酶免基礎(chǔ)知識(shí)和血篩產(chǎn)品介紹

酶聯(lián)免疫檢測(cè)技術(shù)簡(jiǎn)介

血液篩查試劑特點(diǎn)及發(fā)展歷程北京萬(wàn)泰生物藥業(yè)股份有限公司汪月才2012年3月一、酶聯(lián)免疫檢測(cè)技術(shù)簡(jiǎn)介什么是ELISA?免疫測(cè)定（immunoassay，IA）是應(yīng)用免疫學(xué)技術(shù)測(cè)定標(biāo)本的方法。在臨床檢驗(yàn)中主要通過(guò)抗原抗體反應(yīng)檢測(cè)體液中的抗體或抗原性物質(zhì)。ELISA是一種免疫測(cè)定。基礎(chǔ)定義抗原（Antigen）：能在機(jī)體中引起特異性免疫應(yīng)答的物質(zhì)。抗體（Antibody）：能與抗原特異性結(jié)合的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)。Ig分五類，即IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。與免疫測(cè)定有關(guān)的Ig主要為IgG和IgM。機(jī)體被微生物感染后，先產(chǎn)生IgM抗體，然后產(chǎn)生IgG抗體。經(jīng)過(guò)一段時(shí)間，IgM抗體量逐漸減少而消失，而IgG抗體可長(zhǎng)期存在，在疾病痊愈后可持續(xù)數(shù)年之久。重要指標(biāo)靈敏度：能檢測(cè)到的分析物的最小量，表示檢測(cè)下限的能力。特異性：鑒別陰性標(biāo)本的能力。精密度：指對(duì)同一個(gè)標(biāo)本進(jìn)行重復(fù)分析，其結(jié)果間的符合率。重要指標(biāo)穩(wěn)定性：指在效期內(nèi)試劑質(zhì)量參數(shù)的變化。一般用非儲(chǔ)存條件下較高溫度進(jìn)行破壞性實(shí)驗(yàn)數(shù)天，參觀各質(zhì)量參數(shù)的變化，一般37℃1天相當(dāng)于4℃45天,還有2-8℃長(zhǎng)期穩(wěn)定性。質(zhì)控血清：指為了對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行控制而配制的血清。一般用無(wú)溶血無(wú)脂血的血清或血漿。本底：指底色，如HBsAgELISA試劑盒，陽(yáng)性顯色、陰性不顯色，本底就是陰性顯色的情況；

ELISA檢測(cè)方法

1.夾心法.2.間接法.3.競(jìng)爭(zhēng)法.4.捕獲法.夾心法雙抗原夾心：固相(包被)抗原Ag+樣品(抗體Ab)+酶標(biāo)抗原Ag*→Ag-Ab-Ag*+底物(TMB)→顯色雙抗體夾心：固相(包被)抗體Ab+樣品(抗原Ag)+酶標(biāo)抗體Ab*→Ab-Ag-Ab*+底物(TMB)→顯色夾心法圖解TMB+H2O2TMB+H2O2顯色樣品酶標(biāo)抗原加樣洗滌加酶包被底物包被抗原21114233360’30’30’45554洗滌一步法二步法間接法固相(包被)抗原Ag+樣品(抗體Ab)+酶標(biāo)二抗Ab*→Ag-Ab-抗Ab*+底物(TMB)→顯色TMB+H2O2樣品酶標(biāo)二抗底物包被抗原競(jìng)爭(zhēng)法固相(包被)抗原Ag+樣品(無(wú)抗體Ab)+酶標(biāo)抗體Ab*→Ag-Ab*+底物(TMB)→顯色捕獲法固相-抗IgM抗體(抗μ)+樣品(IgM)→抗μ-IgM+酶標(biāo)抗原Ag*→抗μ-IgM-Ag*+底物(TMB)→顯色TMB+H2O2樣品酶標(biāo)抗原包被抗IgM底物

