黃連及其炮制品的薄層鑒別研究

黃連及其炮制品的薄層鑒別研究

黃連是中醫(yī)科的一個常見品種，來自黃連科植物。這是一種三葉黃連。y.chengeth及其干燥的根系干燥。具有清熱除濕、清火解毒的功效，適用于濕熱、敗血癥、發(fā)熱、頭暈、蠕蟲等。酒徒花可以去除上椰樹的熱量，用于目紅口傷口。姜黃連能識別母親和胃的嘔吐，阻礙冷熱，嘔吐。茱黃連用于肝臟和胃的不相容性嘔吐和吞咽困難。黃連及其炮制品薄層色譜分析已屢見文獻報道,綜合比較目前報道的所有方法,存在以下問題:①《中國藥典》2005年版黃連項下薄層色譜鑒別方法,可以同時鑒別出黃連中的5種生物堿,且分離效果好。但僅以鹽酸小檗堿作為對照,客觀性和專屬性差,難以準確地反映和控制黃連藥材及炮制品的質量。且2005年版《中國藥典》薄層項下供試液的制備方法較為繁瑣,展開劑中使用了有毒試劑苯;其他文獻報道方法或者只能鑒別出2~3個生物堿,或者分離效果差。②萸黃連系黃連藥材的炮制品,其成分中除含有黃連共有的成分外,還含有炮制輔料特有的成分,顯然,僅對黃連中的成分進行薄層鑒別,難以全面控制炮制品質量。本研究參考藥典和文獻報道的方法,確定了能同時鑒定黃連中5種生物堿和鑒定萸黃連中吳茱萸的特征成分的薄層鑒別方法。1儀器和試劑盒1.1儀器及其性質微量進樣器(上海安亨微量進樣器廠),ZF-20D暗箱式紫外分析儀(鞏義市予華儀器有限責任公司),AUW220D型電子天平(十萬分之一,日本島津公司),BS224S型電子天平(萬分之一,德國賽多利斯公司);預制板(青島譜科分離材料有限公司)。1.2藥品、藥材與藥品鹽酸藥根堿對照品(批號0733-200005),鹽酸巴馬汀對照品(批號110732-200506),鹽酸小檗堿對照品(批號110713-200208)由中國藥品生物制品檢定所提供,鹽酸表小檗堿對照品、鹽酸黃連堿對照品由本院藥化研究所提供,純度98%以上;黃連原藥材(購自浙江中醫(yī)藥大學中藥飲片廠,批號080805),酒黃連飲片(購自亳州干草藥業(yè),批號080301),姜黃連飲片(購自亳州干草藥業(yè),批號080301),萸黃連飲片(購自亳州干草藥業(yè),批號080301)經重慶市中藥研究院中藥種植研究所鐘國躍研究員鑒定確認;試劑均為分析純。2膜層析成像2.1黃連中生物成分的膜識別2.1.1溶媒用量和提取時間的考察考察了鹽酸-甲醇(1∶100)和甲醇作提取溶媒及回流和超聲兩種提取方法。結果表明,不同的溶媒,不同的提取方法對薄層鑒別的影響不大。故選擇使用甲醇直接超聲提取制備供試液。在此基礎上,對溶媒用量和提取時間進行了考察。確定供試液的制備方法為:取本品粉末0.25g,加甲醇25ml,超聲處理30min,濾過,濾液作為供試品溶液。按照薄層色譜法(《中國藥典》2005年Ⅰ部附錄VIIB)實驗,吸取相同用量,不同提取方法和溶媒制備的供試品考察液各1μl,分別點于同一自制硅膠G板上,以環(huán)己烷-醋酸乙酯-異丙醇-甲醇-水-三乙胺(3∶3.5∶1∶1.5∶0.5∶1)(對槽加等量氨水,預飽和20min)為展開劑,展開,取出,晾干,置紫外燈365nm下檢視。結果見圖1。