)具備哪些特性？普通性，純度高（工業(yè)純，化學(xué)成分單一，分析純，光譜純，食品純），理化性質(zhì)穩(wěn)定，含量準(zhǔn)確，雜質(zhì)無影響。請闡述移液管與比色皿的正確清洗方法和放置方法；闡述移液管取樣與比色皿加樣的正確操作方式和操作注意事項(xiàng)。移液管：移液管清洗要根據(jù)吸取液體的性質(zhì)選用不同的清洗劑，有機(jī)液體可用丙酮、乙醇溶液，無機(jī)試劑可用洗滌劑。應(yīng)反復(fù)清洗數(shù)次，再用蒸餾水清洗干凈，自然涼干。標(biāo)志：內(nèi)壁不掛水珠。干凈的移液管應(yīng)置于干凈的一夜管架上，先豎著放，等水分干后橫著放。比色皿：用鉻酸侵泡一段時(shí)間后，將鉻酸倒回試劑瓶，再用清水沖洗比色皿。使用時(shí)，要讓光穿過透光面，測定完畢放到盒里時(shí)要讓磨砂面向上，清洗后放置時(shí)，倒置于濾紙上。移液管取樣：根據(jù)所移溶液的體積和要求選擇合適規(guī)格的移液管使用，在滴定分析中準(zhǔn)確移取溶液一般使用移液管，反應(yīng)需控制試液加入量時(shí)一般使用吸量管。檢查移液管的管口和尖嘴有無破損，若有破損則不能使用;1、使用前：使用移液管，首先要看一下移液管標(biāo)記、準(zhǔn)確度等級、刻度標(biāo)線位置等。使用移液管前，應(yīng)先用鉻酸洗液潤洗，以除去管內(nèi)壁的油污。然后用自來水沖洗殘留的洗液，再用蒸餾水洗凈。洗凈后的移液管內(nèi)壁應(yīng)不掛水珠。移取溶液前，應(yīng)先用濾紙將移液管末端內(nèi)外的水吸干，然后用欲移取的溶液涮洗管壁2至3次，以確保所移取溶液的濃度不變。2、吸液：搖勻待吸溶液，將待吸溶液倒一小部分于一洗凈并干燥的小燒杯中，用濾紙將清洗過的移液管尖端內(nèi)外的水分吸干，并插入小燒杯中吸取溶液，當(dāng)吸至移液管容量的1/3時(shí)，立即用右手食指按住管口，取出，橫持并轉(zhuǎn)動(dòng)移液管，使溶液流遍全管內(nèi)壁，將溶液從下端尖口處排入廢液杯內(nèi)。如此操作，潤洗了3-4次后即可吸取溶液。將用待吸液潤洗過的移液管插入待吸液面下1～2cm處用吸耳球按上述操作方法吸取溶液(注意移液管插入溶液不能太深，并要邊吸邊往下插入，始終保持此深度)。當(dāng)管內(nèi)液面上升至標(biāo)線以上約1～2cm處時(shí)，迅速用右手食指堵住管口(此時(shí)若溶液下落至標(biāo)線以下，應(yīng)重新吸取)，將移液管提出待吸液面，并使管尖端接觸待吸液容器內(nèi)壁片刻后提起，用濾紙擦干移液管或吸量管下端粘附的少量溶液。(在移動(dòng)移液管或吸量管時(shí)，應(yīng)將移液管或吸量管保持垂直，不能傾斜)3、調(diào)節(jié)液面：左手另取一干凈小燒杯，將移液管管尖緊靠小燒杯內(nèi)壁，小燒杯保持傾斜，使移液管保持垂直，刻度線和視線保持水平(左手不能接觸移液管)。稍稍松開食指(可微微轉(zhuǎn)動(dòng)移液管或吸量管)，使管內(nèi)溶液慢慢從下口流出，液面將至刻度線時(shí)，按緊右手食指，停頓片刻，再按上法將溶液的彎月面底線請闡述茚三酮反應(yīng)的反應(yīng)原理及其應(yīng)用。書93頁請闡述蛋白質(zhì)“鹽析”與“中性有機(jī)溶劑沉淀蛋白質(zhì)”反應(yīng)原理；這兩類沉淀反應(yīng)有何應(yīng)用？鹽析：用大量中性鹽使蛋白質(zhì)從其膠體溶液中析出的過程為蛋白質(zhì)的鹽析作用。應(yīng)用：分級分離，提純蛋白質(zhì)。中性有機(jī)溶劑：有機(jī)溶劑有強(qiáng)合水作用，使蛋白質(zhì)分子脫水，破壞蛋白質(zhì)的水化層，降低其在水溶液中的穩(wěn)定性，而形成沉淀。應(yīng)用：提純蛋白質(zhì)。在蛋白質(zhì)不可逆沉淀反應(yīng)實(shí)驗(yàn)中，多次涉及到蛋白質(zhì)遇到沉淀劑后，沉淀不增加反而消失的現(xiàn)象，這一現(xiàn)象統(tǒng)稱為“假溶”現(xiàn)象，蛋白質(zhì)的“假溶”與“復(fù)溶”兩者之間有什么本質(zhì)上的不同？并請解釋以下“假溶”現(xiàn)象：假溶指蛋白質(zhì)已變性后，因溶液或酸或堿而帶同種電荷，使蛋白質(zhì)分子間產(chǎn)生排斥，從而溶解。