與其他檢測(cè)方法比較二、血液篩查試劑特點(diǎn)及發(fā)展歷程1、人類免疫缺陷病毒診斷試劑HIVELSIA試劑的發(fā)展第三代檢測(cè)試劑簡(jiǎn)介全稱：人類免疫缺陷病毒HIV（1+2型）抗體診斷試劑盒方法：雙抗原夾心酶聯(lián)免疫法（第三代）檢測(cè)對(duì)象：血液標(biāo)本中的HIV總抗體原料：基因重組（萬(wàn)泰和廈大合作研制），包被GP41、GP120、GP36，片段齊全。檢測(cè)窗口期：20天左右基因重組多表位嵌合抗原對(duì)HIV-2型陽(yáng)性出色的檢測(cè)能力試劑盒內(nèi)設(shè)置有HIVⅠ型和Ⅱ型陽(yáng)性對(duì)照，為國(guó)產(chǎn)試劑首創(chuàng)，我們使用美國(guó)BBI

血清盤Panel202對(duì)萬(wàn)泰試劑進(jìn)行考核。

對(duì)HIVO亞型的檢測(cè)O亞型血來(lái)源于美國(guó)BBI超強(qiáng)的抗干擾能力臨床研究顯示，多種其他疾病潛在干擾因素血清標(biāo)本均不會(huì)影響萬(wàn)泰兩步法HIV診斷試劑盒的靈敏度和特異性，適合臨床使用23第四代診斷試劑簡(jiǎn)介HIV-Ab與HIV-Ag雙系統(tǒng)檢測(cè)

——HIV-Ag和HIVP24抗體共同包被

——雙抗原夾心法檢測(cè)HIV-Ab——雙抗體夾心法檢測(cè)HIV-Ag生物素-親和素反應(yīng)系統(tǒng)應(yīng)用

——包被抗體＋生物素標(biāo)記抗體＋HRP標(biāo)記親和素國(guó)產(chǎn)第四代HIV診斷產(chǎn)品明顯縮短窗口期25結(jié)論

HIVAg/Ab診斷試劑全新第四代HIV篩查試劑為使用者提供:增強(qiáng)檢驗(yàn)安全性更可信賴的實(shí)驗(yàn)結(jié)果2、乙肝系列診斷試劑簡(jiǎn)介1、乙型肝炎HBsAg及HBsAb檢測(cè)2、乙型肝炎HBeAg及HBeAb檢測(cè)3、乙型肝炎HBcAb及HBcAb-IgM檢測(cè)4、乙型肝炎前-S1及前-S2檢測(cè)（大蛋白）5、乙型肝炎HBcAg及前-S1檢測(cè)（Dane顆粒）6、乙型肝炎核酸檢測(cè)乙肝標(biāo)志物及臨床意義1乙型肝炎病毒（HBV）具有明顯的種屬及嗜肝特性，可致持續(xù)性病毒感染。我國(guó)屬乙肝感染的高發(fā)區(qū)，乙肝表面抗原（HBsAg）的攜帶者超過(guò)10%。通常判斷HBV感染及其狀況的指標(biāo)為HBV血清血標(biāo)志物—乙肝兩對(duì)半、HBc-IgM、HBVDNA等。乙肝病毒（HBV）又稱Dane顆粒（丹顆粒），由外至內(nèi)可分為包膜蛋白、核殼蛋白、HBVDNA等主要組成。包膜蛋白構(gòu)成乙肝病毒表面抗原（HBsAg）核殼蛋白構(gòu)成乙肝病毒核心抗原（HBcAg）和乙肝病毒e抗原（HBeAg）乙肝標(biāo)志物及臨床意義2乙肝表面抗原（HBsAg）HBsAg于1963年在澳大利亞土著人血中發(fā)現(xiàn)，故也稱為澳大利亞抗原（簡(jiǎn)稱“澳抗”），具有免疫原性，可刺激機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，是機(jī)體感染HBV后最早出現(xiàn)的血清血指標(biāo)。HBsAg分為4個(gè)亞型：adr、adw、ayw和ayr。不同亞型的HBsAg刺激機(jī)體產(chǎn)生的HBsAb不同。乙肝標(biāo)志物及臨床意義3乙肝表面抗體（HBsAb）HBsAg刺激機(jī)體產(chǎn)生的特異性抗體，能中和體液中的HBV，感染乙肝病毒后6-23周出現(xiàn)。見(jiàn)于乙肝恢復(fù)期、HBV既往感染和乙肝疫苗免疫后。HBsAb滴度≥10mIU表示具有保護(hù)性，可抵御同一亞型的再感染。乙肝標(biāo)志物及臨床意義4乙肝病毒核心抗原（HBcAg）HBV核心顆粒外表面具有HBcAg活性，但外周血中沒(méi)有游離的HBcAg。HBcAg陽(yáng)性表示有Dane顆粒存在，有傳染性。乙肝標(biāo)志物及臨床意義5乙肝核心抗體（HBcAb）HBcAb是乙肝核心抗原的總抗體。感染HBV后最早出現(xiàn)的抗體是HBc-IgM抗體，它是乙肝病毒急性感染的重要指標(biāo)，慢性肝炎的炎癥活動(dòng)期也呈陽(yáng)性。核心抗體不是中和抗體，HBc-IgG抗體可持續(xù)多年不消退，是既往感染的指標(biāo)。乙肝標(biāo)志物及臨床意義6乙肝e抗原（HBeAg）HBV核心顆粒內(nèi)表面具有HBeAg活性，也可以由HBcAg經(jīng)蛋白酶降解后產(chǎn)生，在乙肝潛伏期后期出現(xiàn)，略晚于HBsAg。HBeAg陽(yáng)性表示HBV在體內(nèi)復(fù)制，有很強(qiáng)的傳染性。進(jìn)入恢復(fù)期后，HBeAg隨著HBsAg的消失而消失，其消失前后出現(xiàn)HBeAb。乙肝標(biāo)志物及臨床意義7乙肝e抗體（HBeAb）HBeAb的出現(xiàn)預(yù)示HBV復(fù)制減弱或中止，疾病可能向好的方向轉(zhuǎn)化。HBeAg逐漸消失HBeAb逐漸產(chǎn)生的時(shí)期稱為血清轉(zhuǎn)換期，即由復(fù)制期轉(zhuǎn)為非復(fù)制期。在這一時(shí)期可能出現(xiàn)eAg、eAb同陽(yáng)的現(xiàn)象。HBeAb也不是保護(hù)性抗體。乙肝標(biāo)志物產(chǎn)生的先后順序HBsAg→(HBcAg)→HBcAb→HBeAg→HBeAb乙肝兩對(duì)半模式常見(jiàn)模式（出現(xiàn)率1～40%）