2.1.2最大限度在+見表1考察了42個薄層條件,其中分離效果比較好的條件有:①苯-醋酸乙酯-異丙醇-甲醇-水(6∶3∶1.5∶1.5∶0.3)(對槽加等量氨水,預飽和20min)。②環(huán)己烷-醋酸乙酯-異丙醇-甲醇-水-三乙胺(3∶3.5∶1∶1.5∶0.5∶1)(對槽加等量氨水,預飽和20min)。照薄層色譜法(《中國藥典》2005年Ⅰ部附錄VIIB)實驗,吸取供試品溶液各1μl,分別點于同一自制硅膠G板上,以上述條件①和②為展開劑,展開,取出,晾干,置紫外燈365nm下檢視,結果見圖2~4。由圖可以看出兩種條件的分離度均良好,但條件②的展開溶劑毒性小,故選擇后者為最佳條件。2.1.3溫度和濕度考察對選定的展開條件:環(huán)己烷-醋酸乙酯-異丙醇-甲醇-水-三乙胺(3∶3.5∶1∶1.5∶0.5∶1)(對槽加等量氨水,預飽和20min)進行了4℃~10℃和25℃的溫度考察以及18%和72%相對濕度考察,分離效果均良好。結果見圖5~8。2.2黃連中吳茱萸特征成分的等級2.2.1超聲提取方法主要考察了以下幾種方法:①將藥材水煎提取的濃縮液用鹽酸調pH至1~2或用氨水調pH至9~10,再用氯仿萃取,取氯仿層。②將藥材粉末先用氨水悶潤2h,再用氯仿超聲提取。③直接用氯仿超聲提取。方法①和②操作復雜,且?guī)氲碾s質多,故選擇直接用氯仿超聲提取。在此基礎上,進行用量和提取時間的考察,最終確定供試液的制備方法為:取本品粉末2g,加氯仿20ml,超聲處理30min,濾過,濾渣同法處理兩次,合并濾液,減壓回收至干,加氯仿1ml使溶解,作為供試品溶液。對照藥材溶液的制備方法為:取吳茱萸對照藥材,同法制成每毫升溶液中含有0.5g的對照藥材溶液。2.2.2吳新型鑒別藥物的篩選參考文獻,共考察10個條件,選取其中分離效果比較好的條件:①環(huán)己烷-醋酸乙酯-甲醇-三乙胺(19∶5∶1∶1)(紫外燈365nm下檢視)。②石油醚-氯仿-丙酮-甲醇-二乙胺(5∶2∶2∶1∶0.2)(2%的香草醛濃硫酸試液,105℃加熱至斑點清晰)。照薄層色譜法(2005年《中國藥典》Ⅰ部附錄VIIB)實驗,吸取對照品及對照藥材溶液各2μl,供試品考察液各5μl,分別點于同一高效硅膠G板上,以上述條件①和②為展開劑,展開,取出,晾干,按相應方法檢視,結果見圖9~10。經多次實驗結果發(fā)現,條件①重現性不好,故選定②為萸黃連藥材中關于吳茱萸特征成分的薄層鑒別條件。經過對照品對照,證實其鑒別成分為吳茱萸內酯。2.2.3溫度和濕度的考察對選定的展開條件:石油醚-氯仿-丙酮-甲醇-二乙胺(5∶2∶2∶1∶0.2)進行了4~10℃和25℃的溫度考察以及18%和72%相對濕度考察,均取得了良好的分離效果,見圖11~14。3不同藥材提取方法對吳新型認識的影響與現版《中國藥典》方法比較,新方法中供試品的制備方法較為簡單;薄層條件中未使用毒性大的試劑苯,而改用毒性相對小的環(huán)己烷;采用黃連中的5種主要生物堿作為對照,相對藥典單獨用鹽酸小檗堿作對照,客觀性和專屬性更強。在萸黃連關于吳茱萸特征成分的薄層鑒別中,供試液的制備方法考察了用水煎煮液的濃縮物提取,