復(fù)溶指蛋白質(zhì)因溶液酸堿度，輕金屬離子等一起溶解度降低的現(xiàn)像，在消除這些因素后，蛋白質(zhì)能回到原樣從而復(fù)溶。此過程蛋白質(zhì)未變性。在重金屬鹽沉淀蛋白質(zhì)實(shí)驗(yàn)中，加入過量的硫酸銅或過量的乙酸鉛后，沉淀消失現(xiàn)象？過量的硫酸銅（醋酸鉛）中的銅（鉛）離子會吸附在蛋白質(zhì)表面從而使蛋白質(zhì)帶電而是蛋白質(zhì)分子間相互排斥，最終發(fā)生假溶現(xiàn)象。在“海倫壓環(huán)”試驗(yàn)中；請解釋用濃硫酸與濃鹽酸進(jìn)行海倫壓環(huán)試驗(yàn)振蕩后，沉淀消失現(xiàn)象？濃硫酸和濃鹽酸中含有大量的氫離子，氫離子吸附在蛋白質(zhì)表面使蛋白質(zhì)帶電，也能發(fā)生假溶現(xiàn)象。請闡述用透析試驗(yàn)驗(yàn)證蛋白質(zhì)“可逆”與“不可逆沉淀反應(yīng)”的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)原理。書101。透析法：透析袋能使小分子運(yùn)動(dòng)出去，而大分子蛋白質(zhì)不能。若果透析后蛋白質(zhì)復(fù)性則為可逆沉淀，未復(fù)性則為不可逆。請闡述酸、堿、鹽的存在對加熱變性蛋白質(zhì)沉淀反應(yīng)有何影響。要求能對加熱變性沉淀蛋白質(zhì)實(shí)驗(yàn)中涉及到的每個(gè)實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象作出正確的理論解釋。沉淀——溶解，解釋：參照假溶現(xiàn)象。請闡述電泳基本概念，常用電泳方法的分類及其應(yīng)用。書32.請闡述全血，血漿與血清基本概念。略請闡述人體血清蛋白醋酸纖維薄膜電泳原理，通過人體血清蛋白醋酸纖維薄膜電泳，可以將人體血清蛋白分為哪幾類？分離測定各血清蛋白相對百分含量對于醫(yī)學(xué)臨床診斷疾病有何指導(dǎo)意義？書13127.為什么人體血清蛋白醋酸纖維薄膜電泳適宜在pH=8.6的弱堿性緩沖液中進(jìn)行電泳分離，而不適宜在弱酸性緩沖液中電泳？書131頁，實(shí)驗(yàn)原理第二段。請闡述在電泳實(shí)驗(yàn)中，電場強(qiáng)度、電泳緩沖溶液pH、緩沖溶液的離子強(qiáng)度對被分離物質(zhì)有何影響?電場強(qiáng)度：電泳速度緩沖液PH：蛋白質(zhì)帶電多少，從而影響電泳速度。緩沖液離子強(qiáng)度：溶液的離子強(qiáng)度電泳液中的離子濃度增加時(shí)會引起質(zhì)點(diǎn)遷移率的降低。其原因是帶電質(zhì)點(diǎn)吸引相反符合的離子聚集其周圍，形成一個(gè)與運(yùn)動(dòng)質(zhì)點(diǎn)符合相反的離子氛（ionicatmosphere），離子氛不僅降低質(zhì)點(diǎn)的帶電量，同時(shí)增加質(zhì)點(diǎn)前移的阻力，甚至使其不能泳動(dòng)。然而離子濃度過低，會降低緩沖液的總濃度及緩沖容量，不易維持溶液的pH值，影響質(zhì)點(diǎn)的帶電量，改變泳動(dòng)速度。離子的這種障礙效應(yīng)與其濃度和價(jià)數(shù)相關(guān)。可用離子強(qiáng)度I表示。

在電泳中“虹吸現(xiàn)象”是如何發(fā)生的？“虹吸現(xiàn)象”對電泳有何影響？如何在電泳實(shí)驗(yàn)操作中盡量避免“虹吸現(xiàn)象”發(fā)生？虹吸現(xiàn)象是液態(tài)分子間引力與位差能造成的。（如薄膜的干濕程度不同，點(diǎn)樣時(shí)操作不精確，電泳時(shí)薄膜未平衡等）影響：在某區(qū)域發(fā)生虹吸現(xiàn)象會使這里電泳時(shí)蛋白質(zhì)分子在電場中運(yùn)動(dòng)速度改變，從而時(shí)薄膜上的蛋白質(zhì)分布不均勻準(zhǔn)確，影響測量結(jié)果。挑選薄膜是一定要挑光滑，質(zhì)地均勻，無斑點(diǎn)，能迅速潤濕的。點(diǎn)樣精確均勻，并且架空式不能使薄膜接觸桌面。電泳之前一定要平衡。