花色素的提取分離

實(shí)驗(yàn)1?了解原花色素及其分離提純的常用方法。2?學(xué)會(huì)用乙醇抽提法提取分離花色素和比色法測(cè)定其含量。二實(shí)驗(yàn)原花色素，也稱原花青素(proanthocyanidins)，是一類從植物中分離得到的在熱酸條件下能產(chǎn)生花色素的多酚化合物，它既存在于多種水果的皮，核和果肉中，如葡萄，蘋果，山楂等。也存在于如黒荊樹(shù)，馬尾松，思茅松，落葉松等的皮和葉中。OHOHOHOH原花色素 花青素原花色素屬于生物類黃酮(flavonoids)，它們是由不同數(shù)量的兒茶素或表兒茶素聚合而成，最簡(jiǎn)單的原花色素是兒茶素的二聚體，此外還有三聚體，四聚體等。依據(jù)聚合度的大小通常將二至四聚體稱為低聚體而五聚體以上的稱為高聚體。從植物中提取原花色素的方法一般有兩種，分別是用水抽提或用乙醇抽提。其抽提物為低聚物，稱之為低聚原花色素(oligomericproanthocyanidins,簡(jiǎn)稱OPC)。三■實(shí)驗(yàn)儀器

試劑：花色素標(biāo)準(zhǔn)樣品；甲醇；0.1%HCL-95%乙醇（V:V=70:30）;無(wú)水乙醇；石油醚；乙酸乙酯；HCL-正丁醇（濃HCL5.0ml加入正丁醇95.0ml混合即可）2%硫酸鐵氨硫酸鐵氨2.0g溶于2.0mol/LHCL100.0ml即可）器材：冷凍干燥機(jī)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；分光光度計(jì)；水浴鍋；電爐；電子分析天平材料：新鮮勒杜鵑花（一）勒杜鵑原花色素的提取（一）勒杜鵑原花色素的提取1.材料處理：稱取新鮮勒杜鵑10.0g，剪碎，置于錐形瓶中，加入3倍體積的石油醚，室溫浸泡，脫去脂質(zhì)物質(zhì)和葉綠素，過(guò)濾，將勒杜鵑樣品晾干，備用。a）花色素的提?。禾崛?.1%HCL-95%乙醇（V:V=70:30）料液比（m:V=1:150），提取時(shí)間30分鐘，控制提取溫度60°C,提取次數(shù)2次，即提取液分2次加入。花色素的純化：由于樣品中還是會(huì)含有其他雜質(zhì)，如:蛋白質(zhì)，維生素（水溶性維生素易溶于水而不易溶于非極性有機(jī)溶劑；脂溶性維生素易溶于非極性有機(jī)溶劑，而不易溶于水。往粗提液中加入2倍體積的乙醇，過(guò)濾，除去變性的蛋白質(zhì)，在往里加入石油醚、乙酸乙酯除去水溶性維生素、脂質(zhì)、葉綠素和多酚等雜質(zhì)，棄有機(jī)溶劑劑層?；ㄉ氐睦鋬龈稍铮褐锰崛∫号c旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、冷凍干燥機(jī)中濃縮干燥后即是待測(cè)花色素樣品?；ㄉ貥?biāo)準(zhǔn)樣品溶解（1.0mg/ml）:精確稱取花色素標(biāo)準(zhǔn)樣品lO.Omg，用甲醇溶解，定容至10.0ml備用?；ㄉ貥悠啡芙猓簩⒎蛛x得到的花色素樣品，用甲醇溶解定容至25.0ml,試樣濃度控制在1.0-3.0mg/ml。標(biāo)準(zhǔn)曲線制備：去干凈試管8支，按下表進(jìn)行操作。以吸光度A546為縱坐標(biāo)，花色素含量（^g為橫坐標(biāo)作圖得標(biāo)準(zhǔn)曲線。試劑血卜、1234567樣品OP「標(biāo)準(zhǔn)液V00.2S0.300.2甲醇0.50.45仇4"0350.2S0.200.3?2%硫酸鐵鞍0.10仇1樸IUU0J0aio0.104L10■HCI-正丁醇3.-103?403.40J.-W3.40J.40沸水浴2Wnin取出，冷水冷卻1和in后測(cè)定OFC含量伽050HH)150200250300二8?待測(cè)花色素樣品含量測(cè)定：吸取樣品0.10ml加入試管（平行做兩份），個(gè)補(bǔ)加甲醇0.4ml,在分別加2%硫酸鐵氨溶液0.1ml和HCL-正丁醇溶液3.4ml,沸水浴中煮沸30min,冷卻至室溫后，15min內(nèi)以上表的0號(hào)管為參比溶液在波長(zhǎng)546nm處測(cè)定個(gè)管吸光度。根據(jù)測(cè)得的吸光度從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出待測(cè)樣品液中花色素含量（呃五?結(jié)果處理1.常用溶劑的極性順序水（最大）＞甲酰胺＞三氟乙酸＞DMSO＞乙腈〉DMF＞六甲基磷酰胺〉甲醇〉乙醇〉乙酸〉異丙醇〉吡啶〉四甲基乙二胺〉丙酮〉三乙胺＞正丁醇〉二氧六環(huán)〉四氫呋喃〉甲酸甲酯〉三丁胺〉甲乙酮〉乙酸乙酯〉三辛胺〉碳酸二甲酯〉乙醚〉異丙醚＞正丁醚〉三氯乙烯〉二苯醚〉二氯甲烷〉氯仿〉二氯乙烷〉甲苯＞苯＞四氯化碳〉二硫化碳〉環(huán)己烷〉己烷〉煤油（石油醚）（最?。??鹽酸乙醇溶液是常用的非水成鹽溶液。用于一些堿性有機(jī)物的成鹽反應(yīng),因?yàn)橛袡C(jī)物常常不容于水而易溶于乙醇等有機(jī)溶劑，如有機(jī)胺類。http://