模式sAgsAbeAgeAbcAb出現(xiàn)率臨床意義1＋－＋－＋30～40%a、急、慢性肝炎

b、提示HBV復(fù)制2＋－－－＋10～15%a、急性HBV復(fù)制

b、慢性HBsAg攜帶者

c、傳染性弱3＋－－＋＋5～10%a、急性HBV趨向恢復(fù)

b、慢性HBsAg攜帶者

c、長(zhǎng)期持續(xù)容易癌變4－－－－－1～30%未感染過(guò)HBV5－＋－－＋5～15%a、既往感染，仍有免疫力

b、非典型恢復(fù)型，急性HBV感染模式sAgsAbeAgeAbcAb出現(xiàn)率臨床意義6－－－＋＋2～10%a、既往感染過(guò)HBV

b、急性HBV感染恢復(fù)

c、少數(shù)標(biāo)本仍有傳染性7－－－－＋5～10%a、既往感染過(guò)HBV

b、急性HBV感染窗口期8－＋－－－1～6%a、被動(dòng)或主動(dòng)免疫后

b、HBV感染后已經(jīng)康復(fù)9－＋-＋＋0.5～5%a、既往感染過(guò)HBV

b、急性HBV感染后已經(jīng)康復(fù)常見(jiàn)模式（出現(xiàn)率1～40%）

少見(jiàn)模式（出現(xiàn)率1～4%）模式sAgsAbeAgeAbcAb臨床意義10＋－－－－a、慢性HBsAg攜帶者，傳染性弱

b、急性HBV感染11＋－－＋－a、慢性HBsAg攜帶者易轉(zhuǎn)陽(yáng)易發(fā)生基因整合

b、急性HBV感染趨向恢復(fù)12＋－＋

－－早期HBV感染或慢性攜帶者，傳染力強(qiáng)13＋－＋＋＋a、急性HBV感染，趨向恢復(fù)

b、慢性HBsAg攜帶者14＋＋－－－a、亞臨床型HBV感染早期

b、不同亞型HBV二次感染15＋＋－－＋模式sAgsAbeAgeAbcAb臨床意義16＋＋－＋－亞臨床型或非典型感染17＋＋－＋＋18＋＋＋－＋亞臨床型或非典型感染早期19－－＋－－a、非典型性急性感染

b、提