列表詳盡闡述在血清蛋白醋酸纖維薄膜電泳實(shí)驗(yàn)操作中，下列試劑及器材的作用：三層濾紙（作鹽橋）；（2）厚型載玻片（架空，使薄膜點(diǎn)樣懸空）；pH8.6的電泳緩沖液（時(shí)蛋白質(zhì)帶同種電荷）；（4）10B氨基黑染色液（固定染色蛋白質(zhì)）；（5）冰乙酸-乙醇漂洗液（洗去薄膜上不含蛋白質(zhì)的染料）（6）0.4moL/L的NaOH溶液（洗去蛋白質(zhì)上的染料）？請闡述Folin酚法定制蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線的原理；對比雙縮脲定制蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線原理和方法，列表從標(biāo)準(zhǔn)品的使用濃度，測定范圍，反應(yīng)靈敏度，標(biāo)準(zhǔn)品的用量，線性關(guān)系的好壞比較兩種測定蛋白質(zhì)方法的優(yōu)、缺點(diǎn)。（略）請闡述考馬斯亮藍(lán)G250染色法定制蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線的原理；對比Folin酚定制蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線原理和方法，列表從標(biāo)準(zhǔn)品的使用濃度，測定范圍，反應(yīng)靈敏度，標(biāo)準(zhǔn)品的用量，線性關(guān)系的好壞比較兩種測定蛋白質(zhì)方法的優(yōu)、缺點(diǎn)。（略）請從檢測方法的原理與應(yīng)用范圍著手分析，為什么分別采用Folin酚法和雙縮脲法測定“蛋白胨”這種微生物培養(yǎng)基質(zhì)中蛋白含量時(shí)，其測定出的蛋白含量檢測結(jié)果會大相徑庭，相差甚遠(yuǎn)？從測定特點(diǎn)去分析，一個(gè)能測定水解蛋白，一個(gè)不能。相關(guān)資料：蛋白胨是有機(jī)化合物。蛋白胨是將肉、酪素或明膠用酸或蛋白酶水解后干燥而成的外觀呈淡黃色的粉劑，具有肉香的特殊氣息。蛋白質(zhì)經(jīng)酸、堿或蛋白酶分解后也可形成蛋白胨。在胃內(nèi)蛋白質(zhì)的初步消化產(chǎn)物之一就是蛋白胨。蛋白胨富含有機(jī)氮化合物，也含有一些維生素和糖類。它可以作為微生物培養(yǎng)基的主要原料，在抗生素、醫(yī)藥工業(yè)、發(fā)酵工業(yè)、生化制品及微生物學(xué)科研等領(lǐng)域中的用量均很大，可以用來治療消化道疾?。徊煌纳矬w需要特定的氨基酸和多肽，因此存在著各種蛋白胨，一般來說，用于蛋白胨生產(chǎn)的蛋白包括動(dòng)物蛋白（酪蛋白、肉類）和植物蛋白（豆類）等兩種。在考馬斯亮藍(lán)G250染色法定制蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備中，考馬斯亮藍(lán)G250試劑配制中往往因試劑的酸度、試劑過濾的清澈度、試劑質(zhì)量本身等諸多因素，影響試劑配制的準(zhǔn)確性。從而直接影響其標(biāo)準(zhǔn)曲線定制的準(zhǔn)確性，因此常常需要對配制好的試劑進(jìn)行準(zhǔn)確度測定，請你結(jié)合該方法的檢測靈敏度，闡述驗(yàn)證試劑配制準(zhǔn)確性的有效檢測方法。（以實(shí)例進(jìn)行闡述）根據(jù)：在測定液中含5ug/ml時(shí)就有0.275的吸光度變化。從不同濃度（等差關(guān)系）的蛋白質(zhì)對應(yīng)的吸光度（等差關(guān)系）比較，可以設(shè)計(jì)檢測方法。測定食品中蛋白質(zhì)含量的傳統(tǒng)方法是什么？請闡述該方法的檢測原理。三聚氰胺事件發(fā)生后，該檢測方法暴露出了一個(gè)重大缺陷，請分析導(dǎo)致該缺陷的原因，并根據(jù)你所學(xué)知識，推薦一種測定食品中蛋白含量的準(zhǔn)確方法，并說明其方法在實(shí)際應(yīng)用中的優(yōu)點(diǎn)。略，書118頁。為什么在提取唾液淀粉酶前，必需將口中的殘?jiān)们逅M后，才能滿足實(shí)驗(yàn)需要，正確提取淀粉酶？否則會對酶的什么驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)造成